应用噬菌体随机肽库研究艾滋病病人血清中特异抗原表位

目的 运用噬菌体随机肽库,进行人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）蛋白质的Ｂ细胞抗原表位研究。方法 制备ＨＩＶ病人血清总ＩｇＧ抗体,用噬菌体递呈随机十二肽库进行生物淘洗,反向吸附非特异噬菌体,进行阳性噬菌体克隆的ＥＬＩＳＡ矢鉴定、ＤＮＡ测序及计算机模拟分析。结果 成功地筛选出了位于ＨＩＶ－１ ＧＰ４１蛋白上的的表位（ＧＣＳＧＫＬＩＣＴＩＮＶ）。结论 运用噬菌体随机肽库可以有效地进行ＨＩＶ蛋白质的Ｂ细胞抗原表位研究。由此推论,此方法也可移植于其他病原微生物抗原或自身抗原的表位研究,继而为基于表位水平的特异诊断试剂的研制、疫苗的设计提供依据。     

抗胃癌单克隆抗体识别的噬菌体呈现肽与天然抗原的关系

噬菌体呈现的随机肽库已成功地用于筛选Ｂ细胞或Ｔ细胞表位。为进一步研究胃癌相关抗原与相应单克隆抗体（ｍＡｂ）结合的结构基序及其相互作用,我所通过两株胃癌ｍＡｂＭＧ７和ＭＧｂ２筛选噬菌体呈现的随机九肽库,获得一些可与ｍＡｂ结合的噬菌体呈现肽。我们采用竞争抑制实验,研究了这些肽与天然胃癌相关抗原的关系。１材料和方法１．１材料胃癌ｍＡｂＭＧ７和ＭＧｂ２由本所研制〔１,２〕,通过筛选噬菌体呈现的随机九肽库〔３,４〕,获得可与相应ｍＡｂ结合的噬菌体呈现肽〔５,６〕。１．２方法１．２．１噬菌体呈现肽竞争抑制试验将纯…     

从噬菌体短肽库中筛选模拟乳腺血清抗原表位

目的： 从１５ 肽 ＰⅢ融合噬菌体库中筛选乳腺血清抗原（ Ｍ Ｓ Ａ） 的模拟表位， 并验证免疫 Ｐ Ｃ Ｒ 筛选法是否与传统的 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 筛选方法具有一致的结果。方法： 用 Ｍ Ｓ Ａ 的特异单克隆抗体３ Ｅ１２ 作 “诱饵”， 亲和选择法（ｐａｎｎｉｎｇ ） 富集特异噬菌体， 用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 及免疫 Ｐ Ｃ Ｒ 法挑选阳性克隆并验证特异性。结果： 经过四轮ｐａｎｎｉｎｇ ， 特异噬菌体产出率约为第一轮的１８８倍， 说明抗体３ Ｅ１２ 对噬菌体进行了选择性富集。选出了１０ 个 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 反应呈明显阳性克隆， 其中４ 个克隆能抑制天然 Ｍ Ｓ Ａ 抗原抗体的结合。免疫 Ｐ Ｃ Ｒ 的筛选结果与前者基本一致， 但竞争抑制试验中， 未能达到理想效果。结论： 推测这４个克隆表达的短肽与抗体３ Ｅ１２ 识别的表位具有一致或相似的结构。免疫 Ｐ Ｃ Ｒ 的筛选法可以同 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法结合起来作为常规方法之一， 但它不适于做竞争抑制试验。     

A COMPUTERIZED SYSTEM FOR ANALYSING CHAOTIC CHARACTERISTICS OF HEART PERIOD SIGNAL

ＡＣＯＭＰＵＴＥＲＩＺＥＤＳＹＳＴＥＭＦＯＲＡＮＡＬＹＳＩＮＧＣＨＡＯＴＩＣＣＨＡＲＡＣＴＥＲＩＳＴＩＣＳＯＦＨＥＡＲＴＰＥＲＩＯＤＳＩＧＮＡＬＡＣＯＭＰＵＴＥＲＩＺＥＤＳＹＳＴＥＭＦＯＲＡＮＡＬＹＳＩＮＧＣＨＡＯＴＩＣＣＨＡＲＡＣＴＥＲＩＳＴＩＣＳ...     

B7/CD28和ICAM-1/LFA-1共刺激信号对T及B细胞功能影响的研究

目的　研究共刺激途径Ｂ７／ＣＤ２８ 和ＩＣＡＭ１／ＬＦＡ１ 对Ｔ 细胞活化以及Ｂ 细胞效应的作用。方法　在体外建立ＡＰＣＴＢ 细胞反应系统, 用Ｂ７１ 单抗和ＩＣＡＭ１ 单抗分别阻断Ｂ７／ＣＤ２８ 和ＩＣＡＭ１／ＬＦＡ１ 共刺激途径, 利用３ ＨＴｄＲ 法检测Ｔ 细胞增殖,ＥＬＩＳＡ 法测定Ｂ 细胞分泌的抗体, 用ＲＴＰＣＲ 法检测细胞因子基因的表达。结果　Ｂ７１ 单抗和ＩＣＡＭ１ 单抗均可抑制Ｔ 细胞增殖及ＩＬ２ 的产生。Ｂ７１ 单抗可下调Ｂ 细胞抗体的产生（ Ｐ＜ ０ ．０５） , 而ＩＣＡＭ１ 单抗未见明显的抑制（ Ｐ＞ ０ ．０５） 。Ｂ７１ 单抗和ＣｓＡ 联用能阻断Ｔ 细胞增殖活性及Ｂ 细胞的效应, 而ＩＣＡＭ１ 单抗和ＣｓＡ联用则无此作用。Ｂ７１ 单抗能下调ＩＬ２ 和ＩＦＮγｍ ＲＮＡ 表达,Ｂ７１ 单抗和ＣｓＡ 联用则阻断ＩＬ２ 和ＩＦＮγｍ ＲＮＡ 表达,ＩＬ４ 和ＩＬ１０ ｍ ＲＮＡ 仍可表达。结论　Ｂ７／ＣＤ２８ 和ＩＣＡＭ１／ＬＦＡ１ 共刺激途径在Ｔ 细胞活化中具有不同的作用,Ｂ７１ 单抗和ＣｓＡ 联用可导致Ｔ 细胞功能失活即无能。     

ACTIVATION OF TCELLS BY SYNTHETIC PEPTIDES OF SUPERANTIGEN TSST-1 UNDER ASSISTANCE OF ASSITANT MOLECULES

根据以往对超抗原ＴＳＳＴ－１分子的Ｔ细胞表位预测结果，从ＴＳＳＴ－１分子中选择了一段序列，合成了两个交叠肽，Ｔ３４和Ｔ５８；观察它们在辅助分子辅助下的促Ｔ细胞增殖能力。结果发现：Ｔ３４和Ｔ５８单独虽均不能活化人的ＰＢＭＣ或小鼠脾细胞，但在ＣＤ２８的共刺激或ＰＭＡ的辅助下却可活化人的ＰＢＭＣ和小鼠的脾细胞。提示：Ｔ３４和Ｔ５８不具备ＭＨＣ结合位，但含有Ｔ细胞表位，两者的Ｔ细胞表位可能位于两肽的共同序列内，即ＴＳＳＴ－１（１２５～１５８）。     

ACTIVATION OF T CELIS BY SYNTHETIC PEPTIDES OF SUPERANTICGEN T…

根据以往对超抗原ＴＳＳＴ－１分子的Ｔ细胞表位预测结果，从ＴＳＳＴ－１分子中选择了一段序列，合成了两个交叠肽，Ｔ３４和Ｔ５８；观察它们在辅助分子辅助下的促Ｔ细胞增殖能力。结果发现：Ｔ３４和Ｔ５８单独虽均不能活化人的ＰＢＭＣ或小鼠脾细胞，但在ＣＤ２８的共刺或ＰＭＡ的辅助下却可活化人的ＰＢＭＣ和小鼠的脾细胞。     

超抗原诱导T细胞凋亡或增殖的体外研究

研究抗原递呈细胞在超抗原诱导人外周血特异性Ｔ细胞反应中的作用。方法金黄色葡萄球菌Ａ肠毒素刺激短期人外周血ＳＥＡ反应Ｔ细胞系的作用中,通过去除或加入Ａｐｃ观察细胞形态,ＦＣＭ检测细胞亚ＧＯ／Ｇ１峰大小及１．８％ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳观察凋亡特征条带。     

人补体膜辅助调节蛋白MCP的基因克隆及其真核表达的研究

目的　克隆获得编码人补体膜辅助调节蛋白（ ＭＣＰ） 的ｃＤＮＡ,并对其在真核细胞的表达及功能进行研究。方法　应用ＲＴＰＣＲ 方法,从Ｕ９３７ 细胞总ＲＮＡ 中扩增编码人ＭＣＰ 分子的ｃＤＮＡ片段, 快速克隆于ｐＧＥＭＴＥａｓｙ 载体,测定其序列。将该片段重组于ｐＬＸＳＮ 载体,电穿孔转染ＮＩＨ３Ｔ３ 细胞,经ＦＡＣＳ 检测筛选表达ＭＣＰ 的阳性细胞克隆,用补体溶破试验鉴定其抑制人补体溶破的功能。结果　ＲＴＰＣＲ 扩增得到１ １４４ｂｐ 的编码人ＭＣＰ 分子的ｃＤＮＡ 片段,序列分析表明该ｃＤＮＡ编码的蛋白为ＳＴＣ＋ ＣＹＴ２ 亚型。细胞转染筛选获得多个表达ＭＣＰ 的ＮＩＨ３Ｔ３ 阳性细胞克隆,补体溶破试验证实其具有抑制人补体经典途径和旁路途径溶破的功能。结论　本研究为进一步探讨不同亚型结构的ＭＣＰ 分子与功能的关系及其应用奠定了基础。     

抗KGla细胞噬菌体展示ScFv的筛选及鉴定

目的 应用ＫＧ１ａ细胞（髓系白血病细胞系）筛选噬菌体抗体库,获得能以一定特异性结合ＫＧ１ａ细胞的单链抗体（ＳｃＦｖ）,克隆重其基因并研究其对应抗原在不同细胞表面的分布。方法 用完整的ＫＧ１ａ细胞筛选一个经ＫＧ１ａ细胞免疫小鼠脾细胞的ＳｃＦｖ噬菌体抗体库,重复筛选４轮;细胞ＥＬＩＳＡ鉴定了其中９６个克隆重与ＫＧ１ａ细胞的结合反应;从２６个ＫＧ１ａ细胞ＥＬＩＳＡ阳性克隆中挑选了３个克隆重,进一步用免疫     

2型糖尿病患者单核巨噬细胞胆固醇外流的降低与ABCG1表达下调相关

目的 研究2型糖尿病患者巨噬细胞内胆固醇外流的变化及ABCA1、ABCG1和SR-B1的表达情况。方法 选取2型糖尿病患者30例（包括合并冠心病组与单纯糖尿病组各15例）和正常对照组15例。分离外周血单核细胞进行巨噬化培养,应用Real-time PCR与Western blot方法测定细胞ATP结合盒受体A1（ABCA1）、ATP结合盒受体G1（ABCG1）和清道夫受体B1（SR-B1）的mRNA及蛋白表达。以5%自身血清及标准血清为接受体测定巨噬细胞胆固醇流出率。 结果ABCG1在2型糖尿病患者巨噬细胞的mRNA与蛋白表达显著低于对照组,而ABCA1与SR-B1的表达在各组间无差异。2型糖尿病患者巨噬细胞的胆固醇流出率也显著低于对照组（P＜0.01）;ABCG1的mRNA表达与巨噬细胞胆固醇外流率呈显著正相关（r=0.552,r=0.630,P＜0.01）。结论 2型糖尿病患者巨噬细胞的胆固醇外流功能明显降低,与ABCG1表达下调相关。     

BER修复基因多态性与肺癌易感性的研究进展

碱基切除修复(base excision repair,BER)通路是DNA损伤修复的关键通路,通路中的8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶基因(human 8-oxoguanine glycosylase,hOGG1),人类X线交叉互补修复基因(X-ray repair cross-complementing group 1,XRCC1),MutY homolog(MUTYH)基因的单核苷酸多态性影响BER通路中重要的酶和蛋白质的功能,导致修复障碍,最终引起癌症发生.DNA损伤修复基因单核苷酸多态性和肺癌易感性的研究结果尚存在争议,本文对近年来BER通路基因hOGG1Ser326Cys,XRCC1 Arg194Trp,XRCC1 Arg280His,XRCC1 Arg399Gln,XRCC1-77T>C和MUTYHHis324Gln多态性与肺癌易感性的关系的研究进行汇总,并探讨了多项研究对BER基因多态性与不同肺癌亚型的关系以及与吸烟之间关系.基因多态性与肺癌易感性关系受多因素影响,其相关性尚待进一步探索.     

BER修复基因多态性与肺癌易感性的研究进展

碱基切除修复(base excision repair,BER)通路是DNA损伤修复的关键通路,通路中的8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶基因(human 8-oxoguanine glycosylase,hOGG1),人类X线交叉互补修复基因(X-ray repair cross-complementing group 1,XRCC1),MutY homolog(MUTYH)基因的单核苷酸多态性影响BER通路中重要的酶和蛋白质的功能,导致修复障碍,最终引起癌症发生.DNA损伤修复基因单核苷酸多态性和肺癌易感性的研究结果尚存在争议,本文对近年来BER通路基因hOGG1Ser326Cys,XRCC1 Arg194Trp,XRCC1 Arg280His,XRCC1 Arg399Gln,XRCC1-77T>C和MUTYHHis324Gln多态性与肺癌易感性的关系的研究进行汇总,并探讨了多项研究对BER基因多态性与不同肺癌亚型的关系以及与吸烟之间关系.基因多态性与肺癌易感性关系受多因素影响,其相关性尚待进一步探索.     

深圳市2008-2009年A型H1N1季节性流感病毒神经氨酸酶抑制剂耐药性监测

目的 对深圳市2008-2009年分离到的H1N1季节性流感病毒神经氨酸酶(NA)抑制剂的耐药性进行监测.方法 根据原始临床样本的采集时间,按周抽取了55株2008-2009年分离到的H1N1季节性流感病毒,对其NA片段进行全长测序,选取WHO推荐的疫苗株和部分国内外分离到的H1N1季节性流感病毒作为参考株,运用Mega3.1软件进行种系发生树的构建、耐药相关位点及糖基化位点的分析.结果 对NA片段的序列分析发现2008年有2株(7.1%)出现了H275Y突变,但是2009年则有25株(92.6%)出现了该突变.提示H275Y达菲耐药突变株成为了2009年深圳市社区传播的优势株.同时还发现了一株Q136K变异株,显示对乐感清出现耐药.分子进化分析结果显示,H275Y变异成为了毒株在系统进化树上分布的主要依据.所有的深圳株NA片段上潜在的糖基化位点序列保守.结论 大量H275Y达菲耐药株的出现提示在今后的工作中应当密切关注流感病毒的耐药进展,进一步加强其耐药机制的研究.

Abstract：

Objective To analyze neuraminidase(NA) inhibitor resistance of seasonal H1N1 influenza A viruses isolated in Shenzhen during 2008 to 2009. Methods The NA gene of these viruses were sequenced. Phylogenetic analysis of the sequences was performed with Mega3. 1 software. Results In 2008, most isolates of the seasonal H1 N1 virus were susceptible to neuraminidase inhibitors, but the H275Y mutation in the neuraminidase gene region associated with high-level oseltamivir resistance had been detected in 92.6% of the strains isolated in 2009. Furthermore, a strain with Q136K was found, which showed the resistance to Zanamivir. Conclusion In the light of emerging resistance, close monitoring and understanding of the nature and dynamics of resistance mutations in influenza virus should be a priority.     

H1N1患者心肌标志物及常规生化检测的临床意义

目的:探讨心肌标志物及部分生化项目检测对于H1N1甲型流行性感冒患者(简称"甲流")的临床意义.方法:对54例H1N1甲流患者(包括4例重症甲流死亡患者)和50例正常对照者用电发光免疫分析、全自动临床化学分析检测H1N1甲流患者心肌标志物及常规生化项目.结果:与正常对照组相比,甲型H1N1感染者在治疗前血清肌酸激酶(C...     

神经系统RNA结合蛋白Musashi1 RRM1的初步结晶

目的 对Musashi1发挥功能的 RRM1结构域进行结晶,得到可用来衍射的蛋白晶体,为之后的结构解析打基础。方法 通过构建Musashi1RRM1的原核表达载体,并在BL21中表达、纯化高纯度的蛋白质,通过筛选结晶体条件得到蛋白晶体。结果 通过系统筛选和优化晶体生长条件得到了蛋白晶体。结论 Musashi1 RRM1的蛋白晶体质量较好,满足蛋白晶体衍射和数据收集的要求。     

1995-2007年深圳市H1N1流感病毒血凝素基因的序列分析

目的 研究1995-2007年深圳市流行的H1N1流感病毒血凝素(HA)的基因特性.方法 选取在该期间分离培养到的64株H1N1流感病毒,对其进行HA片段核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,用Simmonic软件和Mega软件对其进行分析.结果 深圳市H1N1流感毒株在进化树上可以划分为A、B、C三个分枝.部分2005-2006年毒株与2001年毒株在同一分枝上.通过同源性分析发现部分WHO所推荐的疫苗株在时间上滞后于深圳株.深圳H1N1株的4个抗原决定簇及受体结合位点均发生了氨基酸的替换.除1995年外其余年份的毒株均在137位上发生了氨基酸的缺失.结论 1995-2007年深圳市H1N1毒株氨基酸的变异主要集中在抗原决定簇及受体结合部位.并且抗原决定簇的变异活跃区域随时间的推移发生了转移.     

多房囊性肾细胞癌18例临床病理分析

目的：探讨多房囊性肾细胞癌（ mu1ti1ocu1ar cystic rena1 ce11 carcinoma,MCRCC）的临床病理学特征、诊断及鉴别诊断。方法回顾性分析18例MCRCC的临床病理学及免疫表型特征,并复习相关文献。结果18例中男性12例,女性6例,年龄26~68岁（平均55.6岁）。影像学检查均示多囊性占位,边界清楚。眼观：肿瘤切面见大小不等的多房囊腔,内含浆液性或血性液体。镜检：肿瘤囊内壁被覆单层透明细胞、复层上皮或上皮缺如,囊内成分大部分流失,纤维性囊壁或囊腔间隔中见灶状透明细胞,呈Ⅰ级细胞核,其为形态学诊断线索。免疫表型：透明细胞CD10、vimentin、EMA均阳性,Ki-67增殖指数低。18例患者平均随访43个月,均无复发或转移,预后良好。结论 MCRCC是一种罕见的肾细胞癌组织学亚型,预后良好,需与肾透明细胞癌囊性变及良性肾囊性病变相鉴别。     

HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1, -DPA1 and -DPB1 genes in Japanese multiple sclerosis patients

Japanese MS patients and controls were examined for the distribution of HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1, -DPA1 and -DPB1 alleles using in vitro amplification of genomic DNA and probing with sequence-specific oligonucleotides. No significant difference in frequency of the examined alleles was observed among the two groups. This is in contrast to Norwegian MS patients, where an association to a combination of certain DQA1 and DQB1 alleles has previously been demonstrated.     

动物源性和人源性甲型流感病毒(H1N1)血凝素(HA)的特征分析

目的 研究动物源性和人源性甲型H1N1流感病毒(influenza A virus)血凝素(hemagglutinin,HA)的特征,以探讨动物源性和人源性甲型H1N1流感病毒血凝素之间的关系.方法 从美国生物信息中心(NCBI)下载禽(鸟)源、猪源、人源的甲型H1N1流感病毒血凝素氨基酸序列,使用Clustal W2.0生物学软件比较上述血凝素氨基酸序列,并建立甲型H1N1流感病毒血凝素氨基酸序列的进化树.结果 2009年分离的人源性甲型流感病毒血凝素氨基酸序列同源性非常高,达到了99%～100%,而2009年分离的人源性甲型流感病毒血凝素氨基酸序列和禽(鸟)源,猪源的甲型流感病毒血凝素氨基酸序列之间的同源性非常低,只有77%～90%(只有猪源ABW36355和2009年分离的人源甲型流感病毒血凝素氨基酸序列同源性为90%,余同源性为77%～83%);蛋白生物进化树表明禽源(鸟)、猪源、人源的甲型流感病毒血凝素氨基酸序列明显分为3个大的分支.2009年分离的人源性甲型流感病毒血凝素氨基酸序列(ADA71154除外)与疫情前分离得到的人源的血凝素氨基酸序列同源性很低(79%～80%),并且进化树分为3个分支.结论 2009年流行的甲型H1N1流感病毒是一种新的流感病毒,病毒的血凝素氨基酸序列之间的同源性非常高,而和猪、禽(鸟)源的甲型H1N1流感病毒的血凝素氨基酸序列之间的同源性非常低,从这一层面上来讲,目前流行的甲型流感病毒的血凝素的基因并不是猪源和禽源,和疫情前人源的血凝素比对的结果也表明,2009年流行的甲型H1N1流感病毒也并不是直接源于2009年以前的人源流感H1N1病毒,而应该是另有来源.