Livin基因表达与食管鳞癌化疗药物敏感性的相关性研究

目的研究原代培养食管癌细胞对化疗药物的敏感性,并进一步探讨其敏感性与食管癌组织中Livin基因表达的关系,为食管癌的临床化疗提供个体化用药的实验资料和依据。方法：取手术切除的新鲜食管癌组织标本,用MTT法检测经化疗药物作用后肿瘤细胞活力及代谢活性的变化;同时取相同食管癌组织制成石蜡切片,用免疫组化检测Livin蛋白的表达。结果：1.Livin阳性表达与5-FU及ADM耐药有关（P〈0.05）;2.TAX、MMC及5-FU与ADM及DDP之间敏感性差异具有统计学意义（P〈0.05）,前者明显高于后者;ADM敏感性明显高于DDP,组间差异具有统计学意义（P〈0.01）;结论：食管癌组织中Livin阳性表达者与5-FU及ADM耐药有关,提示Livin可作为食管癌原发性耐药标志之一。     

野生型survivin表达的上调促进胃癌对多西他赛的耐药性

目的研究胃癌组织survivin基因各转录变异体表达情况及其与胃癌化疗药物抗药性的关系。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术,对39例胃恶性肿瘤患者肿瘤标本中的survivin转录变异体进行定量检测。采用组织培养肿瘤药敏实验(HDRA)技术,检测胃癌组织对多种化疗药物的敏感性,并且分析该敏感性与survivin转录变异体表达的关系。结果在39例胃癌组织标本中,survivin的表达率100%(39/39),survivin2B的表达率795%(31/39),survivin△Ex3的表达率667%(26/39)。胃癌标本对顺铂、丝裂霉素、5氟尿嘧啶、多西他赛(TXT,商品名泰索帝)和双氟脱氧胞苷在体外实验中的敏感率分别是368%(14/38)、312%(10/32)、231%(9/39)、205%(8/39)和125%(4/32)。泰索帝耐药组中患者野生型survivin的表达水平显著高于泰索帝敏感组(P=0021)。结论研究结果提示野生型survivin的表达促进了胃癌患者对泰索帝的抗药性。     

Pokemon基因表达与胃癌耐药性的关系

目的 探讨okemon基因表达与胃癌细胞药敏性及耐药基因的关系.方法 取60例胃癌组织和癌旁组织石蜡标本,采用免疫组化技术检测组织中pokemon蛋白及耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、肺耐药蛋白(LRP)、生存素(survivin)的表达,并分析pokemon蛋白与其他4种蛋白的关系.采用磺酰罗丹明B(SRB)蛋白染色法检测5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)、奥沙利铂(L-OHP)对胃癌细胞株SGC7901、胃癌耐药细胞株SGC7901/ADR、胃上皮细胞株GES-1的抑制作用;qPCR及蛋白质印迹法检测上述3种细胞株中pokemon和耐药基因的表达.合成针对pokemon的siRNA并转染SGC7901/ADR细胞,检测转染前后SGC7901/ADR细胞的化疗药敏性及耐药基因的变化.结果 胃癌组织中pokemon、P-gp、MRP1、LRP、survivin蛋白的阳性表达率均高于癌旁组织(P＜0.05);pokemon蛋白表达与P-gp、survivin蛋白表达间存在正相关关系(r=0.385 2,P=0.002;r=0.342 4,P=0.007).Pokemon、P-gp、MRP1、survivin蛋白在SGC7901/ADR细胞株中的表达高于细胞株SGC7901及GES-1;SGC7901/ADR细胞株的耐药性最强,SGC7901次之,GES-1最弱(P＜0.01).Pokemon-siRNA转染SGC7901/ADR细胞后细胞中pokemon mRNA的表达明显受到抑制;转染后化疗药物对细胞的抑制能力增强,P-gp、survivin表达减弱(P＜0.05).结论 Pokemon与P-gp、survivin通过相互调控而促进胃癌耐药性的形成.Pokemon可能成为胃癌靶向治疗的候选基因.     

sorvivin、PTEN在胃癌组织中的表达以及相关性

目的 检测在胃癌组织中生存素(survivin)、PTEN基因及其蛋白活性的表达,探讨二者相互作用机制.方法 采用RT-PCR和Westem blot技术对临床60例胃癌新鲜标本及其周围正常黏膜组织中survivin、PTEN基因和蛋白的表达进行检测,癌旁组织作为正常对照组.结果 正常胃黏膜组织中surrivin无表达,胃癌组织中survivin随分化程度降低表达增强.正常胃黏膜组织中PTEN表达高于胃癌组织中的表达量,并随分化程度降低而减弱.均有统计学意义(P<0.05).survivin、PTEN的表达与性别、肿瘤大小无关(P>0.05).结论 在胃癌组织中PTEN低表达而survivin高表达,二者呈显著负相关.提示PTEN的失活和survivin的高表达是胃癌进展的重要环节.二者在胃癌的发生发展过程中起着协同作用.     

胃癌细胞P53、P16蛋白表达与化疗药物敏感性的关系

目的探讨胃癌对化疗药物的耐药性及其与P53和P16蛋白表达的关系。方法收集75例新鲜胃癌标本,制备单细胞悬液,分别加入HCPT、CDDP、ADM、5-FU和MMC培养48h,用MTT比色法检测胃癌细胞对化疗药物的敏感性;免疫组化技术检测P53和P16 蛋白在胃癌组织中的表达。结果胃癌细胞对不同化疗药物敏感性不同：5-FU（43.4&#177;9.2）、CDDP（41.9&#177;8.7）和HCPT（40.6&#177;8.3）对胃癌细胞的抑制率与ADM（31.6&#177;7.8）和MMC（28.7&#177;7.3）比较有统计学意义（P〈0.05）。胃癌组织中P53和P16 蛋白的阳性率分别为81.33%（61/75）和38.67%（32/75）。P53阳性者显示对5-FU、ADM、HCPT有明显的体外耐药性（P〈0.05）,P16在5-FU和CDDP耐药组阳性率低于敏感组（P〈0.05）。结论P53和P16蛋白参与了胃癌对化疗药物原发性耐药的产生。MTT药敏检测有助于筛选有效化疗药物。     

P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白在胃癌的表达与化疗敏感性的相关性研究

目的：探讨胃癌组织中P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gP）、多药耐药相关蛋白（muhidrug resistance-associated protein,MRP）的表达及对胃癌原代细胞培养体外化疗药物敏感性的影响。方法：应用免疫组化法检测P-gP及MRP在48例胃癌及癌旁组织的表达,同时通过胃癌原代细胞培养MTT药敏试验,检测胃癌对7种临床常用化疗药物的敏感性及耐药性,进一步分析药敏试验结果与P-gp、MRP表达的相关性。结果：在48例胃癌中,P-gP及MRP阳性率分别为41．7％、29．2％,共同表达率为25．0％。癌旁组织与癌组织的P-gP、MRP阳性表达率无显著差异。在顺铂（DDP）、丝裂霉素（MMC）、阿霉素（ADM）、鬼臼乙叉甙（VP-16）、5-氟尿嘧啶（5-FU）、羟基喜树碱（HCVF）、甲氨蝶呤（MTX）中,ADM、VP-16、HCVF耐药组P-gP、MRP阳性表达及共表达率较敏感组显著升高。结论：胃癌组织P-gp、MRP表达可导致胃癌原发性耐药。P-gP、MRP介导的MDR是ADM、VP-16、HCPT耐药的重要因素．     

survivin基因在胃癌中的表达

目的探讨凋亡抑制基因survivin在胃癌组织中的表达。方法应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),免疫组织化学染色技术研究Survivin mRNA在胃癌及正常胃组织中的表达。结果8例胃癌及3例正常胃黏膜中Ssurvivin的表达,3例正常胃黏膜组织中survivin基因无表达,而在8例胃癌组织中survivin基因阳性表达5例,阳性率为63%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Survivin表达与胃癌组织的分化程度、淋巴结转移及肿瘤的TNM分期具有相关性,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论survivin基因在胃癌组织中表达率升高,提示Survivin对胃癌发生、发展起重要作用,其过度表达可能提示胃癌预后不良。检测胃癌组织中survivin基因的表达可作为评价胃癌生物学行为和判断预后的重要指标。     

人胃癌原代细胞培养化疗药物敏感性评价

目的:评价人胃癌原代细胞对7种化疗药物的敏感性。方法:取59例手术切除的新鲜胃癌组织标本,应用人胃癌原代细胞短期培养(混杂非肿瘤细胞)与纯化培养MTT法体外药敏试验,测定每种化疗药物对肿瘤细胞的抑制率。结果:药敏试验测定7种化疗药物抑制率除氨甲蝶呤(MTX)外纯化法均高于短期法,表明纯化法较敏感;两种方法测定药物敏感性顺序一致,由高至低依次为顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、阿霉素(ADM)、依托泊甙(VP-16)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、羟基喜树碱(HCPT)、MTX。结论:7种化疗药物以DDP、MMC、ADM较敏感,VP-16、5-FU次之,HCPT、MTX最差。     

ONECUT2高表达介导胃癌复发患者5-FU化疗耐药

目的:探究One cut结构域家族成员2(ONECUT2)是否可以作为对5-FU耐药的胃癌复发患者的治疗靶点。方法:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析ONECUT2基因在胃癌患者及胃癌复发患者的表达情况。利用基因集富集分析(GSEA)评估TCGA数据库中ONECUT2表达量与药物代谢相关生物学过程的相关性。利用CCK-8细胞毒性实验评估胃癌细胞敲低或过表达ONECUT2对5-FU的耐药情况。分析30例胃癌术后复发患者ONECUT2表达量与5-FU治疗效果的相关性。结果:TCGA数据库分析显示,在经受过化疗且复发的胃癌患者中,ONECUT2高表达的患者无病间隔期(disease-free interval, DFI)更短。GSEA分析结果表明,ONECUT2高表达与异生药物代谢通路呈正相关,这提示可能与胃癌患者的耐药相关。体外实验中,敲低ONECUT2降低胃癌细胞对5-FU的半数抑制浓度(IC₅₀)值;反之,过表达ONECUT2增加细胞对5-FU的IC₅₀值。30例胃癌复发患者对5-FU的药物敏感性与ONECUT2表达量相关。结论:胃癌复...     

DBC1在胃癌耐药中的作用和机制初探

目的 初步探讨乳腺癌缺失基因1(deleted in breast cancer 1,DBC1)在胃癌耐药中的作用和可能机制。方法 选取对化疗敏感和化疗耐药的胃癌患者,利用免疫组织化学染色法检测DBC1表达差异;在SGC7901胃癌细胞系中通过DBC1-shRNA载体下调DBC1的表达,利用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyl tetrazolium, MTT)、流式细胞术观察胃癌细胞对顺铂(cisplatin, CDDP)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)等化疗药物的敏感性;利用Western blot检测多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein, MRP)的表达变化,初步揭示可能的分子机制。结果 在化疗耐药的胃癌患者中,DBC1表达明显高于化疗敏感的胃癌患者;在SGC7901胃癌细胞,下调DBC1表达可以提高胃癌细胞对CDDP和5-FU的敏感性、降低半抑制浓度(half maximal inhibitory c...     

药物敏感试验指导小鼠胃癌化疗对凋亡及P53基因的影响

目的:通过应用药敏试验筛选化疗药物对多次传代的荷瘤鼠进行化疗,了解其疗效以及对移植瘤凋亡及P53基因的影响.方法:用MTT法检测小鼠胃癌细胞对6种化疗药物的敏感性,对荷瘤鼠进行化疗,观察化疗后移植瘤的体积、抑瘤率,检测凋亡及P53基因的表达.结果:用MTT法筛选最敏感的化疗药5-FU对第一代荷瘤小鼠进行化疗,其抑瘤率高,凋亡率高,P53基因的表达下降,与对照组比较有显著性差异;最不敏感的ADM化疗组抑瘤率低,凋亡率低,P53基因的表达高于对照组(P＜0.05).再对已行化疗的胃癌细胞筛选最敏感药物为DDP,最不敏感药物为用MMC,对第二代荷瘤小鼠进行化疗,发现DDP组抑瘤率高,凋亡率高,P53基因的表达较对照组低(P＜0.05);MMC组抑瘤率低,凋亡率低, P53蛋白表达高,与对照组比较无显著性差异.而继用5-FU和ADM化疗对第二代荷瘤小鼠进行化疗,抑瘤率低,凋亡率低,P53基因的表达高,与对照组比较无显著性差异.结论:药敏试验、凋亡及P53基因的检测可作为化疗药物的选择及判断预后的指标.     

用MTT法预测胃癌化疗药物敏感性试验研究

用ＭＴＴ法测定７２例新鲜人胃癌组织对１０种常用化疗药物的敏感性，试图选出针对性较强的化疗药。结果表明对胃癌较敏感的药物依次是：５－ＦＵ、ＡＤＭ、ＰＹＭ等，并发现不同病理类型间敏感性有差异，各个体间对抗癌药的反应性亦不同。由此进一步说明，同一类型肿瘤的不同个体其临床化疗效果有较大差异。ＭＴＴ法具有快速、简便、经济、重复性好等优点。本试验结果与实际疗效的相关性有待临床进一步观察。     

腺病毒介导p53基因逆转乳腺癌耐药的实验研究

目的探讨腺病毒介导p53基因（Ad-p53）对人乳腺癌阿霉素（ADM）耐药细胞株MCF-7／ADM的耐药性及多药耐药基因1（MDR1）的影响。方法以Ad-p53转染MCF-7／ADM细胞株,流式细胞术检测p53蛋白变化;锥虫蓝活细胞拒染法观察细胞生长情况;MTT法观察MCF-7／ADM细胞对阿霉素耐药性的变化,实时荧光RT—PCR法检测MDR1 mRNA变化。结果流式细胞术观察到MCF-7／ADM细胞经MOI50的Ad-p53作用48h后,p53蛋白表达率由10．24％升高到36．20％;细胞抑制率为7．4％（P=0．003）;逆转MCF-7／ADM对ADM的耐药倍数11．6倍（P=0．001）;实时荧光RT-PCR检测结果显示MDR1 mRNA相对表达量由1．25±0．01下降至0．91±0．01（P=0．011）。结论腺病毒介导p53基因能抑制MCF-7／ADM细胞MDR1基因的表达,并能部分逆转MCF-7／ADM的耐药性,增加阿霉素化疗敏感性。     

Survivin和PTEN在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究

目的：探讨survivin和PTEN在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况及其与NSCLC临床生物学行为的关系。方法：应用免疫组织化学方法检测survivin和PTEN在78例NSCLC组织、46例癌旁组织和12例非癌肺良性病变组织中的表达情况,并将结果进行相关性分析。结果：Survivin在非癌良性病变组织、癌旁组织、非小细胞肺癌中的阳性表达率分别是0、10．9％、67．9％．其蛋白表达逐渐增强（P〈0．05）;非小细胞肺癌中的survivin表达显著高于癌旁肺组织及非癌良性病变组织中的表达（P〈0．05）。PTEN在非癌良性病变组织、癌旁组织、非小细胞肺癌中的阳性表达率分别是100％、91．3％、47．4％,其表达逐渐减弱（P〈0．05）：非小细胞肺癌中的PTEN表达低于癌旁肺组织及非癌良性病变组织中的表达（P〈0．05）。survivin蛋白的表达与NSCLC的病理学分级、淋巴结转移、TNM分期有关（P〈0．05）。PTEN蛋白的表达与NSCLC的病理学分级、淋巴结转移、TNM分期有关（P〈0．05）。Survivin与PTEN表达呈负相关（P〈0．05）。结论：Survivin和PTEN在NSCLC中的异常表达与其生物学行为密切相关,survivin在非小细胞肺癌中过度表达,PTEN在非小细胞肺癌中表达降低,并且二者的表达呈负相关,二者可作为NSCLC判断病情和评价预后的参考指标。     

Inhibition of survivin expression and mechanisms of reversing drug-resistance of human lung adenocarcinoma cells by siRNA

Background Survivin, a member of the inhibitor of apoptosis protein （IAP） family, overexpresses in tumor cells and not expresses in terminally differentiated adult tissues. This study aimed to investigate the effects of survivin-specific siRNA on cell proliferation, apoptosis and chemosensitivity to cisplatin in vitro and in vivo and explore the mechanisms about decreasing expression of survivin in reversing cancer cells resistance to chemotherapeutic drug.Methods Survivin-specific siRNA was transfected into A549/DDP cells. The expression of survivin and lung resistance-related protein （LRP） mRNA levels were determined by RT-PCR, chemosensitivity of A549/DDP （cisplatin）cells to cisplatin was determined by MTT assay, and apoptosis and cell cycle were determined by flow cytometry （FCM）.The protein expression levels of survivin, LRP, cyclin-D1, caspase-3 and bcl-2 were determined by Western blotting analyses. The effect of survivin siRNA inhibition on tumor growth was studied in athymic nude mice in vivo.Results Survivin-specific siRNA efficiently down-regulated survivin expression. The cell cycle was arrested at G2/M phase, and apoptosis was obviously found. Inhibition of survivin expression could make the IC50 and drug-resistant index of cisplatin decrease, and enhance the cancer cells sensitivity to cisplatin. After transfection by survivin-specific siRNA, expression of LRP and cyclin-D1 were downregulated, caspase-3 expression was upregulated, bcl-2 expression had no obvious change. The animal experiment confirmed knockdown of survivin could inhibit the tumor growth.Conclusions Survivin-specific siRNA can efficiently suppress the expression of survivin, increase apoptosis, inhibit cells proliferation and enhance the chemosensitivity to cisplatin in vitro and in vivo. Suppression of survivin expression helping to reverse drug-resistance may have relationship with downregulation of LRP and upregulation of caspase-3.Anti-tumor strategies based on the inhibition of survivin may be useful in targeting lung adenocarcinomas.     

药物敏感试验指导小鼠多次传代胃癌化疗的疗效及耐药基因观察

目的 通过应用药敏试验筛选化疗药物对多次传代的荷瘤鼠进行化疗,了解其疗效及耐药基因的表达.方法 用MTT法检测小鼠胃癌细胞对6种化疗药物的敏感性,对荷瘤鼠进行化疗,观察化疗后移植瘤的体积、抑瘤率,检测多药耐药基因1(MDR1)的表达.结果 用MTT法筛选最敏感的化疗药5-FU对第一代荷瘤小鼠进行化疗,其抑瘤率显著高于对照组,但MDR1的表达与对照组无显著性差异;筛选的最不敏感的阿霉素化疗组抑瘤率低,MDR1的表达与对照组比较无显著性差异.再对已行化疗的胃癌细胞筛选最敏感药物为顺铂,最不敏感药物为丝裂霉素.对第2代荷瘤小鼠进行化疗,发现顺铂组抑瘤率高,但MDR1的表达与对照组无显著性差异;丝裂霉素组抑瘤率低,MDR1表达高,与对照组比较有显著性差异.继而用5-FU和阿霉素对第2代荷瘤小鼠进行化疗,抑瘤率低,MDR1表达与对照组比较无显著性差异.结论 应根据药敏试验和耐药基因来实施科学的、药物适配的个体化化疗方案.     

Down-regulation of lung resistance related protein by RNA interference targeting survivin induces the reversal of chemoresistances in hepatocellular carcinoma

Background Both survivin and lung resistance related protein （LRP） are hepatocellular carcinoma （HCC）. But the relationship between survivin and LRP is investigate the effects of down-regulation of survivin on LRP expressions and the both in vitro and in vivo. related to the chemoresistances in ndefinite. The aim of this study was to reversal of chemoresistances in HCC Methods The expressions of survivin were detected by RT-PCR and Western blotting in HCC cell line SMMC-7721 and SMMC-7721/ADM. The sensitivities of these two cell lines to ADM were evaluated by MTT assays. SiRNA which targeted survivin was transfected into SMMC-7721/ADM cells, then the sensitivity of SMMC-7721/ADM cells to ADM and the expressions of survivin and LRP were detected respectively. SMMC-7721/ADM cells were transplanted subcutaneously into nude mice to establish xenograft tumors. Antitumor activities of RNA interference （RNAi） targeting survivin, various doses of ADM and combination therapies were observed respectively. Possible toxicities were evaluated. LRP expression changes were tested. Student＇s ttest was used for evaluating statistical significance. Results The expressions of survivin in SMMC-7721/ADM cell line showed significant elevation compared to those in SMMC-7721 cell line （P 〈0.05）. Positive siRNA down-regulated the expressions of survivin significantly （P 〈0.05）. SiRNA targeting survivin could sensitize SMMC-7721/ADM cells to ADM and down-regulate the expressions of LRP significantly （P 〈0.05）. Growths of the tumors were significantly inhibited in positive siRNA group as compared with those in the control group from the 8th day （P 〈0.05）. Combination therapies caused significant tumor inhibitions compared with tumors of nude mice in the other three groups respectively （P 〈0.05）. No toxicities were found in nude mice treated by siRNA and combination therapies. The expressions of LRP were markedly reduced in tumors treated with siRNA targeting survivin （P 〈0.05）. Conclusions Down regulation of survivin gene by RNAi can increase chemosensitivity of HCC both in vitro and in vivo. The reversal of drug resistance may be reduced through the inhibitions of LRP.