柱前衍生-HPLC测定白消安在家兔体内的药动学参数

目的 建立测定家兔血清中白消安浓度和家兔体内药动学特征的柱前衍生化HPLC。方法 以1,5-戊二醇二甲磺酸酯为内标,二乙基二硫代氨基甲酸钠为衍生化试剂。流动相：甲醇-水（54∶46）,流速：0~20 min（1.0 mL·min^-1）,20~27 min（1.3 mL·min^-1）。柱温：30℃,检测波长：280 nm,进样量：25 μL。家兔分别以灌胃、静注的方式给予白消安,按本法测定血药浓度,DAS 3.0计算药动学参数。结果 白消安的血药浓度在0.1~3.4 mg·-L¹ 内线性关系良好（r=0.999 7）,日内、日间精密度以及样品稳定性符合中国药典2015年版的规定。低、中、高浓度的萃取回收率分别为90.0%,89.0%,91.5%。不同给药途径获得的药动学参数：单剂量口服t_1/2=（2.26±0.66）h,k=（0.33±0.12）·h^-1,k_a=（2.54±1.3）·h^-1,AUC_0–t=（1.95±0.18）h·mg·mL^-1;单剂量静脉注射t_1/2=（1.53±0.09）h,k=（0.45±0.03）·h^-1,AUC_0–∞=（4.38±0.26）h·mg·mL^-1。多剂量口服后C_ss=（0.48±0.03）mg·mL^-1,AUC_0–τ=（3.87±0.26）h·mg·mL^-1。结论 建立的柱前衍生-HPLC法适用于白消安血药浓度测定及药动学研究,不同给药途径的药动学参数为临床药动学研究提供了依据。     

青蒿琥酯自微乳在大鼠体内的药动学研究

目的 建立大鼠血浆中青蒿琥酯的HPLC-MS/MS测定方法,并研究青蒿琥酯自微乳在大鼠体内的药动学特征。方法 12只SD大鼠随机分为2组,单剂量分别灌胃（50 mg·kg^-1）青蒿琥酯自微乳和青蒿琥酯原料药,以格列吡嗪为内标,用LC-MS/MS测定给药后血浆中的药物浓度,并计算药动学参数。结果 青蒿琥酯血浆样品的线性范围为1.0~1 000.0 ng·mL^-1,回归方程为A=294.74C-439.33（r=0.999 6）,定量下限为1.0 ng·mL^-1。日内、日间变异系数（RSD）均<10%,符合生物样品的分析要求。青蒿琥酯原料药和青蒿琥酯自微乳的药动学参数C_max、t_1/2和AUC_0→t分别为：（87.6±8.80）ng·mL^-1,（1.88±0.33）h和（43.3±1.74）h·ng·mL^-1;（421±41.6）ng·mL^-1,（1.48±0.17）h和（282±17.7）h·ng·mL^-1。其中,C_max和AUC_0→t存在显著性差异（p<0.01）。结论 该方法简便灵敏,可用于血浆中青蒿琥酯的含量测定,经灌胃给药后,与原料药比较,青蒿琥酯自微乳能显著提高生物利用度。     

CO2超临界流体色谱法同时测定莪术油中3个倍半萜类成分的含量

目的 建立CO₂超临界流体色谱法测定莪术油中呋喃二烯、牻牛儿酮和莪术二酮含量的方法。方法 采用ACQUITY UPC² HSS C₁₈ SB色谱柱（3.0 mm×150 mm,1.8 μm）,以CO₂-乙腈为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 mL·min^-1;检测波长为216 nm,柱温为55℃,背压为2 000 psi。结果 呋喃二烯在2.67~1 337.26μg·mL^-1内线性关系良好（r=1.000）,加样回收率为97.94%（n=6,RSD=1.50%）。牻牛儿酮在2.77~1 386.00 μg·mL^-1内线性关系良好（r=1.000）,加样回收率为96.07%（n=6,RSD=1.68%）;莪术二酮在6.99~3 493.00 μg·mL^-1内线性关系良好（r=1.000）,加样回收率为99.33%（n=6,RSD=1.88%）。结论 本方法快捷准确、稳定且绿色环保,可用于莪术油中上述3个倍半萜类成分的质量控制。     

高灵敏度HPLC测定大鼠血浆中益母草碱浓度及其药动学研究

目的 建立一种高灵敏度HPLC测定大鼠血浆中益母草碱浓度,并研究益母草碱在大鼠体内的药动学特征。方法 大鼠口服益母草碱混悬溶液（50 mg·kg^-1）后,不同时间点尾静脉采血,以苯甲酰精氨酸乙酯为内标,血浆样品经酸化后乙酸乙酯萃取,采用HPLC进行测定。色谱条件：采用Diamonsil C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）为色谱柱,以乙腈-0.02 mol·L^-1磷酸二氢钾缓冲溶液（pH 3.0）（22：78）为流动相,流速1.0 mL·min^-1,柱温35℃,检测波长277 nm。并利用PKS 1.0软件计算药动学参数。结果 益母草碱血浆浓度在0.05~1.5 μg·mL^-1内线性关系良好（r=0.999 1）。方法的定量下限（LLOQ）为0.05 μg·mL^-1（RSD=12.8%,n=5）;提取回收率为76.5%~82.5%;批内、批间准确度为96.9%~104.9%;日内、日间精密度均<10%;质控样品经反复冻融3次及-20℃放置1个月后均较稳定。大鼠口服益母草碱后,药-时曲线符合二室开放模型,主要药动学参数为t_max=0.95 h,C_max=0.51 μg·mL^-1,t_1/2=3.64 h,AUC_0-t=1.56 μg·mL^-1·h^-1,AUC_0-∞=1.78 μg·mL^-1·h^-1。结论 该方法准确度、灵敏度高,重复性好,可用于生物样品中益母草碱浓度的测定。     

LC-MS/MS测定阿齐沙坦及其盐在大鼠血浆中的药动学研究

目的 建立液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中阿齐沙坦及其盐的浓度并研究其药动学。方法 大鼠血浆样本以乙腈沉淀蛋白后,采用Eclipse Plus C₁₈色谱柱（50 mm×3.0 mm,1.8 μm）;流动相（乙腈：水=60：40）,流速为0.35 mL·min^-1,柱温为40℃;采用Agilent 6430三重四极杆串联质谱仪,离子化方式：电喷雾-正离子（API-ES）;监测方式：MRM;阿齐沙坦监测离子对457.3/233.1,缬沙坦监测离子对436.2/291.4,用作内标。SD大鼠灌胃给予阿齐沙坦1.0 mg·kg^-1及阿齐沙坦盐1.2 mg·kg^-1。结果 阿齐沙坦在5~30 000 ng·mL^-1内线性关系良好;回收率为85%~115%,精密度RSD在±15%内。阿齐沙坦盐大鼠体内主要动力学参数如下：AUC_{（0-24 h）}为（12.9±3.2）μg·mL^-1·h^-1,AUC_（0-∞）为（14.2±4.1）μg·mL^-1·h^-1,C_max为（3.8±0.3）μg·mL^-1,T_1/2为（13.4±0.5）h。阿齐沙坦的主要动力学参数如下：AUC_{（0-24 h）}为（8.1±2.6）μg·mL^-1·h^-1,AUC_（0-∞）为（9.7±3.1）μg·mL^-1·h^-1,C_max为（2.3±0.5）μg·mL^-1,T_1/2为（10.5±0.5）h。结论 本法经方法学验证,适用于大鼠血浆中阿齐沙坦及其盐的浓度测定,可用于阿齐沙坦及其盐大鼠体内药动学研究。     

(S)-2-(Boc-氨基)-3-[(S)-2-氧代-3-吡咯烷基]丙酸甲酯单晶制备及其结构表征

目的 培养(S)-2-(Boc-氨基)-3-[(S)-2-氧代-3-吡咯烷基]丙酸甲酯单晶,并进行晶型表征和立体结构确证。方法 用醋酸乙酯-甲基叔丁基醚（1∶1）体系培养单晶,并采用热重法、差示扫描量热法、粉末X射线衍射和单晶X射线衍射分析。结果 制备得到无色块状晶体;样品熔点约为114 ℃;该晶胞属于正交晶系,空间群为P2₁2₁2₁,分子式为C₁₃H₂₂N₂O₅,相对分子质量为286.33,晶体密度为1.152 mg/mm³,绝对构型为S,S构型。结论 确定了(S)-2-(Boc-氨基)-3-[(S)-2-氧代-3-吡咯烷基]丙酸甲酯的立体构型,培养的晶体为非水合物和溶剂化物。     

盐酸二甲双胍缓释片的人体生物等效性研究

目的 评价中国健康受试者空腹和餐后状态下单次口服盐酸二甲双胍缓释片的生物等效性。方法 采用单剂量、随机、开放、两制剂、两周期、交叉对照的试验设计,健康受试者每周期在空腹或餐后状态下口服盐酸二甲双胍缓释片受试制剂和参比制剂500 mg。采用经验证的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法测定二甲双胍的血浆浓度,使用Phoenix WinNonlin 8.0计算药动学参数并用SAS9.4软件进行生物等效性评价。结果 空腹状态下,受试制剂和参比制剂中二甲双胍C_max分别为（733.00±178.25）、（665.80±146.58） ng·mL^-1,AUC_0～t分别为（4 848.60±1 204.80）、（4 743.00±1 104.34） h·ng·mL^-1,AUC_{0 ～ ∞}分别为（4 940.70±1 219.48）、（4 832.58±1 093.55） h·ng·mL^-1。餐后状态下,受试制剂和参比制剂中二甲双胍C_max分别为（519.10±92.55）、（475.50±65.88） ng·mL^-1,AUC_0～t分别为（5 989.20±1 112.01）、（5 946.50±1 094.81） h·ng·mL^-1,AUC_{0 ～ ∞}分别为（6 052.20±1 118.35）、（6 049.80±1 062.28） h·ng·mL^-1。受试制剂和参比制剂二甲双胍C_max、AUC_0～t和AUC_0～∞几何均值比的90%置信区间均在80.00%～125.00%的生物等效性范围内。结论 盐酸二甲双胍缓释片受试制剂和参比制剂在空腹和餐后状态下均具有生物等效性。     

珍菊降压片在大鼠体内药动学研究

目的 建立同时测定大鼠血浆中芦丁和氢氯噻嗪的LC-MS/MS方法,并研究珍菊降压片在大鼠体内的药动学。方法 采用蛋白质沉淀法处理血浆样品,色谱柱为Pntulips BP-C₁₈柱（2.1 mm×50 mm,5μm）,流动相为乙腈-水梯度洗脱,柱温为30℃;流速为0.45 mL·min^-1。采用电喷雾离子源,选择离子反应监测模式。采用DAS 2.0软件计算药动学参数。结果 方法学验证结果表明内源性杂质不干扰待测物和内标的测定,芦丁和氢氯噻嗪的线性范围分别为5~1 000 ng·mL^-1（r²=0.997 1）和2.5~500 ng·mL^-1（r²=0.995 8）。芦丁和氢氯噻嗪药动学参数：AUC_（0-t）为（107 157.31±38 056.63）,（130 387.28±46 306.69）ng·mL^-1·min^-1;T_1/2z为（108.65±20.95）,（240.86±46.44）min;T_max为（34.25±16.34）,（120.00±0.00）min;C_max为（683.44±254.03）,（368.45±136.95）ng·mL^-1。结论 该方法准确度、精密度、回收率和基质效应均符合生物基质样品测试要求,适用于珍菊降压片在大鼠体内的药动学研究。     

UPLC-MS/MS检测大鼠血浆中阿帕替尼的浓度及其药动学研究

目的 采用UPLC-MS/MS建立快速检测大鼠血浆中阿帕替尼浓度的方法,并应用于药动学研究。方法 大鼠血浆样本用乙腈沉淀蛋白,液质联用技术检测浓度,流动相为乙腈-水（含0.1%甲酸）,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^-1,柱温40℃,内标为氯唑沙宗;质谱条件：电喷雾离子化源（ESI）,负离子监测模式,检测离子对阿帕替尼为m/z 396.2→210.0和m/z 396.2→158.0,氯唑沙宗m/z 168.0→132.0。结果 阿帕替尼和内标氯唑沙宗的保留时间分别为1.07 min和1.40 min,线性范围为10~2 000 ng·mL^-1（r²=0.993）,检测限为1 ng·mL^-1,准确度为90.65%~111.50%,基质效应为89.14%~104.65%,平均回收率>86%,日内、日间精密度RSD均<10%。常温下放置24 h、冻融2次和-80℃冻存30 d的RSD均<10%。药动学研究结果显示,大鼠单次灌胃阿帕替尼76.5 mg·kg^-1,AUC_（0-t）为（6 114.41±645.99）ng·mL^-1·h,CL_z/F为（12.21±1.08）L·h^-1·kg^-1,V_z/F为（75.70±38）L·kg^-1,T_1/2为（4.23±1.94）h,T_max为（2±0.71）h,C_max为（1 377.7±284.54）μg·L^-1。结论 该法操作简便,重复性好,准确可靠,适用于大鼠血浆中阿帕替尼的浓度检测及其药动学研究。     

山胡椒内生真菌Trichoderma sp. SHJN1和Perenniporia sp. SHJG1的抗肿瘤活性成分研究

目的 从民族药山胡椒内生真菌Trichoderma sp.SHJN1和Perenniporia sp.SHJG1的代谢物中寻找活性先导化合物。方法 采用正相硅胶、反相硅胶、Sephadex LH-20凝胶及制备型HPLC等对Trichoderma sp.SHJN1和Perenniporia sp.SHJG1发酵物进行分离纯化，再通过NMR、ESI-MS等鉴定化合物结构，同时采用人乳腺癌细胞（MCF-7）和人肺癌细胞（A549）对这些化合物的抗肿瘤活性进行初步评价。结果 从2株内生真菌次级代谢产物中共分离鉴定了12个化合物：alantrypinone （1）、oryzalactam （2）、phomoindene A （3）、cis-gregatin B （4）、huaspenone B （5）、stigmasta-7，22-dien-3β，5α，6α-triol （6）、ergosterol （7）、1-deoxy-2-demethylviridiol （8）、viridiol （9）、trichodermamides A （10）、chromone （11）、对-羟基苯乙酸（12）。抗肿瘤活性评价结果显示，化合物3 抑制MCF-7细胞增殖活性IC₅₀为（62.9±1.02）μmol·L^-1[顺铂（cisplatin，DDP） IC₅₀为（30.1±1.67）μmol·L^-1]；化合物8 和9 抑制A549细胞增殖活性的IC₅₀分别为（34.6±1.57）μmol·L^-1和（44.9±1.74）μmol·L^-1[DDP IC₅₀为（20.6±1.42）μmol·L^-1]。结论 化合物3 ，8 和9 具有潜在抗肿瘤活性。     

4-〔4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基哌啶氮氧自由基)氨基〕-4′-去甲表鬼臼毒素诱导NB4肿瘤细胞凋亡

为了从细胞凋亡角度探讨 4-〔4″- ( 2″,2″,6″,6″-四甲基 - 1″-哌啶氮氧自由基 )氨基〕- 4′-去甲表鬼臼毒素 ( GP7)抗肿瘤作用的机理 ,用活细胞计数法及MTT比色法观察了 GP7对 NB4细胞的生长抑制作用 ;用光学显微镜及电子显微镜观察了凋亡细胞的形态学变化 ;用琼脂糖凝胶电泳观察了 DNA的梯形改变 .结果发现 :GP70 .1 8- 1 8μmol· L-1能显著抑制 NB4细胞的生长增殖 ;GP7可明显诱导NB4细胞凋亡的形态学变化及 DNA梯形带 .凋亡率随处理时间延长而增高 . 9μmol· L-1处理 NB4细胞 48h凋亡率达到最高峰 ,为 45.0± 3.0 ) % .延长处理时间至 72 h,凋亡率降至 ( 2 6.7± 1 .5) % .凋亡率与药物浓度的对数呈正相关 ( r=0 .938,P<0 .0 5) .结果表明 GP7具有诱导 NB4细胞凋亡作用 .     

4-(4-氨基苯基)-3-吗啉酮的合成

用两种方法制得抗凝剂利伐沙班的中间体4-(4-氨基苯基)-3-吗啉酮(1):①溴苯相继与乙醇胺、氯乙酰氯反应得4-苯基吗啉酮,再经硝化、还原生成1,总收率约32%;②溴苯先硝化,再与乙醇胺反应得到2-(4-硝基苯胺基)乙醇,再经氯乙酰氯闭环、还原反应制得1,总收率约47%.     

Inhibitory effect of 4-(4-fluorophenyl)-2-(4-hydroxyphenyl)-5-(4-pyridyl)1H - imidazole on HCMV DNA replication and permissive infection.

We found that Human Cytomegalovirus (HCMV) infection of human fibroblasts resulted in a dramatic increase in p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) phosphorylation. Recently, drug mediated inhibition of p38 has been demonstrated to exhibit anti-viral activity against HIV (Shapiro, L., Heidenreich, K.A., Meintzer, M.D. and Dinarello, C.A., 1998. Role of p38 mitogen-activated protein kinase in HIV type 1 production in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 95, 7422-7426). Therefore, we examined the effect of a specific p38 kinase inhibitor on HCMV infection. Inhibiting p38 activity in HCMV infected cells by treating cells with 4-(4-fluorophenyl)-2-(4-hydroxyphenyl)-5-(4-pyridyl)1H-imidazole; (FHPI), a p38 inhibitor drug, prevented permissive HCMV infection as measured by plaque assay. In the presence of FHPI, HCMV immediate early gene expression was slightly lower at early times of infection, but there was no inhibition of expression of the early gene UL-84, an HCMV protein essential for viral replication. However, FHPI inhibited HCMV DNA replication and late gene expression. The inhibitory effect of FHPI was reversible, as demonstrated by the induction of HCMV replication upon withdrawal of FHPI. Our data describes FHPI as a novel anti-HCMV compound that inhibits synthesis/activation of cellular and/or viral factors required for initiation of HCMV DNA replication.     

The course of CCl4 induced hepatotoxicity is altered in mGSTA4-4 null (-/-) mice

Glutathione S-transferases (GSTs) play a key role in cellular detoxification of environmental toxicants through their conjugation to glutathione (GSH). Recent studies have shown that the alpha-class GSTs also provide protection against oxidative stress and lipid peroxidation (LPO). GSTA4-4 is a member of a sub group of the alpha-class GSTs. It has been shown to metabolize 4-hydroxynonenal (4-HNE) with high catalytic efficiency through its conjugation to glutathione (GSH) and has been suggested to be a major component of cellular defense against toxic electrophiles such as 4-HNE generated during LPO. Since the hepatotoxicity of carbon tetrachloride (CCl(4)) has been suggested to be due to the generation of free radicals leading to membrane LPO, the present studies were designed to compare hepatotoxicity of CCl(4) in GSTA4-4 null (-/-) and wild type (+/+) mice. The results show that administration of a single dose of CCl(4) (1 ml/kg i.p.) resulted in time dependent hepatotoxicity in both -/- and +/+ mice; the extent of cellular damage by serum enzymes suggests that progression was more rapid in -/- mice, although injury was similar by 24 h. Histopathologic examination showed similar degrees of centrilobular necrosis by 24 h but much greater surrounding degenerative change, including cellular swelling, disarray, and vacuolization, in the liver of -/- mice. As expected -/- mice did not show any expression of mGSTA4-4; after CCl(4) a compensatory increase in the activities of total GST activity was noted at 24 h. Major alterations in other antioxidant enzymes was not observed. 4-HNE levels in the liver of -/- mice were about four-fold higher than in +/+ mice, suggesting a positive correlation between 4-HNE levels and the altered course of CCl(4) hepatotoxicity. These studies suggest that GSTA4-4 is an important component during the early stages (1-6 h) of cellular defense against oxidative stress and LPO although, it is not effective in protecting against the ultimate degree of overall cell injury.     

Antidepressant-like and antinociceptive-like actions of 4-(4'-chlorophenyl)-6-(4''-methylphenyl)-2-hydrazinepyrimidine Mannich base in mice

This study investigated the possible antidepressant and antinociceptive action of CPMPH Mannich base, as well as the involvement of serotonergic, dopaminergic, noradrenergic and opioid systems and the L-arginine-nitric oxide pathway in the antidepressant-like effect of CPMPH in the forced swimming test (FST) in mice. The immobility time in the FST was significantly reduced by CPMPH (0.1-10 mg/kg, i.p.), without accompanying changes in the ambulation in an open-field. CPMPH at high doses (i.p. or s.c. routes) produced a significant inhibition of acetic acid-induced writhing. The antidepressant-like effect of CPMPH (1 mg/kg, i.p.) in the FST was prevented by pre-treatment of mice with methysergide (2 mg/kg, i.p., a non-selective serotonin receptor antagonist), sulpiride (32 mg/kg, i.p., a D2 receptor antagonist) or yohimbine (1 mg/kg, i.p., an alpha2-adrenoceptor antagonist). In contrast, the antidepressant-like effect of CPMPH was not affected by pre-treatment (i.p.) with naloxone (1 mg/kg, a non-selective opioid receptor antagonist) or L-arginine (750 mg/kg, a nitric oxide precursor). The results demonstrate that CPMPH had an antidepressant-like action that appears to be mediated through its interaction with serotonergic, dopaminergic and noradrenergic systems.