Chemical synthesis and cloning of human calcitonin (hCT) cDNA

Humancalcitonin(hCT)isanoligo--peptidehormonecontaining32aminoacidresidues(aa)whichisproducedbytheC--parafollicularcellsofthethyroidglandinhumans.Togetherwiththearathyoidichormoneand1,25--dihydroxycholecalciferol,hCTplaysanimportantroleintheregulationofcalciumandphosphatemetabolism.Itstimulatestheimmobilizationofthecalciuminthebonesystem,preventingtheresorptionofthebones.ThehCThasbeenadministeredfortreatmentofpatientssufferingfromvariousdiseaseswherestronghypercalcemiaorboneresorptionoccurs…     

Co-existence of calcitonin gene-related peptide (CGRP) and 5-hydroxytryptamin (5-HT) in rabbit lung

It was investigated that the localization and distribution of calcitonin gene-relatedpeptide (CGRP) in the rabbit lung by ABC-GDN immunohistochemistry.The results demon-strated that CGRP immunoreactivity was located in neuroendocrine cells (NEC_s) and neu-roepthelial bodies (NEB_s),including all airways from bronchi,bronchioles,and alveolar ducts.The nerve fibers in walls of the intrapulmonary bronchi and blood vessels also had CGRP-immunoreactivity.Adjacent sections immunostained with antibodies to CGRP and 5-HT provedthe coexistence of CGRP and 5-HT in NECs and NEBs.This finding suggested the possibilityof functional interaction between the peptide and amine.     

缺氧对P物质、降钙素基因相关肽舒血管作用的影响

本文采用兔离体动脉(肾动脉,股动脉和基底动脉)浸浴实验。结果表明,缺氧可抑制P物质和降钙素基因相关肽的舒血管作用,并且缺氧对降钙素基因相关肽舒血管作用的影响较大。三种动脉比较,缺氧对基底动脉反应性的影响最为显著。     

大肠杆菌偏嗜性密码子组成的人降钙素(hCT)编码序列的克隆

目的：克隆适于在大肠杆菌(Escherichia coli，E．coli)中表达的人降钙素(hCT)基因，为提高其表达水平奠定基础。方法：根据大肠杆菌密码子频率表，在不改变hCT。氨基酸组成的前提下，设计并合成适于在大肠杆菌中表达的编码hCT的DNA序列，经PCR扩增后，与质粒载体pGEM^R-Teasy进行连接。连接产物转化感受态JM109大肠杆菌，筛选阳性菌落，经扩大培养后，对所含重组质粒进行鉴定。结果：经酶切鉴定及DNA序列分析证实，hCT编码DNA序列成功地克隆人pGEM^R-Teasy载体中，其序列与设计的完全一致。结论：完成了大肠杆菌偏嗜性人降钙素基因的克隆，为下一步hCT表达载体的构建及在大肠杆菌中进行表达的研究奠定了基础。     

破骨细胞在剪切应力下形态改变及降钙素受体mRNA表达差异的研究

目的对流体剪切力作用下破骨细胞降钙素受体mRNA的表达水平进行研究。方法采用1α,25-(OH)2D3诱导5周龄SD大鼠骨髓细胞体外培养破骨细胞,观察不同流体剪切力对其形态的影响,运用荧光定量RT-PCR方法检测破骨细胞降钙素受体mRNA在不同力值下表达的差异。结果研究发现,破骨细胞在流体剪切力的作用下形态有较大改变,主要在细胞膜部位,可能与破骨细胞细胞骨架的适应性改变相关;流体剪切力对CTR mRNA的表达为上升调节(15mins组除外)。     

降钙素基因相关肽真核表达载体pcDNA3．1／CGRP的构建

目的构建带有大鼠降钙素基因相关肽基因（rCGRP）的重组真核表达载体pcDNA3．1（＋）／rCGRP。方法应用Trizol试剂从SD大鼠脑组织提取总RNA，RT—PCR扩增rCGRPeDNA（PCR引物上加上双酶切位点），产物通过Hindm和BamHI酶切、纯化、连接，将目的基因插入真核表达质粒载体peDNA3．1（＋），再将重组质粒转化感受态细菌，通过氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆，再经PCR、酶切和测序鉴定所得克隆。结果（1）RT-PCR产物电泳分析扩增产物行1％琼脂糖凝胶电泳后可见一条特异的片段，和rCGRPcDNA大小相吻合；（2）重组克隆鉴定①PCR鉴定。PCR产物行1％琼脂糖凝胶电泳后可见一条特异的片段，和rCGRPeDNA大小相吻合；②酶切鉴定，抽提质粒经双酶切，酶切产物行1％琼脂糖凝胶电泳后在凝胶成像仪下可见两特异性条带，分别和pcDNA3．1（＋）和rCGRPcD-NA大小相吻合；③DNA测序，测序结果经BLAST分析，与rCGRP基因编码区全长序列完全一致。结论（1）大鼠脑组织中有rCGRP的表达；（2）通过RT—PCR及基因重组技术成功构建重组表达质粒pcDNA3．1（＋）／rCGRP。     

腰椎小关节SP、CGRP免疫反应神经分布及其与腰椎退变的相关性研究

目的　观察小关节SP、CGRP神经正常分布和在关节退变时分布的变化 ,探讨椎间盘结构和功能改变对小关节的影响和小关节肽能神经在腰椎小关节退变发生中的作用。方法　通过间盘移植建立腰椎小关节退变模型 ,用免疫组化染色观察小关节SP、CGRP神经正常分布和在关节退变时分布的变化。结果　SP和CGRP -IR神经纤维在小关节内的定位与分布基本一致 ,小关节含SP/CGRP神经主要存在于关节囊内 ,另外在小关节软骨下骨区亦有少量独立走行的SP/CGRP纤维。腰椎小关节退变时 ,关节囊及软骨下骨区 ,SP -IR、CGRP -IR神经纤维减少。结论　SP、CGRP可能参与关节退变及腰痛的发生 ,小关节在腰腿痛发生中起重要作用。     

重组人甲状旁腺素(1-34)与降钙素治疗绝经后骨质疏松临床观察

目的:观察对比重组人甲状旁腺素(1-34)[Recombinant human parat-hyroid hormone,rhPTH(1-34)],后简称PTHI和降钙素(calcitionin,CT)对绝经后妇女骨质疏松症的疗效.方法:符合入选标准的56例绝经后妇女骨质疏松患者随机分为两组:PTH组(n=30)皮下注射重组人甲状旁腺素20 μg每天1次;CT组(n=26)肌肉注射降钙素20 Iu每周1次,两组均每日给予钙尔奇D 600mg/d,连续治疗6个月.比较治疗前后腰椎(L_(2～4))骨密度及T值,血钙磷及碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AKP)等指标的变化及观察有无不良反应.结果:治疗后PTH组和CT组腰椎(L_(2～4))骨密度(Bone mineral density,BMD)均有明显增加[PTH组:(-4.09±1.30 vs-3.70±1.17)SD;CT组:(-4.03±1.27 vs-3.74±1.19)SD,均P<0.01].但两组间比较无明显差异.PTH组治疗后AKP明显增高[(88.2±28.2vs 123.2±34.2)U/L,P<0.05],而CT组无明显变化.另外,CT组治疗后血清胆固醇(Total cholesterol,TC)降低[(5.64±0.61 vs 5.22±0.70)mmol/L,P<0.O1].两组均无严重不良反应发生.结论:rhPTH(1-34)与降钙素都能显著提高BMD和缓解骨质疏松症状,对于治疗骨质疏松安全有效.     

新生鼠出血肺组织中内皮素、降钙素基因相关肽与氧自由基的关系

目的　探讨出血肺组织中内皮素 -1(ET -1)、降钙素基因相关肽 (CGRP)与氧自由基 (OFR)的关系。方法　将 40只新生Wistar大鼠分成两组 ,正常对照组 10只 (A组 ) ,研究组 3 0只 (B组 ) ,用低温缺氧后复温供氧方法 ,制作肺出血模型 ,将肺组织制成匀浆 ,用放射免疫法检测ET -1及CGRP ,紫外分光光度计检测丙二醛 (MDA)及超氧化物歧化酶 (SOD)。结果　研究组 3 0只新生鼠均发生肺出血 ,肺出血由轻至重共 3种类型 ,包括点状出血 8只 ,局灶出血 12只 ,弥漫出血 10只。随着肺出血加重 :①肺组织ET -1及CGRP含量不断升高 (与对照组比较P <0 0 0 1) ,3种类型出血中 ,ET -1组间差异有显著性 (P <0 0 5～ 0 0 0 1) ,而CGRP则组间无差异 (P >0 0 5 )。②肺组织MDA不断升高 ,SOD不断下降 ,各组间差异有显著性 (P <0 0 5～ 0 0 0 1)。结论　①机体对低温缺氧后复温供氧耐受力的不同导致肺组织ET -1及CGRP释放量亦不同 ;②可导致不同程度肺出血的OFR ,乃由ET -1通过对肺血管内皮细胞的自分泌作用所产生     

鲑鱼降钙素联合放疗治疗恶性肿瘤骨转移疗效分析

[目的]观察鲑鱼降钙素(密盖息)联合直线加速器外照射治疗对骨转移瘤患者的疗效.[方法]对2008年8月-2009年8月我科42例骨转移瘤患者应用直线加速器外照射治疗(采用常规分割方式进行放疗,200cGy/次,5次/周,共照射10次).其中21例单纯采用直线加速器外照射治疗,21例采用密盖息(100 IU,肌肉注射,1次/d)联合直线加速器外照射治疗.疗程结束后对疼痛进行评价,并分别测定治疗前后血钙、血清碱性磷酸酶含量.[结果]单纯放疗组骨痛缓解有效率76.1％( 16/21),血钙降至正常者占28.6％( 6/21),血清碱性磷酸酶下降者占61.9％(13/21);密盖息联合放疗组骨痛缓解有效率90.5％(19/21),血钙降至正常者占90.5％( 19/21),血清碱性磷酸酶下降者占100％(21/21).比较上述两组指标,差异皆具有显著性(P＜0.05).[结论]鲑鱼降钙素(密盖息)联合直线加速器外照射治疗对骨转移瘤患者可明显的抑制骨痛,具有降低血钙、降低血清碱性磷酸酶作用,安全性好,副作用小.     

急性肾小球肾炎患儿血浆内皮素,降钙素相关基因肽和心钠素的变化及意义

目的了解急性肾小球肾炎患儿血浆内皮素、降钙素相关基因肽和心钠素的变化。方法应用放射免疫法测定血浆内皮素、降钙素相关基因肽和心钠素的水平。结果患儿血浆内皮素水平（15．4±70．1ng／L）明显高于正常儿童（42.0±14.4ng／L）,P＜0.0001;患儿血浆降钙素相关基因肽水平（86．0±41．8ng／L）与正常儿童（65．3±48．5ng／L）无显著性差异,P＝0．05;患儿血浆心钠素水平（77．2±34.8nmol／L）明显低于正常儿童（166．2±31．2nmol／L）,P＜0．0001。结论应用外源性降钙素相关基因肽、心钠素对儿童急性肾小球肾炎的临床治疗可能具有重要的意义。     

纳洛酮对急性重症颅脑损伤患者血中ET、CGRP的影响

目的:探讨大剂量纳洛酮对重症颅脑损伤患者血中内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)的影响。方法:选择重型颅脑损伤患者60例,再随机分为两组,纳洛酮治疗组(30例),在常规治疗的基础上同时应用大剂量的纳洛酮;常规治疗组(30例),测量两组治疗后24h、3d、7d血中ET、CGRP的动态变化,追踪观察2个月,判断患者预后。结果:在相同的时间点,纳洛酮治疗组较常规治疗组比较,ET的水平明显降低,CGRP的水平明显升高;预后良好的比例纳洛酮组较常规治疗组高。结论:应用大剂量纳洛酮对重型颅脑损伤患者进行早期治疗,可以降低血中ET的水平,升高CGRP的水平,改善预后。     

重组降钙素研究进展

应用基因工程法可以制备出重组降钙素类似物。通过这种方法可得到生物活性高、免疫原性低的降钙素。该文综述了用基因工程法制备降钙素的研究进展。     

降钙素阴性的甲状腺神经内分泌肿瘤临床病理特征分析

【摘要】 目的 探讨降钙素阴性的甲状腺神经内分泌肿瘤的临床病理特征及鉴别诊断。方法 对1例诊断为降钙素阴性的甲状腺神经内分泌肿瘤病例进行病史收集、形态学检查及免疫表型检测，并复习相关文献。结果 52岁女性患者在我院行甲状腺全切术后，甲状腺右叶剖视见一直径0.6cm的灰白结节，边界欠清，切面实性、质中，镜下肿瘤细胞排列成巢团状，细胞呈卵圆形或梭形，胞浆中等，胞核较小，染色质粗颗粒状，核仁不明显，间质纤维组织增生，免疫表型：甲状腺转录因子1（TTF-1）、嗜铬素A（CgA）、突触素（Syn）和癌胚抗原（CEA）均弥漫阳性，甲状腺球蛋白（TG）、降钙素（CT）均阴性，Ki 67增殖指数<1%。结论 降钙素阴性的神经内分泌肿瘤是一种罕见的甲状腺肿瘤，诊断需结合病理形态尤其是免疫表型。     

鲑降钙素喷鼻剂稳定性考察

目的考察鲑降钙素喷鼻剂的稳定性,为制定其合理的有效期、储存条件提供依据。方法采用高效液相色谱法,分别测定在强光、高温、高湿条件下放置5 d和10 d,在25℃加速试验的条件下放置6个月,在（5±3）℃的条件下放置3个月的鲑降钙素喷鼻剂的含量、有关物质等的含量变化情况。结果鲑降钙素喷鼻剂在40℃、25℃和强光条件下,含量及有关物质均发生明显变化,在（5±3）℃及高湿度条件下则未发生明显变化,各储存条件下的pH值及外观装量等均无明显变化。结论鲑降钙素的有效期可暂定24个月,其合适储存条件为低温（2～8℃）、避光贮存。     

降钙素阴性的甲状腺神经内分泌肿瘤临床病理特征分析

【摘要】 目的 探讨降钙素阴性的甲状腺神经内分泌肿瘤的临床病理特征及鉴别诊断。方法 对1例诊断为降钙素阴性的甲状腺神经内分泌肿瘤病例进行病史收集、形态学检查及免疫表型检测,并复习相关文献。结果 52岁女性患者在我院行甲状腺全切术后,甲状腺右叶剖视见一直径0.6cm的灰白结节,边界欠清,切面实性、质中,镜下肿瘤细胞排列成巢团状,细胞呈卵圆形或梭形,胞浆中等,胞核较小,染色质粗颗粒状,核仁不明显,间质纤维组织增生,免疫表型：甲状腺转录因子1（TTF-1）、嗜铬素A（CgA）、突触素（Syn）和癌胚抗原（CEA）均弥漫阳性,甲状腺球蛋白（TG）、降钙素（CT）均阴性,Ki 67增殖指数<1%。结论 降钙素阴性的神经内分泌肿瘤是一种罕见的甲状腺肿瘤,诊断需结合病理形态尤其是免疫表型。