2种核酸筛查系统对血清学阳性献血者检测结果的分析

目的比较2种核酸筛查系统对血清学阳性标本的检测结果,分析不同核酸筛查系统不同核酸试剂降低输血残余风险的情况。方法对2013年8月5日—2013年9月1日共计6 889人(次)无偿献血者的血液标本进行血清学检测,同时平行进行HBV/HCV/HIV的3项联合单标本核酸定性检测(美国诺华核酸检测平台,Procleix Ultrio试剂)。血清学HBs Ag、抗-HCV、抗-HIV阳性标本用阴性血浆稀释6倍,模拟混合标本(美国罗氏核酸检测平台,cobas Taq Screen MPX试剂)检测核酸。血清学HBs Ag阳性标本完善血清学乙肝5项,同时用另1家公司HBs Ag酶联免疫吸附试剂重复试验;抗-HCV阳性标本应用重组免疫印迹试验(RIBA)确证;抗-HIV阳性标本采用HIV蛋白印迹法确证。分析不同核酸筛查平台使用不同核酸试剂检测血清学阳性献血者的结果。结果酶免阳性标本6倍稀释后,MPX试剂与Ultrio试剂阳性检测一致率100%。2种核酸试剂对HBV DNA检测结果一致性中等(K=0.640),检出率差异有统计学意义(P0.001);对HCV RNA及HIV RNA检测结果一致性非常好(K=1.000)。2种核酸试剂一致检出的HCV RNA反应性样品及HIV RNA反应性标本,确证试验均为阳性。45份HBs Ag阳性标本,Ultrio试剂检测阴性MPX试剂检测阳性标本共有7例,1例HBs Ag酶免S/CO值介于1.0-2.0,6例S/CO值1.8。另1种进口HBs Ag酶联免疫试剂盒检测,7例2种NAT结果不一致标本中6例阳性,1例阴性。其中2名在6个月后复检,酶免及2种核酸检测结果均为阳性。结论 HBs Ag阳性献血者中,MPX试剂HBV DNA检出率高于Ultrio试剂;抗-HCV与抗-HIV阳性献血者中,HCV RNA和HIV RNA检出率MPX试剂与Ultrio试剂差异不显著。血液筛查工作中,核酸检测与血清学检测结果存在不一致,应重视血清学检测试剂与核酸检测方法试剂的选择和质量控制,使二者互补,降低由于核酸检测灵敏度相对较低导致的漏检。     

献血者抗-HCV及HCV RNA的检测分析

目前,国内采供血机构筛查献血者HCV抗体是采用两种不同试剂进行检测,其中任何一种试剂检测阳性,就淘汰该献血者。为缩短抗HCV检测的“窗口期”,一些发达国家已将HCV核酸检测用于献血者筛选。我国虽未将HCV核酸检测列入献血者的强制筛查项目,但国内一些血站已尝试将HCV核酸检测用于抗HCV阴性的献血者[1]。为进一步探讨献血者抗-HCV及HCVRNA检测状况,笔者对4 912例血液标本进行了酶免疫学及荧光定量PCR(FQ-PCR)检测,报告如下。1对象和方法1.1对象郑州市无偿献血标本。1.2试剂与仪器HCV PCR荧光定量试剂盒,中山医科大学达安基因诊断中心产;抗-HCV酶免试剂盒,分别购自A、B两家试剂公司;STAR-FAM E自动化酶免分析系统,瑞士H am ilton公司产,PE 570 PCR基因扩增仪,美国PE公司产。1.3方法1.3.1免疫学检测采用自动化酶免分析系统,利用两种酶免试剂检测无偿献血标本,并收集标本,其中两种试剂均阳性标本26份,及一种试剂阳性一种试剂阴性的标本20份,均阴性标本4 866份。1.3.2 HCV核酸检测将两种酶免试剂检测均阴性标本,24份混在一起进行检测[2],其余单份...     

酶免抗-HCV阳性标本中NAT法及胶体金法检测相关性分析

目的通过比较酶免法(ELISA)及胶体金法检测抗-HCV和核酸(NAT)检测HCVRNA,分析3种检测方法的实际效果,为临床输血安全提供依据。方法选取经2种ELISA法检测均为阳性的献血者标本,同时进行核酸和胶体金法检测,对结果进行分析。结果 45例抗-HCV反应性标本,核酸检测阳性率为37.8%,胶体金法检测阳性率为77.8%。NAT显示,在酶免试剂1和试剂2的S/CO值均≤10.00时,核酸均未检出;在S/CO值均10.00时,核酸检出率分别为70.8%和62.9%。胶体金法检测显示,在酶免1和2的S/CO值为1.00～5.00时,检出率分别为46.1%和40%;在S/CO值为5.01～10.00时,检出率均为75%;在S/CO值10.00时,检出率分别为95.8%和77.8%.结论随着S/CO值升高,NAT和胶体金检测法的检出率也随之升高;核酸检测法无法替代ELISA法检测HCV,ELISA法检测抗-HCV联合核酸检测法检测HCVRNA检测可提高丙肝检出率。     

一种国产HCV RIBA试剂性能评价

目的评价国产丙型肝炎病毒抗体重组免疫印迹(HCV RIBA)试剂在检测anti-HCV阳性献血者中应用价值。方法采用国产RIBA试剂对107例进口酶联免疫吸附试验(ELISA)检出的抗-HCV阳性样本进行补充实验。平行HBV/HCV/HIV三联单样本核酸定性检测HCV RNA,对RIBA试剂性能进行评价。结果 RIBA阳性检出率50.47%(54/107),RIBA阳性样本中HCV RNA检出率为59.26%(32/54)。随着RIBA结果中条带数增加,HCV RNA检出率增加。RIBA试剂NS3抗原条带检出率最高(90.91%),33例HCV RNA阳性样本NS3均为阳性,阳性符合率100%,两者中等相关性(Spearman相关系数rs=0.486,P0.01),52.85%NS3阳性样本未检测出HCV RNA(37/70),结果一致性较差(Kappa=0.382,P0.001)。22例RIBA阳性/HCV RNA无反应性样本中2例HCV RNA定量检测阳性,另一进口抗-HCV酶免检测试验结果阳性。结论国产RIBA试剂作为检测献血者HCV感染补充实验具有一定应用价值。RIBA可疑结果可以检出部分极低载量HCV RNA样本。     

2012～2014年无偿献血者抗-HCV筛查结果分析

目的了解盐城地区献血者丙型肝炎病毒(HCV)感染情况。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测献血者抗-HCV,用荧光定量聚合酶链反应检测HCV RNA。结果盐城地区献血者抗-HCV阳性率为0.07%(109/163 782);109例抗-HCV阳性者中,80例为单试剂阳性,29例为双试剂阳性;初次献血者抗-HCV阳性80例,重复献血者抗-HCV阳性29例;符合核酸检测要求的72例单试剂抗-HCV阳性者均为HCV RNA阴性。结论盐城地区献血者抗-HCV阳性率低于普通人群,近三年献血者抗-HCV阳性率没有变化,抗-HCV单试剂阳性者核酸检测均为阴性。     

核酸检测与酶免检测平行筛查血液在基层血站的应用效果评价

目的探讨核酸检测与酶免检测平行筛查血液在基层血站的应用效果评价。方法选取2016年1月-2017年7月本基层血站无偿献血者标本34680例,采用核酸检测与酶免检测两种检测方法平行筛查,对酶免检测阴性的标本分别采用核酸检测NAT进行HBV DNA/HIV RNA/HCV RNA的检测。将核酸检测阳性标本进行分项定量检测和乙肝血清学补充试验,分析检测结果。结果经ELISA筛查HBsAg、抗-HCV和抗-HIV-1/2无反应性及仅1种试剂为反应性的标本共32456例,经核酸NAT检测阳性标本72例,阳性检出率为0.21%,ELISA筛查HB-sAg,抗-HBs,抗-HBe,HBeAg,抗-HBc,最终确认阳性标本48例,确认阳性率为66.67%(P0.05);72例NAT检测阳性标本进行定量检测,其中定量检测HBV DNA阳性36例,阳性率为75.00%(36/48),未检测出HIV RNA阳性和HCV RNA阳性。结论核酸检测与酶免检测平行筛查,两种手段相互补充,可使输血传播疾病残余风险极大得到降低,预防经输血传播的病毒性疾病,从可有效地保障血液安全。     

大连市血液中心血清学检测与核酸检测并行的效果观察

目的通过血清学检测和核酸检测并行的检测模式,全面合理评估血清学检测和核酸检测在降低输血相关感染风险中的相关性。方法对2010年12月2日～2011年7月7日共计30 561份献血者标本进行血清学检测(HBsAg、抗-HCV、HIV抗原/抗体、梅毒特异性抗体、谷丙转氨酶及血型),同时进行HBV、HCV、HIV的3联检核酸定性检测以及HBV DNA阳性标本测定血清学乙肝5项,即HBsAg,抗-HBs,抗-HBc(总),HBeAg和抗-HBe。统计各项检测的检出率;将血清学检测HBsAg、抗-HCV、HIV抗原/抗体酶免3项检测与核酸检测结果进行对比;分析HBV DNA阳性标本的血清学特点。结果 HBsAg、抗-HCV和HIV抗原/抗体3项检测处于灰区和灰区以下的不合格标本中无核酸检测阳性标本。单纯核酸阳性的检出率为0.07%,经鉴别,HBV DNA阳性17份,无HCVRNA和HIV RNA的检出。HBV DNA阳性标本的乙肝血清学以全阴模式居多。45份核酸酶免均不合格的标本中有29份获得鉴别,鉴别结果与酶免结果符合率为100%。核酸检测阴性而酶免检测双试剂阳性的标本有14份,HBsAg阳性6份,抗-HCV阳性8份,无HIV抗体/抗原阳性标本。结论核酸检测对于HBsAg(-)的HBV感染献血者的检出效果明显。核酸检测与血清学检测结果存在不一致,合理的解释和分析需要必要的献血者追踪和更进一步的实验室确证手段及完善的检测策略。     

抗-HCV、HCV-cAg及HCV RNA联合检测在吸毒人员筛查的临床意义

目的探讨丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)、丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)及丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)联合检测在吸毒人员中的临床意义。方法对217例吸毒人员的血清标本分别采用抗-HCV、HCV-cAg及HCV RNA进行检测,并对数据进行统计学分析。结果 217例吸毒人员血清中,46例抗-HCV结果为阳性(已被证实为HCV感染)吸毒人员血清的HCV-cAg和HCV RNA的阳性检出率分别为54.3%(25/46)、52.3%(24/46);171例抗-HCV结果为阴性吸毒人员血清的HCV-cAg、HCV RNA阳性检出率分别为6.43%(11/171)、8.19%(14/171)。抗-HCV+HCV-cAg、抗-HCV+HCV RNA、抗-HCV+HCV-cAg+HCV RNA对217例吸毒人员血清的阳性检出率分别为26.3%(57/217)、27.6%(60/217)、27.6%(60/217)。结论单纯使用抗-HCV做筛查,将会产生较大的漏检。抗-HCV+HCV-cAg为理想的检测组合。     

两种试剂检测抗-HCV在丙型肝炎诊断中的意义

目的提高丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）检出率和检测结果的准确率。方法应用两个厂家抗-HCV ELISA试剂（试剂①、②）检测本院2006年1～12月间2516份输血、手术前住院患者血清标本。再将试剂①、②均阳性的血清标本28份、仅试剂①阳性的15份和仅试剂②阳性的17份血清标本进行HCV RNA RT—PCR荧光定量检测。结果试剂①、②抗-HCV均阳性28份标本的RT—PCR结果均阳性,仅试剂①抗-HCV阳性的15份标本中2份阳性,试剂②抗-HCV阳性的17份标本中3份阳性;仅试剂①或②抗-HCV阳性的32份血清标本中,HCV RNA RT—PCR检测阳性率为15．63％。结论采用双试剂检测能提高抗-HCV的检出率和结果的准确率。     

深圳地区抗-HCV阴性/NAT初筛阳性献血者的HCV窗口感染期确认

目的了解深圳地区血液筛查中抗-HCV阴性/NAT初筛阳性献血者的检出情况及其HCV窗口感染期的确认。方法 2008-2014年本中心采用酶免(ELISA)及病毒核酸检测方法(NAT)筛查492 325份无偿献血者样品,获得6例抗-HCV阴性/NAT初筛阳性献血者,使用荧光定量检测方法(QPCR)和巢式PCR(Nested-PCR)确认其HCV RNA是否存在并随访跟踪复查,以确定6例献血者核酸检测结果假阳性或HCV窗口感染期的性质。结果本中心在这7年期间,492 325份献血者的抗-HCV阴性/NAT初筛阳性检出率为1/82 054(6/492 325);6例抗-HCV阴性/NAT初筛阳性献血者,确认1/6例(16.7%)处于HCV窗口感染期,1/6例(16.7%)判定为核酸检测采血管血样污染HCV造成假阳性结果,4/6例(66.7%)判定为核酸仪器检测过程中出现假阳性导致NAT初筛阳性。故本中心目前献血者HCV窗口感染期检出率为1:492 325。结论目前核酸检测存在假阳性情况,需建立额外核酸扩增方法及追踪随访才能确定样品性质,确保病毒感染窗口期结果的准确性。     

ORTHO抗-HCV酶联免疫试剂2种孵育试验程序在血液筛查中的比较研究

目的确定1种3代抗-HCV酶免试剂(ORTHO HCV 3.0 ELISA试剂)2种孵育试验过程在血液筛查中是否存在差异。方法随机留取常规献血者血液筛查中检出的抗-HCV反应性的血液标本180(人)份作HCVRNA检测,并用RIBA和不同于血站常规抗-HCV筛查的酶免试剂作抗-HCV复测;依据ORTHO HCV 3.0 ELISA检测试剂说明书中的长、短2种孵育检测程序,同时作对比检测。结果 180份初筛抗-HCV阳性标本中,有16份ORTHO HCV 3.0 ELISA 2种检测程序的检测结果不一致,其中5份为短孵育试验反应性、11份为长孵育试验反应性,短孵育试验漏检2份被确证抗-HCV阳性标本。ORTHO HCV 3.0 ELISA试剂的长孵育检测程序灵敏度高于短孵育试验程序,2种试验程序的S/CO值分布没有差别,但RIBA不确定标本其S/CO值分布在一定的灰区范围内。结论在献血人群血液筛查中,采用具有更高灵敏度的长孵育酶免程序和设定合理的结果判定灰区,有助于预防输血传播HCV,提高血液的安全。     

丙型肝炎病毒抗体筛查阳性结果确证方案的探讨

目的明确抗-HCV酶免检测结果与确证阳性结果之间的相互关系,以期建立简便、经济的血液筛查实验室抗-HCV确证试验方案。方法使用重组免疫印迹试验结合核酸检测方法对134份酶免抗-HCV阳性样本确证,初步探讨2或3种抗-HCV酶免试剂(Ortho、Murex和科华联合复检的S/Co值与阳性预期值的关系及不同试剂组合检测的阳性预期值。结果134份样本中,92份真阳性,5份可疑,其余均为阴性。Ortho和Murex试剂的S/Co与阳性预期值呈正相关,当S/Co≥3.8时,阳性预期值分别可达98.33%和97.78%。Murex联合科华、Ortho联合科华以及3种试剂同时检测为阳性时的阳性预期值为100%;Ortho联合Murex的阳性预期值为98.48%,与上述其它2或3种试剂组合比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论2种或3种酶免试剂联合复检的确证方案优于美国CDC推荐的S/Co≥3.8方案。在常规血液筛查实验室,可以选择3种抗-HCV试剂中的任2种同时复检,先行对抗-HCV阳性标本确证,对无法确证的样本再作重组免疫印迹试验分析。     

临汾地区丙型肝炎病毒感染检测结果分析

目的了解本地区普通人群中丙型肝炎病毒(HCV)感染实验室检测情况。方法收集2015年1月1日至12月31日来山西省临汾市人民医院就诊的申请检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)的门诊及住院患者标本共21 120例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行抗-HCV的筛查,对ELISA筛查阳性的标本采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法进行丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)检测。结果 21 120例标本中抗-HCV筛查阳性率为0.69%(146/21 120);在146例抗-HCV标本中其中47例检测出HCV RNA,检出率为32.2%(47/146);检测出HCV RNA标本的抗-HCV的浓度试剂测量值/阳性判定值之比值(S/CO值)介于8.32~25.80(8.0)。结论在山西临汾地区就诊的普通人群中抗-HCV阳性分布比例以及HCV RNA检出率均较低,可检出HCV RNA的患者抗-HCV浓度相对较高。     

献血者抗-HCV阳性标本中RIBA确认情况的研究

目的探索献血人群ELISA试剂抗-HCV阳性标本RIBA确认阳性情况。方法收集492份ELISA试剂抗-HCV阳性标本,采用重组免疫印迹实验(RIBA)进行确认,并比较不同ELISA试剂检测情况。结果 492份抗-HCV阳性标本中RIBA确认阳性89份、可疑164份、阴性239份,确认阳性比例为18.1%。RIBA确认阳性的标本,2种抗-HCV ELISA试剂检测结果均呈现阳性反应;一种ELISA抗-HCV试剂阳性反应的标本中,RIBA确认均为阴性或可疑。2种ELISA试剂抗-HCV均阳性反应的标本中,RIBA确认阳性率为56.9%—60.0%。结论献血人群ELISA试剂抗-HCV阳性标本中存在较高的假阳性反应,在反馈献血者检测信息中应加以考虑。     

抗-HCV酶免试剂用于血站血液筛查的效果评价

目的 对目前国内血站采用的抗—HCV酶免试剂进行效果评价，为血站合理选用抗—HCV筛查试剂提供参考依据。方法 对不同厂家抗-HCV酶免试剂检测阳性标本分别用抗—HCV确认实验及逆转录—巢式PCR(RT—nPCR)技术进行检测，并对结果进行比较分析。结果 不同厂家抗—HCV酶免试剂对HCV的C区和NS5区抗体检测结果的差异无显性；但对NS3和NS4区抗体检测结果的差异有显性。结论 血站应根据不同抗—HCV试剂对HCV不同区段抗体的检出特性合理选择初复检试剂。     

4种国产丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂的检测结果分析

目的探讨不同国产酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂在实际血样丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)检测中的效能。方法采用4种不同厂家的ELISA试剂对59例初筛为抗-HCV阳性的标本分别进行抗-HCV检测,并对不同方法的检测结果进行比较分析,观察不同试剂间检测结果的一致性。结果 28 500份血样检测到阳性标本59例,阳性检出率为0.2%,4种试剂的检测结果具有较高的吻合性。结论随着现代生物技术的快速发展,国产抗-HCV酶法试剂在灵敏性、特异性、重复性、稳定性等方面都有了很大的提高。国产抗-HCV试剂广泛应用于临床检验,可以作为HCV感染的补充试验。     

抗-HCV酶免法检测结果在临界值附近的风险探讨

<正>酶免疫分析法(简称酶免法)抗丙型肝炎病毒(HCV)抗体(简称抗-HCV)检测广泛应用于血液筛查。不同品牌试剂使用的HCV基因重组抗原质量及包被工艺有所不同,在检测特异性和灵敏度方面存在一定的差异,有可能导致检测结果不一致。病毒核酸扩增检测灵敏度高,使检测"窗口期"大大缩短,有利于实现HCV感染的早期诊断,避免传染性疾病的输血传播~([1-3])。本研究对酶免法抗-HCV检测临界值结果标本进行了     

江苏地区无偿献血者HCV基因型的分布

目的探讨江苏地区献血者感染的HCV基因型及亚型。方法收集2013年来自江苏省血液中心ELISA双试剂检测抗-HCV阳性献血者血清标本,使用HCV核酸定量检测试剂盒检测HCV RNA载量;同时使用RNA提取试剂提取HCV RNA,反转录PCR法扩增HCV Core区基因片段,并对扩增产物进行测序,利用进化树分析基因型和亚型。结果 2013年抗-HCV阳性标本139例(0.20%),其中64例抗-HCV阳性血清标本经荧光定量检测,RNA阴性30份,阳性34份。经巢式PCR扩增能够分型的标本24份,包括1a(71.7%)、1b(7.5%)、2a(7.5%)和3b(1.9%)3种基因型和4种亚型。年龄偏大(35岁)以及男性的HCV RNA阳性标本的病毒滴度与抗-HCV水平(S/CO值)都高于RNA阴性标本,并且存在性别差异,但年龄间无差异。结论江苏无偿献血者感染的HCV基因型以1型为主,其中1b为优势基因亚型。病毒血症献血者的HCV抗体水平显著升高,HCV RNA在自然感染进程中的变化有待通过进一步随访进行研究。     

静脉吸毒人群中血浆抗-HCVEIA法、WB法与HCVRNA荧光定量PCR法比较

目的了解吸毒人群中抗-HCV EIA法、WB法与HCV RNA检测分析的符合性,选取适合高危人群的HCV实验室诊断策略。方法使用2种EIA试剂进行筛查试验,初检阳性者用另一种抗体试剂复检和用FQ-PCR(荧光定量PCR)法检测HCV RNA,抗体复检阳性的样品用HCV WB检测试剂进行确认。结果血清学试验115份样本初检结果阳性108份,阴性7份;对初检阳性者进行复检,结果阳性90份,阴性18份。复检阳性者使用WB确认,89份阳性,1份不确定;EIA抗-HCV结果S/CO≥3.8有71份,与WB阳性符合率为98.6%。EIA复检阳性样本中HCV-RNA检出率为82.22%,复检阴性样本中有HCV RNA的检出率为77.78%(14/18)。结论抗-HCV并不与HCV RNA同时出现。吸毒人员HCV感染的检测,在EIA筛查基础上,对阴性样本检测HCV-RNA,阳性样本用WB试验进行确认,确保检测的准确性。     

ELISA法检测HCVcAg、抗-HCV及RT-PCR法检测HCV-RNA的价值

目的分析探讨采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)、HCV病毒抗体(抗-HCV)及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)用于丙型肝炎诊断的价值。方法随机选择2014年8月至2015年10月进行HCVcAg、抗-HCV及HCV-RNA检测的疑似丙型肝炎病毒感染患者180例为研究对象,纳入同期体检人员200例为健康对照。对比观察3种检测方法的检测结果。结果 180例受检人员经HCV-RNA定量检测,阳性检出率为61.11%(110/180),抗-HCV阳性检出率为52.22%(94/180),HCVcA阳性检出率42.22%(76/180)。200例健康对照人员HCV-RNA阳性检出率为0.50%(1/200),HCVcAg阳性检出率为7.00%(14/200),抗-HCV阳性检出率为9.00%(18/200)。结论 RT-PCR检测HCV-RNA是丙型肝炎感染最为准确的方法,HCVcAg、抗-HCV联用或者抗-HCV、RNA(HCV-RNA)联用,可提高检测的准确率。