脐血清对培养人造血祖细胞集落生长的影响

目的：研究脐血清对培养人造血祖细胞集落生长的影响。方法：采用半固体细胞培养法。结果：在正常足月胎儿脐血清中有较高粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）和粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）活性，单用脐血清作刺激因子来源，在体外进行粒系造血祖细胞培养，可产生１４８１±８８７个粒系集落（ＣＦＵ－Ｇ），而植物血凝素刺激的单个核细胞条件培养液为５９０±２８８个ＣＦＵ－Ｇ，差别非常显著（Ｐ＜０００１）。脐血清组与３０ｎｇｒｈＧ－ＣＳＦ组所产生１５２０±３４５个ＣＦＵ－Ｇ相比，差别无显著（Ｐ＞００５）。并且我们还观察到脐血清组培养随时间延长有较多粒－巨噬细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）生长，有些可出现混合爆式集落。结论：脐血清富含多种造血生长因子，并且Ｇ－ＣＳＦ水平较高     

集落刺激因子（CSF）的研究进展

造血生长因子是近年来人们的研究热点之一。随着基因工程技术的发展,在国外许多重组的造血生长因子已进入临床试用阶段,广泛的临床应用也将为期不远了。造血生长因子主要包括红细胞生成索(Epo)和集落刺激因子(CSF)。Epo将有专门文章综述,本文仅就CSF的各种特性、生物学活性及临床应用做一简单综述。 一、集落刺激因子(CSF)的一般特性 在体外,造血祖细胞(Progenitor cells)的存活、增殖及终末分化依赖于细胞的造血生长因子即集落刺激因子(CSF)。已发现多种CSF,均为糖蛋白。根据其对造血祖细胞克隆增殖的作用不同而命名:“GM-CSF”刺激粒细胞和巨噬细胞的生成;“M-CSF”     

高增殖潜能集落形成细胞的分类,富集与调控

高增殖潜能集落形成细胞（ＨＰＰ－ＣＦＣ）是存在于小鼠和人骨髓及入胎肝、脐血中的一类较为原始的造血祖细胞。它在体外培养中可产生直径大于０．５ｍｍ，５００００细胞／集落的巨大集落；对５－氟尿嘧啶有相对耐受性；对多种造血生长因子的刺激有反应性。     

rHuIL—3 McAb在rHuIL—3促人骨髓干细胞集落形成中的中…

本文在应用ｒＨｕＩＬ－３刺激健康人骨髓干细胞半固体培养中的集落形成的实验系统，发现了ｒＨｕＩＬ－３ ＭｃＡｂ １Ｂ９对ｒＨｕＩＬ－３刺激集落形成活性的中和作用，当在培养系统中加入１：１０００稀释的ＭｃＡｂ腹水时其抑制率达到８２．５％，本结果对由于ＩＬ－３分泌过高时所引起的某些造血系和非造血系肿瘤等疾病的治疗提供了有价值的实验依据。     

rHuIL－3McAb在rHuIL－3促人骨髓干细胞集落形成中的中和作用

本文在应用ｒＨｕＩＬ－３刺激健康人骨髓干细胞半固体培养中的集落形成的实验系统，发现了ｒＨｕＩＬ－３ＭｃＡｂＩＢ９对ｒＨｕＩＬ－３刺激集落形成活性的中和作用，当在培养系统中加入１：１０００稀释的ＭｃＡｂ腹水时其抑制率达到８２．５％。本结果对由于ＩＬ－３分泌过高时所引起的某些造血系和非造血系肿瘤等疾病的治疗提供了有价值的实验依据。     

γδ细胞及其培养上清成份对骨髓造血细胞集落形成 …

目的 研究γδＴ细胞及其培养上清成份对骨髓造血细胞集落形成的影响。方法 运用体外半固体造血集落培养观察了人γδ细胞及其分泌上清对自体骨髓造血集落（ＣＦＵ－Ｃ）形成的影响。结果 γδＴ细胞及其培养上清能刺激自体骨髓造血集落的形成;共培养上清中可检出ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ、ＩＬ－８等细胞因子。结论 γδＴ细胞能分泌一系列具有不同效应的造血调控因子、但其共同的作用结果则具有一定的造血刺激效应,可能成为一种新     

γδT细胞及其培养上清成份对骨髓造血细胞集落形成的影响

目的　研究γδＴ 细胞及其培养上清成份对骨髓造血细胞集落形成的影响。方法　运用体外半固体造血集落培养观察了人γδＴ 细胞及其分泌上清对自体骨髓造血集落（ＣＦＵＣ） 形成的影响。结果　γδＴ 细胞及其培养上清能刺激自体骨髓造血集落的形成;其培养上清中可检出ＩＦＮγ、ＴＮＦ、ＩＬ８ 等细胞因子。结论　γδＴ 细胞能分泌一系列具有不同效应的造血调控因子,但其共同的作用结果则具有一定的造血刺激效应,可能成为一种新型的ＣＴＬ 用于肿瘤的过继免疫疗法。     

粒—巨噬细胞和粒细胞集落刺激因子作用的研究进展

粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）不仅具有刺激造血于细胞的作用，且可影响定向造血祖细胞的增殖和向成熟阶段分化，成熟细胞的功能激活和细胞的生存等功能。本文就ＧＭ－ＣＳＦ及Ｇ－ＣＳＦ的研究进展作一简要综述．     

当归补血汤载药血清干预后骨髓基质细胞中粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3的分泌

背景：实验表明,当归补血汤的有效成分多糖对造血干细胞和造血祖细胞的增殖分化存在显著的促进作用,对造血微环境具有重要的调控作用。 目的：观察当归补血汤载药血清干预后小鼠骨髓基质细胞中粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3的分泌状况。 方法：分离骨髓基质细胞,于96孔板培养,在相差显微镜下观察细胞形态和生长状况;将细胞分4组,加含有不同剂量的当归补血汤载药血清进行干预,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性,ELISA法检测粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3的表达情况。 结果与结论：当归补血汤载药血清可明显促进骨髓基质细胞的增殖,促进骨髓基质细胞分泌粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3,呈剂量依赖性,含等效剂量载药血清组促增殖作用和促分泌作用优于其他各组,浓度过高可减弱细胞的增殖分泌效应。     

银屑病患者骨髓HPP-CFC集落形成及p21基因启动子甲基化的研究

目的：研究银屑病患者骨髓高增殖潜能集落形成细胞（HPP-CFC）集落形成能力及集落细胞p21基因启动子甲基化状态,探讨银屑病患者骨髓造血前体细胞的活性。方法：密度梯度离心法分离银屑病患者及正常对照骨髓单个核细胞,培养于含SCF＋GM-CSF＋IL-3＋IL-6细胞因子组合的甲基纤维素半固体培养基,培养14天时计数HPP-CFC集落,然后收集集落。提取纯化集落细胞DNA,经亚硫酸盐修饰后,采用甲基化特异性PCR（MSP）检测HPP-CFC集落细胞p21基因启动子甲基化状态。结果：（1）在甲基纤维素半固体培养基中,银屑病患者骨髓HPP-CFC集落数显著低于正常对照组,且集落形态较小;（2）正常对照骨髓HPP-CFCp21基因启动子甲基化阳性率较高,而银屑病患者骨髓HPP-CFCp21基因启动子甲基化阳性率低于正常对照组。结论：银屑病患者骨髓造血前体细胞活性有异常;银屑病患者骨髓HPP-CFCp21基因甲基化降低可能与其相对较低的HPP-CFC集落形成能力密切相关。     

AFT024-SCF细胞系的构建及其生物学功能鉴定

 目的: 构建AFT024-SCF和HPC-Lhx2细胞系,并用HPC-Lhx2细胞系鉴定AFT024-SCF细胞系的生物学功能。方法: 采用逆转录病毒感染法构建干细胞因子(stem cell factor,SCF)依赖的永生化造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cell,HPC)-Lhx2细胞系和小鼠胎肝基质细胞系AFT024-SCF及其不含目的基因的对照组细胞系AFT024-GFP。采用real-time PCR法及Western blot法鉴定此AFT024-SCF细胞系中SCF的表达。ELISA法鉴定AFT024-SCF上清液中SCF的表达。收集AFT024-SCF及AFT024-GFP细胞培养上清液并以1:10与IMDM基础培养基混合备用。以AFT024-SCF组上清液为实验组,AFT024-GFP组上清液为内源性阴性对照组,无任何添加的IMDM基础培养基为外源性阴性对照组,添加重组SCF的IMDM培养基为阳性对照组,分别与HPC-Lhx2细胞系共培养72 h。MTT法检测各组HPC-Lhx2细胞增殖活性,集落形成实验鉴定HPC-Lhx2细胞系扩增后的细胞干性。结果: 构建的AFT024-SCF细胞系表达SCF;HPC-Lhx2细胞系体外培养72 h后,外源性及内源性阴性对照组未能维持HPC-Lhx2细胞增殖;而阳性对照组及实验组均可促进HPC-Lhx2细胞增殖;阳性对照组及实验组细胞均有集落形成单位,且差异无统计学意义,阴性对照组无集落形成单位。结论: 成功构建表达SCF的AFT024-SCF细胞系,其培养上清液能够替代重组SCF用于HPC-Lhx2细胞系的体外扩增。     

Serum-free culture of enriched murine haemopoietic stem cells. I: Effect of haemopoietic growth factors on proliferation.

Using a population of cells highly enriched for multipotential day 12 spleen colony forming cells (CFU-S) (termed the FACS-BM population), and a serum-free culture system, the requirements for development of multipotential cell have been investigated and compared to previous results using serum containing cultures. In both serum-free and serum supplemented cultures interleukin-3 (IL-3) was a potent colony stimulating factor, although it was more effective in serum free conditions. However, colony stimulation by granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) and macrophage-colony stimulating factor (M-CSF) was markedly reduced in the absence of serum. Significantly, the ability of interleukin-1 (IL-1) and granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) to synergise with these two growth factors was retained in serum-free conditions, indicating that these growth factors act directly on the FACS-BM without serum co-factors. Furthermore synergistic interactions between IL-3 plus IL-1, and IL-3 plus M-CSF were only manifest in serum-free conditions. The significance of these results in relation to the ability of these growth factors to act directly on multipotential cells is discussed.     

藏药柳茶提取物对K562肿瘤细胞生长的影响

目的:验证柳茶(Liucha)对肿瘤细胞体外生长的抑制作用,初步探讨其作用机制。方法:应用半固体琼脂培养法检测柳茶提取物对人白血病K562细胞集落形成能力的影响,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察柳茶提取物对肿瘤细胞代谢的影响,并在电镜下观察药物作用后肿瘤细胞形态学的变化。结果:与对照组相比,使用柳茶提取物后肿瘤细胞体外生长繁殖受到限制,表现为细胞软琼脂集落形成能力低下和MTT比色吸光度A值的降低。电镜下有细胞核周间隙变窄,染色质块状聚集浓染,线粒体肿大、嵴消失甚至呈空泡状等改变。结论:柳茶提取物具有抑制K562肿瘤细胞体外生长的潜能,作用机制可能与上述一系列形态学变化有关,这些变化可影响肿瘤细胞的代谢,从而限制其生长繁殖。     

乙醛脱氢酶活性检测子宫内膜干细胞

背景：人子宫内膜中存在干细胞特性的细胞,但特异性标志物尚未找到,导致此类细胞很难被分离。 目的：分析乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)活性检测能否分选出子宫内膜干细胞。 方法：采用机械和酶消化相结合方法分离人子宫内膜细胞,用两次滤网方法分离出基质细胞和上皮细胞,根据乙醛脱氢酶活性采用流式细胞仪分选出ALDHhigh细胞和ALDHlow细胞,用有限稀释法培养细胞,观察细胞形态及生长特性;采用流式细胞仪鉴定细胞c-kit,CD90,CD73及CD29的表达。 结果与结论：基质细胞中ALDHhigh细胞占(1.88±0.17)%,经过15 d的原代培养后,ALDHlow细胞克隆形成率达(1.06±0.34)%,ALDHhigh细胞克隆形成率达(4.50±0.82)%,ALDHhigh细胞集落形成率较ALDHlow细胞高(P < 0.05),同时ALDHhigh细胞大克隆数较ALDHlow高(P < 0.05);上皮细胞中未发现ALDHhigh细胞及克隆形成。子宫内膜集落形成细胞表现出c-kit、CD29、CD90、CD73阳性。说明ALDH活性检测对子宫内膜干细胞有一定的分选作用。     

黄芪体外作用对贫血小鼠骨髓基质细胞分泌SCF的影响

目的 研究黄芪注射液（AMI）对贫血小鼠骨髓基质细胞分泌干细胞因子（SCF）的影响。方法 在贫血小鼠骨髓基质细胞培养体系中，分别加入0.1mL不同浓度的AMI（终浓度分别为40mg/L,400mg/L)作为药物1组，药物2组，对照组加入等量的IMDM培养液，检测各实验组培养体系中骨髓成纤维细胞集落（CFU-F）数，同时，分别收集培养上清液，透析浓缩成冻干粉，经IMDM液稀释后作为条件培养液，分别加入到高增殖潜能的集落形成细胞（HPP-CFC）培养体系中，检测各实验组培养上清液中所含SCF的水平。结果 与对照组相比较，药物组的CFU-F数及骨髓基质细胞条件培养液（BMSCM）中SCF的水平均明显升高。结论 一定浓度的AMI可促进贫血小鼠骨髓CFU-F增殖。刺激其骨髓基质细胞分泌SCF。     

Antigenic stimulation of bone marrow colony forming cells: III. Effect in vivo

It has been shown that intraperitoneal injection of Freund's complete adjuvant can stimulate the multiplication and effect the distribution within the animal of cells which form granulocytic and monocytic colonies in vitro. This response is associated with a leukocytosis and a fall in haematocrit. A variety of antigens were tested all of which resulted in an increase in the number of colony forming cells in the spleen to a greater or lesser degree. Two mechanisms are thought to be involved in this response: (1) with some antigens a direct stimulation of colony forming cells by an antigen—α-macroglobulin complex; and (2) an indirect stimulation of colony forming cells by release of colony stimulating factor from cells other than the colony forming cells.     

适合人肌母细胞的无血清培养基

背景：肌母细胞体外培养大多使用添加胎牛血清培养基,存在很多不足,开发无血清培养基,更加稳定、安全、经济,有广泛的应用前景。 目的：初步探索适合人肌母细胞培养的无血清培养基。 方法：配制含胎牛血清培养基 (DMEM/F12 1∶1添加胰岛素样生长因子1、碱性成纤维细胞生长因子和体积分数20%胎牛血清),间充质干细胞无血清培养基组(无血清培养基、2%血清替代物、2 mmol/L L-谷氨酰胺,人脐带间充质干细胞,细胞纯度大于99%,UltraCULTURETM添加血清替代物,谷氨酰胺)。自制无血清培养基组(GibcoTM添加胰岛素样生长因子1,碱性成纤维细胞生长因子,谷氨酰胺)。3种培养基分别对人肌母细胞分别进行培养,观察肌母细胞的形态、免疫组织化学的鉴定,计算克隆的形成率,绘制细胞生长的曲线,MTT检测肌母细胞的活性,比较3种培养基培养肌母细胞增殖、分化的差异。 结果与结论：各组细胞形态上无明显差异;各组免疫组织化学鉴定肌母细胞纯度均达99%;含胎牛血清培养基组和自制无血清培养基组克隆形成率显著高于间充质干细胞无血清培养基组(P < 0.01),含胎牛血清培养基组克隆形成率显著高于自制无血清培养基组(P < 0.01);含胎牛血清培养基组与自制无血清培养基组细胞数远高于间充质干细胞无血清培养基组;自制无血清培养基组细胞活性显著高于含胎牛血清培养基组和间充质干细胞无血清培养基组(P < 0.01)。自制无血清培养基组可有效用于肌母细胞的培养,在促进肌母细胞早期贴壁、增殖上还需进一步优化。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程      

Colony forming cell-fibroblast development in extracellular matrix-induced bone and bone marrow formation in rat

The development of murine endochondral bone and bone marrow as a result of demineralized bone matrix implantation is preceded by the accumulation and proliferation of colony forming cell fibroblasts. These cells appear first at 24 hours post-implantation, after which they increase in 2 swells, achieving peak number between days 10-14. The observed differences in developmental kinetics of colony forming cell fibroblasts in culture were not found to be related to qualitative differences in the synthesis of collagens, fibronectin, laminin or proteoglycans. The colony forming cell fibroblasts were shown to be radiosensitive, with the Do = 339 +/- 63.     

Serum-free culture of enriched murine haemopoietic stem cells. II: Effects of growth factors and haemin on development.

A serum-free culture system was used to determine the effects of growth factors on the clonogenic development of a population of cells highly enriched for multipotential day 12 spleen colony forming cells (CFU-S) (FACS-BM). Under these conditions, interleukin-3 (IL-3) was found to be primarily a proliferative stimulus, the progenitor cells developing in the clonal assay systems produced colonies of morphologically undifferentiated cells for up to 20 days. No such induction of proliferation without maturation was observed with other growth factors (eg. granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF)). However, combinations of IL-3 plus secondary growth factors such as GM-CSF, macrophage colony stimulating factor (M-CSF), granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) or interleukin-1 (IL-1) led to the formation of colonies containing mature haemopoietic cells of the granulocytic, megakaryocytic or monocytic lineages. In contrast, erythroid development did not occur unless the protoporphyrin, haemin, was added to the cultures. Under these conditions mature erythroid cells were produced in cultures containing either IL-3 or GM-CSF (with or without erythropoietin (epo)). In replating experiments it was determined that the FACS-BM cells were able to generate large numbers of clonogenic cells for up to 30-40 free cultures. Such cultures, therefore, may be useful for investigating the biological and basis of the generation of clonogenic cells and of haemopoietic cell differentiation and development in response to growth factors.     

体外负压培养对小鼠骨髓间充质干细胞增殖能力和血管内皮生长因子分泌水平的影响

文题释义： 自制负压吸引装置：由一个吸痰机和一个负压可调节吸引器及一个密闭的容器盒组成。手术创面应用负压吸引可促进切口愈合,负压还可以促进间充质干细胞向成骨细胞、表皮细胞分化。 5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EDU)：一种胸腺嘧啶核苷酸类似物,在细胞增殖时EDU能够插入正在复制的DNA分子中,利用EDU与染料之间的点击化学(Click Chemistry)反应进行高效快速的细胞增殖检测分析,可以有效地检测处于S期的细胞百分数。 背景：如何增强骨髓间充质干细胞增殖活性使其移植后发挥应有的疗效是目前急需解决的问题。 目的：探讨体外负压培养技术对小鼠骨髓间充质干细胞增殖活性及血管内皮生长因子分泌水平的影响。 方法：取第3代骨髓间充质干细胞,给予间歇性负压培养(-6.65,-13.3,-26.6 kPa),2 h/次,1次/12 h,对照组在正常条件下培养。培养12,24,36,48,60 h,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,ELISA检测细胞分泌血管内皮生长因子水平,RT-PCR检测血管内皮生长因子受体mRNA表达。根据上述结果,选择一个最佳负压条件和时间(-26.6 kPa,24 h),将骨髓间充质干细胞分为正常对照组、负压组、负压+血管内皮生长因子受体抑制剂Axitinib组,CCK-8法检测细胞增殖情况,EDU试剂盒检测EDU细胞阳性率,结晶紫染色观察细胞集落形成单位。 结果与结论：①与对照组比较,3个负压干预组骨髓间充质干细胞显著增殖(P < 0.05);②与对照组比较,3个负压干预组细胞分泌血管内皮生长因子水平显著增高(P < 0.05),血管内皮生长因子受体mRNA表达显著增高(P < 0.05);③经血管内皮生长因子受体抑制剂处理后,细胞增殖吸光度值、克隆形成单位数量及EDU阳性细胞率较负压干预组明显降低;④结果表明,体外负压培养可能通过上调血管内皮生长因子分泌水平促进骨髓间充质干细胞增殖。 ORCID: 0000-0002-3897-6629(吴向未);0000-0002-5063-973X(杨雄峰) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程