小窝蛋白-1对人甲状腺上皮细胞增殖、凋亡及胞内活性氧水平的影响

目的: 探讨小窝蛋白-1（Caveolin-1）对人甲状腺上皮细胞系Nthy-ori 3-1增殖、凋亡和胞内活性氧产生的影响。方法: 将正常人甲状腺上皮细胞（Nthy-ori 3-1）分为实验组和阴性对照组,分别转染 Caveolin-1敲减病毒上清液以及阴性对照病毒上清液,以未转染的Nthy-ori 3-1细胞为空白对照组,应用嘌呤霉素筛选出阳性细胞,qRT-PCR和蛋白质印迹检测3组细胞Caveolin-1的mRNA和蛋白表达;MTT 法检测Caveolin-1敲减后细胞增殖能力变化;流式细胞术检测Caveolin 1敲减后细胞的凋亡率;荧光探针DCFH-DA法检测Caveolin-1敲减后细胞内活性氧水平。结果： Caveolin 1抑制性慢病毒感染后,Nthy-ori 3-1细胞Caveolin 1 mRNA和蛋白水平均显著降低（P均<0.01）。抑制Caveolin-1表达后,Nthy-ori 3-1细胞增殖能力较阴性对照组明显降低,凋亡率明显增加,细胞内活性氧水平明显升高（P 均<0.01）。结论： Caveolin-1表达降低通过增加胞内活性氧水平和细胞凋亡,抑制细胞增殖,介导甲状腺上皮细胞损伤。     

ghrelin对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响

目的探讨ghrelin对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖及凋亡作用的影响。方法将不同质量浓度的ghrelin(400、500、600、700、800ng·mL-1)与人卵巢癌细胞株HO-8910共同培养,采用MTT法检测细胞增殖的抑制率,Tunel法检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)的表达。结果ghrelin≥600ng·mL-1时对HO-8910细胞增殖的抑制率具有显著作用(P<0.05)。600ng·mL-1质量浓度的ghrelin作用于HO-8910细胞20min后,细胞凋亡、p-ERK1/2的灰度值均显著减少(均P<0.05)。结论 ghrelin能抑制人卵巢癌细胞株HO-8910增殖、促进其凋亡;ERK1/2可能参与了ghrelin对人卵巢癌细胞株HO-8910作用的过程。 更多还原     

自噬在脂多糖诱导成牙本质细胞凋亡中的作用

目的 探讨自噬在脂多糖（LPS）诱导成牙本质细胞（mDPC-23）凋亡中的作用。方法 将5 μg/mL脂多糖作用于成牙本质细胞0、6、12、24 h后,CCK8检测细胞活力,TUNEL染色检测细胞凋亡。5 μg/mL脂多糖作用细胞24 h后,用Western blot检测自噬标志蛋白LC3、Beclin1和Atg5以及自噬相关通路AKT、p-AKT、mTOR和p-mTOR的表达水平。以脂多糖（5 μg/mL）和脂多糖（5 μg/mL）+3-甲基腺嘌呤（3-MA,5 mmol/L）为实验组,不加脂多糖或3-MA为空白对照组,作用细胞24 h后,Western blot检测凋亡蛋白Caspase 3和Bax的表达水平。结果 脂多糖作用mDPC-23细胞6、12 h,细胞增殖能力和凋亡无明显变化;作用24 h后,其增殖能力较对照组显著降低（P<0.05）,凋亡水平较作用0 h明显增加（P<0.05）。且脂多糖作用mDPC-23细胞24 h后,自噬标志蛋白LC3、Beclin1和Atg5表达较对照组均明显增加（P<0.05）,通路相关蛋白p-AKT和p-mTOR较对照组表达下降（P<0.05）。脂多糖组凋亡蛋白Caspase 3和Bax显著高于对照组（P<0.05）;脂多糖+3-MA组中凋亡蛋白明显低于脂多糖组（P<0.05）。结论 脂多糖可通过诱导mDPC-23自噬发生以促进细胞凋亡;而抑制自噬,可减弱脂多糖的促凋亡作用,提示在炎性牙髓组织损伤中,自噬发挥重要作用。     

小窝蛋白-1敲减对人甲状腺上皮细胞趋化因子mRNA表达的影响

目的: 探讨小窝蛋白-1（Caveolin-1）RNA干扰慢病毒对人甲状腺上皮细胞Nthy-ori 3-1趋化因子mRNA表达的影响。方法: 采用分子克隆技术,根据Caveolin-1的短发夹RNA序列,构建pLKO.1-Caveolin-1重组质粒,将其或空载质粒与慢病毒包膜质粒pMD2.G和包装质粒psPAX2共转染人胚肾上皮293T细胞。48 h后收集病毒液并感染Nthy-ori 3-1细胞,用嘌呤霉素筛选出阳性细胞,于倒置显微镜下观察Nthy-ori 3-1细胞的生长情况;荧光实时定量PCR和蛋白质印迹检测Caveolin-1的敲减效果;荧光实时定量PCR检测CXC趋化因子配体10（CXCL10）、CC趋化因子配体20（CCL20）mRNA表达水平。结果： 慢病毒感染后的Nthy-ori 3-1细胞生长状态良好,Caveolin-1的表达显著降低。抑制Nthy-ori 3-1细胞中Caveolin-1表达后,其CXCL10、CCL20的mRNA表达水平显著上调。 结论： 成功构建Caveolin-1 RNA干扰慢病毒,Caveolin-1可能通过影响某些趋化因子的表达,参与桥本甲状腺炎的发生。     

丙戊酸钠对急性髓系白血病细胞株HL-60增殖和凋亡的影响

目的研究丙戊酸钠（VPA）对急性髓系白血病细胞株HL-60细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用,探讨其可能作用机制。方法采用CCK-8法检测细胞生长抑制率;经瑞氏-姬姆萨（Wright—Giemsa）染色,光镜下观察经VPA处理后细胞的形态学改变;应用流式细胞仪检测细细胞周期和细胞凋亡率。结果VPA对HL-60细胞的增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性。经2．0mmol／LVPA处理HL-60细胞48h后,显微镜下可见凋亡细胞胞体固缩、核固缩、核碎裂及凋亡小体。经1．0和2．0mmol／LVPA处理HL-160细胞48h后,流式细胞仪检查结果表明细胞凋亡率由处理前的（1．25±0．457）％分别上升为（3．27±0．984）％和（10．3±3．4）％,差并有统计学意义（P〈O．05）;G0／G1期细胞比例逐渐上升,S期细胞比例及细胞增殖指数（PI）呈下降趋势,细胞被阻滞在G0／G1期（P〈0．01）。结论VPA对HL-60细胞具有增殖抑制和诱导细胞凋亡作用。且呈剂量一时间依赖性;作用机制与细胞周期阻滞有关。     

大黄素抑制食管癌EC-109细胞增殖的机制探讨

目的：探讨大黄素对人食管癌细胞株EC-109增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法：不同浓度（0．0,2．5、5．0、10．0、20．0μg/mL）大黄索作用食管癌细胞EC-109,应用噻唑蓝比色法检测大黄素对食管癌细胞增殖的影响;用Annexin V-FTTC碘化丙啶双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞内活性氧变化情况。结果：不同浓度大黄素可明显抑制EC．109细胞增殖,并且呈浓度-时间依赖性;在作用EC-109细胞2h后,细胞内活性氧明显增加;12h后可见细胞凋亡率分别为8．1％、15．6％、24．0％、36．5％。结论：大黄素能明显抑制EC-109细胞的增殖,通过诱导细胞内活性氧的产生引起食管癌细胞EC-109凋亡。     

奥美拉唑诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制研究

【目的】探讨质子泵抑制剂奥美拉唑体外对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其可能机制。【方法】0、100、200、300μmol／L奥美拉唑分别作用于体外培养的HeLa细胞,荧光显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测凋亡基因caspase-3和bcl-2的mRNA表达。【结果】HeLa细胞经奥美拉唑作用24h后,均可见染色质凝集;MTT法检测示各组24h增殖抑制率为（2．19±0．24）％、（16．70±1．61）％、（27．50±1．37）％和（31．20±2．04）％,48h增殖抑制率为（2．38±0．76）％、（16．80±3．00）％、（40．50±2．64）％和（45．80±2．18）％。增殖抑制率随奥美拉唑浓度和作用时间增加而增加（P〈0．05）;各组流式细胞仪检测24h凋亡率为（3．99±0．75）％、（11．50±2．61）％、（25．70±3．1）％和（37．3±2．67）％;200μmol／L组48h凋亡率为（45±2．15）％,72h为（62．4±2．89）％。细胞凋亡率随奥美拉唑浓度和作用时间增加而增加（P〈0．05）;RT-PCR结果示casepase-3基因表达随奥美拉唑浓度增加而增加,bcl-2基因表达随奥美拉唑浓度增加而降低。【结论】奥美拉唑通过上调casepase-3和下调bcl-2基因的表达,诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡。     

甲状旁腺激素通过非依赖PLC的PKC途径抑制成骨细胞的凋亡

目的观察甲状旁腺激素的非依赖PLC的PKC转导通路（PTH/nonPLC/PKC）是否会对成骨细胞（MC3T3-E1）的凋亡以及 细胞数量具有影响。方法培养MC3T3-E1细胞,以1.5×104密度接种到96孔板,然后置于培养箱培养3 d直到细胞达到汇合状 态,随机分为5 组：按100 nmol/L［Gly1, Arg19］hPTH（1-28）;100 nmol/L［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）;100 nmol/L［Gly1, Arg19］hPTH （1-34）+1 μmol/L Go6983,1 μmol/L Go6983;空白对照组加入等体积的去离子水,分别刺激细胞1、24、48 h,然后使用细胞计数 试剂盒（CCK-8）和Caspase-Glo® 3/7试剂盒（caspase-3）检测细胞的细胞数量与凋亡。结果CCK-8检测结果显示,［Gly1, Arg19］ hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）+Go6983组相比,在1 h和24 h具有提高细胞数量的趋势,但结果并没有统计学差异, 48 h［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-28）组相比,可以明显提高细胞的数量（P<0.05）。进一步的研究发现在 ［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组添加抑制剂Go6983 后,细胞数量增多的效应消失（P<0.05）。Caspase-3 检测凋亡结果显示,［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）+Go6983组相比,在1 h和24 h具有抑制细胞凋亡（细胞凋亡受到抑制）,但是差 异无统计学意义。48 h检测细胞凋亡显示,［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-28）组相比,前者可以明显抑制细 胞凋亡（P<0.05）,给予PKC抑制剂Go6983后,其抑制凋亡现象消失。结论PTH的nonPLC/PKC信号转导通路可能在长时间 （48 h）作用于MC3T3-E1细胞时,可抑制细胞凋亡,提高细胞的数量。     

5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸对人脑胶质瘤SHG-44细胞增殖的作用及其机制

目的：探讨氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸（NPPB）对人脑胶质瘤SHG-44细胞生长的影响,初步阐明NPPB抑制胶质瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡的可能机制。方法：培养人脑胶质瘤SHG-44细胞,将其分为空白对照组和50、100及200  μmol•L^-1 NPPB组,MTT法检测各组SHG-44细胞的增殖活性,细胞分析仪分析细胞周期变化及凋亡率。结果：MTT检测,与空白对照组比较,50   μmol•L^-1 NPPB 组在48 h时细胞增殖活性降低（P<0.05）,200  μmol•L^-1 NPPB组3 h时细胞增殖活性增高（P<0.05）,100和200   μmol•L^-1 NPPB组24和48 h时细胞增殖活性明显降低（P<0.01）。细胞周期检测,与空白对照组比较,50  μmol•L^-1 NPPB组G1期细胞百分数明显减少,G2/M期细胞百分数明显增多（P<0.01）,100和200  μmol•L^-1 NPPB组细胞增殖停滞在G1期（P<0.01）。细胞凋亡检测,与空白对照组比较,100和200  μmol•L^-1 NPPB组细胞凋亡率明显升高,分别达到24.64%和41.85%（P<0.01）。结论：高浓度NPPB可以抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖并诱导其凋亡,提示氯通道在人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖与凋亡中起一定的作用。     

山茱萸总皂甙对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察山茱萸总皂甙（TSCO）对慢性髓系白血病细胞株K562 增殖的抑制作用.方法 用乙醇溶剂回流法提取TSCO,HPD-100大孔吸附树脂对提取液纯化;用MTT法检测不同浓度TSCO对K562细胞增殖的抑制作用;用Hoechst33342/PI荧光染色法检测细胞凋亡情况;比色法测定凋亡相关蛋白Caspase-3活性.结果 TSCO能够抑制K562细胞的增殖,且随着药物浓度（12.5、25、50、100 和200 μg/ml）增大和培养时间（24 h、48 h和72 h）的延长,对K562细胞活性的抑制作用逐渐增强;不同浓度的TSCO处理72 h后,K562细胞出现典型凋亡的三期形态学改变,可见胞体缩小、核染色质聚集、胞浆浓缩、核固缩、核碎裂,还可见膜包裹的凋亡小体;细胞凋亡率随着药物的浓度的增大而升高;TSCO作用72 h后K562细胞的Caspase-3活性明显增高.结论 TSCO能抑制K562细胞增殖,促进K562细胞凋亡,其作用随着作用时间和药物浓度的增加而增强;TSCO诱导K562细胞凋亡的作用可能与Caspase-3的表达增加有关.     

二氢青蒿素抑制大鼠胶质瘤C6细胞增殖和诱导凋亡

目的:研究二氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对大鼠胶质瘤细胞(C6细胞)增殖和凋亡的影响。方法:在培养的C6细胞,加入DHA1～125μmol/L作用24、48、72h。以台盼蓝染色计数和噻唑蓝(MTT)还原反应,观察细胞增殖和活性;以Hoechst33342染色,观察细胞凋亡;以H2DCFDA氧化试验检测细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)变化。结果:DHA5～125μmol/L浓度及时间依赖性抑制C6细胞的增殖,作用48h后的IC50是23.4μmol/L;5～25μmol/L能诱导细胞凋亡(P<0.05);5～125μmol/L DHA可增高细胞内的ROS(P<0.01)。结论:DHA能够抑制C6细胞增殖,并诱导其凋亡,其细胞毒作用与细胞内ROS增加相关。     

巨噬细胞炎症蛋白-1β对人舌鳞癌细胞CAL-27增殖和凋亡的影响

目的 探讨β亚族趋化因子受体5(CCR5)在不同人舌鳞癌细胞株的表达情况以及其配体巨噬细胞炎症蛋白-1β(MIP-1β)对人舌鳞癌细胞株CAL-27增殖和凋亡的影响.方法 采用蛋白印迹法和免疫荧光染色对3种人舌鳞癌细胞株(CAL-27、UM-1、Tca-8113)MIP-1β的相应受体CCR5的表达进行检测;根据MIP-1β刺激浓度的不同,细胞被随机分为4组:0 ng/mL组(对照组)、10 ng/mL组、20 ng/mL组、40 ng/mL组.用CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8)检测MIP-1β在刺激12、24、48 h时,对CAL-27细胞增殖的影响;实验分组同前,分别用0、10、20、40 ng/mL IP-10处理24 h后收集细胞,用Annexin V/PI双染流式细胞仪检测CAL-27细胞的凋亡情况.结果 CCR5在3种人舌鳞癌细胞株均有表达,并且CCR5在3株细胞的胞膜及胞质内均有染色;和对照组相比,MIP-1β对CAL-27细胞有促进增殖的作用.在12 h、24 h时,3种浓度的MIP-1β均能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05);48 h时,10 ng/mL、20 ng/mL的MIP-1β均能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05),但40 ng/mL的MIP-1β对CAL-27细胞的增殖无影响(P>0.05);在24 h时,40 ng/mL MIP-1β组的细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05),而10 ng/mL、20 ng/mL MIP-1β组细胞凋亡率和对照组之间均无显著差异(P>0.05).结论 CCR5在3种人舌鳞癌细胞株的胞膜及胞质内均有表达;MIP-1β对CAL-27细胞有促进增殖的作用,但相对较高浓度的MIP-1β对CAL-27细胞的凋亡也有促进作用.随着较高浓度MIP-1β作用时间的延长,促增殖作用减弱,而这种减弱可能是由MIP-1β的促凋亡作用的逐步发挥所引起的.     

EPA、DHA对脂多糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

摘要：目的观察二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)对正常及在脂多糖(LPS)诱导下的肾小球系膜细胞(GMCs)增殖和凋亡的影响。方法EPA和DHA各设两个终浓度(10μmol／L和100μmol／L),LPS终浓度为10μg／mL,培养时间为24、48和72h,采用MTT法测定细胞增殖;EPA和DHA终浓度为100μmol／L,培养48h后,采用双染色流式细胞术检测细胞凋亡。结果EPA和DHA对正常GMCs无明显影响;对LPS诱导的GMCs增殖有明显抑制作用(P＜0.01),在同等浓度下,DHA的作用强于EPA(P＜0.01);EPA、DHA可明显促进GMCs凋亡。结论EPA和DHA明显抑制LPS诱导的GMCs增殖并促进其凋亡。     

小鼠卵巢内质网应激模型的建立及诱导凋亡的研究

目的通过观察内质网应激(ERS)诱导剂衣霉素(TM)及ERS抑制剂牛磺熊去氧胆酸钠(TUDCA)对ERS相关标识性蛋白表达水平的影响,建立小鼠卵巢ERS模型。方法取4周龄昆明白小鼠卵巢,进行半卵巢培养。实验分组:新鲜对照组,不同浓度TM诱导组(1、5、10、20、30μg·mL-1),TUDCA+TM组、不同浓度TUDCA(1、2、5、10mM)+TM组。通过免疫组织化学技术观测培养1h卵巢内内质网应激伴侣蛋白GRP78、培养3h后ERS凋亡相关蛋白CHOP的表达水平;TUNEL法检测培养3、6、12、24、36、48h后卵巢细胞凋亡情况。结果与新鲜组相比,TM诱导1h后卵巢发生内质网应激反应,TM浓度为5-10μg·mL-1时GRP78表达水平达到最高(P<0.05),之后随TM浓度增加缓慢递减;TM诱导3h后卵巢内ERS凋亡相关蛋白CHOP表达水平在TM 10μg·mL-1处达到最高(P<0.05),凋亡细胞数随着培养时间的延长增加。TUDCA抑制ERS实验显示,随着TUDCA浓度的增大,10μg·mL-1TM诱导的GRP78蛋白表达呈递减趋势,其中TUDCA 10mM组GRP78表达水平基本恢复到新鲜组水平。结论 TM可诱导小鼠卵巢ERS,5μg·mL-1为诱导ERS保护作用浓度,而10μg·mL-1以上则产生ERS途径介导的凋亡。TUDCA可抑制TM诱导的卵巢ERS。     

Cytotoxicity and Apoptosis Induction in Human HepG2 Hepatoma Cells by Decabromodiphenyl Ethane

ObjectiveTo investigate the toxic effects of decabromodiphenyl ethane (DBDPE), used as an alternative to decabromodiphenyl ether in vitro.MethodsHepG2 cells were cultured in the presence of DBDPE at various concentrations (3.125–100.0 mg/L) for 24, 48, and 72 h respectively and the toxic effect of DBDPE was studied.ResultsAs evaluated by the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide and lactate dehydrogenase assays and nuclear morphological changes, DBDPE inhibited HepG2 viability in a time- and dose-dependent manner within a range of 12.5 mg/L to 100 mg/L and for 48 h and 72 h. Induction of apoptosis was detected at 12.5–100 mg/L at 48 h and 72 h by propidium iodide staining, accompanied with overproduction of reactive oxygen species (ROS). Furthermore, N-acetyl-L-cysteine, a widely used ROS scavenger, significantly reduced DBDPE-induced ROS levels and increased HepG2 cells viability.ConclusionDBDPE has cytotoxic and anti-proliferation effect and can induce apoptosis in which ROS plays an important role     

髓相关蛋白14过表达对人甲状腺上皮细胞增殖的影响

目的: 探讨髓相关蛋白14（myeloid related protein 14,MRP14）过表达对人甲状腺上皮细胞增殖及分泌甲状腺激素的影响。方法: 免疫组织化学染色方法检测 MRP14蛋白在单纯性甲状腺肿和桥本甲状腺炎（HT）患者甲状腺组织中的表达;将MRP14基因过表达质粒pcDNA3.1 MRP14或对照质粒pcDNA3.1瞬时转染入人甲状腺滤泡上皮细胞Nthy-ori 3-1,构建MRP14过表达甲状腺滤泡上皮细胞系;转染48 h后收集细胞及培养上清液,实时定量PCR检测 MRP14的转染效果;MTT法检测细胞增殖,化学发光免疫法检测细胞培养上清液中游离甲状腺素（FT4）浓度。结果： 与单纯性甲状腺肿患者相比,桥本甲状腺炎患者甲状腺组织中MRP14蛋白表达明显增多;MRP14基因转染成功后,MRP14过表达组Nthy-ori 3-1细胞存活率较对照组明显降低（P＜0.01）,培养上清液中 FT4浓度较对照组明显降低（P＜0.01）。结论： 成功构建MRP14过表达甲状腺滤泡上皮细胞系;MRP14蛋白可能通过抑制甲状腺细胞增殖和甲状腺激素的分泌参与桥本甲状腺炎的发生发展。