人参皂苷 Rg1对帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡及EphB1、TH、P-c-Jun蛋白表达的影响

目的：观察人参皂苷Rg1对MPTP所致帕金森病（ PD）模型小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡及酪氨酸羟化酶（TH）、EphB1和P-c-Jun蛋白表达的影响。方法：将27只C57BL／6小鼠等分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组。腹腔注射人参皂苷Rg1预防给药3 d,腹腔注射MPTP构建PD模型。观察不同时间点小鼠游泳情况。 MPTP给药2周后采用TUNEL染色检测小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡情况,采用免疫组化检测黑质EphB1蛋白的表达,采用Western blot检测黑质TH、P-c-Jun蛋白的表达。结果：模型组小鼠不同时间点游泳实验分值低于对照组和人参皂苷Rg1组（P均＜0．05）。模型组黑质多巴胺能神经元凋亡数、EphB1阳性细胞数和P-c-Jun蛋白相对表达量均高于对照组和人参皂苷Rg1组,而模型组黑质TH蛋白相对表达量低于对照组和人参皂苷Rg1组（P均＜0．05）。结论：人参皂苷Rg1可能通过减少黑质多巴胺能神经元凋亡以及降低EphB1、P-c-Jun的表达而改善PD的症状。     

人参皂苷Rg1对帕金森病小鼠黑质中酪氨酸羟化酶及ephrinB2和磷酸化c-Jun表达的影响

目的观察人参皂苷Rg1对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)模型小鼠黑质中酪氨酸羟化酶(TH)mRNA、ephrinB2和磷酸化c-Jun(p-c-Jun)蛋白表达的影响,探讨人参皂苷Rg1对PD的治疗作用及其可能机制。方法将27只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组,每组9只。模型组和人参皂苷Rg1组小鼠腹腔注射MPTP构建PD模型。注射MPTP前,对照组和模型组小鼠腹腔注射生理盐水(1 mL·kg-1·d-1),人参皂苷Rg1组小鼠腹腔注射人参皂苷Rg1(10 mg·kg-1·d-1),连续3 d。通过爬杆实验观察小鼠行为学变化,2周后采用反转录聚合酶链反应检测小鼠黑质中TH mRNA的表达,免疫组织化学法检测小鼠黑质中ephrinB2及p-c-Jun蛋白的表达。结果不同时间点模型组小鼠的爬杆时间均显著长于对照组和人参皂苷Rg1组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组小鼠脑黑质中TH mRNA表达水平显著低于对照组和人参皂苷Rg1组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);模型组小鼠脑黑质中ephrinB2、p-c-Jun阳性表达细胞数显著高于对照组和人参皂苷Rg1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MPTP可能通过促进小鼠中脑黑质中ephrinB2、p-c-Jun的表达及诱导多巴胺能神经元细胞凋亡导致PD;人参皂苷Rg1可能通过降低小鼠中脑黑质中ephrinB2、p-c-Jun的表达并缓解多巴胺能神经元凋亡而改善PD症状。     

人参皂苷Rg1与Rb1在心肌缺血复合肿瘤病理环境下的作用研究

目的:观察三七总皂苷主要成分人参皂苷Rg1和Rb1在心肌缺血复合肿瘤病理环境下的作用,并通过研究血管新生探索其可能的作用机制。方法:采用小鼠经皮下移植LLCs肿瘤细胞及腹腔注射异丙肾上腺素的方法制备肿瘤复合心肌缺血动物模型,再随机分为模型组、人参皂苷Rg1组、人参皂苷Rb1组;另设正常对照组。Rg1组和Rb1组分别予腹腔注射Rg1、Rb1(50 mg/kg);正常组与模型组给予等体积生理盐水。连续干预15 d后,比较各组小鼠的肿瘤生长情况、心肌组织病理形态学变化及通过免疫组织化学的方法检测心肌和肿瘤组织中CD34、vWF的蛋白表达。结果:人参皂苷Rg1及Rb1治疗组小鼠移植肿瘤生长显著受到抑制,其平均瘤重显著低于模型组(P0.05);两组心肌组织缺血损伤显著改善,胶原含量明显减少(P0.05,P0.01);同时心肌组织中CD34和vWF蛋白表达量显著升高,而肿瘤组织中CD34和vWF蛋白表达量显著降低,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:三七总皂苷主要活性成分人参皂苷Rg1和Rb1在心肌缺血复合肿瘤病理环境下显著抑制LLCs肿瘤生长,并显著改善心肌缺血损伤,其双向作用的机制可能与对血管生成双向调节作用有关。     

人参皂苷Rg1对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶诱导的帕金森病小鼠黑质酪氨酸蛋白激酶A4表达的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对帕金森病(PD)小鼠黑质中酪氨酸蛋白激酶A4(Eph A4)表达的影响及意义。方法将45只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型组、人参皂苷Rg1组、1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)+人参皂苷Rg1+9-(四氢-2-呋喃基)-9H-嘌呤-6-胺(SQ22536)组和MPTP+人参皂苷Rg1+N-[2-(P-溴苯丙烯盐基氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺(H-89)组。正常对照组和模型组小鼠腹腔注射生理盐水,其他各组小鼠腹腔注射人参皂苷Rg1预防给药,腹腔注射MPTP构建PD模型,MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组在注射MPTP前30 min分别注射SQ22536和H-89。采用反转录-聚合酶链反应和Western blot检测小鼠黑质Eph A4 mRNA和蛋白表达水平。结果模型组、人参皂苷Rg1组、MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4 mRNA表达水平显著高于正常对照组(P<0.01,P<0.05),但人参皂苷Rg1组、MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4 mRNA表达水平显著低于模型组(P<0.01);MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4 mRNA表达水平显著高于人参皂苷Rg1组(P<0.01)。模型组、人参皂苷Rg1组、MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4蛋白表达水平显著高于正常对照组(P<0.01),但人参皂苷Rg1组、MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4蛋白表达水平显著低于模型组(P<0.01,P<0.05);MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4蛋白表达水平显著高于人参皂苷Rg1组(P<0.01,P<0.05)。结论 MPTP可能通过促进小鼠中脑黑质区Eph A4的表达导致PD发生;人参皂苷Rg1可能通过活化腺苷酸环化酶/环磷酸腺苷/蛋白激酶A信号转导通路,降低PD小鼠黑质区Eph A4的表达而改善PD症状。     

人参皂苷Rg1对帕金森病模型小鼠黑质区FADD和FLIP表达的影响及其意义

目的：探讨人参皂苷Rg1对帕金森病（PD）模型小鼠黑质区凋亡信号蛋白Fas死亡结构域蛋白(FADD)、FADD样白细胞介素1-转化酶样抑制蛋白(FLIP)及Caspase-3表达的影响,阐明FADD和FLIP在PD发病机制中的作用及人参皂苷Rg1对多巴胺（DA）能神经元的保护作用。方法： 45只C57BL/6N小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组,每组15只。模型组小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP),人参皂苷Rg1组小鼠注射MPTP前先注射人参皂苷Rg1,对照组小鼠腹腔注射生理盐水。观察各组小鼠行为学变化;采用免疫组织化学法和免疫蛋白印迹法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶（TH）、FLIP、FADD及Caspase-3的表达。结果：与对照组比较,模型组小鼠出现典型PD症状,黑质区TH阳性细胞数明显减少(P<0.01),FADD、FLIP及Caspase-3阳性细胞数明显增加(P<0.01),胞浆染色深;FADD、FLIP及Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,人参皂苷Rg1组小鼠PD症状减轻,黑质区TH阳性细胞数明显增多(P<0.01),FADD、FLIP及Caspase-3阳性细胞数明显减少(P<0.01),胞浆染色浅;FADD、FLIP和Caspase-3蛋白表达水平降低 (P<0.01)。FADD与Caspase-3阳性细胞数呈正相关关系(r= 0.791,P< 0.05)。结论：人参皂苷Rg1可通过影响PD模型小鼠黑质区FADD和FLIP的表达对DA能神经元起到一定的保护作用。     

人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3对雄性生殖功能损伤模型小鼠生殖功能的改善作用

目的：探讨人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3对邻苯二甲酸二丁酯（DBP）诱导的雄性生殖功能损伤模型小鼠生殖功能的改善作用,阐明人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3对生殖功能保护作用的相关机制,为其深入开发提供实验依据。方法：28只清洁级雄性C57BL/6小鼠随机分为模型组（400 mg·kg^-1 DBP）、人参皂苷Rg1+DBP组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg1,400 mg·kg^-1 DBP）、人参皂苷Rg3+DBP组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg3,400 mg·kg^-1 DBP）和联合组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg1,20 mg·kg^-1人参皂苷Rg3,400 mg·kg^-1DBP）,每组7只。DBP溶于玉米油于每天上午灌胃给药,人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3溶于生理盐水于每天下午皮下注射给药,每天各给药1次,连续给药35 d。采用WLJY-9000型精子质量检测系统检测各组小鼠的精子密度、精子活力和总畸形率,HE染色观察小鼠睾丸组织病理形态表现,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测小鼠血清中睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）水平,采用免疫荧光法检测睾丸组织缝隙连接蛋白43（Cx43）蛋白表达水平。结果：与模型组比较,联合组小鼠睾丸脏器系数明显升高（P<0.05）,人参皂苷Rg1+DBP组、人参皂苷Rg3+DBP组和联合组小鼠精子密度和精子活力明显升高（P<0.01）;与模型组比较,人参皂苷Rg1+DBP组、人参皂苷Rg3+DBP组和联合组小鼠血清中T和LH水平明显升高（P<0.01）,FSH水平明显降低（P<0.01）,小鼠睾丸组织中Cx43蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。HE染色,模型组小鼠睾丸组织生精上皮较薄,管腔中生精细胞严重脱落;与模型组比较,人参皂苷Rg1+DBP组和人参皂苷Rg3+DBP组小鼠睾丸组织生精上皮变厚,管腔中脱落细胞较少;联合组小鼠睾丸组织生精上皮结构完整,各级生精细胞排列规则,腔内精子丰富。析因分析,人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3可致小鼠精子活力（F=6.704,P=0.016）、血清中T水平（F=4.912,P=0.036）和睾丸组织中Cx43蛋白表达水平（F=6.937,P=0.018）升高。结论：人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3单独使用及人参皂苷Rg1与人参皂苷Rg3联合使用,可提高精子密度和精子活力,使小鼠血清中T和LH水平升高,FSH水平降低,减轻小鼠生殖功能损伤,其作用机制可能与上调Cx43表达水平发挥生精保护作用有关,可抑制DBP所致的生殖功能损伤,且人参皂苷Rg1与Rg3联合使用表现为协同作用。     

大鼠缺血后肢局部应用bFGF对血管新生的影响

目的 观察不同月龄大鼠缺血后肢肌肉内局部应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对血管新生的影响.方法 Wistar大鼠40只,按月龄分为A组(4个月)和B组(16个月),A组又分为A1、A2组,B组又分为B1、B2组,每组10只大鼠.40只大鼠均切断左股动脉,制作后肢缺血模型.成模后A1和B1组大鼠缺血后肢肌肉内多次注射重组牛bFGF蛋白;A2和B2组则给予等量生理盐水.术后4周,取各组大鼠内收肌组织行病理组织学检查,采用图像分析系统计算血管密度,免疫组化方法 检测内收肌中VEGF阳性表达的血管数.结果 各组大鼠缺血后肢肌内血管密度及VEGF阳性表达的血管数比较,A1组多于A2组,B1组多于B2组,差异均有显著意义(t=3.30～3.50,P<0.05);其他各组比较,差异无显著性(P>0.05).结论 在不同月龄大鼠缺血后肢肌肉内注射bFGF蛋白可促进肢体血管新生,改善肢体缺血状态,且与月龄无关.     

人参皂苷Rg1上调miR-298抑制胰腺癌肿瘤生长

目的 探讨人参皂苷Rg1对胰腺癌的影响及调控机制。方法 采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）检测0、2.5、5、10、20μmol/L人参皂苷Rg1对人胰腺癌细胞PANC-1细胞活力的影响,流式细胞术检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞凋亡的影响,Western blot检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞BCL-2相关X蛋白（BAX）和B淋巴细胞瘤-2蛋白（BCL2）表达的影响,Transwell实验检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞侵袭能力的影响,划痕实验检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞迁移能力的影响,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞miR-298水平的影响;将胰腺癌细胞分为三组：对照组、人参皂苷Rg1组和人参皂苷Rg1+miR-298 inhibitor组,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测BAX和BCL2蛋白的表达;构建胰腺癌荷瘤小鼠,进行人参皂苷Rg1处理,观察瘤体组织大小和重量变化,Western...     

人参皂苷Rg1对大鼠急性缺血心肌血管再生的促进作用

目的 研究人参皂苷Rg1对急性心肌缺血大鼠心肌血管再生的分子机制.方法 建立大鼠急性心肌缺血模型,48只大鼠随机抽签法分为急性心肌缺血模型组,阳性药组(美托洛尔4.5 mg/kg),人参皂苷Rg1 5、10、15 mg/kg组,假手术组,每组各8只.连续腹腔注射14 d后取材.TTC法测定心肌梗死面积,免疫组化染色法测定心肌梗死边缘区微血管密度,心肌梗死边缘区VEGF、VEGFR1、VEGFR2和p-Akt表达,Griess法测定大鼠心肌组织NO水平.结果 与模型组比较,人参皂苷Rg1 10、15 mg/kg组心肌梗死面积明显减小(P＜0.01),微血管密度显著增加(P＜0.01).人参皂苷Rg1 10 mg/kg组VEGF、VEGFR1、VEGFR2及p-Akt表达均为次强阳性,Rg1 15 mg/kg组VEGF、VEGFR1、VEGFR2及p-Akt表达则均为强阳性,结果与阳性药物作用相当,其中以Rg1 15 mg/kg剂量效果最佳.此外,与模型组比较,人参皂苷Rg110、15 mg/kg组心肌组织NO水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 人参皂苷Rg1可促进大鼠急性缺血心肌血管再生,该作用与人参皂苷Rg1增加心肌组织VEGF、VEGFR、p-Akt以及NO的表达有关.     

骨髓基质干细胞联合 rhVEGF治疗肢体缺血的实验研究

目的：研究骨髓基质干细胞移植联合 rhVEGF 对兔肢体缺血的治疗效果。方法手术制作兔后肢缺血模型,之后将骨髓基质干细胞和/或 rhVEGF 注射到局部缺血组织中,对照组注射生理盐水。结果移植后2周、4周各组微血管计数比较,均为 P ﹤0.05,差别有统计学意义。移植后2周、4周缺血组织中 VEGF 蛋白的变化：各组间比较,P ﹤0.05,差别有统计学意义。结论骨髓基质干细胞移植联合 rhVEGF 治疗肢体缺血效果显著,骨髓基质干细胞移植促进 VEGF 分泌,而后者反过来促进干细胞向血管内皮细胞分化,形成新生微血管,加快侧枝循环网络的重建,增加缺血组织血流灌注。     

叶酸对高脂血症状态下缺血性血管新生的改善作用

目的检验口服叶酸能否改善高脂血症(HC)对缺血组织血管新生的抑制。方法雄性大鼠54只,随机分为对照组、HC组和HC 叶酸(F)组,每组18只。用手术的方法结扎大鼠左侧股动、静脉,观察其缺血下肢的血管新生情况。结果术后14 d血流仪分析显示:HC组缺血/非缺血下肢血流比值较对照组明显下降;毛细血管评分记数和毛细血管密度均表明HC组明显低于对照组;而HC F组均较HC组明显升高;上述结果与组织中一氧化氮(NO)和环磷酸鸟酸(cGMP)含量变化有关。结论HC对下肢缺血性血管新生和侧枝血管的建立有明显的抑制作用,口服叶酸能够使被抑制的缺血性血管新生得以恢复。     

Opposite effects of WEB2086 on angiogenesis in atheromas and ischemic hindlimb of apoE gene deficient mice

Background  Our previous research has suggested that platelet activating factor receptor was related to atherosclerosis. The present study investigated the effect of a platelet activating factor receptor antagonist- WEB2086 on angiogenesis in aortal plaque and ischemic hindlimb of apolipoprotein E-deficient mice.
Methods  Eight-week-old apolipoprotein E-deficient mice were fed with a 0.15% cholesterol diet to develop advanced lesions. At age 32 weeks unilateral hindlimb ischemia was surgically induced and the mice were divided into two groups: with or without WEB2086 mixed with their drinking water (4.3 mg in 100 ml). At age 40 weeks blood was collected from the orbit for measurement of serum lipids and an enzyme linked immunosorbent assay was used to determine platelet activating factor and oxidized low density lipoprotein in the gastrocnemius and aorta. Whole-Mount CD31 stain and plaque-associated sprouting have been used to estimate angiogenesis in plaque from the aorta and laser Doppler perfusion imaging and immunohistochemical expression of von Willebrand factor have been used to estimate angiogenesis in ischemic hindlimb.
Results  The lipid composition of serum was not different between the groups. However, the amount of platelet activating factor and oxidized low density lipoprotein detected in the aorta was significantly higher than that in the gastrocnemius of ischemic hindlimb. The ratio of lesion to aorta levels was significantly reduced by administration of WEB2086, (31.52±6.18)% vs (55.58±8.34)%, P<0.01. The mean density of intimal capillaries in atherosclerotic plaque, (31.13±9.20)% vs (57.74±11.28)%, P<0.01, and the mean number of sprouts per aorta were significantly reduced, 183.92±34.17 vs 392.54±76.79, P<0.01, in the WEB2086 group. Blood flow (0.85±0.12 vs 0.45±0.06, P<0.01) and capillary density of ischemic hindlimb (1.18±0.17 vs 0.53±0.09, P<0.01) were markedly increased in apolipoprotein E-deficient mice treated with WEB2086 versus controls.
Conclusion  The study provides evidence that WEB2086 can inhibit angiogenesis in atherosclerotic plaque but promote it in ischemic hindlimb.

     

人参皂苷Rg3对HSE模型鼠的治疗作用及免疫调节效应

目的：研究人参皂苷Rg3对单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)模型鼠的治疗作用及其免疫调节效应。方法：腹腔注射单纯疱疹病毒1(HSV-1)病毒悬液,用PBS做六个稀释度10倍递次稀释,分别为10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5和10^-6,制备小鼠HSE模型。硝酸还原酶法检测小鼠脑组织NO含量。腹腔注射人参皂苷Rg3,剂量分别为0.3、1.0和3.0 mg•kg^-1,观察Rg3对HSE模型鼠存活时间的影响和脑组织病理形态的改变。MTT法检测Rg3对小鼠淋巴细胞转化功能和NK细胞毒活性的影响,鼠脾T淋巴母细胞增殖分析法测定上清中IL-2活性,细胞病变抑制法测定IFN-γ活性。结果：成功建立HSE小鼠模型。HSE模型鼠脑组织中NO含量高于对照组(P<0.05)。0.3 mg•kg^-1Rg3组和疱疹性脑炎小鼠的存活时间延长,脑组织病理改变减轻。0.4 mg•kg^-1Rg3组SI、IL-2和IFN-γ高于对照组(P<0.05),NK细胞毒活性高于对照,但差异无显著性(P<0.05)。结论：Rg3对HSE小鼠具有保护作用,具有免疫调节效应,是一种具有潜在开发前景的抗HSV-1药物。     

兔缺血后肢静脉动脉化后远端形态学及微循环的改变

目的研究静脉动脉化对兔后肢缺血形态学及微循环的影响。方法制备兔单侧后肢缺血动物模型 ,在此基础上即刻行股浅动脉近侧端与伴行股浅静脉的端侧吻合 ,完成缺血 动静脉转流模型。于实验的第 1周、第4周时 ,分别取缺血组、缺血 动静脉转流组术肢远端的腓肠肌及胫神经组织作光、电镜观察 ,并于术前、术后 4周采集转流组的股动脉、股深静脉血做血气分析。结果缺血组术肢可见跛行 ,肢体坏死 ,动物 1周后死亡。光、电镜观察显示 :转流组术后 1周肌肉、神经组织变性坏死 ;术后 4周肌肉、神经组织出现修复性改变。血气分析显示 :术前灌注动脉血和回流静脉血与术后 4周血液比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论分期静脉动脉化可使缺血肢体的组织营养、微循环得到有效改善     

高胆固醇饲料喂养的大鼠缺血下肢血管新生受抑制的机制

目的 以喂养高胆固醇饲料造成高脂血症(HC)的大鼠为研究对象。观察HC对缺血性血管新生的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组和HC组。对照组给予正常的普通饲料，HC组给予含2％胆同醇的饲料。喂养14d后用手术的方法切除各动物左侧股动、静脉。造成左下肢缺血。分别按各组方法再喂养14d后．观察两组动物缺血性血管新生的情况。结果 HC组血清中同型半胱氨酸(Hcy)显著升高，而血清中叶酸和混合一氧化氮(NOx)浓度明显低于对照组；HC组缺血／非缺血下肢血流比值、下肢血管造影后血管计数明显低于对照组；HC组大鼠缺血下肢肌肉内毛细血管密度以及NOx和环磷酸鸟苷(cGMP)的含量明显低于对照组。结论 用高胆固醇饲料喂养造成HC的大鼠缺血下肢侧支血管和血管新生明显受到抑制。且与缺血组织中NOx和cGMP降低以及血清中NOx、Hcy和叶酸变化有关。     

人参皂苷Rg1对急性心肌梗死大鼠血管新生的作用

目的:研究人参皂苷Rg1对急性心肌梗死(AMI)大鼠血管新生的影响及其机制。方法:建立Wistar大鼠急性心肌梗死模型,分假手术组、急性心肌梗死对照组、人参皂苷Rg1低剂量治疗组(1mg/kg)和高剂量治疗组(5mg/kg),于术后3,7,10,14d测定血清心肌酶、心肌梗死面积、梗死区微血管密度,RT-PCR法检测梗死区心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。结果:心肌梗死组织中各时段假手术组的微血管密度、VEGFmRNA表达均低于手术各组(P<0.01);治疗组心肌酶及心肌梗死面积明显降低(P<0.05),梗死区血管生成数量稳定持续增加,与对照组有显著差异(P<0.01);心肌梗死后VEGFmRNA表达随缺血时间的延长(3,7,10d组)有增高趋势,治疗组明显升高(P<0.01),14d时VEGFmRNA的增长出现停止或下降。结论:严重缺血急性期可刺激心肌组织产生大量的VEGF起自我保护作用,人参皂苷Rg1增加其表达,并可刺激心肌梗死区的血管生成。     

人参皂苷Rg1联合抗生素治疗小鼠脓毒症急性肺损伤

  目的  观察人参皂苷Rg1联合抗生素亚胺培南对脓毒症急性肺损伤的影响。  方法  C57BL/6雄性小鼠以盲肠穿刺法建立脓毒症模型,将模型小鼠随机分为模型组、亚胺培南组、人参皂苷Rg1组、人参皂苷Rg1+亚胺培南组,每组10只。另取10只C57BL/6小鼠只开腹不穿刺,作为假手术组。各组于术后2 h、26 h、50 h腹腔注射给药。末次给药2 h后（术后52 h）,取小鼠动脉血液测定氧合指数,取肺组织测定肺脏湿/干质量比,HE染色观察肺脏炎症,ELISA测试盒检测肺泡灌洗液白介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α及核转录因子（NF）-κB的水平,蛋白印迹及免疫组织化学染色检测肺组织NF-κB p65的表达。  结果  各给药组均能够显著降低脓毒症小鼠的肺脏湿/干质量比,并升高血液中的氧合指数（P<0.01）,降低肺泡灌洗液中IL-1β、IL-6、TNF-α及NF-κB水平（P<0.01）,同时降低肺组织中NF-κB p65的表达（P<0.01）。人参皂苷Rg1合并亚胺培南应用时,与单用人参皂苷Rg1及单用亚胺培南组相比,上述指标更接近对照组水平。HE染色结果显示给药治疗后的各组脓毒症小鼠的肺泡炎细胞浸润减轻,联合用药组的肺脏组织形态与假手术组最为接近。  结论  人参皂苷Rg1单用和联用均能够抑制脓毒症小鼠的肺脏炎症,以抗生素治疗脓毒症时或可考虑联合使用。     

雷公藤化合物对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的:通过观察三种雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook,TW)化合物TW1、TW2和TW3对鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管生成的影响,探讨雷公藤的抗新生血管形成作用。方法:50枚新鲜香港麻花鸡种蛋,随机分为5组:PBS组、TW1组、TW2组、TW3组、参一胶囊(ginsenoside,Rg3)组,每组各10枚。种蛋消毒后,放入37.8C恒温箱内孵育6 d,暴露尿囊膜,将含有待测品的滤纸放在尿囊膜血管较少部位,继续孵育2 d,以滤纸为中心,把膜剪下,固定,拍照并记录各组CAM血管生长情况。结果:PBS组CAM血管及其网络清晰可见,生长良好;TW1、TW2、TW3(剂量均为10μg/枚)处理组的毛细血管数目较PBS组明显减少,血管结构模糊,颜色变浅、苍白,三者对CAM血管生成的抑制率分别为80%、60%、100%;阳性对照Rg3在相同剂量时,对CAM血管生成的抑制率仅10%。结论:三种雷公藤化合物TW1、TW2、TW3对CAM血管生成均有明显的抑制作用,值得进一步研究。     

高血糖状态对缺血后血管新生影响的机制研究

目的探讨链脲佐菌素(STZ)诱导的高血糖状态对大鼠单侧下肢缺血后血管新生影响的作用机制。方法糖尿病组(n=18)采用柠檬酸钠缓冲液稀释STZ,70 mg/kg一次性腹腔注射制作糖尿病模型;正常对照组大鼠(n=18)给予等量柠檬酸钠缓冲液一次性腹腔注射。均手术结扎切除左侧股动、静脉造成单侧下肢缺血。分别于手术当天和第7天检测尾静脉血糖;第15天两组各处死9只大鼠检测血清血糖、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、总抗氧化能力(TAOC)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、肌肉组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和环磷酸鸟苷(cGMP)含量,碱性磷酸酶染色法测定缺血区域肌肉毛细血管密度;两组剩余各9只大鼠血管造影法观察双下肢血管生成情况。结果术后15 d,毛细血管缺血区域毛细血管评分记数和毛细血管密度均表明糖尿病组明显低于正常对照组(P<0.05),与血清中血糖、HDL及组织中的SOD、XOD、NO和cGMP含量变化相关。结论STZ诱导的高血糖状态对缺血后血管新生有明显的抑制作用,可能与糖脂代谢紊乱、氧化应激状态及内皮功能受损有关。     

Nerve Growth Factor Promotes Angiogenesis and Skeletal Muscle Fiber Remodeling in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Background:

Therapeutic angiogenesis has been shown to promote blood vessel growth and improve tissue perfusion. Nerve growth factor (NGF) has been reported to play an important role in both physiological and pathological angiogenesis. This study aimed to investigate the effects of NGF on angiogenesis and skeletal muscle fiber remodeling in a murine model of hindlimb ischemia and study the relationship between NGF and vascular endothelial growth factor (VEGF) in angiogenesis.

Methods:

Twenty-four mice were randomly allocated to normal control group (n = 6), blank control group (n = 6), VEGF gene transfection group (n = 6), and NGF gene transfection group (n = 6). The model of left hindlimb ischemia model was established by ligating the femoral artery. VEGF₁₆₅ plasmid (125 μg) and NGF plasmid (125 μg) was injected into the ischemic gastrocnemius of mice from VEGF group and NGF group, respectively. Left hindlimb function and ischemic damage were assessed with terminal points at 21^th day postischemia induction. The gastrocnemius of four groups was tested by hematoxylin-eosin staining, proliferating cell nuclear antigen and CD34 immunohistochemistry staining, and myosin ATPase staining. NGF and VEGF protein expression was detected by enzyme-linked immunosorbent assay.

Results:

On the 21^th day after surgery, the functional assessment score and skeletal muscle atrophy degree of VEGF group and NGF group were significantly lower than those of normal control group and blank control group. The endothelial cell proliferation index and the capillary density of VEGF group and NGF group were significantly increased compared with normal control group and blank control group (P < 0.05). The NGF and VEGF protein expression of NGF group showed a significant rise when compared with blank control group (P < 0.05). Similarly, the VEGF protein expression of VEGF group was significantly higher than that of blank control group (P < 0.05), but there was no significant difference of the NGF protein expression between VEGF group and blank control group (P > 0.05). The type I skeletal muscle fiber proportion in gastrocnemius of NGF group and VEGF group was significantly higher than that of blank control group (P < 0.05).

Conclusions:

NGF transfection can promote NGF and VEGF protein expression which not only can induce angiogenesis but also induce type I muscle fiber expression in ischemic limbs.