miR-146a经TLR4/MyD88途径加速巨噬细胞迁移所致动脉硬化的作用机制

目的 探讨微小RNA-146a(miR-146a)经Toll样受体4(TLR4)/髓系分化因子88蛋白(MyD88)途径调控巨噬细胞迁移所致动脉硬化的具体机制。 方法 RAW264.7巨噬细胞分为空白组、ox-LDL组、miR-146a mimic组、miR-146a inhibitor组、shRNA-MyD88组、shRNA-NC组、shRNA-MyD88+miR-146a mimic组、shRNA-MyD88+miR-146a inhibitor组,除空白组,其他各组均用50 mg/L ox-LDL进行干预;采用Western blotting法检测TLR4、MyD88、核因子κB(NF-κB)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达水平。采用qPCR法检测miR-146a、TLR4、MyD88、NF-κB、IL-6基因表达水平。采用Transwell法检测巨噬细胞迁移能力。 结果 (1)ox-LDL组细胞内TLR4、IL-6蛋白含量及巨噬细胞迁移率均高于空白组(P均<0.01),miR-146a低于空白组(P<0.01);(2)miR-146a mimic组细胞TLR4 mRNA相对表达量及蛋白含量、巨噬细胞迁移率低于ox-LDL组,miR-146a mRNA相对表达量高于ox-LDL组(P均<0.01);miR-146a inhibitor组细胞TLR4 mRNA相对表达量及蛋白含量、巨噬细胞迁移率高于ox-LDL组,miR-146a mRNA相对表达量低于ox-LDL组(P均<0.01);(3)shRNA-MyD88组MyD88、NF-κB、IL-6蛋白含量、巨噬细胞迁移率低于ox-LDL组(P<0.01),miR-146a、TLR4表达无明显差异(P>0.05);shRNA-MyD88+miR-146a mimic组miR-146a表达高于shRNA-MyD88组,TLR4蛋白含量低于shRNA-MyD88组(P<0.01),MyD88、NF-κB、IL-6蛋白含量表达、巨噬细胞迁移率与shRNA-MyD88组无明显差异(P>0.05);shRNA-MyD88+miR-146a inhibitor组miR-146a表达低于shRNA-MyD88组,TLR4蛋白含量表达高于shRNA-MyD88组(P<0.01),MyD88、NF-κB、IL-6蛋白含量表达、巨噬细胞迁移率与shRNA-MyD88组无明显差异(P>0.05)。 结论 miR-146a是动脉粥样硬化的保护性因子,通过拮抗TLR4/MyD88途径调控炎症因子分泌进而抑制巨噬细胞迁移所致动脉粥样硬化进程,为动脉粥样硬化的防治提供新的治疗靶点。     

miRNA-27a对实验性肺结核大鼠免疫功能的调控作用及其机制

目的:探讨miRNA-27a对实验性肺结核模型大鼠免疫功能的调控作用,阐明其可能的作用机制.方法:经尾静脉注射结核杆菌悬液建立肺结核大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、miR-27a激动剂对照(agomir-NC)组和miR-27a激动剂(agomir)组,另取正常大鼠设为对照组,每组12只.agomir-NC组...     

前列腺小体miRNA-146a/TLR-4/NF-κB通路在EAP大鼠慢性炎症中的作用及大火草干预的研究

背景 目前对慢性前列腺炎（CP）的治疗未达到预期的疗效,亟需寻找新的治疗药物,本课题组前期研究发现大火草〔Anemone tomentosa （Maxim.）Péi〕对CP有较好的疗效,但具体作用机制还有待进一步研究。 目的 探讨前列腺小体源性微小RNA-146a（miRNA-146a）调控Toll样受体4（TLR-4）/核转录因子κB（NF-κB）通路在自身免疫性前列腺炎（EAP）大鼠慢性炎症中的作用及大火草干预的可能机制。 方法 2021年12月—2022年6月,将42只Wistar大鼠采用随机数字表法分正常组、模型组、大火草低剂量组、大火草中剂量组、大火草高剂量组、miRNA-146a激动剂（mimics）组、miRNA-146a抑制剂（inhibitor）组,每组6只。药物干预后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA,采用蛋白质印迹法检测TLR-4、细胞内抑制性蛋白κB（IκB）、磷酸化细胞内抑制性蛋白κB（p-IκB）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）,酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）检测炎症因子。 结果 与正常组比较,各组前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA表达均下调（P<0.01）。与模型组比较,大火草中、高剂量组,miRNA-146a mimics组前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA表达均上调（P<0.01）;miRNA-146a inhibitor组前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA表达下调（P<0.01）。大火草和miRNA-146a mimics可以显著降低前列腺组织TLR-4、p-IκBα、TRAF6蛋白表达（P<0.01）;促进前列腺组织IκBα蛋白表达上调（P<0.01）;降低大鼠血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6）、白介素8（IL-8）、干扰素γ（IFN-γ）水平（P<0.05）。大火草和miRNA-146a mimics可以减轻前列腺组织炎症细胞浸润,改善前列腺组织病理损伤。 结论 前列腺小体源性miRNA-146a可以调节TLR-4/NF-κB通路参与EAP大鼠前列腺局部病理变化。大火草抗EAP大鼠慢性炎症的作用机制可能与其调控前列腺小体源性miRNA-146a/TLR-4/NF-κB通路有关。     

TLR4 mAb对人正常肝内胆管上皮细胞LPS-TLR4-NF-κB通路的影响

目的对脂多糖( LPS)及Toll样受体4单克隆抗体( TLR4 mAb)作用于体外培养的人肝内胆管细胞( HiBEC)后其TLR4 mRNA和核转录因子-κB( NF-κB) mRNA的表达情况进行了研究。方法体外培养HiBEC,采用 RT-PCR 法检测经LPS和不同浓度的TLR4 mAb作用后,HiBEC细胞株中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达情况。结果 LPS可以上调HiBEC中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达( P<0．05);而 LPS 作用于 TLR4 mAb 处理后的 HiBEC 中其TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达下调;高质量浓度TLR4 mAb使NF-κB mRNA的表达下调更明显( P<0．05)。结论LPS 能上调HiBEC中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达;而 TLR4 mAb 则能拮抗 LPS 对 HiBEC 的刺激作用,下调TLR4 mRNA和NF-κB mRNA 的表达。     

miRNA-146a在炎症与肿瘤之间的调节作用

越来越多的临床证据和研究显示,慢性感染和炎症可以导致癌变。其中,MicroRNA(miRNA)与炎症、肿瘤相关的信号转导通路具有密切的联系。miRNA是一种非编码的短链RNA,它在转录后水平调节多个靶基因的表达,进而参与机体诸多生理、病理过程。miRNA-146a更是今年来研究的热点,NF-κB依赖的miR-146a,在炎症与肿瘤之间可能具有桥梁作用;同时我们推测miR-146a对肿瘤相性巨噬细胞(TAM)的功能也有强烈的调控作用,miR-146a的过表达将有助于TAM对肿瘤的促发展作用。我们就miR-146a在炎症及肿瘤中调节作用的研究进展进行综述。     

TLR4和NF-κB及细胞因子炎症反应在急性胰腺炎发病中的作用

目的研究在急性胰腺炎发病过程中较全面反映出Toll样受体4(TLR4)通过激活NF-κB引起大量炎性递质的释放及其临床意义。方法通过应用凝胶迁移率改变分析法检测轻症和重症急性胰腺炎发病1、3、7d外周血中性粒细胞NF-κB的表达情况及应用免疫荧光流式细胞技术检测外周血单核细胞TLR4的表达,并同时检测血TNF-α、IL-1β、IL-6,分析各组数据的相关性。结果入院第1天,MAP组、SAP组TLR4表达及NF-κB活化水平显著升高且明显高于对照组,SAP组TLR4表达较MAP组更为增高,随时间延长而逐渐下降。通过Pearson相关分析表明SAP组、MAP组患者发病第1、3、7天外周血PMN内NF-κB蛋白活性及PBMCs表面TLR4的表达与APACHE-Ⅱ评分及TNF-α、IL-1β水平的变化一致,呈正相关,并随时间相关性呈递减趋势。与IL-6变化无相关性。结论在人体急性胰腺炎发病、病情进展中较全面动态地反应出TLR4通过激活NF-κB,引起大量炎性递质的释放,加重病情的进展,为今后预测疾病进展及防治提供依据。     

沉默微小RNA-34a对类风湿关节炎大鼠症状改善和血清炎症因子水平的影响及其机制

目的 探讨沉默微小RNA-34a(miRNA-34a)对类风湿关节炎大鼠关节症状改善和血清炎症因子水平的影响及其机制.方法 将60只大鼠随机分为空白组、模型组、过表达组、沉默组各15只,其中模型组、过表达组、沉默组建立类风湿关节炎模型.建模成功后,于沉默组大鼠双后肢骨关节处注射含10μL miRNA-34a抑制载体的慢...     

虫草素对脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠的保护作用及TLR4/NF-κB通路的影响

目的：探讨虫草素对脂多糖诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠的保护作用及Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）通路的影响。方法：通过脂多糖诱导建立ALI大鼠模型,造模48只大鼠随机分成：模型组、虫草素低（5 mg/kg）、中（10 mg/kg）、高（20 mg/kg）剂量组,12只/组;另设12只健康大鼠作为对照组。虫草素各剂量组大鼠腹腔注射相应剂量的虫草素,模型组和对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水,连续给药1周（1次/d）。检测大鼠动脉血氧分压（PaO2）、二氧化碳分压（PaCO2）、肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）、TLR4、NF-κB信使核糖核酸（mRNA）和蛋白水平,观察肺组织形态学并进行肺损伤评分。结果：对照组大鼠肺泡组织结构正常;模型组肺泡组织受损,毛细血管扩张,红细胞渗漏和肺组织液分泌,可见炎症细胞浸润;虫草素干预后,肺泡组织趋于正常,肺泡壁变薄,红细胞、分泌液减少,炎症细胞浸润减少。与对照组比较,模型组大鼠PaO2水平降低,PaCO2、肺损伤评分、肺组织TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白水平升高（P<0.05）;与模型组比较,虫草素低、中、高剂量组大鼠PaO2水平依次升高,PaCO2、肺损伤评分、肺组织TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白水平依次降低（P<0.05）。结论：虫草素可改善ALI大鼠肺功能和肺损伤,降低肺部炎症反应,其机制可能与虫草素抑制ALI大鼠肺组织TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达进而抑制TLR4/NF-κB通路的激活有关。     

miR-21和miR-146 a在癫痫患者中的表达及临床意义

目的 分析微小RNA-21(miR-21)和miR-146a在癫痫患者血清中的表达及临床意义.方法 选择2017年4月—2019年5月成都中医药大学附属第五人民医院/成都市第五人民医院神经内科诊治的癫痫患者99例作为癫痫组,选择同期在医院进行体检的健康者99例作为健康对照组.比较2组血清miR-21和miR-146a表...     

miRNA-146a和Toll样受体2对幼鼠细菌性脑膜炎的影响

目的 探讨微小RNA146a(miRNA-146a)和Toll样受体2(TLR2)信号通路在细菌性脑膜炎免疫病理机制中的作用.方法 18只小鼠分为对照组、模型组和Pam3CSK4(TLR2拮抗剂)预处理组,采用侧脑室注射法制备肺炎链球菌(SP)性脑膜炎模型,用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠血清肿瘤坏死因子-a(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,荧光卖时定量PCR(QRT-PCR)检测TLR2、髓样分化因子88(MyD88)、miRNA-146a mRNA表达,观察各组指标变化.结果 与对照组比较,注射SP 24 h后模型组小鼠血清TNF-α、IL-6和MCP-1水平明显增高(P＜0.01);与模型组比较,则Pam3CSK4预处理组TNF-a、IL-6和MCP-1明显下降(P＜0.01);与对照组比较,在注射SP 24 h后模型组小鼠脑组织的TLR2、MyD88、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、核转录因子-kappa B(NK-κB)和miRNA-146a mR-NA表达明显增高(P＜0.01),与模型组比较,Pam3CSK4预处理组各指标水平明显下降(P＜0.01).结论 miRNA-146a参与TLR2及其信号通路调节幼鼠细菌性脑膜炎.     

血管紧张素-(1-7)对巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子表达的影响

目的探讨血管紧张素(Ang)-(1-7)是否可以调节巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子的表达及TLR4/NF-κB通路在其中的作用。方法佛波酯(130 ng/ml)诱导人单核细胞(THP-1)分化为巨噬细胞,分别以不同浓度(0.01、0.1、1μmol/L)的Ang-(1-7)和相同浓度氧化低密度脂蛋白(ox-LDL,50 mg/L)联合刺激,并以A-779[Ang-(1-7)特异性受体阻断剂,10-7 mol/L]预处理以及用TLR4单克隆抗体(5 mg/L)阻断TLR4/NF-κB信号通路。ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的含量。实时PCR检测TLR4的mRNA水平,免疫印迹法检测细胞总蛋白TLR4蛋白水平、IκB蛋白的磷酸化水平以及胞浆蛋白、核蛋白NF-κB蛋白水平。结果与对照组比较,Ang-(1-7)干预下调泡沫细胞分泌的TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达,呈现剂量依赖性(P0.05),其作用可被A-779部分抑制;当TLR4/NF-κB信号通路被TLR4单克隆抗体阻断后,Ang-(1-7)作用可被部分抑制。Ang-(1-7)干预下调泡沫细胞TLR4mRNA和蛋白表达水平,下调IκB蛋白的磷酸化水平,抑制NF-kB蛋白由细胞质向细胞核内转位(P0.05),其作用可被A-779部分抑制。结论 Ang-(1-7)可以抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,该过程与TLR4/NF-κB信号转导通路抑制有关。     

灼烧技术治疗慢性扁桃体炎对患者免疫功能的影响

目的 探讨灼烧技术治疗慢性扁桃体炎(CT)对患者免疫功能的影响和作用机制.方法 选择2013年6月至2016年12月于西南医科大学附属中医医院耳鼻咽喉科门诊就诊并临床诊断为CT的患者20例为观察组,同期西南医科大学在校学生及西南医科大学附属中医医院招募的健康志愿者6例为对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测观察组治疗前后Toll样受体(TLR)-核因子-κB(NF-κB)信号通路中的TLR2、TLR4、NF-κB在外周血的水平,同时检测部分关键细胞因子白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-10及干扰素γ(INF-γ)、转化生长因子β(TGF-β)在外周血的水平.结果 观察组CT患者灼烧治疗前血清中TLR2、TLR4、NF-κB、IL-4、IL-5、IL-10、INF-γ及TGF-β水平均明显高于对照组(P＜0.05);与治疗前比较,观察组患者治疗后上述指标均明显降低(P＜0.05).观察组患者治疗前血清中TLR2、TLR4、IL-4、IL-5、IL-10、INF-γ及TGF-β表达水平与NF-κB无明显相关性(P＞0.05);灼烧治疗后血清中只有TLR2水平与NF-κB呈正相关(r=0.49,P=0.04),而其他检测指标与NF-κB无明显相关性(P＞0.05).结论 灼烧技术治疗CT后患者血清中免疫因子水平明显降低,其治疗CT的机制可能与TLR-NF-κB信号通路及该通路的关键细胞因子关系密切.     

乌司他丁对创伤失血性休克大鼠肺炎症介质及其信号通路miR-146a调控TLR4/NF-κB的影响研究

目的探讨乌司他丁对创伤失血性休克大鼠肺炎症介质及其信号通路miR-146a/TLR4/NF-κB的影响。方法将60只SD大鼠经股动脉放血制作休克模型,采用随机数字表法分为A、B、C三组,每组20只,其中A组不予复苏,B组休克后60 min给予醋酸钠林格液复苏,C组采用醋酸钠林格液联合乌司他丁复苏。采集大鼠复苏后肺组织,对肺组织中miR-146a、TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6以及IL-10的mRNA水平予以检测,采用Western blotting对肺组织中TLR4、NF-κB蛋白相对表达量予以检测,对三组大鼠肺组织病理学变化予以观察。结果与A组、B组相比,C组大鼠miR-146a、IL-4、IL-10 mRNA水平提高,TNF-α、IL-1、IL-6水平下降,差异有统计学意义(P0.05);三组大鼠肺组织TLR4、NF-κB蛋白表达水平相比,C组低于A组、B组,差异有统计学意义(P0.05)。结论乌司他丁能够通过增强miR-146a表达复苏创伤失血性休克大鼠,对TLR4/NF-κB信号通路起到负反馈调控作用,维持促炎因子与抑炎因子平衡,对肺组织具有保护作用。     

间歇性禁食对小鼠脑缺血再灌注TLR4/NF-κB通路的作用

目的 探讨间歇性禁食对小鼠脑缺血再灌注损伤中TLR4/NF-κB通路的作用及对脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法 KM小鼠45只平均随机分为假手术组(Sham组)、正常饮食组(CIRI组)和间歇性禁食组(IF组)。IF组造模前连续间歇性禁食14天,除Sham组外,其他各组构建小鼠脑缺血再灌注损伤模型,观察各组小鼠行为学变化,HE染色观察细胞形态,免疫组化法测定TLR4及NF-κB阳性细胞的表达情况。结果 IF组神经功能缺损评分较CIRI组明显下降(P<0.05),IF组TLR4及NF-κB阳性细胞表达较CIRI组明显下降(P<0.05)。HE染色显示IF组缺血半暗带及海马区神经元细胞深染及皱缩较CIRI组明显减轻,细胞形态明显改善。结论 间歇性禁食对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用可能与减轻炎症,抑制TLR4及NF-κB的表达有关。     

TLR4/NF-κB信号通路对变应性鼻炎的调控作用及中药治疗的研究进展

变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR) 耳鼻咽喉科的常见病种,其中辅助性T细胞Th(T helper lymphocyte,Th)1/Th2及Th17/调节性T细胞(regulatory cell,Treg)失调均可引起AR,通过阻断Toll样受体(toll like receptor,TLR)4/核转录因子(nuclear factor-κB,NF-κB)经典信号通路来治疗AR可能与其能调控Th1/Th2及Th17/Treg平衡和影响体内特异性免疫球蛋白E(immunity globulin E,IgE)、相关炎性细胞因子的作用有关。近年来,TLR4/NF-κB信号通路的分子结构与功能等方面的研究逐渐增多,但其对AR发生和发展的调控机制仍有待于进一步探究。该文对TLR4/NF-κB信号通路在AR中的作用新进展进行总结,或可能成为治疗AR的新方向,这也将为中药治疗AR的深入研究提供新思路。     

竹节参皂苷通过Toll样受体4/核因子-κB信号通路调控免疫功能对肺癌大鼠模型的影响

目的:研究竹节参皂苷对原发性肺癌的治疗作用以及对Toll样受体4(TRL4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的调控作用,阐明竹节参皂苷治疗原发性肺癌的作用机制。方法:大鼠灌注碘化油液诱导原发性肺癌模型。造模后1周,竹节参皂苷溶于生理盐水后灌胃给药,连续20周。观察大鼠的一般状态,计算肺癌肿瘤组织的体积和数量,ELISA测定炎症因子表达情况,流式细胞术测定CD₃⁺、CD₄⁺、CD₈⁺免疫细胞数量,Western blot测定TRL4、NF-κB p65和环氧合酶2(COX2)蛋白表达情况。结果:竹节参皂苷可有效抑制肿瘤体积增大和数量增加,减少咳嗽频率,增加CD₃⁺和CD₄⁺免疫细胞数量,减少CD₈⁺数量,抑制血清中炎症因子水平。Western blot结果表明,竹节参皂苷可有效抑制TRL4、NF-κB p65和COX2蛋白表...