rolC基因对颠茄托品烷生物碱合成的影响

发根农杆菌浸染植物后产生的发根可合成高水平次生代谢产物,这种代谢增强作用是由rol基因诱导激发的,因此可利用rol基因提高颠茄中托品烷生物碱(tropane alkaloids, TAs)的合成能力。本研究以颠茄为实验材料,将发根农杆菌pRiA4质粒上的rolC基因通过CaMV35S启动子驱动,导入颠茄中超表达。分析转基因颠茄的表型、TAs含量以及TAs合成途径关键酶基因转录表达水平表化。结果表明,转基因颠茄表现出根系发达、雄性不育、雄蕊柱长高于雌蕊、提前开花、节间缩短、花小且多、腋芽和侧芽增多、顶端优势下降和叶片狭长等表型;转基因颠茄的TAs含量均显著高于对照,莨菪碱、山莨菪碱和东莨菪碱含量最高可达对照的2.58、3.59和15.77倍; TAs合成途径中的3个关键酶基因腐胺N-甲基转移酶(PMT)、托品酮还原酶I (TRⅠ)和莨菪碱6-β-羟化酶(H6H)的表达量与对照相比表达上调。以上研究表明rolC基因通过上调颠茄TAs合成关键酶基因的表达提高了颠茄中TAs的合成能力,为利用rolC基因进行高TAs含量的颠茄分子育种奠定了基础。     

rolB基因对颠茄表型发育和托品烷生物碱合成的影响

发根农杆菌pRiA4质粒上的rol基因是促进次生代谢的强效基因,可利用rol基因对颠茄进行分子育种以提升颠茄中托品烷生物碱(tropane alkaloids, TAs)含量。本研究将rolB基因在颠茄植株中进行超表达,为了研究rolB基因对颠茄TAs生物合成的影响,分析了转基因颠茄的表型、TAs含量及TAs合成途径中关键酶基因的表达水平。结果表明,转基因颠茄根系发达,叶片增大、叶片鲜重增加、叶片颜色加深,花朵增大、花形改变,雌蕊高度降低,花粉活力下降。转基因颠茄茎中TAs的含量显著高于对照,东莨菪碱、山莨菪碱、莨菪碱的含量分别为对照的2.11～2.91、1.23～2.37、4.88～5.20倍。与对照组相比, TAs合成途径中的关键酶基因N-甲基腐胺转移酶(PMT)、吡咯烷聚酮合酶(PYKS)、托品酮还原酶I (TRI)、芳香族氨基酸氨基转移酶4 (ArAT4)、UDP-糖基转移酶1 (UGT1)和莨菪碱6-β-羟化酶(H6H)的表达上调,且托品酮还原酶II (TRII)作为代谢分流基因表达下调。研究表明rolB基因通过增强TAs合成途径代谢流和减弱竞争支路代谢分流,增强了颠茄根中T...     

过表达内源PMT和H6H基因对颠茄发根托品烷类生物碱合成的影响

颠茄是我国药典规定的托品烷类生物碱包括东莨菪碱和莨菪碱最主要的商业栽培的药源植物。本研究采用基于发根的基因表达系统,农杆菌介导遗传转化颠茄,潮霉素筛选获得转颠茄自身PMT和H6H基因发根;基因组PCR鉴定转基因发根;液体摇床培养后,HPLC测量莨菪碱和东莨菪碱含量;qPCR检测颠茄PMT和H6H基因表达水平。基因组PCR检测获得5个双基因共转化颠茄发根系,其中2个发根系(PH2和PH14)的总生物碱含量得到显著提高,最高的PH2总生物碱含量为非转基因发根的2.7倍;另外3个转基因发根系总生物碱含量与对照相比没有显著性差异。4个转基因发根系(PH2、PH32、PH14和PH20)东莨菪含量都有提高,其中PH2东莨菪碱含量比对照提高了8.2倍。基因表达量与生物碱含量结果基本一致,说明颠茄发根中PMT和H6H两者同时维持高水平表达可以极大程度的促进东莨菪碱积累。     

HPLC法测定天仙子和马尿泡中3种托烷类生物碱的含量

采用 Kromasil C18ODS色谱柱 (4.6 mm× 15 0 mm,5 μm) ,以甲醇 -水 (2 5∶ 75 ,水中含 2 0 mmol·L-1醋酸钠、 0 .0 2 %三乙胺、 0 .3%四氢呋喃 ,p H 6 .0 )为流动相 ,流速为 1.0 m L· min-1,检测波长为 2 15 nm,外标法定量。此方法将 3种生物碱同时进行了定量测定 ,且方法简便、高效、灵敏、重现性好。     

消旋山莨菪碱及其片剂中托烷生物碱的鉴别

目的对中国药典收载的消旋山莨菪碱片的托烷生物碱基团的鉴别试验提出修改建议。方法将消旋山莨菪碱片剂及其原料药的鉴别试验与药典附录Ⅲ(一般鉴别试验)中有关托烷生物碱类的鉴别试验进行比较、分析。结果消旋山莨菪碱片剂与原料药及附录中有关托烷生物碱基团的鉴别试验方法存在不一致之处。结论应对消旋山莨菪碱片剂鉴别方法进行修订。     

苯甲酰胺类抗精神病药物的研究:若干3α-去甲托品烷衍生物的合成

Reductive amination of8- benzyl-nortropinone(3 )with ammonium acetate andsodium cyanoborohydride yielded the 3 α-amino nortropane derivative 4 which was condensed withsubstituted benzoic acids using 2-bromo-N-methyl-pyridinium iodide as condensing reagent to give thetarget compounds 2a～ein an overall yield of 50～60%.Compound 2e showed marked and selectiveaffinity for D-2 receptor.Compound 2d showed definite affinity for D- 1 receptor besides markedaffinity for D-2 receptor.     

苯甲酰胺类抗精神病药物的研究：若干3α－去甲托品烷衍生物的合成

苯甲酰胺类抗精神病药物的研究：若干３α－去甲托品烷衍生物的合成褚国华，周启霆（上海中国科学院上海药物研究所２０００３１）在治疗精神病的药物中，有一类称为苯甲酰胺类抗精神病药物。其分子结构可用如下通式表示，特点为分子中含叔胺及苯甲酰胺单元，其间嵌入各种...     

抗胆碱能药物的研究 3-取代托品衍生物的合成

本文报道24个3-取代托品乙醇类、乙烯类和乙烷类化合物的合成。药理筛选结果表明:大多数化合物有明显的抗胆碱能作用,且中枢与外周作用相当。     

苯甲酰胺类抗精神病药物的研究：6β－羟基，乙酰氧基和苯甲酰氧基－3α及β－托品烷衍生物的合成

合成了１５个３α和β－取代苯申酰氨基－６β－羟基，乙酰氧基和苯甲酰氧基－托品烷类化合物。其中化合物５ｄ，１２ｃ和１２ｄ对Ｄ－１和Ｄ－２受体都有一定的亲和作用。     

苯甲酰胺类抗精神病药物的研究:6β-羟基,乙酰氧基和苯甲酰氧基-3α及β-托品烷衍生物的合成

合成了15个3α和β-取代苯申酰氨基-6β-羟基,乙酰氧基和苯甲酰氧基-托品烷类化合物。其中化合物5d,12c和12d对D-1和D-2受体都有一定的亲和作用。     

抗胆碱药物3-取代托品衍生物的合成

本文报道了5个3-取代托品乙醇类、乙烯类和乙烷类新化合物的合成。药理实验结果表明,它们都有一定的抗胆碱作用。     

胆碱能M受体拮抗剂2β－（2－环戊基－2－羟基－2－苯基乙氧基）托品烷光学异构体的合成

以（１Ｓ）－（＋）－１０－樟脑磺酸－２Ｒ－和－２Ｓ－２－环戊基－２－羟基－２－苯基乙醇酯分别与１Ｒ，２Ｓ和１Ｓ，２Ｒ－托品醇反应，制备了四个不同构型的２β托品醚目标化合物．大鼠脑Ｍ受体结合试验表明，异构体之间活性差异显著，最大相差约２２０倍。当分子中季碳为Ｒ构型时，对活性影响最大。     

胆碱能M受体拮抗剂:2α-(2',2'-二取代基-2'-羟基乙氧基)托品烷光学异构体合成

Eight 2α-(2',2'-disubstituted-2'-hydroxyethoxy) tropanes(2)were prepared byreactions of enantiomeric and racemic 2α-tropanols with 1,1-disubstituted oxiranes.The optical purityof these diastereoisomers was analyzed by RP-HPLC. The results of preliminary screening indicatedthat the stereochemical variations of these isomers exhibited great influence on the binding affinity forrat brain M-receptor Compounds with 2' R configuration for the tertiary carbon showed greateractivity.     

托品酰胺与阿托品滴眼液对儿童验光结果的影响比较

目的了解对屈光不正儿童应用托品酰胺或阿托品滴眼液后，散瞳验光及复验结果的符合率。方法186例屈光不正患儿(共372只眼)，均先给予托品酰胺扩瞳，5 min滴眼1次，共3次，最后1次滴药后30 min进行检影验光，并于第2天复验。再嘱患儿自实验第2天复验后开始，用阿托品滴眼液每天滴眼3次，共3 d，第4天复诊时再行验光，并于3周后复验。比较两种药物散瞳验光和复验的结果。结果4～10岁屈光不正儿童远视占多数，～14岁则以近视多见。～14岁近视患儿采用托品酰胺与阿托品散瞳后验光及复验的结果差异无显著性(P＞0.05)，其他患儿采用这两种药物散瞳验光及复验的结果差异有显著性(P＜0.05)。结论托品酰胺是较大年龄(10～14岁)近视性儿童散瞳验光的理想药物，但对其他年龄段儿童和托品酰胺散瞳验光后发现有复性散光的患儿，应使用阿托品。     

匹鲁卡品对Wistar大鼠心律失常的影响

目的观察匹罗卡品对Wistar大鼠心律失常的作用。方法分别以乌头碱、氯化钡制作Wistar大鼠心律失常模型,观察0.2 mg.kg-1匹罗卡品舌下静脉注射对心律失常的作用。结果匹罗卡品可明显延迟乌头碱引起Wistar大鼠室性心律失常的出现(P<0.05)、延长其出现心律失常后的存活时间(P<0.05);匹罗卡品能明显延迟氯化钡引起Wistar大鼠双相室性心律失常的出现(P<0.01)、缩短其心律失常的持续时间(P<0.01);但上述作用可被M3受体阻滞剂4-DAMP完全逆转。结论匹罗卡品通过激动Wistar大鼠心肌M3受体而产生对抗乌头碱和氯化钡诱发Wistar大鼠心律失常的作用。     

胆碱能M受体拮抗剂：2α－（2＇，2＇－二取代基－2＇－羟基乙氧基）托品烷光学异构体合成

胆碱能Ｍ受体拮抗剂：２α－（２＇，２＇－二取代基－２＇－羟基乙氧基）托品烷光学异构体合成王林，恽榴红，张其楷（军事医学科学院毒物药物研究所，北京１００８５０）目前临床所用托品类抗胆碱药一般为３位取代托品酯类衍生物，这类药物作用较广泛，但选择性不高。Ａ...     

雾化吸入溴化异丙托品对慢阻肺患者肺功能的影响

本文探讨雾化吸入溴化异丙托品对慢阻肺患者肺功能的影响,以验证其支气管扩张作用。随机分为两组,治疗组吸入溴化异丙托品,对照组吸入生理盐水。结果显示：治疗组不论雾化吸入前后自身对照还是与对照组比较,吸入嗅化异丙托品后RVC、FEV1均有明显增加（P＜0．05）,而对照组雾化吸入前后各肺功能指标均无明显改变（P＞0．05）。以上结果表明,雾化吸入溴化异丙托品可改善患者的肺功能,且能使气道持久扩张,爱喘乐是一种有效、安全的支气管扩张剂。     

双环醇对组成型雄甾烷受体和孕烷X受体介导的CYP3A4和CYP286转录的调控

目的：构建pGL4．17-CYP3A4启动子嵌合报告基因表达载体,研究双环醇是否通过活化组成型雄甾烷受体（Constitutive Androstane Receptor,CAR）和孕烷X受体（pregnane Xreceptor．PXR）影响CYP3A4及CYP286的转录。方法：以提取的人肝组织基因组DNA为模板,应用RT-PCR技术,扩增获得CYP3A4启动子的近端启动序列（-362／＋53）和远端调控序列（-7836／-7208）,并连接到pGEM-T载体,测序正确后将目的基因片段先后插入至pGL4．17报告基因表达载体。将hPXR、hCAR表达载体分别与CYP3A4及CYP286报告载体共转染HepG2细胞,利用双荧光素酶报告基因系统检测CYP3A4及CYP286均具有启动活性后,双环醇分别与转染hPXR和CYP3A4、hCAR和CYP3A4、hCAR和CYP286的HepG2细胞温孵24h后,收获细胞并裂解,检测活性以分析双环醇对CYP3A4及CYP286的转录调节途径。结果：获得pGL4．17-CYP3A4启动子嵌合报告基因表达载体,经酶切鉴定及核酸序列测定证实该报告基因表达载体构建成功。双环醇主要通过活化CAR受体途径,调控CYP3A4和CYP286的转录,而PXR受体途径较少参与。     

CYP3A4,CYP3A5和MDR1基因多态性对环孢素处置的影响

环孢素是一个广泛用于器官移植患者的免疫抑制剂,具有治疗指数窄,不同个体间药代动力学差异较大的特点。它主要通过肝脏和小肠的CYP3A4和CYP3A5代谢;同时它又是药物转运体的底物。不同个体间药物代谢酶和转运体活性的差异可能是造成不同器官移植患者环孢素药代动力学差异的主要原因。而遗传因素即编码药物代谢酶和转运体基因序列的差异可能是其产生活性差异的分子机制。因此,从编码药物代谢酶和转运体的基因入手,可能会为器官移植患者提供最优的治疗方案。     

豆腐果苷对人孕烷X受体介导的CYP3A4和MDR1的转录调节作用

目的:建立和验证人孕烷X受体(human pregnant X receptor,hPXR)介导的CYP3A4、MDR1药物诱导剂的体外筛选体系,考察豆腐果苷对hPXR介导的CYP3A4、MDR1的转录调节作用。方法:利用构建的双荧光素酶报告基因系统,将表达载体和报告载体共转染HepG2细胞,以10μmol/L利福平为阳性对照,用不同浓度(0.004、0.04、0.4μmol/L)豆腐果苷处理48h后裂解细胞进行双荧光素酶活性检测。结果:不同浓度的豆腐果苷均不能通过激活hPXR来介导CYP3A4和MDR1表达上调,各浓度处理组的双荧光素酶比活性值与DMSO溶媒组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功构建了hPXR介导的CYP3A4和MDR1药物诱导剂的体外筛选体系,并发现豆腐果苷不能通过激活hPXR介导CYP3A4和MDR1的表达上调。