肺癌患者血浆P-选择素水平的检测

Ｐ选择素（Ｐｓｅｌ）是存在于血小板α颗粒和内皮细胞分泌颗粒内的一种糖蛋白；在控制炎症方面起重要作用。目前认为肿瘤细胞也可经其表面的Ｐｓｅｌ受体介导与血小板及内皮细胞粘附，从而促进肿瘤细胞的浸润与转移，如小细胞性肺癌细胞［４］。本研究用ＥＬＩＳＡ法检测了６５例不同期肺癌患者血浆Ｐ选择素（ｓＰｓｅｌ）水平，并对其临床意义进行了探讨。１　对象和方法１－１　对象　６５例肺癌患者，男４７例、女１８例；年龄３３～７６岁，平均５３岁。所有病例均经临床确诊，并按ＴＮＭ分期（国际抗癌协会推荐）。对照为健…     

LPS及IL-3对人骨髓基质细胞分泌IL-6的调节效应

骨髓造血微环境主要由基质细胞和细胞外基质（ＥＣＭ）构成,基质细胞包括多种细胞成分,如成纤维细胞、内皮细胞、脂肪细胞、巨噬细胞等,可分泌多种造血调控因子,调节造血干、祖细胞的增殖分化和自我更新［１］。基质细胞可以合成ＩＬ６参与造血调控,已为许多学者证实［２］。近来报道显示,ＬＰＳ和ＩＬ３可以促进基质细胞合成ＩＬ６、ＩＬ８、ＳＣＦ等,进而促进造血干、祖细胞的增殖分化［２,３］。我们拟建立人骨髓基质细胞层,探讨各种条件下ＩＬ６的合成情况。１　材料与方法１．１　材料　试剂：ＬＰＳ北京邦定公司。…     

β-内啡肽增强人外周血单个核细胞IL-1β、IL-6和iNOS mRNA表达

目的　研究β内啡肽（βｅｎｄｏｒｐｈｉｎ ，βＥＮＤ） 对人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ） 细胞因子ＩＬ１β、ＩＬ６ 和诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ） 的ｍ ＲＮＡ 表达， 探讨神经递质对免疫细胞产生细胞因子和ｉＮＯＳ 的调节作用。方法　以不同浓度βＥＮＤ 体外作用于人外周血单个核细胞，随后提取细胞ＲＮＡ。逆转录成ｃＤＮＡ，并分别和相应的上下游引物进行ＰＣＲ 扩增，扩增产物在含有溴化乙锭（ＥＢ）的琼脂糖凝胶上电泳，泳动带经激光密度扫描仪扫描进行定量。结果　βＥＮＤ 明显增强人外周血单个核细胞ＩＬ１β、ＩＬ６ 和ｉＮＯＳ的ｍ ＲＮＡ 表达。结论　神经肽对免疫功能的调节包括调节免疫细胞产生细胞因子和ｉＮＯＳ。     

HSV-TK/GCV系统治疗小鼠乳腺癌的实验研究

我们从体内外两方面研究单纯疱疹病毒胸苷激酶基因联合前药ＧＣＶ系统（ＨＳＶＴＫ／ＧＣＶ）对小鼠乳腺癌的作用,并初步探讨引起细胞死亡的机理。一、材料与方法１－细胞培养和实验动物：小鼠乳腺癌细胞系４Ｔ１（密执安州大学Ｄｒ．Ｍｉｌｌｅｒ惠赠）,常规培养在Ｄｕｌｂａｃｃｏ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ（ＤＭＥ,美国Ｂｉｏｆｌｕｉｄ公司）培养液内,添加１０％胎牛血清,青、链霉素,谷胺酰胺（Ｂｉｏｆｌｕｉｄ公司）。６～８周雌性Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠用于实验。２－逆病毒载体及基因转导：ＳＴＫ逆病毒载体来自ＬＮＬ６载…     

单核细胞趋化蛋白—1在大肠杆菌中的表达

将人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ插入融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１中，构建成质粒ｐＧＥＸ／ＭＣＰ转化大肠杆菌ＪＭ１０９，经ＩＰＴＧ诱导后合成ＧＳＴ－ＭＣＰ－１融合蛋白。用１２％ＳＣＳ－ＰＡＧＥ检测在３０ｋＤ左右有新生蛋白条带出现，表达量约占菌体总蛋白的３１．７％，趋化实验证明，该产物具备明确的单核细胞趋化活性。     

多药耐药性相关蛋白MRP在胃癌耐药细胞SGC7901中的表达

肿瘤多药耐药性的产生是导致临床上化疗失败的主要原因。本研究观测了胃癌阿霉素耐药细胞ＳＧＣ７９０１／Ａｄｒ中，多药耐药相关蛋白（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＭＲＰ）的表达，以了解其在胃癌细胞耐药中的作用。１材料和方法１．１药物与试剂阿霉素（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ，ＡＤＲ）（ＦａｒｍｉｔａｌｉａｃａｒｌｏＥｒｂａ），ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ），ＱＣＲＬ１杂交瘤上清（加拿大Ｃｏｌｅ教授惠赠［１］）。１．２细胞培养人胃低分化腺癌细胞系ＳＧＣ７９０１（军事医…     

全反式维甲酸可增强大鼠系膜细胞基质金属蛋白酶-2表达

一、材料与方法１．大鼠系膜细胞（ＭｓＣ）的培养与鉴定：１５０～２００ｇＳＤ大鼠购自本校动物部，取肾皮质，分离肾小球，培养与鉴定ＭｓＣ按本实验室常规方法进行［１］。实验用细胞为１０～１５代。２．Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法检测基质金属蛋白酶２（ＭＭＰ２）ｍＲＮＡ：当ＭｓＣ长至亚融合状态后，分别在完全培养液中加入全反式维甲酸（ＡＴＲＡ，Ｓｉｇｍａ公司）１０－６、１０－７、１０－８、１０－９、０ｍｏｌ／Ｌ处理２４小时；另在亚融合状态ＭｓＣ加１０－６ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸分别处理０、６、１２、２４、４…     

人白细胞介素18 cDNA的克隆和在大肠杆菌中的表达

白细胞介素１８（ＩＬ－１８）是１９９５年克隆的一种新型细胞因子，又称ＩＦＮ－γ诱导因子，主要由活化的巨噬细胞产生，其相对分子质量（Ｍｒ）为１８　３００［１、２］。ＩＬ－１８可诱导ＴＨ１细胞产生ＩＦＮ－γ和ＧＭ－ＣＳＦ等细胞因子，增强ＮＫ细胞和ＣＴＬ的活性［１、２］，促进ＩＬ－２介导的Ｔ细胞增殖；增强ＴＨ１等细胞产生ＴＨ１类细胞因子［３、４］；促进免疫细胞表达ＦａｓＬ，增强Ｆａｓ介导的细胞毒作用等多种生物学功能［５］，在抗病原微生物感染﹑抗肿瘤及抗超敏反应等方面具有潜在的应用前景。因此，我们采用Ｒ…     

大蒜精油对IL-1诱导的内皮细胞VCAM-1表达的影响

大蒜精油对ＩＬ－１诱导的内皮细胞ＶＣＡＭ－１表达的影响葛璐璐李进（第一军医大学组胚教研室）ＶＣＡＭ－１（血管细胞粘附分子－１，ＣＤ１０６）在ＩＬ－１、ＴＮＦ－α等细胞因子活化的血管内皮细胞上表达，分子量为１００ＫＤａ或１１ＯＫＤａ，介导内皮细胞与白细...     

IL-4和IFN-γ对哮喘患儿淋巴细胞CD23表达的调控

ＣＤ２３是一种跨膜糖蛋白,主要分布于Ｂ细胞、单核／巨噬细胞和Ｔ细胞。近年研究表明淋巴细胞ＣＤ２３的表达与哮喘的发病有关［１］。本研究观察了白细胞介素４（ＩＬ４）和γ干扰素（ＩＦＮγ）对哮喘和正常儿童淋巴细胞ＣＤ２３表达的影响,以便进一步揭示ＣＤ...     

骨髓增生异常综合征患者血清可溶性Fas受体水平测定及其意义

中国图书分类号Ｒ５５１．３骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）是以病态造血为特征的一组恶性克隆性造血干细胞疾病,其发病机制不明。近来发现,骨髓造血干细胞和基质细胞的凋亡异常,与ＭＤＳ的病理过程密切相关［１］。其中有关ＡＰＯ１／Ｆａｓ（ＣＤ９５）受体的表达及...     

小鼠胸腺基质细胞系（MTEC1）对裸鼠骨髓细胞的诱…

在体外建立的小鼠胸腺基质细胞系（ＭＴＥＣ１）及其培养上清（ＭＴＥＣ１－ＳＮ）与裸鼠骨髓（ＢＭ）细胞共同培养，通过直接荧光素标记抗体，ＦＡＣＳ分析其细胞表面标志表明，ＭＴＥＣ１及ＭＴＥＣ１－ＳＮ均有诱导促进Ｔｈｙ·１＾－ＣＤ＾－４ＣＤ＾－８的ＢＭ细胞表达Ｔｈｙ·１，ＣＤ４及ＣＤ８分子的作用。在培养或共育三天时，ＭＴＥＣ１－ＳＮ可促进ＢＭ细胞分化形成ＣＤ＾＋４Ｔｈｙ·１＾－，ＣＤ＾－４Ｔｈｙ·１＾＋细     

肿瘤抗原诱导的骨髓基质细胞活化后凋亡

目的　活化后凋亡（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ） 被认为是免疫应答负向调控（ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ） 的一种重要方式,抗原提呈细胞在完成了抗原提呈功能后是否也经历一个自身活化后凋亡的过程,目前尚无定论。方法　以巨噬细胞型骨髓基质细胞（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｌｉｋｅ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ） 为模型,探讨抗原提呈细胞是否具有自身活化后凋亡的现象。结果　经 Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ 诱导的 Ｂ Ｍ Ｓ Ｃ 高表达多种膜表面分子,包括 Ｍ Ｈ ＣⅠ、 Ｍ Ｈ ＣⅡ、 Ｂ７２ 、 Ｖ Ｃ Ａ Ｍ１ 、 Ｃ Ｄ１４ 等,显著表达巨噬细胞的标志 Ｆ４／８０ 和树突状细胞的标志 Ｎ Ｌ Ｄ Ｃ１４５ ;对同种异体淋巴细胞的促增殖能力显著增强,表明 Ｂ Ｍ Ｓ Ｃ 具有抗原提呈细胞的分子和细胞基础与功能活化特征。进一步研究发现, Ｂ Ｍ Ｓ Ｃ 经 Ｆ Ｂ Ｌ３ 肿瘤抗原刺激后１８ 小时,上述多种免疫分子表达明显下调,而 Ｆａｓ Ｌ 分子明显升高,透射电镜显示其具有明显的凋亡特征。结论　骨髓基质细胞经肿瘤抗原诱导后存在凋亡现象,其具体机制和免疫调节意义有待进一步探讨。     

PECAM—1与血管内皮细胞通透性及白细胞渗出

血小板源内皮细胞粘附分子（ｐｌａｌｅｌｅｔｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ,ＰＥＣＡＭ１） 是细胞粘附分子免疫球蛋白超家族成员之一,主要在内皮细胞、血小板、粒细胞和一些淋巴细胞上表达。ＰＥＣＡＭ１在炎症过程中调控内皮细胞通透性、介导白细胞跨内皮细胞迁移到炎症部位有重要作用,其作用机制与ＰＥＣＡＭ１ 的磷酸化、ＰＥＣＡＭ１ 在细胞膜上的分布改变及细胞骨架变化有关     

单核细胞趋化蛋白－1在大肠杆菌中的表达

将人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ插入融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１中，构建成质粒ｐＧＥＸ／ＭＣＰ转化大肠杆菌ＪＭ１０９，经ＩＰＴＧ诱导后合成ＧＳＴ－ＭＣＰ－１融合蛋白。用１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测在３０ｋＤ左右有新生蛋白条带出现，表达量约占菌体总蛋白的３１．７％。趋化实验证明，该产物具备明确的单核细胞趋化活性。     

抗内毒素单链抗体基因的构建、序列分析及表达

目的：构建抗内毒素（ＬＰＳ） 单链抗体基因, 并尝试其在Ｅ．ｃｏｌｉ 中的表达。方法： 采用ｌｉｎｋｅｒ Ｐｒｉｍ ｅｒ Ｍｉｘ ,按ＶＨｌｉｎｋｅｒＶＬ 的结构将鼠抗ＬＰＳ ｍ Ａｂ Ｃ３Ａ２ 的ＶＨ ,ＶＬ 基因拼接成单链抗体（ＳｃＦｖ） 基因;用ＰＥ３７３Ａ 型全自动ＤＮＡ序列分析仪测定其核苷酸序列。ＰＣＲ 扩增抗ＬＰＳ ＳｃＦｖ 基因并更换两端接头序列后,插入谷胱甘肽巯基转移酶（ＧＳＴ）融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ１ ;转染Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９ ,以ＩＰＴＧ 诱导表达,ＳＤＳＰＡＧＥ 分析表达产物。结果：扩增出的ＳｃＦｖ基因长７３５ｂｐ , 序列分析表明,该序列完整、正确;ＳＤＳＰＡＧＥ 显示,转染入重组质粒ｐ４ＴＣ３Ａ２Ｆｖ 的ＪＭ１０９ 菌经诱导后,有相对分子质量（ Ｍｒ） 约为５２ ０００ 的外源蛋白表达。结论：成功地构建了鼠抗ＬＰＳ ＳｃＦｖ 基因,并在Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９中表达了ＧＳＴＳｃＦｖ 融合蛋白。     

rTNF_(-α)、IFN_(γ)对人脐静脉内皮细胞表达粘附分子的影响

为了研究细胞因子ｒＴＮＦ α、ＩＦＮγ对内皮细胞表达粘附分子的影响,及ｒＩＦＮγ对ＴＮＦ α的协同效应。采用ｒＴＮＦ α、ＩＦＮγ诱导培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）,以Ｃｅｌ ＥＬＩＳＡ法检测粘附分子ＩＣＡＭ １、ＥＬＡＭ １和ＶＣＡＭ １的表达。结果表明,ｒＴＮＦ α以浓度和时间依赖的方式诱导ＨＵＶＥＣ表达ＩＣＡＭ １、ＥＬＡＭ １和ＶＣＡＭ １,ＩＦＮγ促进ｒＴＮＦ α诱导的ＶＣＡＭ １表达。ＩＦＮ α对ｒＴＮＦ α诱导效应无影响。提示ｒＴＮＦ α可诱导ＨＵＶＥＣ表达粘附分子,而ＩＦＮγ可促进ｒＴＮＦ α诱导的ＨＵＶＥＣ表达ＶＣＡＭ １。     

反义myb寡核苷酸对内皮素诱导动脉平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

合成反义和正义ｃ－ｍｙｂ１８－ｍｅｒ，分别导入培养的ＷＫＹ主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣｓ），同时用内皮素诱导ＳＭＣｓ增殖。反义ｃ－ｍｙｂ寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对内皮素诱导ＳＭＣｓ的抗细胞增殖抑制作用随浓度（６０μｍｏｌ·Ｌ－１～１２０μｍｏｌ·Ｌ－１）的增加而增加。用１２０μｍｏｌ·Ｌ－１反义ＯＤＮｓ抗细胞增殖能力随时间延长而下降。免疫组化显示受抑制细胞ｍｙｂ水平较同期对照组或正义ＯＤＮｓ组低。以上为反义ＯＤＮｓ抑制外源性生长因子或细胞因子诱导靶基因的高表达和细胞增殖提供了新的线索，同时为探讨癌基因表达调控与动脉ＳＭＣｓ增殖的关系提供了一种新方法。     

人补体C_1－抑制物基因在COS－7细胞中的表达

利用全长人Ｃ１－ＩＮＨｃＤＮＡ片段构建成功可在ＣＯＳ－７细胞中瞬间表达重组人Ｃ１－ＩＮＨ的表达质粒ｐＳＶＬＣ１。通过ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ－７细胞，经体外标记、免疫沉淀和Ｗｅｂｔｅｒｎ印迹后发现，转染细胞可分泌─条分子量约１１０ｋＤ的免疫活性蛋白带。ＥＬＩＳＡ测定其表达水平，在转染后７２ｈ可达２μ／（ｍｌ·１０７细胞）。功能活性测定表明重组Ｃ１－ＩＮＨ具有抑制Ｃ１ｓ酯裂解的作用。     

粘附分子对CD3介导的胸腺细胞[Ca^2＋]i应答的影响

ＬＦＡ－１和ＩＣＡＭ－１广泛表达于各胸腺细胞亚群，但ＩＣＡＭ－１在ＰＮＡ￣＋细胞的表达下调。本文报道：用抗ＬＦＡ－１／ＩＣＡＭ－１和抗ＣＤ３单抗，分析了粘附分子ＬＦＡ－１／ＩＣＡＭ－１对抗ＣＤ３诱导的胸腺细胞［Ｃａ￣（２＋）］ｉ应答的影响。结果显示，可溶性抗ＬＦＡ－１／ＩＣＡＭ－１可抑制ＣｏｎＡ刺激的胸腺细胞增殖，且以抗ＬＦＡ－１抗体的作用更为显著，在ＣｏｎＡ或抗ＣＤ３诱导的胸腺细胞［Ｃａ￣（２＋）］ｉ应答中，抗ＬＦＡ－１单抗可明显抑制［Ｃａ￣（２＋）ｉ升高。但如果用二抗交联ＣＤ３和ＬＦＡ－１，胸腺细胞［Ｃａ￣（２＋）ｉ则显著高于单独交联ＣＤ３时的水平（Ｐ＜０．０１），而ＣＤ３与ＩＣＡＭ－ｌ交联却无此效应，此外，仅交联ＬＦＡ－１或ＩＣＡＭ－１也无诱导［Ｃａ￣（２＋）］ｉ应答的作用。提示在ＬＦＡ－ｌ与ＩＣＡＭ－１介导的胸腺细胞与胸腺基质细胞相互作用中，ＬＦＡ－１可为ＴＣＲ／ＣＤ３途径介导的胸腺细胞活化提供复合刺激信号。