ADGRD1抑制非小细胞肺癌细胞增殖和转移的作用及其分子机制

目的 探讨黏附G蛋白耦联受体D1(ADGRD1)在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）的发生发展中的作用及其分子机制。方法 通过肿瘤基因图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库分析ADGRD1在NSCLC中的表达,以及与NSCLC患者预后的关系;利用定量聚合酶链反应（quantitative polymerase chain reaction,qPCR）检测ADGRD1在肺癌及其癌旁正常组织中的表达;在不同的肺癌细胞系中过表达或敲减ADGRD1后利用CCK-8(Cell Counting Kit-8)、细胞克隆形成和迁移实验分别观察ADGRD1对NSCLC细胞增殖和迁移能力的影响;利用western blot实验检测其下游通路探究ADGRD1发挥作用的潜在机制。结果 TCGA数据库分析结果显示,ADGRD1基因在肺癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织（P <0.05）,且与患者的不良预后相关（P <0.01）;20例临床肺癌样本qPCR结果显示,ADGRD1mRNA水平较其癌旁正常组织显著降低（0.56...     

非小细胞肺癌中miR-320a靶向PD-L1对肿瘤免疫调节的影响

目的 探讨miR-320a对EGFR突变型非小细胞肺癌细胞中PD-L1的表达以及免疫抑制的影响。方法 采用q RT-PCR、western blot和flow cytometry法检测EGFR野生型的H460和A549细胞以及EGFR突变型的HCC827和H1975细胞中miR-320a和PD-L1的表达水平。运用生物信息学工具TargetScan和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-320a与PD-L1的3’ UTR结合。采用Annexin V-FITC/PI双染法检测T细胞的凋亡率以及采用MTT法检测H1975细胞的存活率。结果 EGFR突变型的HCC827和H1975细胞中,miR-320a呈较低表达,而PD-L1呈较高表达。miR-320a mimics可下调PD-L1的表达、抑制PD-L1 3’ UTR的荧光素酶活性以及缩短PD-L1 m RNA的半衰期。此外,miR-320a mimics还可抑制T细胞的凋亡和降低H1975细胞的存活率。结论 miR-320a与PD-L1 3’ UTR结合可促进PD-L1 mRNA的降解,下调PD-L1的表达,进而减弱肿瘤免疫抑制。mi...     

过表达糖原合成酶1对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响

目的 探讨糖原合成酶（GYS1）对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测正常人支气管上皮样细胞系HBE细胞和非小细胞肺癌细胞系NCI-H661、NCI-H1299中GYS1 mRNA相对表达量。过表达NCI-H1299细胞的GYS1,构建GYS1过表达细胞模型,采用MTT增殖实验、EdU增殖实验评估细胞的增殖能力,应用平板克隆形成实验评估细胞的克隆形成能力。结果 人非小细胞肺癌细胞NCI-H661、NCI-H1299中GYS1 mRNA的表达水平高于人正常支气管上皮样细胞HBE的表达水平（P均< 0.001）。NCI-H1299-GYS1过表达细胞的GYS1 mRNA和蛋白相对表达量均上调（P均< 0.001）。过表达GYS1促进了NCI-H1299细胞的增殖和克隆形成（P均< 0.001）。结论 GYS1在非小细胞肺癌中高表达,过表达GYS1促进了非小细胞肺癌细胞的增殖。     

热疗通过靶向HOXB1诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的研究

目的 探讨热疗调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的潜在机制。方法 在37、40、43、46℃的温度下处理NSCLC细胞系A549、HCC827、NCI-H1299,并分析热疗对NSCLC细胞活力和凋亡水平的影响。将37、43℃处理的NSCLC细胞系进行转录组高通量测序并分析3种细胞系中同时被调控的基因。通过遗传学筛选鉴定热疗调控NSCLC细胞凋亡的关键分子同源盒结构基因B1(HOXB1)。siGFP或siHOXB1敲低后检测NSCLC细胞系在43℃下的凋亡水平。过表达Vector或HOXB1后检测NSCLC细胞系在37℃下的凋亡水平。siGFP或siHOXB1敲低后采用荧光素酶报告实验检测NF-κB的活性。结果 相比于37℃,NSCLC细胞系在40、43、46℃下的活力均显著降低(P<0.05),凋亡水平均显著上升(P<0.05)。相比于37、40、46℃下,NSCLC细胞系在43℃的凋亡水平显著上升(P<0.05)。与siGFP组比较,敲低HOXB1后,43℃时NSCLC细胞系A549、HCC827、NCI-H1299的凋亡水平下降(P<0.05)。与Ve...     

BH3诱导肺癌H1299细胞凋亡的试验研究

目的研究肽BH3抗人非小细胞肺癌细胞株H1299的作用,并探讨其作用机制。方法体外培养H1299细胞,取10μM、100μM和1000μM浓度的BH3作用于H1299细胞,72h后,用RT-PCR检测Bcl-2、Capase3和Bcl-xL的表达变化、测定Capase3和Capase9的活性并观察体内外细胞生长的抑制情况。结果 RT-PCR结果显示,不同浓度的BH3作用后,Bcl-2、Capase3和Bcl-xL的表达表现出相应变化,Capase3和9的活性也有增高的趋势。BH3对细胞有明显的抑制作用,24h后,抑制率分别为2.34%、17.5%、24.46%;48h后,抑制率分别为8.72%、20.33%、45.17%;72h后,抑制率分别为13.11%、38.90%、50.24%。BH3(10μM、100μM和1000μM)对裸鼠移植性非小细胞肺癌细胞株H1299也有抑制作用,3个剂量组的抑瘤率分别为43.85%,54.92%和59.02%。结论肽BH3有促进H1299细胞凋亡的作用。降低高表达的Bcl-2和Bcl-xL基因,升高Ca-pase3基因,可能是BH3抗人非小细胞肺癌的机制之一。     

人接头蛋白LNK对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨人接头蛋白LNK(hLNK)对非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展的影响。方法 构建稳定过表达hLNK的人NSCLC细胞株H1299-hLNK及对照细胞株H1299-pCDH。采用Western blot验证上述稳转细胞株中hLNK的表达水平;采用平板克隆实验分析hLNK过表达对H1299细胞增殖的影响;采用划痕实验分析hLNK过表达对H1299细胞侵袭能力的影响;对细胞中上皮间质转化(EMT)的典型标志蛋白进行分析。结果 成功构建过表达hLNK的人NSCLC细胞株H1299-hLNK。与对照细胞H1299-pCDH比较,hLNK过表达抑制了H1299细胞的增殖和迁移能力,且细胞EMT水平被抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 hLNK主要通过下调NSCLC细胞H1299的EMT水平抑制癌细胞的增殖、迁移。     

肿瘤相关巨噬细胞促进非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的研究

目的研究肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对非小细胞肺癌增殖、转移的影响。方法免疫组化方法分析肺癌组织中巨噬细胞浸润情况。CCK-8法和Transwell法分别检测单核巨噬细胞系THP-1(构建为M2型TAMs后)对肺癌细胞系A549细胞增殖和侵袭能力的影响。结果免疫组化结果显示,TAMs浸润数在肺癌组织中显著多于癌旁组织。激活诱导的TAMs细胞促进A549细胞的增殖和侵袭。结论巨噬细胞浸润增加造成的肿瘤周围炎症微环境可能是肺癌发展的机制之一。     

非小细胞肺癌患者血清miR-141及miR-224的表达及其临床意义

目的 探讨miR-141及miR-224在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义。方法 采用RT-PCR检测128例NSCLC患者,60例良性病变患者(良性组)和60例健康体检者(对照组)血清miR-141,miR-224及鳞状细胞癌相关抗原(SCC-Ag)表达水平,分析miR-141及miR-224表达水平与NSCLC临床病理特征的关系。应用ROC曲线评价miR-141,miR-224及SCC-Ag对NSCLC诊断的灵敏度和特异度,Pearson相关分析NSCLC患者血清miR-141与miR-224,SCC-Ag的相关性。结果 NSCLC组血清miR-141,miR-224及SCC-Ag表达水平均明显高于良性组和对照组[miR-141(2^-ΔΔCt):2.56±0.48 vs 1.08±0.24和1.02±0.21; miR-224(2^-ΔΔCt):3.94±0.82 vs 1.42±0.35和1.26±0.30; SCC-Ag(ng/ml):2.75±1.36 vs 0.64±0.47和0.52±0.24,F=8.719～11.573,均P<0.01]。在NSCLC患者中血清miR-141及miR-224表达水平与病理分期、病理分级及淋巴结转移相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-141,miR-224及SCC-Ag(ng/ml)诊断NSCLC的最佳截值分别为1.84,2.85,2.03,三项联合诊断NSCLC的AUC(0.913)最大,其敏感度和特异度较好,分别为92.5%和82.7%。Pearson相关分析显示,血清miR-141与miR-224,SCC-Ag呈正相关(r=0.782,0.594,均P<0.01),血清miR-224与SCC-Ag呈正相关(r=0.594,P<0.01)。结论 血清miR-141及miR-224在NSCLC患者中明显上调,且与患者的临床病理特征相关,有望作为诊断NSCLC的新型生物标志物。     

血清miR-134-5p和趋化因子20对非小细胞肺癌患者肺癌根治术后复发转移的预测价值

目的观察非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者血清miR-134-5p和趋化因子20(chemokine 20, CCL20)表达情况,探讨其与肺癌根治术后复发转移的关系。方法 110例NSCLC患者为NSCLC组,均行肺癌根治术治疗,50例同期体检健康者为对照组,采用实时荧光定量PCR法检测术前2组血清miR-134-5p相对表达量,采用ELISA法检测术前2组血清CCL20水平,比较2组血清miR-134-5p相对表达量、CCL20水平。采用Pearson线性相关性分析NSCLC患者血清CCL20水平与miR-134-5p相对表达量的相关性;比较不同临床病理特征的NSCLC患者血清miR-134-5p相对表达量、CCL20水平。术后随访3年,失访5例,根据随访期间复发转移发生情况分为复发转移组70例,未复发转移组35例。绘制ROC曲线,计算术前血清miR-134-5p相对表达量、CCL20水平预测NSCLC患者术后复发转移的最佳截断值,评估血清CCL20水平、miR-134-5p相对表达量单独及联合检测对NSCLC患者术后复发转移的预...     

非小细胞肺癌的靶向治疗

肺癌的发病率和死亡率在全球恶性肿瘤中居首位。其中,非小细胞肺癌（NSCLC）占80%~85%。绝大多数NSCLC在临床确诊时正处于复发或转移性的晚期阶段,化疗是这部分人群的主要治疗手段。但是,作为标准一线治疗的含铂两药联合化疗方案已进入平台期,无进展生存期（PFS）为4~6个月,总生存期（OS）仅为8~10个月。近年来,靶向药物的临床应用让人们看到了跨越这一平台的希望和曙光,靶向治疗作为一支生力军正逐渐登上非小细胞肺癌综合治疗的历史舞台。     

非小细胞肺癌脑转移的靶向治疗及耐药机制

肺癌脑转移是肺癌晚期严重并发症,其中大部分为非小细胞肺癌来源。目前对非小细胞肺癌脑转移若不治疗,整体生存中位时间约2~3个月。传统治疗包括:系统性化疗、全脑放疗、立体定向伽马刀放射治疗及手术切除,但患者总体生存中位时间也不超过1年。近几年,大量临床资料显示靶向治疗用于非小细胞肺癌脑转移能显著改善患者的预后及生存时间,但随着治疗时间的延长,几乎都出现耐药现象,耐药机制有待进一步研究。本文就非小细胞肺癌脑转移靶向治疗及耐药机制的研究进展进行综述。     

LncRNA MALAT1对非小细胞肺癌患者脑转移的预测价值

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)MALAT1在非小细胞肺癌（NSCLC）脑转移患者血清中的表达情况,并分析其预测价值。方法 选择2019年6月至2021年9月南通大学附属肿瘤医院收治的100例NSCLC患者作为观察对象,其中发生脑转移患者34例（脑转移组）与未发生脑转移患者66例（非脑转移组）,选择同期在本院健康体检人员50名作为对照组;采用实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）检测血清LncRNA MALAT1表达水平,ROC曲线分析血清LncRNA MALAT1对NSCLC患者发生脑转移的预测价值;Cox回归模型分析影响NSCLC患者发生脑转移的危险因素。结果 脑转移组有吸烟史、病理类型为腺癌、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ及有EGR突变的患者比例显著高于非脑转移组,差异有统计学意义（χ2=4.508、4.456、3.862、5.058,P=0.034、0.035、0.049、0.025）,脑转移与非脑转移组患者年龄、性别、肿瘤直径比较无统计学意义（P>0.05）;与对照组比较,脑转移组与非脑转移组患者血清LncRNA MALAT1表达水平显著升高,差异有统计学意义（t=30....     

miR-218-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对TPD52的靶向调控作用

目的 分析miR-218-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对TPD52的靶向调控作用。方法 回顾性收集2020年9月至2021年12月青岛大学附属青岛市中心医院行手术切除的治疗NSCLC患者39例,术中收取患者的癌组织及癌旁组织,实时定量PCR检测miR-218-5p表达,体外培养H1975细胞株,将H1975细胞分为NC组(mimics NC转染)、miR-218-5p组(miR-218-5p mimics转染)、TPD52-siRNA组(TPD52-siRNA转染)和miR-218-5p+TPD52-siRNA组(转染miR-218-5p mimics后再加入TPD52-siRNA试剂进行转染)。平板克隆形成实验检测H1975细胞的克隆形成数目,Transwell检测H1975细胞侵袭,划痕实验检测H1975细胞迁移,双荧光素酶实验测定miR-218-5p和TPD52靶向关系,蛋白质印迹检测TPD52蛋白表达。结果 NSCLC组织中miR-218-5p的表达明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P <0.05)。miR-218-5p的表达与性别、年龄、吸烟无相关性(P> 0...     

MFAP5在非小细胞肺癌组织中的表达情况及其对癌细胞增殖和转移的影响

目的 探讨MFAP5在非小细胞肺癌(NSCLC)疾病进展中的作用.方法 收集NSCLC患者的癌组织及其对应的癌旁组织各87例,免疫组化检测组织中MFAP5表达.体外培养人NSCLC细胞A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B,检测两种细胞中MFAP5的表达水平.进一步用慢病毒液感染部分A549细胞,分为sh-NC组和s...     

p62/SQSTM1在非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭转移中的作用

目的 探讨自噬调控多功能蛋白p62/SQSTM1对非小细胞肺癌生物学行为的影响和调控机制。方法 RT-qPCR检测p62在正常人支气管上皮细胞和非小细胞肺癌细胞中的表达情况;CCK-8、划痕和Transwell实验分别检测抑制和促进p62表达后对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;Western blot实验检测抑制和促进p62表达后对非小细胞肺癌细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2和Bax）和自噬相关蛋白（ATG5和Becline1）表达水平的影响;裸鼠皮下成瘤实验检测抑制p62表达后对非小细胞肺癌细胞体内肿瘤质量的影响。结果 癌旁组织p62表达（1.01±0.08）低于肺癌组织（2.81±0.17）(P <0.05);p62在si-NC、si-p62、pcDNA-NC、pcDNA-p62组的表达水平分别为1.02±0.03、0.62±0.07、1.03±0.01、2.69±0.12。与si-NC组细胞比较,si-p62组细胞中的p62表达显著降低（P <0.05）;与pcDNA-NC组细胞比较,pcDNA-p62组细胞中的p62表达显著升高（P <0.05）;转染...     

应用埃克替尼靶向治疗的非小细胞肺癌脑转移患者血清miR-21、miR-125b表达变化及意义

目的探讨血清miR-21、miR-125b对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)脑转移患者应用埃克替尼靶向治疗后预后的预测价值。方法 100例NSCLC脑转移患者均应用埃克替尼靶向治疗,于病情缓解出院并随访1年,根据随访期间生存情况分为死亡组79例,生存组21例。比较2组年龄、性别、肿瘤直径及靶向治疗前血清miR-21、miR-125b相对表达量;多因素Cox回归分析NSCLC脑转移患者应用埃克替尼靶向治疗1年内死亡的影响因素;绘制ROC曲线,评估血清miR-21、miR-125b预测NSCLC脑转移患者应用埃克替尼靶向治疗1年内死亡的价值。结果死亡组年龄,性别比例,脑转移瘤多发、吸烟、合并糖尿病、合并高血压、淋巴结转移、内脏转移比率及肿瘤直径与生存组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。死亡组血清miR-21(1.63±0.28)、miR-125b相对表达量(1.36±0.25)均高于生存组(1.01±0.12、0.92±0.10)(t=9.879,P<0.001;t=7.875,P<0.001)。血清miR-21(HR=2.162,95%CI:1.156~4.043,P=0.016)、miR-125b(HR=2.317,95%CI:1.107~4.851,P=0.026)是NSCLC脑转移患者应用埃克替尼靶向治疗1年内死亡的影响因素。血清miR-21、miR-125b相对表达量分别以0.980、0.950为最佳截断值,预测NSCLC脑转移患者应用埃克替尼靶向治疗1年内死亡的AUC分别为0.703(95%CI:0.588~0.817,P=0.004)、0.720(95%CI:0.585~0.855,P=0.002),灵敏度分别为78.5%、81.0%,特异度分别为52.4%、57.1%;二者联合预测NSCLC脑转移患者应用埃克替尼靶向治疗1年内死亡的AUC为0.777(95%CI:0.672~0.882,P<0.001),灵敏度为84.8%,特异度为61.9%。结论血清miR-21、miR-125b表达上调提示NSCLC脑转移患者应用埃克替尼靶向治疗后1年内死亡风险增加,二者联合预测NSCLC脑转移患者应用埃克替尼靶向治疗1年内死亡风险有一定价值。     

奥沙利铂诱导的细胞外基质重构介导的非小细胞肺癌H1299细胞系凋亡机制研究

目的探讨奥沙利铂诱导的细胞外基质重构介导的非小细胞肺癌H1299细胞系凋亡的机制。方法非小细胞肺癌H1299细胞系随机分为4组:对照组、奥沙利铂低剂量、中剂量和高剂量组。DAPI染色法和检测各组细胞的凋亡情况,PCR或免疫印迹法检测各组细胞的细胞凋亡蛋白Bax/Bcl2及Caspase9的表达,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶MMP2/9蛋白的活性。结果奥沙利铂引起细胞凋亡蛋白Bax和Caspase9蛋白表达增加和Bcl2表达的下调,细胞内凋亡小体的出现以及MMP2和MMP9活性增加,且奥沙利铂的作用效果具有剂量依从性。结论奥沙利铂诱导的MMP2和MMP9蛋白表达上调介导的细胞外基质重构参与了非小细胞肺癌H1299细胞系凋亡过程。