抗癌Ⅰ号对小鼠U14腹水癌细胞及其DNA聚合酶α活性的影响

抗癌Ⅰ号对U14具有较高的小鼠抑制瘤率，应用DNA聚合酶活性测定技术表明抗癌Ⅰ号能使U14腹水癌细胞DNA聚合酶α活性降低。     

参茸补血丸对去势大鼠生殖器官和DNA甲基化水平的影响

目的：为探讨参茸补血丸(SRBX)补肾填精。提高机体生命活力的分子机理，观察SRBXW对去势大鼠生殖器官及肝肾组织DNA甲基化水平的影响。方法：建立摘除双侧卵巢的雌性大鼠模型，观察生殖器官的组织形态，采用^3H-SAM法测定肝、肾组织DNA-甲基化酶活力，HPLC法分析DNA甲基化水平。^3H-UTP掺入检测RNA聚合酶活力。结果：大鼠摘除卵巢后。雌激素分泌障碍，生殖器官萎缩，整体效应明显下降，肝、肾组织甲基化酶活力、甲基化水平升高，处于高甲基化，对应组织RNA聚合酶活力明显降低，处于低表达；雌二醇组大鼠由于补充外源性雌激素，生殖器官组织发育得到了代偿，肝、肾组织甲基化酶活力、甲基化水平趋于降低，RNA聚合酶活力上升；SRBXW大、小剂量组大鼠子宫和阴道组织结构与模型组对比有明显改善，肝肾组织甲基化酶活力、甲基化水平呈规律性低下，呈剂量依赖性，RNA聚合酶活力明显提高。结论：参茸补血丸能促进去势大鼠生殖器官的发育，明显降低肝、肾组织DNA甲基化酶活力，DNA甲基化水平，提高对应组织中RNA聚合酶活力。能使受损机体肝、肾组织低甲基化，高表达以代偿因切除卵巢带来整体效应低下。     

对叶百部基因组DNA提取及ISSR-PCR体系优化

目的建立适合对叶百部基因组DNA提取方法及ISSR-PCR最佳反应体系。方法通过改良的CTAB法提取对叶百部基因组DNA,并采用正交试验设计方法对影响ISSR-PCR反应体系的5种因素(d NTP、模板DNA、引物、Mg2+和Taq聚合酶)4个水平进行正交试验,优化ISSR-PCR反应体系。结果确立了对叶百部最佳反应体系,即在20μl的总反应体积中含有10×PCR buffer 2μl,d NTP 175μmol/L,Mg2+1.7mmol/L,引物0.6μmol/L,Taq酶1.0U,模板DNA 15ng。结论建立并优化了对叶百部基因组DNA提取方法及ISSR-PCR反应体系。     

沉香DNA的提取及其ITS2-PCR体系的优化

目的:建立沉香的总DNA提取方法及r DNA第二内转录间隔区序列(ITS2)聚合酶链式反应(PCR)扩增体系。方法:分别采用改良的CTAB法、改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法及DNA提取试剂盒法提取沉香总DNA,利用通用引物ITS2P1/ITS2P2扩增r DNA ITS2目的片段,通过正交试验优选沉香的PCR扩增条件并对目的片段进行测序。结果:改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法提取总DNA的A260 nm/A280 nm1.79,质量浓度350 mg·L-1,PCR扩增目的片段产率最高。不同因素水平对沉香ITS2-PCR反应的影响顺序为模板DNA引物Taq DNA聚合酶d NTP。最佳反应体系为20μL体系,DNA模板40 ng,引物0.2 mmol·L-1,d NTP 0.5 mmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.5 U。测序获得的目前片段长度230 bp,与Gen Bank中瑞香科沉香属白木香序列相似性100%。结论:CTAB法联合DNA试剂盒法可简单、快速获得高质量沉香总DNA,正交试验可快速获得ITS2目的片段,为沉香的分子鉴定和系统发育分析提供参考。     

复方参果液对大鼠半乳糖性白内障晶状体蛋白DNA聚合酶α活性的影响

目的 :探讨复方参果液对半乳糖性大鼠白内障的作用。方法 :40日龄大鼠用半乳糖诱发白内障 ,同时灌胃给药。用3 H 胸腺嘧啶核苷三磷酸 ( 3 H TTP)掺入法进行晶状体蛋白DNA聚合酶α活性测定。结果 :大鼠半乳糖性白内障晶状体蛋白DNA聚合酶α活性明显降低 ,复方参果液可使晶状体蛋白DNA聚合酶α活性增加至接近正常水平。结论 :复方参果液有提高半乳糖性白内障大鼠晶状体蛋白DNA聚合酶α活性的能力 ,这可能是复方参果液抑制半乳糖性白内障形成的一个作用机制     

中药对肾阳虚不育症患者精子DNA的影响

目的 :五子衍宗丸合加味肾气丸对男性肾阳虚不育症患者精子 DN A的影响。方法 :用流式细胞仪分析患者精液 DNA,从 DN A的单倍体量、二倍体量及多倍体数量来判断精液的质量以及服五子衍宗丸合加味肾气丸后对精液质量的改善。结果 :服用五子衍宗丸合加味肾气丸十二周后 ,使男性肾阳虚不育症 DNA单倍体数目明显增多。结论 :五子衍宗丸合加味肾气丸能改善男性肾阳虚患者的精子质量。     

055苯乙醇苷对哺乳动物DNA聚合酶的作用

应用一种灵敏的检测DNA聚合酶反应的方法，从源自哈萨克斯坦的准葛尔毛蕊花(Verbascum songaricum)的甲醇提取物中，筛选出2个具有抑制哺乳动物DNA聚合酶活性的已知的苯乙醇苷类的单体。     

肺一丸对La-795肺腺癌细胞及端粒酶活性影响的研究

目的：探讨肺一丸对La-795肺腺癌肿瘤细胞及端粒酶活性的影响。方法：MTT分析法测定细胞存活率;采用端粒酶聚合酶链反应酶联免疫吸附测定（PCR—ELISA）法,测定细胞端粒酶活性。结果：肺一丸能够抑制La-795肺腺癌细胞活性,且在一定的浓度范围内存在剂量依赖性。肺一丸对La-795肺腺癌细胞端粒酶活性有明显抑制作用。结论：肺一丸能够抑制La-795肺腺癌细胞活性,对La-795肺腺癌细胞端粒酶活性有明显抑制作用。     

Albaconol对DNA拓扑异构酶活性的抑制及对DNA的直接作用

目的：研究地花茵(Albatrellus confluens)提取物Albaconol对DNA拓扑异构酶(TOPO)活性的抑制及对DNA的直接作用。方法：DNA超螺旋解旋法检测Albaconol对TOPO介导pBR322 DNA解旋反应的影响;琼脂糖凝胶电泳法测定Albaconol对pBR322 DNA的直接断裂作用。结果：Albaconol能明显促进TOPOⅡ介导的DNA解旋或断裂,并抑制DNA再连接反应,在16μg／ml时完全抑制TOPOⅡ活性,但对TOPOⅠ介导的DNA解旋反应几无影响;同时在较高浓度时(≥400μg／ml)还能直接引起pBR322 DNA双链断裂。结论：Albaconol能选择性地抑制TOPOⅡ的活性,TOPOⅡ是其抗肿瘤作用的细胞内靶点之一。     

逆转录-聚合酶链反应法检测消瘤保肺丸对E-cad、α-catenin及β-catenin表达的影响

目的 研究消瘤保肺丸对人肺癌PG细胞中E-cad、α-catenin及β-catenin表达的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测E-cad、α-catenin及β-catenin表达的情况.随机分为四组,即消瘤保肺丸高剂量组、消瘤保肺丸低剂量组、对照组及空白组,分析电泳凝胶的灰度值.结果 消瘤保肺丸高剂量组对3种分子的表达与空白组差异显著,(P<0.01).消瘤保肺丸低剂量组α-catenin、β-catenin表达与空白组差异显著,(P<0.05);E-cad表达与空白组无显著差异,(P>0.05).在α-catenin的表达与空白组差异显著,(P<0.05).结论 消瘤保肺丸对人肺癌PG细胞的E-cad、α-catenin及β-catenin的表达有明显影响,消瘤保肺丸对肺癌有一定的抑制作用,该实验为今后分子水平的进一步研究提供了依据.     

苯乙醇苷对哺乳动物DNA聚合酶的作用

应用一种灵敏的检测DNA聚合酶反应的方法,从源自哈萨克斯坦的准葛尔毛蕊花(Verbascumsongaricum)的甲醇提取物中,筛选出2个具有抑制哺乳动物DNA聚合酶活性的已知的苯乙醇苷类的单体。取干燥的植物材料(0.5kg),用3倍量的甲醇浸提。甲醇粗提物(55g)显示DNA聚合酶抑制作用。甲醇提取物再用30%甲醇溶液(700mL)溶解,然后用正己烷萃取,以去除对酶活性测定方法敏感的脂类成分。甲醇水层用500mL水稀释,再用氯仿和正丁醇萃取。正丁醇粗提物显示活性。取半量的正丁醇提取物(13.7g)用甲醇在葡聚糖凝胶LH-20柱洗脱得到19个组分。其中具有显著抑制…     

哈萨克斯坦植物抑制DNA聚合酶的活性成分

探讨了中亚哈萨克斯坦的传统药用植物玄参科准噶尔毛蕊花(Verbascum songaricum)提取物对DNA聚合酶的抑制活性,并对其活性成分进行了鉴定。 结果:用乙酸乙酯回流提取准噶尔毛蕊花的根茎(干重78g),再用热甲醇回流提取得提取物     

杜仲SSR-PCR反应体系的优化

目的:建立杜仲简单重复序列-聚合酶链式反应(SSR-PCR)的优化反应体系,为杜仲种质间的遗传差异及亲缘关系分析提供参考。方法:选择Taq DNA聚合酶,模板DNA,Mg2+,引物及d NTP浓度为考察因素,利用单因素试验和L16(45)正交试验优选杜仲的SSR-PCR反应体系,运用SPSS软件对试验结果进行分析。结果:各因素水平变化对反应体系影响顺序依次为Mg2+Taq DNA聚合酶引物d NTP模板DNA。优化的PCR反应体系为10×PCR缓冲液2μL,Taq DNA聚合酶0.5U,Mg2+浓度1.25 mmol·L-1,d NTP浓度0.2 mmol·L-1,引物浓度0.3μmol·L-1,模板DNA用量60 ng,定容至20μL。结论:利用该体系进行扩增,所得谱带明亮清晰,稳定性和重复性良好,适用于杜仲不同居群间亲缘关系和遗传多样性分析。     

天山雪莲RAPD反应条件的优化及再生体系DNA多态性分析

目的:用RAPD法研究天山雪莲再生过程中DNA的变异.方法:优化RAPD反应体系中各影响因素,分别以天山雪莲种子苗、愈伤组织、丛生芽及再生植株的总DNA为模板,进行多态性分析.结果:优化反应体系为:Mg2+2.50mmol·L-1、Taq DNA聚合酶1.00U、引物0.30μmal·L-1、模板DNA 20ng、dNTPo.20mmol·L-1,退火温度为37℃.加条随机引物共扩增出174条带,平均每条引物扩增8.7条带,其中多态性条带18条,多态性位点比率为10.3%.天山雪莲再生体系与种子苗之间相似性系数为0.75～0.80,,结论:天山雪莲再生过程中在DNA水平上发生了一定程度的变异.     

最新PCR技术及其在妇产科的应用

PCR技术即聚合酶联反应 (polymerasechainreaction)是体外利用酶促反应扩增DNA或者RNA片段的技术。常规PCR的原理为将待扩增的核酸 (模板 )与引物、四种脱氧核苷酸和DNA聚合酶等混合在一起 ,经过高温使模板 2条链分开(变性 ) ,然后降温 (退火 )使引物与模板结合 ,再升温到DNA聚     

中药“甲瘤丸”对大白鼠实验性甲状腺肿超微结构的影响

我们曾报告~(1)“甲瘤丸”治疗甲状腺良性结节有较好的疗效,但该方对甲状腺组织的影响尚缺少细致的研究。为了阐明“甲瘤丸”对甲状腺肿的作用,我们观察了其对大白鼠实验性甲状腺肿超微结构的影响,现报告如下: 材料与方法取60只体重为200～250克的雄性大白鼠,分为三组,正常对照组、甲基硫氧嘧啶组(以下简称甲硫组)和中药组,每组各20只,分笼喂养,每笼5只。“甲瘤丸”混悬液的配方:昆布15克,夏枯草15克,丹参15克,牡蛎15克,当归30克,珍珠母30克。将以上药物研成细末后,加水形成混悬液,使1毫升混悬液中含生药2.5克。按Money及Rawson(2)~氏的方法,甲硫组和中药组均用0.5％甲基硫氧嘧啶溶液代替饮用水,1个半月后,甲硫组继续以0.5％甲基硫氧嘧啶溶液作为饮     

土鳖虫DNA的RAMP-PCR反应体系的建立及优化

目的 建立并优化土鳖虫基因组DNA的RAMP-PCR反应体系及扩增程序,为土鳖虫遗传多样性的研究提供依据。方法 以雌性土鳖虫为材料,常规酚/氯仿提取基因组DNA。使用RAMP引物（ISSR807＋RAPD A₅）,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg²⁺、dNTPs、引物、DNA聚合酶、模板进行体系优化,同时选择最佳的引物退火温度。结果 最适引物（ISSR807＋RAPD A₅）组合进行土鳖虫的RAMP-PCR分析的反应体系为总体积25 μL,包括10×缓冲液2.5 μL、Mg²⁺ 1.00 mmol/L、dNTPs 2.00 mmol/L、引物0.50 μmol/L、TaqDNA聚合酶1.00 U、DNA模板1.50 ng/μL,最佳退火温度为46.8 ℃。结论 本实验建立的最佳RAMP-PCR反应体系稳定、重复性好,可用于土鳖虫种质资源鉴定和遗传多样性研究。     

抑瘤扶正丸提高肿瘤化疗疗效的实验研究

目的：研究抑瘤扶正丸对肿瘤化疗的增效作用。方法：1）以荷S180实体瘤小鼠为模型，观察抑瘤扶正丸与ADM联用对肿瘤的抑制率及对小鼠造血功能，肝肾功能及免疫器官重量的影响；2）以荷EAC腹水瘤小鼠为模型，观察抑瘤扶正丸与CTX、5-Fu联用对小鼠生存期的影响。结果：抑瘤扶正丸和ADM联用对小鼠肉瘤S180有显著的化疗增效作用，能明显减少ADM对小鼠造血功能和肝脏的损害作用，能使化疗造成的胸腺及脾脏指数的减少明显回升。与CTX、5-Fu联用，能明显延长小鼠生存期，与单纯化疗比较有明显的增效作用。结论：抑菌扶正丸能显著提高肿瘤化疗的疗效。     

参灵消瘤丸主要药效学研究

目的:研究参灵消瘤丸主要药效学作用。方法:观察参灵消瘤丸对S180小鼠瘤重的影响、对艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延长率的影响、对荷瘤(S180)小鼠减毒增效作用、对正常小鼠溶血素抗体生成及网状内皮系统(RES)吞噬功能的影响。结果:参灵消瘤丸对S180小鼠有显著的抑瘤作用;对艾氏腹水癌小鼠生存时间有明显的延长作用;参灵消瘤丸与环磷酰胺合用对S180肉瘤小鼠的肿瘤生长有一定的协同抑制作用,并能抑制由环磷酰胺引起的小鼠白细胞总数减少;同时该药具有提高小鼠机体体液免疫及细胞免疫功能的作用。结论:参灵消瘤丸具有抗癌和免疫增强作用。     

白芨ISSR-PCR反应体系的建立及优化

目的:对白芨ISSR-PCR反应体系进行建立以及优化。方法:采用正交试验对影响白芨的ISSR-PCR反应体系中的6个影响因素Taq DNA聚合酶、BSA、引物、模板DNA、d NTP、Mg2+进行系统的筛选和优化,寻找白芨ISSR-PCR的最优条件。结果:经过系统的优化后,最终确立了最优的白芨ISSR-PCR方案,50μL反应液中Taq DNA聚合酶为2.5U、BSA为7.5g/L、引物为5.0μmo L/L、模板DNA为200ng、d NTP为0.4mmo L/L、Mg2+为4.0mmo L/L。结论:试验结果得出最佳的白芨ISSR-PCR反应体系,为后期合理有效的应用ISSR方法对白芨遗传资源的监测提供了参考。