重组人促红细胞生成素对成年大鼠高氧肺损伤Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素（rHuEPO）对成年大鼠高氧肺损伤Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法健康成年雄性SD大鼠48只,随机分为6组,每组8只。对照组吸入空气,设为0 h组;其余5组置入动物实验氧舱吸入100%浓度氧气,分为24 h组、48 h组、72 h组、96 h组和rHuEPO干预组。rHuEPO干预组吸氧时间为96 h,并每日予以rHuEPO1000 U/kg腹腔内注射。颈动脉采血行动脉血气分析,计算氧合指数,测定左肺湿干重比值（W/D）及支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、IL-1β水平,免疫组化及Western blot方法检测肺组织Bax和Bcl-2蛋白表达,并观察肺组织病理学改变。结果随高氧暴露时间延长,大鼠氧合指数逐渐下降,96 h达到最低值;左肺W/D值逐渐增加,96 h达到高峰;BALF中TNF-α、IL-1β水平逐渐增高,48 h达到高峰,此后开始下降;肺组织中Bax蛋白表达逐渐增多,Bcl-2蛋白表达逐渐减少。rHuEPO干预组与96 h组比较,氧合指数增加,左肺W/D值下降,BALF中TNF-α、IL-1β水平下降,Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增加。结论 rHuEPO能够下调肺组织Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,抑制肺泡上皮细胞凋亡,从而一定程度上减轻高氧所致成年大鼠急性肺损伤。     

重组人促红细胞生成素对高氧肺损伤新生大鼠细胞凋亡及蛋白激酶B表达的影响

目的支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)是新生儿呼吸系统常见疾病,文中探讨rhEPO对高氧肺损伤新生大鼠肺细胞凋亡和蛋白激酶B(又称Akt)表达的影响,为BPD的防治提供实验依据。方法将新生大鼠给予60%高氧暴露,rhEPO组皮下注射rhEPO,采用TUNEL法检测肺细胞凋亡和RT-PCR法检测Akt mRNA表达水平。结果①高氧组新生大鼠肺细胞凋亡指数为44.312±12.337,明显高于空气组的12.810±4.353(P<0.01);rhEPO组凋亡指数为23.371±9.508,明显低于高氧组(P<0.01)。②高氧组肺组织Akt mRNA表达水平为0.462±0.122,明显低于空气组的1.236±0.357(P<0.01);rhEPO组肺组织Akt mRNA表达水平为0.893±0.235,明显高于高氧组(P<0.01)。结论高氧可引起新生大鼠肺细胞凋亡增多,rhEPO可明显减少肺细胞凋亡,其机制可能与肺组织Akt mRNA表达有关。     

氢气对高氧致肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用

目的探讨氢气对高浓度氧导致的早产大鼠肺泡型Ⅱ上皮细胞（AECⅡ）氧化应激性损伤的影响。方法将分离培养的原
代AECⅡ随机分为空气对照组、高氧对照组、空气+氢气组、高氧+氢气组。空气组和高氧组分别暴露在21%和95%氧气中,空
气+氢气组和高氧+氢气组细胞置于富氢培养基中。各组均于24 h后光镜观察细胞形态改变,采用四甲基偶唑氮蓝（MTT）法检
测各组细胞增殖能力,JC-1荧光探针法检测各组细胞线粒体膜电位（△Ψ）变化,化学比色法测定细胞上清丙二醛（MDA）含量
和超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果与空气对照组比较,空气+氢气组各项指标均无显著差异,高氧对照组细胞的增殖活性明
显受到抑制,细胞的△Ψ明显降低,MDA含量显著增高,SOD活性明显降低。氢气干预后,与高氧对照组相比,细胞的增殖活性
和SOD活性均有所升高,△Ψ有所恢复,MDA含量显著下降（P<0.05）。结论氢气可显著减轻高氧导致的早产鼠AECⅡ的氧化
损伤,提高细胞抗氧化能力,稳定细胞△Ψ,减弱高氧对细胞的增殖抑制效应。
     

不同时间高氧对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞能量代谢的影响

目的 探讨不同时间高浓度氧对肺泡Ⅱ型上皮细胞线粒体能量代谢的影响。方法 将大鼠RLE-6TN细胞分为对照组(21%O₂常规培养4 h)、高氧1、2、3、4 h组(95%O₂分别培养1、2、3、4 h)。采用荧光素酶化学发光法检测各组细胞的三磷酸腺苷(ATP)含量,采用微量法检测线粒体呼吸链复合体V活性,荧光探针JC-1检测细胞线粒体膜电位,实时荧光定量PCR法检测线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的核心亚基NADH脱氢酶亚基1(ND1)、细胞色素b(Cytb)、细胞色素C氧化酶亚基I(COXI)、ATP酶6(ATPase6)mRNA的表达水平。结果 与对照组比较,高氧1、2、3、4 h组细胞线粒体呼吸链复合体核心亚基ND1(q=24.800,P<0.001;q=13.650,P<0.001;q=9.869,P<0.001;q=20.700,P<0.001)、COXI(q=16.750,P<0.001;q=10.120,P<0.001;q=8.476,P<0.001;q=14.060,P<0.001...     

不同氧浓度暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤及CGRP的保护效应

目的 观察不同氧浓度对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞( AECⅡ)的影响以及降钙素基因相关肽(CGRP)对AECⅡ的保护作用. 方法 将原代分离培养的孕19天早产鼠AECⅡ接种至6孔培养板,随机分为空气组、40％氧组、60％氧组、80％氧组及相关浓度氧CGRP组与相关浓度氧CGRP受体拮抗剂组.空气组和高氧组分别置于体积分数为21％的空气或40％、60％、80％的氧气中暴露24 h;CGRP组在暴露前加入CGRP;CGRP拮抗剂组在CGRP组基础上加入CGRP受体拮抗剂(CGRP8-37).培养24h后,用分光光度计测定各组丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAOC)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和细胞凋亡率;用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)测定表面活性蛋白C(SP-C)的mRNA表达. 结果 与空气组比较,40％、60％、80％氧组MDA、ROS及细胞调亡率均显著增高,TAOC、SOD水平及SP-C mRNA表达均显著降低(P均＜0.01).与氧气组比较,高氧CGRP组细胞MDA、ROS水平及细胞调亡率均显著下降;而TAOC、SOD水平及SP-C mRNA表达均明显增高(P＜0.01).高氧CGRP拮抗剂组与高氧组各指标比较差异均无显著性. 结论 高于40％氧暴露24h可导致早产鼠AECⅡ发生氧化损伤,诱导细胞凋亡及SP-C mRNA表达下降;随着氧浓度增加,损伤加重;而CGRP可部分减轻AECⅡ的氧化损伤,减少凋亡,促进SP-C mRNA表达,对高氧损伤的AECⅡ起保护作用.     

重组人促红细胞生成素对大鼠创伤性脑损伤细胞凋亡的影响

目的研究重组人促红细胞生成素（rhEPO）对大鼠创伤性脑损伤的创伤灶周围神经细胞凋亡的影响。探讨rhEPO对大鼠创伤性脑损伤的保护作用。方法采用改进的Feeney氏法制作脑创伤模型，而后实验组立即腹腔注射5000u／kg rhEPO，对照组和假手术组注射生理盐水。于伤后12h、48h、120h处死动物，制作脑切片后行HE染色、TUNEL染色。结果rhEPO干预组与对照组、假手术组比较，各时间点rhEPO治疗组创伤灶周围TUNEL阳性细胞数比对照组显著减少，差异有高度统计学意义（P〈0．01）。结论rhEPO可以抑制神经细胞凋亡，对大鼠创伤性脑损伤具有保护作用。     

重组人促红细胞生成素对血透患者肝炎发生率的影响

本组报告重组人促红细胞生成素 (ｒＨｕＥ ＰＯ)治疗对长期维持性血透病人丙型肝炎发生率的影响 ,结果如下。1　临床资料1 1　 1 995年 6月～ 1 999年 1 2月我院行长期维持性血液透析前无肝炎病史的患者 46例。男 35例 ,女 1 1例。平均年龄 48± 1 6岁。透析时间 3 8± 1 3年。每周透析 1 0～ 1 5小时。血透机型号 :Ｇａｍｂｏ 95 0 ,Ｂａｘｔｅｒ 5 5 0透析器 :亚太铜仿膜、醋酸纤维膜。透析器为 1次性或复用 2～ 4次。透析管路及穿刺针多次复用。透析液 :碳酸盐。严格透析室消毒与管理。1 2　 46例患者随机分为 (1 )ｒＨｕＥＰＯ治疗组…     

重组人红细胞生成素对心肌梗死治疗作用的实验研究

目的观察重组人红细胞生成素(rHu-EPO)对大鼠心肌梗死的治疗作用并探讨其机制。方法体外培养出生3 d 内 SD 大鼠心肌细胞,缺氧培养和 H_2O_2模拟氧化应激反应诱导凋亡,培养体系中加入 rHu-EPO,荧光染色观察凋亡率的变化。32只成年 SD 大鼠分空白组8只、心肌梗死组12只和治疗组12只;空白组开胸但不结扎冠脉,心肌梗死组和治疗组结扎左冠前降支制备心肌梗死的模型,治疗组每天腹腔注射5000 IU/kg rHu-EPO 共7 d,14 d 后所有大鼠检测血流动力学指标,心脏切片原位末端标记(TUNEL)检测凋亡,免疫组化检测 Bcl-2、Bax 表达。结果 rHu-EPO 使心肌细胞缺氧诱导的凋亡率由47.92%±5.87%下降为28.21%±4.35%;氧化应激反应所诱导的凋亡率由60.42%±5.54%下降为43.40%±5.39%;腹腔注射 rHu-EPO 使得心肌梗死后大鼠心功能保存较好,动脉收缩压、平均动脉压、左心室收缩压、±dp/dt_(max)都有所提高,同时,左心室舒张压、左心室舒张末期压下降;细胞凋亡率由1.65%±0.50%减少为0.84%±0.30%;Bcl-2蛋白表达率由0.96%±0.37%增加为1.43%±0.28%;Bax 蛋白表达率由1.34%±0.47%减少为0.68%±0.30%。结论rHu-EPO 可抑制心肌细胞凋亡、保存心功能,可能是通过下调 Bax 表达和上调 bcl-2表达实现的。     

重组人促红细胞生成素对慢性肾衰病人营养状况的影响

目的 :探讨重组人促红细胞生成素对慢性肾衰病人营养状况的影响。方法 :测定用药与未用药患者血中的视黄醇结合蛋白、前白蛋白和转铁蛋白浓度。结果 :慢性肾衰患者血中三种蛋白浓度明显低于正常 ,用药明显高于未用药患者 ,血中三种蛋白浓度与血红蛋白呈正相关关系。结论 :重组人促红细胞生成素可改善病人的营养状况。     

重组人促红细胞生成素对高氧脑损伤新生大鼠IL-18,Caspase-1蛋白表达的影响

[目的]探讨重组人促红细胞生成素(rEPO)对高氧脑损伤新生大鼠IL-18,Caspase-1蛋白表达的影响.[方法]选择新生Wistar大鼠随机分为空气对照组、高氧+生理盐水组及高氧+rEPO治疗组,其中高氧+rEPO治疗组腹腔注射给予3 000U/kg rEPO.在实验第3,7,14d时分别取各组10只大鼠的海马组织行HE染色,观察形态学改变,采用Western blot法测定脑组织中Caspase-1及IL-18的含量.[结果]HE染色观察结果显示,高氧+生理盐水组脑组织可见不同程度的水肿、坏死及炎症反应,且随着暴露于高氧时间的延长病理改变明显加重,而高氧+rEPO治疗组在各时间点的病理改变均较高氧+生理盐水组明显减轻.Western blot检测结果显示,与空气对照组比较,高氧+生理盐水组Caspase-1,IL-18蛋白表达量随着暴露于高氧时间的延长而升高,而高氧+rEPO治疗组蛋白表达量较高氧+生理盐水组下降,出生后第7,14d时高氧+生理盐水组与高氧+rEPO治疗组Caspase-1,IL-18蛋白表达间差异有统计学意义(P<0.05).[结论]rEPO可减轻高氧脑水肿,抑制Caspase-1和IL-18的表达,对高氧脑损伤具有保护作用.     

重组人促红细胞生成素对压力作用下混合培养视网膜神经细胞凋亡及BCL-2表达的影响

目的 观察重组人促红细胞生成素(rhEPO)对压力作用所致鼠混合培养视网膜神经细胞凋亡的保护作用及可能的机制.方法 将体外混合培养3 d的原代大鼠视网膜神经细胞随机分为对照组、单纯压力组和预处理压力组,预处理压力组分别加入0.15、0.30、0.50 U/ml rhEPO作用24 h后,单纯压力组和预处理压力组均在60 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)压力下培养24 h,然后TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化和RT-PCR法检测BCL-2蛋白质及mRNA的表达.结果 单纯压力组细胞凋亡指数(AI)显著高于对照组(P<0.01);与单纯压力组比较,各不同浓度rhEPO预处理压力组的AI明显降低,同时BCL-2 mRNA及蛋白的表达均显著增加,差异均有显著性意义(P<0.05或P<0.01),且呈rhEPO浓度依赖性.结论 rhEPO预处理可通过上调细胞凋亡抑制因子BCL-2的表达,从而抑制压力诱导的视网膜神经细胞的凋亡.     

不同体积分数氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞体外生长状态的影响

目的:探讨不同氧体积分数状态下,胎鼠原代肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar typeⅡepithelial cell,AECⅡ)体外生长状态的变化.方法:原代培养胎鼠AECⅡ并用电镜鉴定;建立氧体积分数0.95组(95%O2)、氧体积分数0.4组(40%O2)和空气组(21%O2)3种氧化损伤性细胞模型,各自暴露12、...     

高氧对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响及神经肽P物质的保护作用

目的 探讨高氧对离体培养的早产大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(type Ⅱ alveolar epithelial cells,AECⅡ)的影响及感觉神经肽P物质(substance P,SP)的保护作用.方法 ①分离纯化原代早产鼠AECⅡ18只,随机分为:空气暴露组、高氧暴露组、SP干预空气暴露组、SP干预高氧暴露组(n=36).空气暴露组氧体积分数为0.21(21%),高氧暴露组氧体积分数为0.95(95%),SP干预组于暴露前加入SP 1×10-6 mol/L,在置于氧体积分数为0.21(21%)和0.95(95%)中各组分别暴露12、24、48 h,电镜观察AECⅡ的形态变化.XTT法及流式细胞仪测定其增殖率和凋亡率.②剖宫取出SD大鼠孕21 d(足月为22 d)早产鼠(n=36),随机分为空气暴露组和高氧暴露组(n=18).空气暴露组氧体积分数为0.21(21%),高氧暴露组氧体积分数为0.95(95%),分别于暴露3、7、14 d后,取肺组织测定其SP含量.结果 与空气暴露组比较,高氧组暴露12、24、48 h后AECⅡ增殖率明显降低,凋亡率明显增加,而SP干预后其增殖率明显增加,凋亡率明显下降,AECⅡ形态学也有明显的改善.高氧暴露3、7、14 d与空气暴露组比较肺组织SP含量显著降低,且随高氧暴露的延长,SP含量降低明显.结论 P物质可促进AECⅡ的增殖并抑制AECⅡ的凋亡,在高氧暴露下对AECⅡ可起到保护作用,高氧暴露可导致肺组织SP含量的变化.     

重组人促红细胞生成素对脑出血患者神经元再生的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对脑出血患者神经元再生的影响.方法 将41例脑出血患者随机分为两组,对照组和治疗组均给予脑出血的常规处理,在此基础上治疗组每例患者给予rhEPO 5 000 U,经腰椎穿刺鞘内注入,分别于第1、4、7、10、14、17、21天给予1次.两组患者分别于鞘内注药的第1、4、7、10、14、17、21天,采集清晨空腹肘静脉血3 ml(生化管),室温放置待凝固后,以3 000 r/min离心10 min,分离血清,置于-20 ℃冰箱保存待测血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),并采用欧洲卒中量表(ESS)评定患者的神经功能变化.结果 治疗的第1、4天两组患者的血清VEGF、bFGF水平间差异均无统计学意义(P＞0.05),而治疗的第7、10、14、17、21天两组患者的血清VEGF、bFGF水平间差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗的第1、4、7天两组患者的ESS评分间差异无统计学意义(P＞0.05),而治疗的第10、14、17、21天两组患者的ESS评分间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 通过腰椎穿刺注入rhEPO能促进脑出血患者的神经元再生,改善神经功能.     

重组人促红细胞生成素应用于中重度烧伤后贫血的初探

目的：初步探讨重组人促红细胞生成素（recombinate human erythropoietin,rhEPO）在中重度烧伤后贫血的临床应用.方法：将本科2001年1月至2004年12月的82例中重度烧伤病人,随机分成试验组（应用rhEPO组）52例和空白对照组30例,分别检测外周血红细胞压积Hct、血红蛋白浓度Hb、红细胞计数RBC、未成熟网织红细胞指数IRF,红细胞C3b受体花环率RBC-C3bRR,T淋巴细胞亚群;并观察其不良反应.结果：对比使用rhEPO前后及空白对照组,试验组病人的各项检测指标的改变具有统计学意义,贫血状况和免疫功能均得到不同程度改善,同时不良反应少.结论：rhEPO对于中重度烧伤后贫血的防治及机体免疫功能的改善具有临床价值.     

肠缺血再灌注时肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡与肺损伤

目的 观察肠缺血再灌注中肺损伤与肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的关系及其可能的发生机制。方法 Wistar大鼠,肠系膜上动脉夹闭后松夹造成肠缺血再灌注。不同时间点活杀动物,测肺通透指数、肺泡灌洗液（BALF）和血浆中NO、IL-2含量,分离肺泡Ⅱ型上皮细胞,观察凋亡率。结果与结论 肠缺血再灌注可能引起肺损伤;肠缺血再灌注后肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率上升,再灌注30 min 达高峰;缺血再灌注后血、BALF中NO、IL-2增加;肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率与肺通透指数显著相关,BALF中IL-2水平与肺通透指数、肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率显著相关。     

重组人促红细胞生成素对糖尿病大鼠随意皮瓣的影响

目的 研究重组人促红细胞生成素对糖尿病大鼠超长随意皮瓣存活的影响.方法 36只SD大鼠.随机选取12只为对照组(A组),其余24只腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型后随机平均分为两组(B组、C组),再次构建大鼠背部任意瓣(3cm×10cm)模型,成模后B组术后腹腔注射重组人促红细胞生成素(rhEPO)(5000 U/kg),A组、C组腹腔注射等量生理盐水.术后第10天取皮瓣检测成活面积、组织学观察、VEGF表达情况,ELISA检测血清中SDF-1α及MMP-9含量.结果 皮瓣面积C组(33.34±2.01)％明显低于A(50.17 +2.29)％组与B(48.3±2.43)％组(P＜0.01),A、B组间比较无统计学差异(P＞0.05);组织学观察B组皮瓣的组织水肿、炎症细胞浸润情况明显比C组减轻;新生血管计数B组17.5±3.29/平方毫米明显高于A组22.08±3.84/mm2,A、B组均明显高于C组11.33±2.42/mm2(p＜0.01).VEGF表达量A组4528.16±551.26、B组3671.67±482.04明显高于C组2571.08±535.45(P＜0.01),A组与B组无差异(P＞0.05).血清中SDF-1α、MMP-9的含量A组、B组均明显高于C组(P＜0.01).结论 促红细胞生成素可能通过增加SDF-1α、MMP-9、VEGF表达等途径促进皮瓣生血管增生,减轻炎症反应,从而提高糖尿病大鼠随意型皮瓣的存活.     

重组人促红细胞生成素对癫痫大鼠海马齿状回的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropietin,r-HuEPO)对癫痫大鼠海马齿状回的影响。方法 140只大鼠按随机数字表法分为正常对照组20只,余120只制作氯化锂-匹罗卡品颞叶癫痫模型,符合条件者采用随机数字表将其分为癫痫治疗组和癫痫组;各组均经腹腔注射BrdU,治疗组同时予以r-HuEPO处理;以FJ-B(Fluoro-Jade B)免疫荧光观察神经元变性情况,BrdU免疫组化观察细胞增殖情况,Timm’s染色观察齿状回苔藓纤维发芽情况。结果海马齿状回神经元变性在癫痫组(32.32±5.09)较治疗组(11.12±0.75)和对照组(6.50±1.08)明显(P<0.01),而治疗组和对照组相比无显著差异;第9天细胞增殖在癫痫组(92.8±2.97)较治疗组(16.95±0.54)和对照组(12.80±2.13)明显(P<0.01),治疗组和对照组相比无显著差异;第28天细胞增殖在癫痫组(146.45±5.91)较治疗组(46.27±2.93)和对照组(38.52±3.10)明显(P<0.01),治疗组和对照组相比无显著差异;Timm’s染色结果表明在第14天,癫痫组(0.45±0.19)苔藓纤维发芽比对照组(0.10±0.11)明显(P<0.05),第28天癫痫组(3.60±0.16)比治疗组(0.55±0.10)和对照组(0.30±0.11)更加明显(P<0.01),治疗组与对照组比差异不明显(P>0.05)。结论癫痫能诱发大鼠海马齿状回神经元变性、细胞增殖和苔藓纤维发芽;r-HuEPO处理能降癫痫大鼠海马齿状回神经元变性和细胞增殖,并能抑制苔藓纤维发芽。