RT-PCR法检测外周原始神经外胚叶瘤石蜡包埋组织中EWS-FLI1融合基因

目的 研究嵌套式逆转录-聚合酶链反应(nested RT-PCR)方法检测外周原始神经外胚叶瘤石蜡包埋组织中EWS-FLI1融合基因的可行性和临床意义。方法 收集12例外周原始神经外胚叶瘤及8例对照肿瘤标本,均为福尔马林固定石蜡包埋组织。EWS-FLI1融合基因检测方法采用嵌套式RT-PCR法。看家基因B-actin为内参照。结果 9例标本检测到β-actin片断,6例检测到EWS-FLI1融合基因表达,其中,“1型”4例,“2型”2例。8例对照肿瘤中未检测到EWS-FLI1基因。结论 在外周原始神经外胚叶瘤石蜡包埋组织中,用嵌套式RT-PCR检测EWS-FLI1融合基因是可行的方法,检测结果对肿瘤鉴别诊断和预后判断有意义。     

荧光原位杂交与逆转录聚合酶链反应在尤文肉瘤/原始神经外胚层肿瘤分子诊断中的应用

目的探讨运用荧光原位杂交（FISH）与逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测尤文肉瘤/原始神经外胚层肿瘤（ES/PNET）石蜡包埋组织特异性染色体易位的临床应用价值.方法收集ES/PNET 10例,分离石蜡包埋组织中的肿瘤细胞,利用Vysis公司的EWSR1双色易位分离探针,间期核FISH检测EWS基因的易位.运用RT-PCR检测t（11;22）（q24;q12）和t（21;22）（q22;q12）形成的融合转录子EWS-FLI1和EWS-ERG.结果10例ES/PNET中FISH观察9例有EWS基因的易位.RT-PCR 8例检测出EWS-FLI1的表达,没有检测出EWS-ERG的表达.结论利用FISH与RT-PCR检测ES/PNET石蜡包埋组织特异性染色体易位可作为可靠的分子诊断指标;两者相比,FISH敏感性和稳定性要优于RT-PCR.     

石蜡包埋隆突性皮肤纤维肉瘤组织中COL1A1/PDGFB融合基因的表达

目的检测隆突性皮肤纤维肉瘤(DFSP)中COL1A1／PDGFB融合基因的表达并探讨其临床病理学意义。方法应用一步法逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测12例4％甲醛固定、石蜡包埋DFSP组织中t(17;22)(q22;q13．1)染色体易位融合基因COL1A1／PDGFB mRNA表达,并选用2例纤维肉瘤、2例恶性纤维组织细胞瘤、3例平滑肌肉瘤、1例神经鞘瘤、1例纤维组织细胞瘤作为对照。结果12例DFSP中8例(67％)检出COL1A1／PDGFB mRNA的表达,其中PDGFB分别与COL1A1不同的位点相融合,而对照组均为阴性。结论用一步法RT-PCR检测石蜡包埋DFSF组织中特异性的COL1A1／PDGFB mRNA的表达,有助于DFSP的诊断和阐明其分子发生机制。     

34例滑膜肉瘤分子遗传学改变的诊断学意义

目的 探讨石蜡包埋滑膜肉瘤组织中t(x；18)(p11．2；q11．2)染色体易位融合基因SYT-SSX mRNA表达的诊断学意义和应用价值。方法 收集滑膜肉瘤标本34例，以14例梭形细胞肉瘤和小圆细胞肉瘤做对照(包括2例纤维肉瘤、2例平滑肌肉瘤、1例恶性神经鞘膜瘤、4例Ewing肉瘤、2例腺泡型横纹肌肉瘤、2例恶性黑色素瘤、1例血管外皮瘤)。在进行免疫组织化学指标检测的基础上，用一步法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测34例石蜡包埋滑膜肉瘤组织中SYT-SSX的表达。结果 34例滑膜肉瘤中30例获得有效RNA，28例(93．3％)检出SYT-SSX融合基因表达。其中14例表达SYT-SSXl型者中10例为双相型，9例表达SYT-SSX2型者中5例为单相分化型，5例SYT-SSXl／2均未检出。对照组均未检出SYT-SSX基因的表达。结论 SYT-SSX融合基因表达可作为诊断滑膜肉瘤新的分子诊断指标。一步法RT-PCR是一种理想而可行的用于石蜡包埋滑膜肉瘤组织SYT-SSX融合基因检测的分子诊断技术。     

应用逆转录-聚合酶链反应检测石蜡包埋腺泡状软组织肉瘤中ASPL-TFE3融合基因的表达

目的 探讨石蜡包埋腺泡状软组织肉瘤中t(X：17)(p11．2：q25)染色体易位融合基因ASPL-TFE3 mRNA表达的意义。方法 收集以4％甲醛固定、石蜡包埋腺泡状软组织肉瘤标本8例,运用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ASPL-TFE3融合基因mRNA表达,以管家基因β-肌动蛋白(actin)作为内对照检测mRNA质量。另以腺泡状横纹肌肉瘤6例,肾细胞癌6例,副神经节瘤2例,颗粒细胞瘤1例作为对照。结果8例腺泡状软组织肉瘤中4例检测到ASPL-TFE32型融合基因mRNA的表达,2例检测出ASPL-TFE31型融合基因mRNA的表达,余2例β-actin和ASPL-TFE3的检测均为阴性。对照组未检出ASPL-TFE3融合基因,其中6例腺泡型横纹肌肉瘤中4例有PAX3／7-FKHR融合基因的表达。结论 石蜡包埋组织中ASPL-TFE3融合基因表达可作为腺泡状软组织肉瘤诊断和鉴别诊断的分子指标,并有助于其分子发生机制的回顾性研究。     

黏液样/圆细胞型脂肪肉瘤石蜡包埋组织中FUS-CHOP融合基因检测的临床病理学意义

目的 探讨在甲醛固定、石蜡包埋组织中检测FUS-CHOP融合基因的可行性及其对黏液样／圆细胞型脂肪肉瘤的诊断和鉴别诊断的价值。方法 收集黏液样／圆细胞型脂肪肉瘤档案标本44例,以非典型性／分化良好型脂肪肉瘤、多形性脂肪肉瘤、低度恶性黏液纤维肉瘤／黏液样恶性纤维组织细胞瘤等作为阴性对照,共60例。所有标本均为甲醛固定、石蜡包埋组织。用嵌套式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测FUS-CHOP融合基因mRNA表达并经测序证实,以看家基因PGK作为内对照检测mRNA质量。结果 104例肿瘤标本中,93例(89．4％)可检出PGK mRNA表达,其中黏液样／圆细胞型脂肪肉瘤标本PGK阳性39例(88．6％),对照组PGK阳性54例(90％)。44例黏液样／圆细胞型脂肪肉瘤中20例可检出Ⅱ型FUS-CHOP融合基因表达,未能检测到Ⅰ型FUS-CHOP融合基因表达,排除内对照阴性病例5例,阳性率为51．3％(20／39)。对照组60例肿瘤标本均未检出FUS-CHOP融合基因表达。结论 (1)嵌套式RT-PCR方法检测FUS-CHOP mRNA表达可用于甲醛固定、石蜡包埋组织。(2)FUS-CHOP是黏液样／圆细胞型脂肪肉瘤的特异性分子遗传学标志物。采用嵌套式RT-PCR方法检测FUS-CHOP敏感性较高,特异性强,可用于该肿瘤的诊断和鉴别诊断。     

滑膜肉瘤融合基因SYT-SSX的检测及意义分析

目的研究逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)在滑膜肉瘤石蜡包埋组织中检测SYT-SSX融合基因的可行性和意义。方法20例滑膜肉瘤标本均用10％福尔马林固定、石蜡包埋。采用RT-PCR检测SYT-SSX融合基因。看家基因PBGD作为内参照。结果所有标本均可检测到PBGDmRNA的表达。18例(90％)检测到融合基因SYT-SSX的表达。SYT-SSX1型占12例(66．7％)，SYT-SSX2型占6例(33．3％)。结论在经福尔马林固定经石蜡包埋组织的滑膜肉瘤用RT-PCR方法检测SYT-SSX融合基因是可行的，有较高的敏感性。融合基因亚型可能为预后提供重要信息。     

滑膜肉瘤石蜡包埋组织SYT-SSX融合基因检测的临床病理意义

目的：探讨在石蜡包埋组织中检测SYT－SSX融合基因的可行性及其对滑膜肉瘤的诊断,分型和鉴别诊断的价值。方法：收集滑膜肉瘤标本38例,以恶性周围神经鞘膜瘤,纤维肉瘤,平滑肌肉瘤,尤文肉瘤,血管外皮肉瘤和转移性腺癌作为对照,共40例,均为甲醛固定,石蜡包埋组织,用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）方法检测SYT－SSX融合基因mRNA表达,以看家基因PBGD作为内对照检测mRNA质量。结果：78例标本中64例（占82．1％）可检出PBGD mRNA表达,38例滑膜肉瘤中33例中可检出SYT－SSX融合基因mRNA表达,对照组无一例检出SYT－SSX基因,去除PBGD及SYT－SSX均阴性病例1例,滑膜肉瘤SYT－SSX融合基因检出率为89．2％（33／37）,33例SYT－SSX阳性滑膜肉中,SYT－SSX1型22例,SYT－SSX2型6例,5例无法区分。融合基因类型与滑膜肉瘤组织学类型有关。10例双相型滑膜肉瘤均为SYT－SSX1型,而18例单相型滑膜肉瘤中SYT－SSX1型12例,SYT－SSX2型6例,二者差异有统计学意义（P＜0．05）,结论：（1）从石蜡包埋组织中检测SYT－SSX融合基因对滑膜肉瘤有较高的敏感性和特异性,可用于滑膜肉瘤的诊断和鉴别诊断;（2）SYT－SSX融合基因类型与滑膜肉瘤组织学类型相关,SYT－SSX2型仅见于单相型。     

肺原发性MALT型淋巴瘤API2-MALT1融合基因的检测及意义

目的 探讨在MALIT淋巴瘤石蜡组织中检测API2-MALIT1融合基因的可行性及API2-MALT1融合基因mRNA表达在肺MALT淋巴瘤诊断中的意义。方法 收集肺MALT淋巴瘤石蜡包埋组织标本10例,以慢性淋巴结炎石蜡包埋组织标本5例作阴性对照,β-肌动蛋白作内对照,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和巢式PCR结合,检测肺MALT淋巴瘤中。API2-MALT1融合基因的mRNA表达。结果 10例肺MALT淋巴瘤均检出内对照β-actin的mRNA表达,3例检出API2-MALTl融合基因的mRNA表达,被检出的3例病变均局限在一侧肺组织,单个病灶最大径小于5cm。其中2例出现不同程度的呼吸道症状,1例为体检发现,所有慢性淋巴结炎病例均未检出融合基因的表达。结论 通过RT-PCR和PCR扩增结合的方法检测石蜡包埋组织中API2-MALT1融合基因的表达是完全可行的,API2-MALT1融合基因的表达与MALIT淋巴瘤的病变范围有一定关系。     

显色原位杂交技术在检测ES/pPNETs染色体易位上的应用

显色原位杂交法（chromogenic in situ hybridization．CISH）作为一种核酸原位分子杂交技术方法,在普通光学显微镜下原位检测基因的扩增、染色体易位和异倍体分析。本实验室用显色原位杂交的方法检测常规福尔马林固定、石蜡包埋ES／pPNETs组织中22号染色体上特异性EWS基因易位,现将该技术对检测染色体异位方面的方法和体会介绍如下．[第一段]     

Ewing sarcoma/peripheral primitive neuroectodermal tumor: adult abdominal tumors with an Ewing sarcoma gene rearrangement demonstrated by fluorescence in situ hybridization in paraffin sections.

The differential diagnosis of small round cell tumors is exhaustive and requires ancillary studies. Relatively recently, fluorescence in situ hybridization (FISH) using probes for specific gene rearrangements has gained wide acceptance. This technique is particularly useful in the differential diagnosis of Ewing sarcoma/primitive neuroectodermal tumor (ES/PNET) and desmoplastic small round-cell tumor (DSRCT). In ES/PNET, the EWS gene is juxtaposed to the FLI-1 gene in 85% of cases and to the ERG gene in another 7% of cases; the EWS gene is juxtaposed to the WTI gene in DSRCT. Documentation of the EWS gene rearrangements in EWS/PNET has previously been demonstrated in frozen tissue. We report 2 unusual cases of EWS/PNET diagnosed in abdominal tumors in adults. Although the immunohistochemical results supported a diagnosis of ES/PNET, 1 case morphologically resembled DSRCT. The diagnosis in these 2 cases was confirmed by the FISH demonstration of EWS/FLI-1 gene fusion in paraffin-embedded tissue. Thus, the usefulness of FISH demonstration of an EWS gene rearrangement with these specific probes in such unusual cases is supported and is demonstrated in paraffin-embedded tissue.