实时荧光PCR对奶粉中坂崎肠杆菌的检测

目的：研究奶粉中坂崎肠杆菌实时荧光PCR检验方法。方法：针对坂崎肠杆菌16s-23s rDNA间区序列（ITS）设计一对SYBRGreenⅠ染料法引物、一对TaqMan探针法引物及探针，建立奶粉中坂崎肠杆菌实时荧光PCR检验方法，并对实时荧光PCR法、传统方法及PCR方法进行比较。结果：用10株坂崎肠杆菌，18株近源菌验证试验表明，本文所建立的两种实时荧光PCR方法特异性强；加菌试验表明，奶粉中坂崎肠杆菌有1．1cfu／100g时就可检出，灵敏度高；检验时间仅需2d。结论：本文提出的奶粉中坂崎肠杆菌实时荧光PCR检验方法可在实际工作推广。     

奶粉与保健食品中坂崎肠杆菌检验方法研究

坂崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)为肠杆菌科、肠杆菌属的革兰阴性小杆菌。坂崎肠杆菌最初以婴儿配方奶粉作为传播媒介导致新生儿出现脑膜炎、败血病、小肠结肠炎坏死等症状，Urmenyi和Franklin在1961年率先报道由坂崎肠杆菌引起的2例脑膜炎。各国为了保护境内婴儿健康的需要，逐步加强对奶粉中坂崎肠杆菌的监控力以降低奶粉污染坂崎肠杆菌所带来的风险。尽快研究奶粉、保健食品中坂崎肠杆菌的检验方法，     

奶粉中坂崎肠杆菌的检测

坂畸肠杆菌为肠杆菌科、肠杆菌属的革兰阴性杆菌。美国食品及药物管理局(FDA)与其它机构发现，该菌是靠食物传播的病原体，并于2002年提出在婴幼儿配方奶粉中监测坂崎肠杆菌。本研究从一批奶粉中分离鉴定出可疑坂崎肠杆菌，经北京药品生物制品检定所复核(报告编号SH200301445)，确认为坂崎肠杆菌。现将其特性、检测方法和毒力等报告如下。     

进口奶制品阪崎肠杆菌检测情况与分析

目的：了解进口奶制品阪崎肠杆菌的污染分布情况，为奶制品进口把关提供科学依据。方法：采用SN/T1632.1-2005方法，对经汕头口岸进口的奶制品共220份样品进行阪崎肠杆菌检验，并对检验结果进行统计分析。结果：从220份的样品中检出阪崎肠杆菌7株，检出率为3.20%；受阪崎肠杆菌污染最严重的是产自新西兰的食用全脂工业奶粉，共检出6份，检出率为12.8%，而所有婴幼儿奶粉均未检出。结论：来自新西兰的食用全脂工业奶粉和来自澳大利亚的钙美健高钙奶粉中阪崎肠杆菌污染较严重，需加大抽样检测比例，并加强检验监管力度。     

婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌分子检测方法探讨

目的：对婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的分子检测方法进行探讨。方法：分别用常规PCR方法和实时荧光PCR方法对32份奶粉样品进行阪崎肠杆菌鉴定。结果：32份样品中检出2株阳性株,阳性率为6.25%,两种检测方法结果相符。结论：市售婴幼儿配方奶粉中存在阪崎肠杆菌污染,应尽快制订婴幼儿食品中阪崎肠杆菌的检测标准,分子检测方法可快速准确检测阪崎肠杆菌。     

深圳市售进口婴幼儿配方粉中阪崎肠杆菌污染状况调查

目的了解深圳市进口婴幼儿配方粉中阪崎肠杆菌的污染情况。方法对抽取的79份进口婴幼儿配方奶粉和米粉进行阪崎肠杆菌荧光定量PCR检测,同时参照GB/T4789.40-2008进行分离培养、鉴定。结果共6份样品经荧光定量PCR检测出阪崎肠杆菌阳性;其中一份分离出菌株。结论深圳市进口婴幼儿配方粉中存在阪崎肠杆菌污染隐患。     

奶粉中坂崎肠杆菌检测方法研究

目的：寻找一种快速简便的奶粉中坂崎肠杆菌的检测方法。方法：通过对不同增菌液及分离平板的试验比较，选择对坂崎肠杆菌的检测适宜的预增菌液及分离平板。结果：通过参考菌株的添加试验，灭菌蒸馏水和缓冲蛋白胨水作为检测的预增菌液，增菌效果差异没有显著性，将34株肠杆菌科细菌的参考菌株分别划线接种于显色培养基琼脂（Xα—GlcA）、山梨醇麦康凯琼脂（SMAC）、四甲基伞形酮培养基（NA＋α—MUG）和结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂（VRBGA），选择性分离效果最好的是XαGlcA。结论：推荐使用无菌蒸馏水作为检测的预增菌液，Xα—GlcA或VRBGA为分离平板，API 20E生化试剂盒或VITEK进行生化鉴定。     

深圳乳制品和环境中阪崎肠杆菌污染状况调查

目的 了解深圳市乳制品中阪崎肠杆菌的污染状况,分析其可能的污染途径.方法 对抽取的195份乳制品及41份环境样品进行阪崎肠杆菌荧光定量PCR检测,同时参照GB/T4789.40-2008进行分离培养和鉴定.结果 共8份乳制品和12份环境样品经荧光PCR检测,为阪崎肠杆菌阳性;其中1份婴幼儿进口配方奶粉、2份新鲜挤出牛奶和4份环境样品分离出菌株.结论 深圳市售进口婴幼儿配方粉中存在阪崎肠杆菌污染隐患.医院婴儿养育环境中存在阪崎肠杆菌污染;生奶及奶场环境阪崎肠杆菌污染风险很高.     

环介导等温扩增法检测进口宠物乳粉中阪崎肠杆菌

目的:建立并验证一种能够简单,准确和快速检测进口宠物乳粉中阪崎肠杆菌的方法。方法:应用环介导等温扩增技术(LAMP)建立宠物乳粉中阪崎肠杆菌检测方法,并通过常规方法对其结果进行验证。结果:LAMP方法从5种进口宠物乳粉中检出两份阪崎肠杆菌阳性,与VITEK 2生化鉴定结果一致。结论:该方法特异性好、灵敏度高,检测时间短,适用于奶粉及其他食品中阪崎肠杆菌检测。     

市售国产婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌污染情况调查

目的了解成都市市售国产婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌污染情况,为制定婴幼儿配方奶粉阪崎肠杆菌的限量标准提供科学依据。方法对2006-09/2007-03采集的80份市售婴幼儿配方奶粉进行菌落总数、大肠菌群及阪崎肠杆菌的检测,并对分离的阪崎肠杆菌进行药敏试验。结果所有检测样品中,有5份样品检出阪崎肠杆菌,阳性率为6.25%,且其中4份样品的菌落总数、大肠菌群均合格。分离的阪崎肠杆菌对常用抗生素普遍敏感。结论市售国产婴幼儿配方奶粉中存在少量阪崎肠杆菌污染,应尽快制定婴幼儿配方奶粉中适宜的阪崎肠杆菌微生物限量标准和相应检验方法。     

Isolation and identification of Enterobacter sakazakii in infant milk formulas

Enterobacter sakazakii is a pathogen of increasing medical concern, due to it being implicated in cases of meningitis, sepis, and necrotizing enterocolitis associated with the consumption of contaminated infant milk formula. At present, the method adopted by the Mexican food industry for the isolation and identification of E. sakazakii is based on the methodology of the United States Food and Drug Administration (FDA). However, this procedure is laborious and requires 7 days to obtain a confirmative result. The objective of this study was to determine the presence of E. sakazakii in two types of powdered infant milk formula, using an alternative method that requires less time and a smaller sample size than the FDA protocol. We adapted Leuschner's procedure by eliminating violet red bile glucose agar (VRBG) plates and instead adopting white light incubation to stimulate yellow pigment development. This allowed for isolation of E. sakazakii from powdered infant milk formula using a smaller sample and requiring only 5 days for analysis. Results showed that 92% of formula 1 and 32% of formula 2 was positive for E. sakazakii. The high contamination level of E. sakazakii suggests the need for monitoring hygienic conditions in the manufacturing plant and to assess the prevalence of E. sakazakii in powdered infant milk formulas sold in México.     

国产婴幼儿配方奶粉及婴幼儿米粉中阪崎肠杆菌分离株的药敏分析

目的:了解北京地区市售国产婴幼儿配方奶粉及婴幼儿米粉中阪崎肠杆菌分离株的药物敏感性及耐药性。方法:采用纸片扩散法对11株分离自婴幼儿配方奶粉及婴幼儿米粉中的阪崎肠杆菌进行8大类17种药敏实验。结果:11株阪崎肠杆菌对苯唑西林和一代头孢菌素(头孢噻吩)100%耐药,对替卡西林、亚胺培南、头孢他定、头孢吡肟、阿莫西林/克拉维酸、环丙沙星高度敏感。结论:针对性使用抗生素,减少阪崎肠杆菌耐药,为临床提供合理用药依据。     

2012 - 2016年陕西省897份婴幼儿食品中阪崎肠杆菌检测

目的 通过连续5年对陕西省婴幼儿食品中阪崎肠杆菌的监测,调查陕西省婴幼儿食品中阪崎肠杆菌的污染情况。方法 随机采集省内超市、零售店、农贸市场、网购场所的婴幼儿食品,依照食品微生物检验国家标准GB 4789.40—2010 对所采集的婴幼儿食品进行阪崎肠杆菌的检测。结果 2012 - 2016年共采集婴幼儿食品897份,总检出率为3.01%（27/897）。婴幼儿辅助食品的检出率（6.54%）高于婴儿配方食品（1.90%）,第二季度的检出率（3.82%）较高,0～6个月婴幼儿配方食品中也检出了阪崎肠杆菌,检出率为1.67%,羊奶粉的检出率（5.51%）高于牛奶粉的检出率（1.08%）。结论 陕西省婴幼儿食品存在阪崎肠杆菌污染,婴幼儿辅助食品、0～6个月婴幼儿食品以及羊奶粉中阪崎肠杆菌污染更为严重,需引起监管部门重视,加强监督和管理。     

1O类食品污染阪崎肠杆菌状况的调查研究

目的了解10类食品中阪崎肠杆菌的污染状况及污染数量,评估其风险性,为预防和控制阪崎肠杆菌的感染、传播、流行提供科学依据。方法按照GB4789．1—2010采抽样技术、GB4789．40—2010（食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》、实时荧光PCR法操作规程,对10类850份食品进行阪崎肠杆菌检验,标准菌株作对照。结果检出阪崎肠杆菌54株,总检出率为6．4％。该10类食品阪崎肠杆菌的检出率差异有统计学意义,由高至低排序为：冰淇淋〉巧克力坚果〉熟肉〉糖饼类〉面包糕点〉方便面〉奶类〉饮用水、生肉、调味品。染菌量〉30MPN／100g（ml）以上的有15份,占27．7％（15／54）。结论10类食品检出阪崎肠杆菌的有7类,应予必重视。     

婴幼儿配方奶粉中肺炎克雷伯菌与阪崎肠杆菌分离株的药敏分析

目的研究中国婴幼儿配方奶粉中肺炎克雷伯菌及阪崎肠杆菌分离株的药物敏感性。方法采用纸片扩散法测定15株细菌对氨苄西林、头孢唑林、环丙沙星、阿米卡星等8大类共24种抗生素的敏感性。结果 2009年自30份婴幼儿奶粉样品中共分离得到15株肠杆菌科细菌,经生化鉴定,其中肺炎克雷伯菌8株(53.3%),阪崎肠杆菌7株(46.7%)。药敏结果显示:所有菌株对β-内酰胺类抗生素均有不同程度的耐药性,对氟喹诺酮类和氨基糖甙类均敏感。分别有1株肺炎克雷伯菌和1株阪崎肠杆菌几乎对所有头孢类抗生素耐药。结论婴幼儿配方奶粉中肺炎克雷伯菌和阪崎肠杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性较强,其多重耐药性不断的出现对婴幼儿构成了极大的危害。     

寿司制品中阪崎肠杆菌污染情况调查

目的:了解寿司制品中阪崎肠杆菌的污染状况。方法:采用常规培养鉴定方法、实时荧光PCR方法对40份样品进行阪崎肠杆菌分离鉴定。结果:从40份市售寿司制品中检出4株阳性株,阳性率为10%。2种鉴定方法结果相符。结论:阪崎肠杆菌的污染造成寿司制品存在安全隐患。