靶向卵巢癌HIF-1α基因siRNA真核表达载体的构建及鉴定

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是生物体内普遍存在于RNA水平上调节基因表达的方式,具有很强的转录后基因沉默作用,已广泛用于抗肿瘤的研究中。缺氧诱导因子-1α表达与肿瘤的耐药可能有密切关系,卵巢癌细胞中亦有HIF-1α蛋白的高表达,因此抑制卵巢癌细胞中HIF-1α基因的表达可能逆转肿瘤耐药。     

沉默缺氧诱导因子-1α对卵巢癌化疗敏感性的影响

目的观察沉默缺氧诱导因子HIF-1α对卵巢癌细胞化疗敏感性的相关影响并探讨其机理。方法构建HIF-1α基因短发夹RNA真核表达质粒,并转染卵巢癌细胞SKOV3（人卵巢浆液性囊腺癌细胞株）。实验可分为空白组,非特异对照组（转染pNonspecific-siRNA,即SKOV3NS）,目的siRNA组（转染pHIF-siRNA,即SKOV3siRNA）3组,用RT-PCR及Western Blot法分别检测各组HIF-1α基因的mRNA和蛋白的表达水平。细胞经过20μmol/L顺铂作用后,用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术（FCS）检测细胞凋亡率。结果 SKOV3siRNA转染组HIF-1α基因在mRNA水平和蛋白水平表达均明显降低,SKOV3siRNA组肿瘤细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均明显增高（P〈0.05）。结论 RNA干扰技术沉默HIF-1α能够有效地抑制卵巢癌SKOV3细胞HIF-1α基因表达,增强其对化疗药物顺铂的敏感性。     

HIF-1α在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在上皮性卵巢癌中的表达及意义。方法采用免疫组化方法,检测了101例上皮性卵巢癌组织中和18例正常卵巢组织中HIF-1α的表达。结果卵巢癌组织中HIF-1α表达率较正常卵巢组织明显增高,P<0.05。在手术-病理分期的各期卵巢癌组织中HIF-1α均有阳性表达,各组间无统计学差异,P>0.05。在浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、子宫内膜样癌和透明细胞癌中HIF-1α均有阳性表达,各组间无统计学差异,P>0.05。结论HIF-1α在上皮性卵巢癌组织中表达明显增高,提示HIF-1α可能成为一种新的上皮性卵巢癌的肿瘤标记物。     

HIF-2α基因与人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的关系

目的：探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）沉默缺氧诱导因子2α（hypoxia inducible factor-2 alpha,HIF2α）基因表达后,人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的变化.方法：构建靶向HIF-2α基因的siRNA真核表达载体并转染A549细胞,采用Reαl-time PCR检测HIF-2α mRNA的表达,采用Western blotting检测HIF-2α及多药耐药基因1（multidrug resistance-1,Mdr-1）蛋白的表达,采用MTT法检测顺铂处理后细胞的存活率.结果：在HIF-2α siRNA转染A549细胞后24、48 h后,HIF-2α在mRNA和蛋白水平的表达与空白对照组相比均显著下调（均P＜0.01）,Mdr 1蛋白的表达水平也明显降低（均P＜0.05）.与空白对照组相比,HIF-2α siRNA组细胞对顺铂的敏感性明显增加,各时间点的IC50值均显著降低,差异有统计学意义（均P＜0.01）.结论：靶向HIF-2α的siRNA表达载体能够有效抑制HIF-2α基因的表达,从而逆转A549细胞对顺铂的化疗耐药性.     

缺氧诱导因子-1α基因沉默对食管鳞癌细胞体外生长的影响

目的:探讨食管鳞癌细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因与食管鳞癌细胞增殖活力和细胞周期的关系。方法:以RNA干扰方法构建出HIF-1α基因沉默食管鳞癌细胞株,通过Westernblot检测HIF-1α基因在细胞中的表达,通过流式细胞术分析了解HIF-1α基因沉默后细胞周期的变化,通过细胞增殖实验观察HIF-1α基因沉默细胞与对照细胞、模拟缺氧细胞增殖活性的差异。结果:细胞增殖实验发现沉默HIF-1α基因后的Eca-109细胞增殖活力较对照细胞明显低下,为对照细胞的62.6%(0.4768±0.1743vs0.7611±0.2165,P=0.012),流式细胞仪分析表明,HIF-1α基因沉默后的Eca-109细胞与对照细胞相比,G1/G0期细胞明显增加(P<0.05),G2/M期细胞变化不大,S期细胞比例明显减少。结论:核糖核酸干扰HIF-1α的表达后,能抑制鳞癌细胞的增殖活力,并可能阻滞肿瘤细胞周期,抑制HIF-1α的表达,有可能导致肿瘤生长的抑制。     

SGK1基因沉默对人前列腺癌细胞生长的抑制作用

目的探究糖皮质激素诱导蛋白激酶1(serum and glucocorticoid-inducible kinase 1,SGK1)基因沉默对人前列腺癌细胞生长抑制的作用。方法选取人前列腺癌PC-3细胞,将RNAi重组质粒(PSGK1-RNAi)通过脂质体转染至PC-3细胞,再用G418筛选稳定转染的SGK1基因沉默的PC-3细胞作为SGK1基因沉默组,并将正常培育的PC-3细胞和空质粒稳定转染的PC-3细胞分别作为阴性对照组与阳性对照组。检测培育48 h、72 h、96 h的细胞增殖能力,计算培育48 h的不同细胞周期表达水平和细胞凋亡情况。结果培育48 h、72 h及96 h,三组PC-3细胞水平差异有统计学意义(P 0. 05);与SGK1基因沉默组比较,培育48 h、72 h及96 h的阳性对照组、阴性对照组PC-3细胞水平升高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。三组G1期和S期细胞所占比例比较差异有统计学意义(P 0. 01);与SGK1基因沉默组比较,阳性对照组、阴性对照组G1期细胞所占比例下降,S期细胞所占比例升高,差异具有统计学意义(P 0. 01)。三组PC-3细胞凋亡率比较差异有统计学意义(P 0. 01);与SGK1基因沉默组比较,阳性对照组、阴性对照组细胞凋亡率下降,差异有统计学意义(P 0. 001)。结论 SGK1基因沉默能抑制PC-3细胞增殖,诱发PC-3细胞凋亡,可作为基因治疗前列腺癌的有效靶点。     

缺氧诱导因子HIF-1α与HIF-2α在宫颈癌组织中的表达及相关性研究

目的:研究缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)与缺氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2 alpha,HIF-2α)在宫颈癌组织中的表达和相关性.方法:免疫组织化学染色方法检测宫颈癌组织中HIF-1α与HIF-2α的表达.用SPSS统计软件分析HIF-1α与HIF-2α在宫颈癌组织中的相关性.结果:原位癌组、浸润癌组HIF-1α蛋白阳性表达率分别为57.7％、78.6％;HIF-2α蛋白阳性表达率分别为65.4％、85.7％,宫颈癌组织中HIF-1α阳性表达得分为1.56±1.60,HIF-2α阳性表达得分为4.51±1.04,HIF-1α和HIF-2α蛋白的表达呈显著正相关(rs=0.855,P＜0.05).结论:宫颈原发癌、浸润癌中,HIF-1α、HIF-2α表达与宫颈癌临床病理特征有密切关系,且两者表达呈显著正相关,两者在宫颈癌的发生发展及浸润转移过程中可能起协同作用.     

HIF-1α和VEGF与肿瘤病理的关系

氧平衡是哺乳动物维持正常生长发育和代谢的基础,是维持细胞生存的重要因素。许多实体肿瘤具有缺氧的微环境,肿瘤细胞对缺氧的自身调节和适应机制主要是通过提高葡萄糖转运、糖酵解及形成血管体系。血管内皮生长因子(VEGF)是肿瘤血管形成过程中最重要的刺激因子,同时又是HIF-1α重要的靶基因,故HIF-1α被认为是肿瘤血管生成环节中的中心启动分子[1]。1 HIF-1α和肿瘤的关系缺氧诱导因子(HIF-1α)是在缺氧的细胞核提取物中发现的一种DNA结合蛋白,是介导细胞对缺氧的微环境进行适应反应的关键性转录调控性因子,是一个异二聚体积bHLH-…     

缺氧对人肝癌HepG2细胞HIF-1α、PCNA表达水平的影响

目的：探讨缺氧对人肝癌HepG2细胞中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法：体外培养HepG2细胞,通过CoCl2化学模拟缺氧作用,采用实时荧光定量聚合酶链式反应实验（Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,PCR）检测基因HIF-1α、PCNA mRNA水平变化,蛋白质印迹（Western Blot,WB）检测HIF1-1α、PCNA蛋白表达水平的变化,细胞化学染色检测HIF-1α、PCNA蛋白表达变化。结果：CoCl2导致的化学缺氧可诱导人肝癌HepG2细胞HIF-1α、PCNA的上调表达。结论：缺氧可提高HIF-1α的表达,可能促进肝癌细胞的进一步增殖。     

RNA干扰HIF-2α基因对人肺腺癌A549细胞株侵袭转移的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制缺氧诱导因子(hyposia-inducible factor 2α,HIF-2α)基因表达对人肺腺癌A549细胞株侵袭转移的影响。方法:构建针对HIF-2α-siRNA并转染A549细胞株,采用实时荧光定量多聚酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot方法检测HIF-2α表达水平,通过Tran-swell试验及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白检测,探讨HIF-2α-siRNA对A549细胞侵袭力的影响。结果:将HIF-2α-siRNA转染A549细胞后,HIF-2α的mRNA和蛋白表达水平均下调。qRT-PCR检测显示,第4号siRNA表达载体抑制作用最强,转染后24 h和48h对HIF-2α基因mRNA表达水平抑制率分别为(60.63±5.10)%和(80.00±3.55)%。Western blot检测同样证实,第4号siRNA表达载体对于HIF-2α蛋白表达抑制作用最强,转染后24 h和48 h抑制率分别为(31.69±11.56)%和(82.87±4.09)%。Transwell试验发现,转染HIF-2α-siRNA后,穿膜细胞数显著减少(P<0.05),表明细胞侵袭力下降。转染HIF-2α-siRNA后,VEGF表达水平显著下调(P<0.01)。结论:转染HIF-2α-siRNA可有效降低A549细胞的侵袭转移力。     

小干扰RNA沉默HIF-1α基因表达对对人鼻咽癌细胞系CNE1 凋亡的影响

目的 探讨CNE1对人鼻咽癌细胞系CNE1凋亡的影响。方法 利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将HIF-1αsiRNA转染入CNE13 细胞中。WB法测定CNE1 细胞内HIF-1α的表达。流式细胞仪及Hochest 荧光染色测定细胞凋亡率的变化。WB法测定CNE1细胞内BCL-2的表达。结果 干扰HIF-1α能有效地促进CNE1细胞的凋亡,同时可下调BCL-2的表达。结论 体外实验初步证明HIF-1α基因在人鼻咽癌细胞系CNE1凋亡方面扮演重要角色,可通过下调BCL-2的表达来诱导凋亡。     

高压氧对结肠癌细胞缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的 初步探讨高压氧(HBO)对结肠癌细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响.方法 将结肠癌细胞SW480分为正常对照组、高压氧不同压力(0.15 Mpa、0.20 Mpa、0.25 Mpa)组和高压氧不同暴露时间(12 h、24 h、36 h)组,各组分别处理后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同压力及时间HBO暴露后结肠癌SW480细胞的HIF-1α和VEGF mRNA表达水平改变.结果 SW480细胞在0.25 Mpa HBO暴露后12 h HIF-1αmRNA表达水平较0.15 Mpa和0.20 Mpa HBO暴露后12 h为低(P＜0.01),0.25 Mpa HBO暴露后24 h HIF-1α mRNA表达缺失;0.25 Mpa HBO暴露后36 hVEGF mRNA表达较0.15 Mpa、0.20 Mpa HBO暴露后12 h和24 h为低(P＜0.05).结论 HBO可能通过下调HIF-1α mRNA、VEGF mRNA来抑制肿瘤组织的血管形成.

Abstract：

Objective To investigate the effects of hyperbaric oxygen (HBO) on the expression of hypoxia inducible factor-1α (HIF-1α) mRNA and vascular endothelial growth factor (VEGF) mRNA in colon adenocarcinoma cells. Methods SW480 colon cancer cells were divided into a control group and an HBO group, which was in turn divided into various subgroups according to the various HBO pressures (0.15 MPa, O. 20 MPa, 0.25 MPa) and exposure times (12, 24 and 36 h) tested. The expression of HIF-1α and VEGF mRNA was evaluated with RT-PCR after the various treatments. Results The expression of HIF-1α mRNA was lower in the SW480 cells than in the controls after exposure to 0.25 MPa HBO for 12 h. No expression of HIF-1α mRNA was detected after exposure to 0.25 MPa HBO for 24 h. The expression of VEGF mRNA was lower after exposure to 0.25 MPa HBO for 36 h than in the controls. Conclusion Absence of HIF-1α mRNA expression and decreased expression of VEGF mRNA in SW480 can be observed after exposure to 0.25 MPa HBO for 24 h, suggesting that HBO may inhibit the formation of tumor blood vessels through down-regulating the expression of these mRNAs.     

TACE治疗对原发性肝癌患者血HIF-1α、骨桥蛋白表达的影响

目的：探究肝动脉化疗栓塞（TACE）治疗前后原发性肝癌患者血缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、骨桥蛋白的变化及意义。方法：原发性肝癌患者35例,采用ELISA检测TACE治疗前、治疗后2d、治疗后30d外周血HIF-1α、骨桥蛋白的动态变化,15名体检者为健康对照组。结果：TACE治疗前肝癌患者外周血HIF-1α为（2562±656）pg/ml、骨桥蛋白为（123±30）μg/L,显著高于健康对照组的（1963±61）pg/ml和（34±12）μg/L（P均（0.01）;且上述2指标水平有癌栓组分别为（3020±752）pg/ml和（137±23）μg/L,表达高于无癌栓组的（2294±430）pg/ml和（119±33）μg/L（P均（0.05）;有远处转移组为（2985±696）pg/ml和（146±28）μg/L,高于无转移组的（2341±497）pg/ml、（115±27）μg/L（P均（0.05）。TACE治疗后2d患者血清HIF-1α和骨桥蛋白为（3001±985）pg/ml、（170±68）μg/L,较治疗前升高（P均（0.05）;TACE治疗后30d患者外周血HIF-1α（2150±289）pg/ml和骨桥蛋白（108±31）μg/L较治疗前、治疗后2d下降（P均（0.05）。肝癌患者外周血HIF-1α、骨桥蛋白的表达明显相关（r=0.983,P（0.05）。结论：TACE治疗后肝癌患者血HIF-1α、骨桥蛋白短期内升高,可能与肿瘤血管栓塞后加重肿瘤的缺氧微环境有关,但术后30d内下降,提示TACE在治疗肿瘤的同时未增加肝癌的侵袭性。     

人骨肉瘤mta1 mRNA的siRNA载体构建及其对mta1沉默作用

目的本实验拟构建针对mta1 mRNA的siRNA重组载体,将siRNA对应的DNA发卡样双链序列克隆入载体内,位于H1启动子下游,转染入人骨肉瘤细胞内,在细胞内表达mta1靶向的siRNA分子,特异性沉默mta1的表达。方法依据GenBank中mta1基因(NM-004689)的序列,用设计分析软件进行设计候选序列,确定针对mta1的siRNA序列。合成mta1发卡样siRNA寡核苷酸,退火成双链DNA,克隆入T载体,利用α互补和T7/SP6PCR扩增筛选鉴定重组子pGEM-T-mta1;用BglⅡ和HindⅢ双酶切重组子pGEM-T-mta1和siRNA表达载体pSuperneo;将双粘mta1发卡样siRNA片段亚克隆入siRNA表达载体pSuperneo中;利用BglⅡ和HindⅢ双酶切筛选鉴定重组子pSuperneo-mta1;对插入序列进行DNA序列分析。将siRNA表达载体pSuperneo-mta1转入人骨肉瘤细胞系MG-63中,用RT-PCR方法检测细胞mta1 mRNA表达水平。结果转染pSuperneo-mta1的实验组骨肉瘤细胞中mta1 mRNA表达几乎完全被抑制,而2个对照组(无关siRNA对照组和空载体对照组)和未转染的骨肉瘤细胞系MG-63细胞中都存在较高水平的mta1 mRNA表达。结论设计出针对mta1的发卡样siRNA寡核苷酸片段,成功构建出针对mta1的siRNA表达载体pSuperneo-mta1,pSuperneo-mta1转染骨肉瘤细胞后能显著降低细胞mta1 mRNA表达。     

siRNA沉默HIF-1α基因联合经导管动脉栓塞术对兔VX2肝癌模型疗效及微循环的影响

目的 探讨小干扰核糖核酸(siRNA)沉默缺氧诱导因子-1(HIF-1α)基因联合经导管动脉栓塞术(TAE)治疗对兔VX2肝肿瘤模型疗效及微循环的影响.方法 24只VX2肝癌模型兔随机分为4组,每组6只.各组于介入治疗当天(VX2肿瘤种植第14天)随机选取3只处死,余下3只进行介入治疗.A组:肝动脉内注入PVA微粒与对...     

人参总皂苷经HIF-1α/HO-1信号通路减轻脓毒症大鼠心肌损伤的机制研究

目的观察人参总皂苷(TG)对脓毒症心肌损伤(SMI)大鼠缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路的调控作用,探究其治疗SMI的作用机制。方法SD雄性大鼠给予内毒素+脂多糖诱导建立大鼠SMI模型,随机分为模型组(SMI组),TG低(20mg/kg)、中(40 mg/kg)、高(60 mg/kg)剂量组和乌司他丁阳性对照组(阳性组,10 000 U/kg)组,每组10只。另取10只,给予生理盐水设置为正常对照组(Normal组)。观察各组大鼠毛发、活动、精神状态等一般行为后,麻醉处死,取血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠心功能指标心肌肌钙蛋白I(cTnI)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平及血清炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素-8(IL-8)含量;取心脏组织,用苏木精-伊红试剂(HE)染色观察心脏组织病理损伤形态;用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测心脏组织HIF-1αmRNA、HO-1mRNA相对表达水平;用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心脏组织HIF-1α、HO-1、IL-8及TNF-α蛋白相对表达水平。结果与Normal组比较,SMI组大鼠出现精神萎靡、毛发松乱、活动减少、眼睑部出现黏稠分泌物等脓毒症表现,心肌细胞水肿、坏死、炎性浸润等病理损伤现象明显,血清TNF-α、IL-8、cTnI、CK-MB含量和心肌组织HIF-1αmRNA及蛋白、HO-1 mRNA及蛋白、IL-8及TNF-α蛋白表达升高(P <0.05)。与SMI组比较,TG低、中、高剂量组及阳性组大鼠心肌组织HIF-1αmRNA及蛋白、HO-1 mRNA及蛋白表达升高(P <0.05),脓毒症表现改善,病理损伤现象减弱,血清cTnI、CK-MB含量以及血清及组织中IL-8和TNF-α表达降低(P <0.05),且TG各剂量组上述指标改善呈剂量依赖性。与TG高剂量组比较,阳性组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TG可激活HIF-1α、HO-1基因及蛋白表达,抑制炎症反应,改善SMI大鼠心肌损伤。     

低氧诱导因子-1α抑制剂逆转K562/A02细胞多药耐药机制研究

目的 探讨低氧诱导因子抑制剂3-(5'-Hydroxymethyl-2'-furyl)-1-benzylindazoh(YC-1)对人白血病耐阿霉素细胞K562/A02的耐药逆转作用,并探讨逆转机制.方法 采用MTT法检测不同浓度YC-1和阿霉素(ADM)单独或联合使用48 h对K562/A02细胞和K562细胞增值抑制效应及耐药逆转效应;用流式细胞术检测0、5、10和20 μmol/L YC-1单独或联合1 mg/L阿霉素作用K562/A02细胞48 h后细胞凋亡率及联合应用后细胞内阿霉素浓度;半定量RT-PCR检测各组细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、mdr1基因mRNA表达变化;Western blot方法检测各组细胞HIF-1α、P-糖蛋白(P-gp)表达变化.结果 K562与K562/A02细胞对阿霉素的IC50值分别为(1.56±0.07)mg/L和(42.98±3.15)mg/L,耐药倍数为27.55倍.予5、10和20μmol/L YC-1作用后,K562/A02细胞对阿霉素的耐药倍数分别为24.63、16.38和10.71倍;0、5、10和20μmol/L YC-1单独或联合1 mg/L阿霉素处理K562/A02细胞48 h后,凋亡率分别为(1.9±0.9)%、(4.9±0.9)%、(5.8±1.1)%和(9.3±1.4)%与(2.3±0.7)%、(8.2±1.2)%、(19.0±1.7)%和(34.5 ±2.4)%.0、5、10和20 μmol/L YC1联合1 mg/L阿霉素处理K562/A02细胞48 h后细胞内阿霉素荧光强度分别为232±33、1300±219、1961±240和3342±269;随着YC-1浓度增加,HIF-1α mRNA表达没有明显差异,mdr1 mRNA逐渐下调,HIF-1±和P-gp表达均下调.结论 YC-1可以通过抑制HIF-1α蛋白表达,下调mdr1 mRNA水平和P-gp水平,增加细胞内阿霉素药物浓度,部分逆转K562/A02细胞耐药.     

DEK基因沉默对宫颈癌CaSki细胞衰老的影响

目的通过DEK基因沉默对CaSki细胞生长、衰老的影响,探讨DEK原癌基因在宫颈癌发生中的作用。方法将DEKsiRNA真核表达载体转入CaSki细胞,观察转染后48 h细胞形态学变化,测定细胞生长曲线、SA-β-半乳糖苷酶细胞化学染色鉴定细胞衰老。结果与未转染和转染psiRNA-hH1neo组相比,转染psiRNA-hHDEK组CaSki细胞的生长速度明显降低;psiRNA-hHDEK转染组SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞百分率(83.2±9.46)%高于转染psiRNA-hH1neo组(18.9±6.46)%和未转染CaSki组(23.1±7.28)%,结果具有统计学意义(P<0.05)。结论 DEK基因沉默后CaSki细胞发生衰老,证明DEK基因在宫颈癌中是衰老抑制基因。     

siRNA沉默PTTG基因对人胰腺癌细胞PANC-1细胞凋亡的影响

目的研究PTTG基因沉默对胰腺癌细胞凋亡的影响,初步探讨其调控机制。方法利用阳离子脂质体进行基因沉默实验,将PANC-1细胞分为三组（①.未转染PANC-1细胞、②.转染阴性对照siRNA、③转染siRNA-PTTG）,TUNEL染色法检测细胞凋亡;RT-PCR和Western blot技术检测bcl-2,bax基因和蛋白表达;ELISA法检测caspase-3活性。结果组③细胞凋亡明显增多,凋亡率为18.4±2.4%;组①和组②凋亡率分别为7.5±2.0%和6.9±1.1%,差异具有显著性（P〈0.05）;组③bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下降,与组①和组②比较差异具有统计学意义（P〈0.05）;组③、组①和组②间bax mRNA和蛋白表达没有具有统计学差异（P〈0.05）;组③caspase-3活性升高,与组①和组②比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 siRNA-PTTG下调PTTG基因表达导致PANC-1细胞凋亡增加,可能与bcl-2表达下调,caspase-3活性升高有关。     

缺氧诱导因子-1α对口腔鳞状细胞癌血管生成拟态相关基因影响的实验研究

目的探讨沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞移植瘤血管生成拟态(VM)的影响及其可能的机制。方法 (1)沉默Tca8113细胞的HIF-1α,Real time RT-PCR和Western blot验证干扰效率;(2)建立裸鼠皮下移植瘤模型:分为阴性对照组和沉默HIF-1α的干扰组,观察沉默HIF-1α对肿瘤生长的影响并绘制生长曲线;(3)瘤体HE染色及免疫组化CD31染色观察血管形态、微血管密度(MVD)和VM的变化,免疫组化染色观察沉默HIF-1α对血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达的影响。结果 (1)移植瘤的生长曲线显示干扰组瘤体的生长速度和体积显著慢于和小于对照组(P<0.05);(2)与对照组相比,干扰组瘤体内的血管形态趋于正常且MVD减小(P<0.05),VM现象少见;(3)与对照组相比,干扰组瘤体组织的VEGF、TGF-β1表达显著减弱,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论口腔鳞癌移植瘤中存在VM现象,VM的形成可能与HIF-1α对靶基因VEGF、TGF-β1的表达调控有关。