COL4A1促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化

目的 探讨Ⅳ型胶原蛋白1(COL4A1)对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的作用,及其上游调控机制。方法 将COL4A1过表达载体、人着色性干皮病基因(XPD)过表达载体、miR-29a-3p模拟物、miR-29a-3p抑制物、Si-COL4A1、Si-XPD按实验目的转染各组细胞,以空载质粒、NC-模拟物、NC-抑制物、NC-SiRNA作为相应的对照组;qRT-PCR检测COL4A1和XPD mRNA水平;蛋白质印迹法检测COL4A1、XPD和EMT相关蛋白质水平;MTT检测细胞活力;Transwell实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力;萤光素酶报告基因实验验证miR-29a-3p和COL4A1的靶向关系。结果 肝癌组织中COL4A1 mRNA[(3.25±1.10) vs (0.88±0.45),P<0.01]和蛋白质[(2.58±0.50) vs (1.00±0.14),P<0.01]水平均高于癌旁组织。SMMC-7721、HepG2(P<0.01)和Hep3B(P<0.05)细胞株的COL4A1 mRNA和蛋白质水平均高于L02细胞。与H...     

PRDX6过表达对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制

目的:探讨过表达过氧化物氧化还原蛋白6(PRDX6)基因对肝细胞癌增殖、侵袭和迁移的影响,并阐明其可能的作用机制.方法:人肝癌HepG2和Hep3B细胞分为过表达PRDX6组(转染过表达质粒PIRES-EGFP-PRDX6)和空载体组(转染对照质粒PIRES).实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western bl...     

ELK-3蛋白在肝癌组织中的表达及其对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响

目的：探讨转录因子ELK-3与肝癌患者临床病理特征的关系及ELK-3对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响,并阐明其作用机制。方法：选取80例肝癌患者癌组织及49例癌旁正常组织石蜡标本、18例肝癌患者癌组织及癌旁正常组织新鲜术后标本,采用免疫组织化学法和Western blotting法检测ELK-3蛋白在肝癌及癌旁正常组织中的表达,探讨ELK-3与肝癌患者临床病理特征的关系。选取处于对数生长期的人肝癌HepG2细胞,设立对照组（control-siRNA）和ELK-3干扰组（ELK-3-siRNA）,将ELK-3 siRNA转染至HepG2细胞,通过细胞划痕实验及体外Transwell小室实验观察肝癌HepG2细胞的迁移和侵袭能力。结果：石蜡组织标本免疫组织化学染色,与癌旁正常组织比较,肝癌组织中ELK-3蛋白阳性表达率明显升高（P<0.05）,且ELK-3蛋白阳性表达率与肝癌患者肿瘤数、TNM分期、Edmondson分级和门静脉浸润有关联（P<0.05）。新鲜术后标本Western blotting法检测,与癌旁正常组织比较,18例肝癌患者肝癌组织中ELK-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与对照组比较,ELK-3-siRNA组细胞的迁移距离明显变短（P<0.05）,侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。结论：ELK-3在肝癌组织中的表达水平明显升高。干扰ELK-3会抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,表明ELK-3蛋白可以通过抑制肝癌细胞的迁移和侵袭对其产生影响,从而在肝癌发生发展过程中起重要作用。     

RIP1在肝癌组织中的表达意义及其对细胞侵袭、迁移的影响

探讨受体相互作用蛋白激酶-1(RIP1)在肝癌组织及癌旁组织中的表达情况,并探索其对肝癌细胞侵袭和迁移的分子调控机制。收集肝癌和癌旁组织,免疫组化检测RIP1蛋白的表达,筛选高表达RIP1的肝癌细胞系。对肝癌细胞系进行RIP1沉默处理并设置阴性对照。采用western blot及RT-PCR法检测RIP1的表达量;Tranwell观察细胞侵袭能力;细胞划痕观察细胞迁移能力。结果显示, 48例肝癌组织中,22例存在RIP1蛋白阳性表达,阳性率为45.83%,其中,强阳性患者为15例,中等及弱阳性7例,该研究中有6例复发患者。RIP1在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P＜0.05),高表达RIP1患者的总生存率和无复发生存率显著低于低表达RIP1的患者(均P＜0.05)。抑制RIP1基因后其相对表达量、细胞侵袭、迁移能力均下降(P＜0.05)。RIP1在肝癌中存在高表达,可能参与肝癌细胞侵袭与迁移过程。     

RIP1在肝癌组织中的表达意义及其对细胞侵袭、迁移的影响

探讨受体相互作用蛋白激酶-1(RIP1)在肝癌组织及癌旁组织中的表达情况,并探索其对肝癌细胞侵袭和迁移的分子调控机制。收集肝癌和癌旁组织,免疫组化检测RIP1蛋白的表达,筛选高表达RIP1的肝癌细胞系。对肝癌细胞系进行RIP1沉默处理并设置阴性对照。采用western blot及RT-PCR法检测RIP1的表达量;Tranwell观察细胞侵袭能力;细胞划痕观察细胞迁移能力。结果显示,48例肝癌组织中,22例存在RIP1蛋白阳性表达,阳性率为45.83%,其中,强阳性患者为15例,中等及弱阳性7例,该研究中有6例复发患者。RIP1在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.05),高表达RIP1患者的总生存率和无复发生存率显著低于低表达RIP1的患者(均P<0.05)。抑制RIP1基因后其相对表达量、细胞侵袭、迁移能力均下降(P<0.05)。RIP1在肝癌中存在高表达,可能参与肝癌细胞侵袭与迁移过程。     

XB130在肝癌组织中的表达及其对细胞侵袭、迁移的影响

  目的  探讨新型接头蛋白XB130在肝癌组织及癌旁组织中的表达情况及与组织病理之间的关系,并探索其对肝癌细胞侵袭和迁移的影响。  方法  （1）收集染色肝癌病理切片并分析;（2）筛选各肝癌细胞系HCCLM3,HepG2,SMMC-7721,Hep3B,MHCC-97中 XB130的表达情况并抑制XB130基因。采用Western blotting及RT-PCR法检测XB130的表达量;Tranwell观察细胞侵袭能力;细胞划痕观察细胞迁移能力。  结果  90例肝癌临床病理样本中,染色阳性率为44.4%（40例）,在阳性染色标本中强阳性29例,中-弱阳性11例,同时研究发现临床样本中,24例为肝癌复发患者。XB130在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织（P < 0.05）,肝癌中XB130表达越高,患者复发率较高,且术后生存时间越短（P < 0.05）。抑制XB130基因后其相对表达量、细胞侵袭、迁移能力均下降（P < 0.05）。  结论  XB130有望成为新的肝癌预后标志物,下调肝癌细胞XB130的表达可减弱肝癌细胞侵袭和迁移能力。     

氧化苦参碱对肝癌细胞QGY-7703迁移侵袭能力和MMP-9表达的影响

目的通过观察氧化苦参碱(oxymatrine,OM)对人肝癌细胞QGY-7703体外迁移侵袭能力和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)表达的影响,初步探讨氧化苦参碱对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响及可能的分子机制。方法体外培养人肝癌细胞QGY-7703并用OM干预后,Transwell迁移和侵袭实验检测OM对细胞迁移侵袭能力的影响;定量PCR检测细胞中MMP-9 mRNA的表达水平,Western Blot检测细胞中MMP-9蛋白的表达水平。结果与细胞对照组相比,低浓度(1mg.mL-1)OM干预组QGY-7703细胞的迁移侵袭能力未发生显著变化;中浓度(2.5mg.mL-1)和高浓度(5mg.mL-1)OM干预组细胞的迁移侵袭能力受到明显抑制(P<0.01),同时伴有MMP-9 mRNA和蛋白表达水平的下降(P<0.01)。结论 OM在体外可抑制人肝癌细胞QGY-7703的迁移侵袭能力,并能抑制MMP-9的表达,提示OM可能通过抑制MMP-9的表达参与抗肿瘤细胞迁移侵袭的作用。     

肝星状细胞经趋化因子SDF-1/CXCR4轴途径促进肝癌细胞侵袭的作用及其机制

目的：探讨肝星状细胞（HSC）通过SDF-1/CXCR4轴对肝癌细胞侵袭的影响和可能机制,为研究肝癌的侵袭过程提供依据。方法: 采用Western blotting和RT-PCR检测HSC LX02和肝癌细胞MHCC97、SMMC7721、Hep3B、HepG2中SDF-1和CXCR4的表达。采用Transwell实验检测LX02共培养或外源性SDF-1干预对肝癌细胞HepG2以及CXCR4基因沉默后的HepG2侵袭的影响。Western blotting法检测上皮标志E-Cadherin和间质标志Vimentin的表达水平。结果：与肝癌细胞比较,LX02中趋化因子SDF-1呈高表达（P<0.05）。4株人肝细胞癌细胞均有CXCR4高表达。HSC或SDF-1均能促进肝癌细胞HepG2侵袭（P<0.05）,并诱导E-Cadeherin蛋白表达下调,Vimentin蛋白表达上调。通过RNA干扰技术靶向沉默肝癌细胞CXCR4基因后,HSC和SDF-1对肝癌细胞HepG2侵袭能力均无明显影响（P>0.05）,肝癌细胞E-Cadeherin、Vimentin蛋白及mRNA表达水平亦无明显变化。结论：HSC可通过SDF-1/CXCR4轴促进肝癌细胞侵袭,其机制可能与诱导肝癌细胞上皮-间质转化有关。     

ET-1在食管鳞状上皮细胞癌中的表达及其对癌细胞侵袭的影响

目的 探讨内皮素-1(Endothelin 1,ET-1)对食管鳞状上皮细胞癌细胞侵袭作用的影响.方法 用Western blotting法检测75例食管鳞癌组织及配对正常食管粘膜上ET-1的蛋白表达,并用双重ET受体抑制剂Bosentan进行干预,用Matrigel体外侵袭试验显示食管癌细胞侵袭能力.结果 Western blotting法显示74.7%(56/75)的食管癌组织中有ET-1蛋白高表达;Bosentan抑制ET-1与其受体结合并降低其生物作用,显著抑制食管癌细胞的体外侵袭.结论 ET-1可增强人类食管鳞癌细胞的侵袭力.     

沉默YAP1可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力

目的探究沉默Yes 相关蛋白1（YAP1）对鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR和 Western blot方法检测YAP1在鼻咽癌细胞系中的表达水平;在鼻咽癌细胞S26和S18中转染3条合成的小干扰RNA：si-NC, si- YAP1#1和si-YAP1#2,以转染阴性对照si-NC的细胞作为对照组,转染si-YAP1#1和si-YAP1#2的细胞作为实验组,实时荧光定 量PCR和Western blot检测转染后的干扰效率;通过细胞计数、平板克隆形成等方法评估转染si-YAP1#1和si-YAP1#2后的实验 组和转染si-NC的对照组对鼻咽癌细胞增殖能力的影响;用划痕和Transwell 方法分析各组细胞迁移与侵袭能力的变化; Western blot检测各组细胞中c-myc、上皮性钙黏蛋白（E-cadherin）、神经性钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）等与细 胞增殖和上皮间质转化相关蛋白的表达变化。结果YAP1在鼻咽癌细胞系中高表达;与阴性对照组相比,转染si-YAP1#1和si- YAP1#2的实验组细胞中YAP1的mRNA及蛋白水平均显著降低（P<0.05）;生长计数、平板克隆、划痕及Transwell等实验结果 均显示转染si-YAP1#1和si-YAP1#2的实验组细胞的生长和克隆能力、划痕愈合能力及侵袭能力较阴性对照组细胞明显下降 （P<0.01）;且相较阴性对照组,实验组细胞中c-myc、N-cadherin和Vimentin等蛋白的表达水平降低,E-cadherin的表达量增加。 结论YAP1在鼻咽癌细胞系中高表达,在鼻咽癌细胞中利用siRNA靶向敲低YAP1的表达后可以抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移 及侵袭能力,提示YAP1可以作为一个潜在的鼻咽癌临床治疗干预靶点。     

干扰AGXT2L1表达对肝细胞癌细胞运动、迁移和侵袭能力的影响

目的:研究AGXT2L1是否能够影响肝细胞癌细胞系的运动、迁移和侵袭。方法:设计并构建AGXT2L1的靶向siRNA,验证敲低效果后,采用划痕愈合实验观察细胞的二维运动能力,采用Transwell实验观察细胞的三维迁移能力,采用带基质胶的Transwell实验观察细胞的侵袭能力。结果:与对照组相比,干扰AGXT2L1的表达可以显著抑制两种肝细胞癌细胞系(97H和HCCLM3)的运动、迁移和侵袭能力。结论:AGXT2L1具有调控肝细胞癌细胞运动、迁移和侵袭的功能,说明AGXT2L1可能在肝细胞癌的转移过程中发挥了重要作用;AGXT2L1是治疗肝细胞癌的潜在靶标。     

槲皮素对人肝癌细胞生长、迁移能力的影响及机制研究

目的探讨槲皮素对人肝癌细胞(HepG2)生长增殖及迁移能力的影响及机制。方法培养对数生长的HepG2细胞,MTT试验分析槲皮素对HepG2生长的影响,划痕实验观察加入槲皮素前、后HepG2迁徙能力的变化。Western blot检测其中细胞迁移黏附因子(IQGAP1)表达的变化。结果加入槲皮素后,HepG2细胞逐渐变圆、脱落,增殖变慢;MTT实验显示HepG2细胞的生长抑制效应与槲皮素有浓度、时间依存关系;Western blot显示加入槲皮素后HepG2细胞中IQGAP1表达明显降低。结论槲皮素能明显抑制HepG2细胞生长增殖,减弱其迁移能力,从而达到抑制恶性细胞增殖转移的作用,这种能力可能是通过抑制IQGAP1表达实现的。     

miR-185对肝癌细胞生长增殖及侵袭迁移的影响

目的 探讨miR-185对人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721生长增殖、侵袭迁移能力的影响.方法 构建miR-185过表达载体、合成miR-185反义寡聚核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO),经脂质体转染肝癌细胞HepG2和SMMC-7721.利用CCK-8和Transwell小室实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力;生物信息学数据库预测结合基因芯片结果确定miR-185的候选靶基因NRl D1;利用实时荧光定量PCR技术和Western blot检测miR-185对细胞中NRlD1基因表达水平的影响;荧光报告载体实验验证miR-185对靶基因的调控作用.结果 miR-185在人肝癌细胞中的mRNA表达水平显著低于正常肝细胞(P＜0.01);过表达miR-185使人肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低,下调肝癌细胞中NRl D1基因的mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.01);荧光报告载体实验证明miR-185可以通过作用于NRlDl mRNA的3’端非翻译区(untranslated region,UTR)下调其表达水平(P＜0.05).结论 miR-185能抑制肝癌细胞的增殖、侵袭迁移能力,NRlD1是miR-185的直接靶基因.     

PD-L1对肝细胞癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨程序性死亡配体(PD-L1)在肝癌细胞增殖、侵袭、迁移中的作用。 方法 转染有效的PD-L1基因siRNA干扰片段进入人肝细胞癌HepG2细胞中,下调细胞中PD-L1表达。采用荧光定量PCR法检测HepG2细胞中PD-L1基因表达情况,采用Western blotting法检测HepG2细胞中PD-L1蛋白表达情况。通过MTT实验观察其对HepG2细胞增殖能力的影响,采用细胞划痕实验检测细胞融合率,采用Transwell小室进行侵袭实验,观察其对HepG2细胞迁移及侵袭能力影响。 结果 下调PD-L1后,HepG2细胞PD-L1基因表达量、PD-L1蛋白表达量和细胞增殖能力、迁移能力及侵袭能力均明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.01),阴性对照组和正常对照组上述指标差异均无统计学意义(P＞0.05)。 结论 下调PD-L1后,肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力有一定程度下降,PD-L1可能成为肝细胞肝癌免疫治疗中的一个新基因靶位。      

METTL16对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制

目的 探究甲基转移酶样蛋白16(METTL16)对肝癌细胞(HCC)增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在的作用机制。方法 在HepG2和HCC-LM3细胞中转染METTL16过表达载体及干扰载体,用嘌呤霉素筛选稳定转染细胞,Western blot和实时定量PCR实验评估过表达以及干扰效果;采用CCK-8与Transwell实验检测METTL16对HCC增殖、迁移及侵袭的影响;采用流式细胞术检测METTL16对HCC细胞周期的影响;采用Western blot实验检测扰动METTL16后对肝癌细胞VEGFA-VEGFR2通路相关蛋白表达的影响;采用高通量基因表达数据库(GEO)分析METTL16在人肝癌组织与癌旁组织中的表达水平,通过Log-rank检验比较METTL16高表达和低表达肝癌患者生存期的差异。结果 Western blot和实时定量PCR实验显示,在HepG2和HCC-LM3细胞中,METTL16过表达细胞株和干扰细胞株构建成功。CCK-8、Transwell和流式细胞术结果显示,过表达METTL16后,增殖、迁移和侵袭的细胞数目减少,处于G₂/M期的细胞...     

沉默CRAF基因表达对肝癌细胞侵袭和迁移的影响

目的：探讨肝癌细胞中原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（CRAF）高表达对肝细胞癌（HCC）侵袭和转移的影响,并阐明其机制。方法：以CRAF高表达的SMMC-7721细胞作为研究对象,采用shRNA技术下调CRAF表达。将SMMC7721细胞分为对照组和沉默组（shCRAF#1转染组和shCRAF#2转染组）。细胞划痕法观察各组SMMC7721细胞创口愈合指数,Transwell实验检测各组SMMC-7721细胞的穿膜细胞数,Western blotting法检测各组SMMC7721细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达水平。结果：细胞划痕实验,与对照组比较,沉默组SMMC7721细胞的创口愈合指数明显降低（P<0.05）。Transwell实验,与对照组比较,沉默组SMMC7721细胞的穿膜细胞数降低（P<0.05）。Western blotting法检测,沉默组细胞中MMP-2和MMP-9表达水平明显低于对照组（P<0.05）。结论：下调CRAF可以通过抑制MMP-2和MMP-9表达抑制肝癌SMMC7721细胞的侵袭和迁移。