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1.
目的 研究吲哚胺2,3-二氧酶( IDO)表达对子宫颈癌患者T淋巴细胞活性的影响,进一步了解子宫颈癌的免疫逃逸机制. 方法 选择子宫颈上皮内瘤变Ⅲ级( CINⅢ)组织20例( CINⅢ组) ,子宫颈癌患者组织20 例(宫颈癌组) ,正常宫颈组织20例(正常组) ,采用流式细胞仪检测各组外周血中 CD3 + T 细胞、CD8 + T 细胞、CD4 + T 细胞、CD4 +CD25 + Foxp3 + Tregs数量、CD4 +T细胞/CD8 +T细胞. 采用Western blot 法和半定量 RT-PCR 法检测各组子宫颈组织IDO mRNA及其蛋白表达,分析各组子宫颈组织中IDO的表达对宿主T淋巴细胞活性的影响. 结果 正常组、CINⅢ组及宫颈癌组3组之间IDO蛋白表达强度差异有统计学意义(P<0. 001). 宫颈癌组IDO表达高于CINⅢ和正常组(P<0. 001),CINⅢ组高于正常组(P<0. 001). 宫颈癌组外周血中CD3 + T 细胞、CD8 + T 细胞、CD4 + T 细胞、CD4 + CD25 +Foxp3 +Tregs数量与正常组和CINⅢ组差异有统计学意义( P<0. 001). 3组中IDO蛋白表达与外周血中CD3 +T细胞、CD4 + T 细胞/CD8 + T 细胞呈负相关性,与 CD4 + CD25 +Foxp3 +Tregs呈正相关性. 结论 IDO抑制外周血T淋巴细胞对肿瘤的杀伤效应,使子宫颈癌患者免疫功能低下,有利于肿瘤细胞免疫逃逸,从而使病情进展.  相似文献   

2.
宫颈癌患者外周血中T细胞亚群数量变化及临床意义   总被引:1,自引:0,他引:1  
[目的]探讨宫颈癌患者外周血中T细胞亚群数量变化及临床意义.[方法]选择2008年10月-2009年10月期间符合纳入及排除标准的CINⅢ患者20例,宫颈浸润癌患者20例,正常宫颈健康妇女20例,流式细胞仪检测外周血中CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+ CD25+ Foxp3+Trregs数量.[结果]宫颈浸润癌患者外周血中CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞数量及CD4+/CD8+显著低于正常宫颈组和CINⅢ组(P<0.05),正常宫颈组和CINⅢ组无显著性差异(P>0.05).宫颈癌浸润组CD4+CD25+Foxp3+Tregs数量显著高于正常宫颈组和CINⅢ组(P<0.05),正常宫颈组和CINⅢ组差异无统计学意义(P>0.05).[结论]宫颈浸润癌患者细胞免疫功能低下,存在免疫抑制.  相似文献   

3.
目的 探讨胃肠道恶性肿瘤患者外周血及病理组织调节性T细胞(Tregs)的表达及临床意义.方法 采用流式细胞仪对60例胃肠道恶性肿瘤患者及20例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Tregs/CD4+T)的比率进行检测,采用免疫组化法检测相应患者病理组织中CD4+CD25+Foxp3+Tregs的表达水平.结果 胃癌、结直肠癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs/CD4+T细胞的比率分别为(7.46±0.85)%和(7.79±1.19)%,与对照组(6.65±0.79)%比较,差异有统计学意义(P<0.01).胃癌、结直肠癌病理组织中CD4+CD25+Foxp3+Tregs的表达平均阳性细胞绝对数为(53.52±16.31)和(58.15±14.86),与癌旁组织(6.53±2.68)比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 胃癌、结直肠癌患者外周血及病理组织中Tregs的高表达可能具有肿瘤免疫的抑制作用,并与肿瘤的发生、发展密切相关.  相似文献   

4.
目的探讨胃肠道恶性肿瘤患者外周血及病理组织调节性T细胞(Tregs)的表达及临床意义。方法采用流式细胞仪对60例胃肠道恶性肿瘤患者及20例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Tregs/CD4+T)的比率进行检测,采用免疫组化法检测相应患者病理组织中CD4+CD25+Foxp3+Tregs的表达水平。结果胃癌、结直肠癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs/CD4+T细胞的比率分别为(7.46±0.85)%和(7.79±1.19)%,与对照组(6.65±0.79)%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。胃癌、结直肠癌病理组织中CD4+CD25+Foxp3+Tregs的表达平均阳性细胞绝对数为(53.52±16.31)和(58.15±14.86),与癌旁组织(6.53±2.68)比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论胃癌、结直肠癌患者外周血及病理组织中Tregs的高表达可能具有肿瘤免疫的抑制作用,并与肿瘤的发生、发展密切相关。  相似文献   

5.
目的研究溃疡性结肠炎(UC)患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞数量、相关细胞因子的水平以及Foxp3的表达,分析它们在UC发病中的作用。方法收集UC患者及健康对照组外周抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞。分析UC患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞百分率,RT-PCR检测T细胞Foxp3mRNA的表达。结果与正常对照组相比,UC患者外周血CD4^+T、CD25^+T、CD4^+CD25^+T/CD4^+T细胞百分率均显著下降(P〈0.05),血清中细胞因子IL-10、TGF-β1的水平也明显低于对照组,T细胞Foxp3mRNA的表达也明显降低(P〈0.05),并且CD4^+CD25^+T/CD4^+T细胞百分率和Foxp3mRNA水平与UC患者疾病的活动指数呈负相关。结论UC患者外周血存在细胞免疫功能失调,CD4^+CD25^+调节性T细胞数量与功能状态发生改变,T淋巴细胞耐受机制的破坏可能与UC的疾病活动状态和发病机制有关。  相似文献   

6.
目的分析CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)患者外周血中的水平,初步探讨Tregs与NHL预后的关系。方法选取我院2013年4月至2013年12月初诊NHL患者38例为观察组,20例健康志愿者设为对照组,对观察组化疗前后及对照组外周血中CD4+CD25+Foxp3+Tregs比例进行检测和对比。结果初诊NHL患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs比例显著高于对照组(P〈0.05),化疗后达到完全缓解及部分缓解的患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs比例较化疗前组均显著减低(P〈0.05),完全缓解组与部分缓解组相比无统计学意义(P〉0.05)。结论初诊的NHL患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Tregs水平明显升高,经有效化疗后其水平显著降低,监测外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs水平对于判断NHL预后具有的临床应用价值。  相似文献   

7.
慢性乙型肝炎中CD4+ CD25+ T调节细胞水平的判定   总被引:6,自引:1,他引:5  
韩捷  陈海燕  李扬  钟惠德  沈培辰 《医学争鸣》2006,27(15):1425-1427
目的:了解慢性乙型肝炎(CHB)患者CD4 CD25 T调节细胞(Tregs)的真实水平. 方法: 采用细胞内外三色荧光标记、流式细胞仪测定、RT-PCR等方法检测CHB患者外周血中Tregs的主要标志CD4 CD25 ,CD4 CD25h,CD4 CD25 Foxp3 细胞和Foxp3 mRNA水平,并观察其与患者肝功能、乙肝病毒复制标志的相关性. 结果: CHB外周血中CD4 CD25 细胞水平与正常无明显差异,CD4 CD25h/PBMC(外周血单个核细胞)则较正常对照组升高[(0.5±0.3) vs (1.1±0.6), P<0.05],而CD25 Foxp3 /CD4 T细胞比值及Foxp3 mRNA水平则较正常明显降低[(4.5±2.7) vs (7.1±2.3)]. RT-PCR结果: △CT:13.98 vs 12.86, △△CT: 1.12 vs 0, 2-△△CT: 0.46 vs 1, P<0.05. 外周血中CD25h T细胞水平与谷丙转氨酶呈正相关(r=0.5,P<0.05),T细胞中CD25(包括高表达)阳性比例与Foxp3阳性的符合率明显低于正常人[(30.5±16.7) vs (54.6±11.1);(57.9±15.9 ) vs (87.8±13.5), P<0.01]. 结论: CHB患者存在着Tregs细胞水平的异常,CD25h的阳性率易受炎症时非调节性T细胞激活而过多表达CD25分子影响,Foxp3作为Tregs判定指标较为可靠.  相似文献   

8.
目的 研究外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞(Treg细胞)数量改变所致的细胞免疫抑制效应在慢性湿疹发病机制中的作用.方法 采用免疫荧光标染技术,经流式细胞仪检测30例慢性湿疹患者和33例正常人外周血CD4^+CD25^+T细胞数量及胞内转录因子Foxp3(forkhead box p3)表达水平.结果 慢性湿疹患者外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞数量比正常人对照组明显下降(P<0.001).结论 慢性湿疹患者外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞数量下降导致参与IV型变态反应的效应性T细胞功能活性增强,这可能是湿疹发病机制之一.  相似文献   

9.
目的:研究乳腺癌CD33+髓系来源的抑制细胞(MDSCs)中吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达情况及与Foxp3+调节性T细胞(Tregs)分布关系和临床意义。方法:运用免疫组化单染技术检测CD33+MDSCs细胞、Foxp3+Tregs,采用免疫组化双染检测CD33+MDSCs细胞中IDO的表达情况。结果:癌组织中CD33+MDSCs细胞、Foxp3+Tregs分布无序,呈散在分布;Foxp3+Tregs高比例组中,CD33+MDSCs细胞中IDO呈高表达,差异有统计学意义(P<0.05);CD33+MDSCs中IDO的表达与患者年龄、肿瘤直径和组织学分级无明显关系,但与是否有淋巴结转移有密切关系(P<0.05)。结论:乳腺癌中CD33+MDSCs中IDO高表达参与肿瘤细胞免疫耐受的形成,可能与乳腺癌淋巴转移存在密切联系。  相似文献   

10.
目的:探讨非小细胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)数量变化及其相关基因Foxp3 mRNA的表达改变.探讨CD4+CD25+调节性T细胞在诱导肿瘤免疫耐受中的作用.方法:采用流式细胞术检测患者外周血中CD4%D25+调节性T细胞数量变化:采用半定量RT-PCR方法检测肺癌患者外周血PBMC中Foxp3 mRNA的表达水平.选取30名非肿瘤患者作为对照.结果:肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞数量明显高于正常组(P<0.05);Foxp3 mRNA在肺鳞癌和肺腺癌患者外周血PBMC中的表达明显增强(P<0.05).结论:CD4+CD25+调节性T细胞可能在肺癌免疫耐受中发挥重要作用.  相似文献   

11.
目的:本研究旨在检测宫颈癌患者放化疗前后外周血和宫颈组织中T细胞亚群的变化规律,研究放化疗前后患者机体免疫功能状态的改变,并探讨对中晚期宫颈癌患者进行适时、合理免疫治疗的临床意义。方法:采用流式细胞仪检测(flow cytometry,FCM)分析2010年1月~2011年9月我院收治的60例维吾尔族宫颈癌患者放化疗前后外周血中CD3+、CD4+、CD8+和CD4+CD25+T细胞百分数;免疫组织化学SP法检测宫颈组织中CD3+TILs、CD4+TILs、CD8+TILs、Treg细胞的分布情况;HPV检测。结果:宫颈癌患者外周血中放化疗前组CD3+、CD4+、CD8+和CD4+CD25+T细胞百分数及Foxp3mRNA(相对量)比值分别为(67.23±5.21)%、(31.30±4.11)%、(34.77±6.41)%、(10.81±1.60)%、0.318±0.027;放化疗后组各指标分别为:(70.89±5.52)%、(35.42±4.72)%、(29.85±6.02)%、(6.96±0.94)%、0.266±0.028;宫颈组织中放化疗前组CD3+、CD4+、CD8+和CD25+T细胞百分数及Foxp3:(49.22±4.32)%、(30.02±4.93)%、(38.13±2.21)%、(12.66±1.78)%、60.18±5.02;放化疗后各指标分别为:(53.11±4.49)%、(36.12±4.21)%、(31.65±1.93)%、(7.87±1.14)%、40.26±4.88;HPV半定量放化疗前(581±22%),放化疗后(154±19%)。结论:中晚期维吾尔族宫颈癌患者放化疗后免疫功能有好转趋势,但均未能恢复到正常水平,且免疫功能与HPV感染呈正相关。  相似文献   

12.
目的:研究人幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)感染后胃黏膜中CD4+CD25+调节性T细胞及Foxp3mRNA的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化、PCR分析35例Hp阴性患者和45例Hp阳性患者CD4+CD25+调节性T细胞及Foxp3 mRNA的表达变化。结果:Hp阳性患者局部胃黏膜中的CD4+CD25+T细胞明显增多,占5.012%,显著高于Hp阴性患者胃黏膜中的CD4+CD25+T细胞(占0.739%),Foxp3 mRNA表达水平也明显高于阴性患者(P〈0.01)。结论:Hp感染后可能通过上调CD4+CD25+Foxp3调节性T细胞的表达,抑制Hp引起的特异性T细胞反应,造成Hp的长期定植。  相似文献   

13.
目的:探讨CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs在自身免疫性甲状腺疾病(AITD)中的作用。方法:收集2014年2月-2016年11月在本院进行检查的AITD患者80例为治疗组,其中Graves(GD)患者40例,为GD组;桥本甲状腺炎(HT)患者40例,为HT组;选取健康体检人员20例为对照组。采用流式细胞术检测外周血CD4~+T、CD4~+CD25~+Tregs细胞数量和比例,采用RT-PCR检测外周血Foxp3 mRNA表达水平,采用化学发光法对血清中甲状腺素(TSH)、总三碘甲状腺原氨酸(TT_3)、总甲状腺素(TT_4)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)和甲状腺过氧化酶抗体(TPOAb)的水平进行测定。结果:三组TSH、TT_3、TT_4、TgAb、TPOAb比较,差异均有统计学意义(P0.05);三组外周血CD4~+T细胞数量比较,差异无统计学意义(P0.05);GD组外周血CD4~+CD25~+Tregs占CD4~+T细胞的比率与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);HT组外周血CD4~+CD25~+Tregs占CD4~+T细胞的比率明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);GD组和HT组外周血Foxp3 mRNA表达量均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);自身免疫性甲状腺疾病的CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs与TSH、TT_3、TT_4、TgAb和TPOAb有明显正相关性(P0.05)。结论:CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs可能在AITD的发生发展进程中起着一定的作用,深入研究CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs在AITD中的作用将有助于建立新的预防和治疗策略。  相似文献   

14.
目的 研究溃疡性结肠炎(UC)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量、相关细胞因子的水平以及Foxp3的表达,分析它们在UC发病中的作用.方法 收集UC患者及健康对照组外周抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞.分析UC患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分率, RT-PCR检测T细胞Foxp3mRNA的表达.结果 与正常对照组相比,UC患者外周血CD4+T、CD25+T、CD4+CD25+T/CD4+T细胞百分率均显著下降(P﹤0.05),血清中细胞因子IL-10、TGF-β1的水平也明显低于对照组,T细胞Foxp3mRNA的表达也明显降低(P﹤0.05),并且CD4+CD25+T/CD4+T细胞百分率和Foxp3mRNA水平与UC患者疾病的活动指数呈负相关.结论 UC患者外周血存在细胞免疫功能失调,CD4+CD25+调节性T细胞数量与功能状态发生改变,T淋巴细胞耐受机制的破坏可能与UC的疾病活动状态和发病机制有关.  相似文献   

15.
目的探讨宫颈癌人乳头瘤病毒(HPV)感染与T细胞亚群、CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的相关性。方法采用HPV核酸扩增分型检测试剂盒及流式细胞术检测宫颈癌组(40例)、正常对照组(20例)的HPV分型和外周血中T细胞亚群及CD4+CD25+Foxp3+Treg的百分率。结果HPV阳性的患者外周血T细胞亚群与HPV阴性的患者比较,差异无统计学意义(P〉O.05),但调节性T细胞(Treg)在HPV阳性与阴性组之间比较,差异有统计学意义(P〈O.05)。宫颈癌组外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg的百分率与正常对照组比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。HPV与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞呈显著正相关(r=0.613,P〈O.05)。结论宫颈癌患者免疫功能与正常人无明显差异,Treg细胞与宫颈癌患者HPV持续感染、肿瘤免疫逃避密切相关。  相似文献   

16.
目的 探讨吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygense,IDO)与CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)之间的相关性及在支气管哮喘发病机制中的作用.方法 BALB/c小鼠用随机数字表法分成对照组和哮喘组,每组8只.哮喘组以鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏,激发小鼠建立哮喘模型,无创肺功能仪检测气道反应性,支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞学分析,ELISA检测BALF中INF-y、IL-4、IL-10浓度,实时荧光定量PCR检测肺组织IDO和Foxp3 mRNA表达,免疫组织化学方法检测IDO蛋白表达,流式细胞仪检测Treg占CD4+细胞的百分率.结果 哮喘组小鼠气道反应性、BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞比例及IL-4浓度明显高于对照组(P<0.01);而INF-γ与IL-10浓度、IDO和Foxp3的mRNA表达、IDO蛋白表达、Treg占CD4+细胞的百分率明显低于对照组(P<0.01);对照组与哮喘组IDO与Foxp3的mRNA表达呈正相关(r=0.819,r=0.807,P<0.05),对照组与哮喘组IDO蛋白表达与Treg占CD4+细胞的百分率呈正相关(r =0.783,r=0.765,P<0.05).结论 哮喘小鼠IDO和Foxp3表达降低,Treg数量减少,且IDO蛋白表达与Treg占CD4+细胞的百分率呈正相关,表明IDO与Treg相互调节,打破免疫耐受,诱导哮喘发生.  相似文献   

17.
目的 分析咳嗽变异性哮喘(CVA)患者外周血调节性T细胞和辅助性T细胞表达水平.方法 连续选择2011年1月至2012年12月在中国医科大学附属第四医院门诊就诊的CVA患者(CVA组)35例和慢性持续期哮喘患者(哮喘组)21例,另有18例同期参加体检结论健康者为对照组.3组对象同期接受了外周血调节性T细胞(CD4+CD25+ Treg和CD4+ CD25+ Foxp3+Treg)和辅助性T细胞(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)检测.结果 CVA患者外周血CD4+表达水平及CD4+/CD8+比值均明显低于对照组,但都明显高于哮喘组(P<0.05,P<0.01).CVA患者外周血CD4+CD25+ Treg和CD4+ CD25+ Foxp3+Treg均明显低于对照组,但都明显高于哮喘组(P<0.05,P<0.01).CVA咳嗽程度重组外周血CD4+、CD4+CD25+ Treg、CD4+ CD25+ Foxp3+Treg表达水平及CD4+/CD8+比值都明显低于咳嗽程度轻组(P<0.05,P<0.01).结论 CVA患者存在明确的外周血调节性T细胞和辅助性T细胞异常表达,且随着症状加重这些异常表达趋于显著.  相似文献   

18.
目的 :检测卵巢癌患者组织及外周血CD8~+T细胞中调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)相关分子标志物的表达率,探讨其在卵巢癌发生发展中的临床意义。方法:用流式细胞术检测31例卵巢癌患者、31例卵巢良性肿瘤患者和31例健康对照者的外周血,以及14例卵巢癌组织和12例卵巢良性肿瘤组织CD8~+T细胞中Foxp3、CD25、CD28、CTLA-4及GITR的表达率。结果:Foxp3和CTLA-4在卵巢癌组织CD8~+T细胞中的表达率显著高于卵巢良性肿瘤组织(P<0.05);CD28在卵巢癌组织CD8~+T细胞中的表达率显著低于卵巢良性肿瘤组织(P<0.05)。卵巢癌患者外周血CD8+T细胞中Foxp3、CD25、CTLA-4的表达率显著高于卵巢良性肿瘤患者和健康对照者(P<0.05),CD28的表达率显著低于卵巢良性肿瘤患者和健康对照者(P<0.05)。结论:卵巢癌组织及外周血CD8~+Treg所占的比例显著高于卵巢良性肿瘤组及健康对照组,且CD8~+T细胞中Foxp3的表达率可能对了解卵巢癌进展状况有一定帮助。  相似文献   

19.
目的研究溃疡性结肠炎(UC)患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞数量、相关细胞因子的水平以及Foxp3基因的表达,分析它们在UC发病机制中的作用。方法收集UC患者及健康对照组外周抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞。PE标记的抗CD4单抗,FITC标记的抗CD25单抗,作双色流式细胞术,分析UC患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞百分率,ELISA法检测血清中相关细胞因子IL-10、TGF-β1的水平,RT-PCR检测T细胞Foxp3 mRNA的表达。结果与正常对照组相比,UC患者外周血CD4 T、CD25 T细胞百分率作及CD4 CD25 T/CD4 T均显著下降(P均<0.05),细胞因子IL-10、TGF-β1的水平也显著降低(P<0.05),T细胞Foxp3 mRNA的表达也明显降低(P<0.05)。结论UC患者外周血存在细胞免疫功能失调,CD4 CD25 调节性T细胞数量与功能状态发生改变,T细胞耐受机制的破坏可能与UC的疾病活动状态和发病机制有关。  相似文献   

20.
毕玉田  洪新  曹国强  吴奎 《重庆医学》2007,36(6):511-513
目的 本研究观察糖皮质激素吸入对急性发作期哮喘患者外周血CD4 T细胞Foxp3的影响.方法 经支气管激发试验确诊的咳嗽变异性哮喘患者12例,予以辅舒酮吸入剂吸入治疗,分别于治疗前及治疗半年后测定其引起FEV1降低20%的乙酰甲胆碱浓度(PC20-FEV1).采集外周血,以流式细胞仪方法检测CD4 CD25 Foxp3 T细胞的比例,并分离外周血单个核细胞,提取其总RNA,以RT-PCR方法检测其Foxp3 mRNA的表达.结果 咳嗽变异性哮喘患者外周血中CD4 Foxp3 T细胞的比例显著低于健康对照者.经辅舒酮吸入治疗半年后气道反应性逐渐下降,外周血中CD4 CD25 Foxp3 T细胞比例显著增加,Foxp3 mRNA表达亦逐渐增加,且与气道反应性呈显著负相关.结论 辅舒酮可有效降低咳嗽变异性哮喘患者气道高反应性,且此变化与CD4 CD25 Foxp3 T细胞增加,Foxp3 mRNA表达增强相关.  相似文献   

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