布鲁氏菌外膜蛋白的研究进展

近十余年来,国外对布鲁氏菌(以下简称布氏菌)外膜蛋白成分(OMPM)的研究已逐步深入,目前已进入了应用方面的研究。现仅就这方面的研究进展予以综述。提取方法一、从物理破碎的菌细胞中提取将细菌在室温下解冻,加入1mg/100mlDNA 酶和 RNA 酶,再将细菌通过高压挤压     

梅毒外膜蛋白的最新研究进展

梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)是性病梅毒的病原体,以其侵袭性和免疫逃避而闻名。Tp外膜蛋白是一类定植于细胞膜表面的脂蛋白,直接接触宿主细胞和免疫系统,在Tp感染宿主过程中具有十分重要的作用。因此,深入研究Tp外膜蛋白有助于进一步阐明其致病机制、优化梅毒分期诊断方法及研发梅毒疫苗,也是进行临床治疗和控制Tp感染的关键环节。本文将对在Tp感染过程中发挥致病作用、具有诊断和疫苗开发价值的Tp外膜蛋白进行综述。     

莱姆病螺旋体外膜蛋白C研究进展

莱姆病 (Ｌｙｍｅｄｉｓｅａｓｅ)是由伯氏疏螺旋体 (Ｂｏｒｒｅｌｉａｂｕｒｇｄｏｒｆｅｉ) ,即莱姆病螺旋体 (Ｌｙｍｅｄｉｓｅａｓｅｓｐｉｒｏｃｈａｅｔｅ) ,引起的多系统感染性疾病 ,是一种主要经蜱叮咬人、兽而传播的人兽共患病。该病分布广泛 ,全世界至今已有五大洲的     

鲍曼不动杆菌外膜蛋白研究进展

鲍曼不动杆菌是医院获得性感染主要致病菌之一,其外膜蛋白是指肽聚糖外脂质双层中间镶嵌的一些特殊的蛋白质.CarO、33-to-36-kDa、OprD等外膜蛋白丢失与细菌耐药有关,而OmpA外膜蛋白是重要的致病因素.其研究技术分为提取、分离和鉴定3个方面,超声物理法、双向凝胶电泳、质谱技术及免疫印迹是目前常用技术.     

鼠疫菌外膜蛋白提取方法的建立

近年来,对鼠疫菌的研究比较深入,除生化、毒力、营养等一般性状以外,对其分子生物学的研究也比较广泛．如鼠疫菌质粒、染色体等［１～３］。鼠疫菌外膜蛋白（ＹＯＰｓ）也有些报导［４］,但都没涉及ＹＯＰＳ提取方法。本试验针对鼠疫菌强毒株ＹＯＰｓ的提取方法进行了探索,试验结果如下。１ 材料与方法１．１ 材料１．１．１菌株 鼠疫ＥＶ菌苗,野生强毒鼠疫菌,由全国鼠疫布氏菌病防治基地提供,见表１。１．１．２ 试剂 营养琼脂,军事医学科学院制备;聚丙烯酞胺,华美生物工程公司,８８０４０９;甲叉丙烯酞胺,ＦＩＵｋａ ＣＨ９…     

鼠疫耶尔森氏菌外膜蛋白研究进展

耶尔森氏菌属中致病性细菌有3种，即鼠疫耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌和假结核耶尔森氏菌。其中鼠疫耶尔森氏菌是致病性最强的一种。随着分子生物学的研究进展，人们对鼠疫菌有了深入的了解。鼠疫菌外膜蛋白（Yops）是近些年对鼠疫菌的基础研究内容焦点之一。国内在世界上首先发现鼠疫菌锡林郭勒高原型病原体缺少32Kd外膜蛋白和40Kd蛋白位于膜内，     

布鲁氏菌外膜蛋白Omp31的生物信息学预测

目的采用生物信息学方法预测和分析布鲁氏菌外膜蛋白Omp31的理化性质、信号肽、蛋白结构和抗原表位,为布鲁斯病基因疫苗的研制提供理论基础。方法从GenBank中获取Omp31的氨基酸序列,运用在线软件Protparam分析Omp31的理化性质;采用SOPMA软件预测和分析布鲁氏菌外膜蛋白Omp31的二级结构。结果利用在线软件预测布鲁氏菌外膜蛋白Omp31分子式为_(C1135)H_(1725)N_(297)O_(354)S_4,脂溶性指数为87.31,蛋白质的疏水值为63.26,理论pI值为8.61,原子总数为47 900;其氨基酸序列Gly(G)占12.9%,Ala(A)占11.7%。正电荷残基(Arg+Lys)、负电荷残基(Asp+Glu)总数分别为19和24,其不稳定系数48.25。该蛋白为稳定蛋白,亲水性系数GRAVY为-0.091。Omp31无跨膜区域,属于水溶性蛋白,其中无规则卷曲较多,位于蛋白表面。蛋白质中大部分氨基酸可以形成一定的结构域,抗原性总预测值为0.632 4。结论生物信息学分析鲁氏菌外膜蛋白Omp31含有多个抗原表位,可能具有免疫原性,表明该蛋白可作为潜在抗原用于疫苗的研制。     

中国鼠疫菌外膜蛋白种类的研究

目的：研究并分析中国各生态型鼠疫菌外膜蛋白种类及分子量。方法：鼠疫菌经破碎后采取超高速离心法提取外膜蛋白，利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺(SDS-PAGE、)电泳系统分离鼠疫菌外膜蛋白。结果：在10％的SDS-PAGE上我国各生态型鼠疫菌37℃条件下的培养物所表达的外膜蛋白最多为26条蛋白带，而28℃培养物表达的外膜蛋白最多的则有36条蛋白带。结论：中国各生态型鼠疫菌外膜蛋白种类存在一定的差异，青海田鼠型菌株所产生的外膜蛋白与布氏田鼠型菌株相同。     

日本血吸虫分泌蛋白和外膜蛋白的原核表达与鉴定

目的 目的 原核表达和鉴定含有编码日本血吸虫分泌蛋白、 外膜蛋白基因的重组质粒, 为高通量筛选日本血吸虫病 疫苗或诊断抗原奠定基础。方法 方法 将前期构建的28个含有分泌蛋白、 外膜蛋白编码基因序列的pET32 （+） 重组质粒通过 化学法转到大肠杆菌 （E. coli） BL21 （DE3） 菌株中进行培养, 加入异丙基?β?D?硫代半乳糖苷 （IPTG） 进行诱导表达。对诱 导表达后的细菌进行超声破壁, 以12% SDS?PAGE分别对菌液、 上清及沉淀进行检测, 判断目的蛋白的大小和表达分布 情况。利用蛋白芯片结合抗His标签荧光抗体对重组融合蛋白表达情况做进一步鉴定。结果 结果 在IPTG终浓度0.1 mmol/L、 37 ℃、 200 r/min和4 h的诱导条件下, 含有编码分泌蛋白、 外膜蛋白序列的重组质粒能够在E. coli BL21 （DE3） 中高效表 达。SDS?PAGE显示28个融合蛋白具有不同程度的表达, 其中2个分布在上清中, 26个分布在沉淀中, 条带大小与预测 大小一致。蛋白芯片成功检测到His抗体荧光信号, 进一步证实了目的蛋白的表达情况。结论 结论 利用E. coli成功表达了 一批编码日本血吸虫分泌蛋白、 外膜蛋白的融合蛋白, 为后续疫苗和免疫诊断研究奠定了基础。     

伤寒沙门氏菌耐药性与外膜蛋白关系的研究

对临床分离的２６株伤寒沙门氏菌进行了外膜蛋白，质粒，药物敏感试验及氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）活性测定。结果显示：２６株菌中有８株耐氯霉素，其中７株对氯霉素等４种抗生素高度耐药（ＭＩＣ＞２００μｇ／ｍｌ），均含９８．６Ｍｄ大质粒，１株对氯霉素敏感而耐氨苄青霉素的菌株亦含该质粒。８株菌除１株外其氯霉素乙酰转移酶活性均为阳性。外膜蛋白指纹图谱示伤寒沙门氏菌均含５２、３８、３７、３６ＫＤ主蛋白，其中有３株耐药菌３７ＫＤ蛋白含量减少或缺失，实验表明伤寒沙门氏菌耐药性与质粒相关，ＣＡＴ由质粒调控，个别菌株存在非酶性耐药，可能与外膜蛋白的减少或缺失有关。     

登革热病毒外膜蛋白基因的克隆、表达

目的　在大肠杆菌中表达登革热病毒外膜抗原基因 ,获得能作为检测抗原的重组蛋白。方法　登革热 2型病毒NGC株感染C6/ 36细胞后 ,抽提病毒RNA ,经逆转录和套式PCR扩增出E基因片断 ,扩增片段经酶切、连接、克隆 ,构建重组表达质粒。并转化大肠杆菌DH5α。结果　重组质粒经诱导后表达外膜抗原的部分肽链。经过免疫印迹证实其具有免疫反应性。结论　截断的部分E蛋白基因在大肠杆菌中表达成功 ,重组的蛋白可作为血清学检测抗原使用     

伯氏疏螺旋体外膜蛋白BBK32的研究进展

BBK32是位于伯氏疏螺旋体外膜的纤连蛋白结合蛋白,其相对分子质量为47×10~3。它的分子结构由两个不同的亚结构域即N-端区域和C-端区域构成,这两个结构域在Bb致病机制中分别扮演着不同的角色。在螺旋体侵入机体引发莱姆病的过程中,BBK32参与了定植、启动微血管播散以及补体逃逸等致病机制;同时,BBK32有良好免疫原性,可刺激机体产生抗体,检测BBK32抗体有利于LD诊断。进一步探索BBK32的分子结构和致病机制可为LD的预防、诊断和治疗提供新思路。     

鼠疫耶尔森菌外膜蛋白及其功能研究进展

鼠疫耶尔森菌和其他革兰阴性杆菌一样,其细胞结构由双层膜结构包绕,内层为内膜(亦称胞浆膜),外层是细胞与外环境的分界,称为外膜.     

布鲁氏菌外膜蛋白的研究——Ⅲ.牛种、羊种布鲁氏菌非典型株外膜蛋白SDS—PAGE图谱的特点

牛种、羊种布鲁氏菌非典型株的菌细胞经机械方法破碎、酶解后用两性离子去污剂提取其外膜蛋白并与光滑型菌株的相应成分进行SDS-PAGE图谱比较,发现两种类型的菌株外膜蛋白图谱有极大的相似之处(即布鲁氏菌光滑型菌株所共有的谱带,非典型株也全具备),但非典型株与光滑型菌株不同的是分子量大于97.4kD的热修饰蛋白电泳谱带发生丢失现象:即这一组的谱带除一条明显变宽外,其余着色变浅或基本消失,当热修饰蛋白在高温SDS系统解聚成单体后,其电泳谱带牛种菌两种类型的菌株基本一致,但对羊种菌非典型株的单体却明显增加了两条谱带,以此显示与光滑型菌株的不同。     

4种血清型登革病毒外膜蛋白重组抗原的表达

摘要 目的 在大肠杆菌中表达重组1－4型登革病毒外膜蛋白,为研制登革病毒抗体快速检测试剂提供原材料。方法 根据基因序列设计、合成引物并经PCR方法扩增1－4型登革病毒部分外膜蛋白基因片段,克隆至表达载体pET30a(+)并在大肠杆菌中诱导表达。小量表达以及纯化后的重组蛋白做SDS-PAGE分析并经WB实验验证其免疫活性。结果 酶切消化及电泳结果表明4种重组质粒均构建成功。经IPTG诱导后,4种重组大肠杆菌均可表达相应的重组蛋白。纯化前后的重组蛋白经WB实验表明,4种重组蛋白均能与对应型别的病毒感染者血清反应。结论 利用大肠杆菌表达系统,成功表达重组1－4型登革病毒外膜蛋白,4种型别的重组蛋白可被各自血清型的抗体结合,均具有免疫反应活性。