人大肠癌中Ⅳ型胶原酶与基底膜免疫组织化学双重染色研究

目的观察Ⅳ型胶原酶和基底膜在大肠癌生长中的相互关系及Ⅳ型胶原酶的表达与ｐ２１的表达之间的关系。方法应用免疫组化双标记方法，对８６例人大肠癌组织的Ⅳ型胶原酶表达及基底膜的改变作对照研究。结果大肠癌组织中Ⅳ型胶原酶的阳性率为８３．７２％（７３／８６），与对照组癌周正常肠粘膜的阳性率１０％差异有非常显著意义（Ｐ＜０．０１）。同时，双染色显示Ⅳ型胶原酶阳性的癌组织基底膜表现为不连续，出现缺口、片段缺失或完全消失等形态。此外，肠癌中Ⅳ型胶原酶的分布与ｐ２１的表达呈正相关（ｒ＝０．９７４，ｐ＜０．０１）。结论Ⅳ型胶原酶的分泌对肠癌基底膜破坏起重要作用，可以作为判断大肠癌生长特性的辅助指标。     

大肠癌细胞粘液分泌功能分化与浸润,转移的关系

目的：观察不同组织类型的大肠癌粘液分泌功能与浸润、转移的关系以及基底膜主要成分ＣｏｌⅣ的表达情况。方法：对４２４例大肠癌进行临床病理分析及ＩＶ型胶原免疫组化标记。结果：大肠癌组织粘液含量越高，浸润越深，淋巴结及远处转移率越高；粘液含量与癌组织分化程度关系不大；癌组织中ＣｏｌⅣ普遍缺失，粘液含量越高，ＣｏｌⅣ缺失越明显。结论：大肠癌粘液分泌功能分化与侵袭、转移能力呈正相关，这种能力可能与ＣｏｌⅣ等基底膜物质的缺失有关     

叶酸受体α表达量与大肠癌分化程度的相关性

目的探讨叶酸受体α（folate receptor Alpha,FRα）在大肠癌组织中的表达及其与肿瘤分化程度的相关性。方法收集35例大肠癌患者的癌组织、癌旁及外周正常组织标本,采用免疫组织化学法及流式细胞仪技术检测大肠癌组织FRα表达情况,分析大肠癌组织FRα表达与临床病理特征的关系。结果 35例患者免疫组化检测正常粘膜组织FRα表达阳性率为8.57%（3/35）,癌组织FRα表达阳性率为68.57%（24/35）,癌旁组织FRα表达阳性率为14.29%（5/35）。流式细胞技术检测癌组织中FRα表达为（53.78±10.37）%,癌旁组织为（19.68±6.22）%,正常粘膜组织为（11.68±5.6）%,癌组织与癌旁组织FRα表达情况比较差异有统计学意义（P〈0.05）。同时FRα表达与大肠癌的分化程度呈负相关关系（P〈0.05）,分化程度越低,FRα表达率越高。结论大肠癌组织中FRα高表达,为FRα成为预测大肠癌发生发展的新的肿瘤分子标志物,大肠癌新的靶向基因治疗手段提供了理论基础。     

兔胎盘源性间充质干祖细胞的分离方法比较

目的探讨几种酶消化方法对兔胎盘源性间充质干细胞（rPDMSCs）的分离效果。方法采用孕兔剖宫产取其胎盘，用Ⅱ型和Ⅳ型胶原酶、分散酶、DNaseⅠ组合成3组混合消化液：Ⅳ型胶原酶、DNaseⅠ与分散酶组（A组）；Ⅳ型胶原酶与DNaseⅠ组fB组）；Ⅱ型胶原酶与DNaseⅠ组（C组），分别对兔胎盘进行消化。分离间充质干细胞（MSCs）后经原代及传代培养．倒置显微镜逐日观察、HE及碱性磷酸酶染色、苔盼蓝拒染法计数胎盘源性细胞数目及倍增时间，流式细胞仪检测细胞表面标志。结果分步分离法对细胞的活力影响较小。C组分离的MSCs较其他两组细胞的数量多、活力好。细胞倍增时间约28～56h，组间差异有统计学意义（P＜0．05）；C组细胞形态规则，不表达碱性磷酸酶，诱导培养后可形成钙结节．流式细胞仪示CD105阳性率为91．9％，CD29阳性率89．1％，CD44阳性率93．6％，CD45阳性率3．2％。结论Ⅱ型胶原酶与DNaseⅠ混合消化液、分步分离法可以较好地从兔胎盘中提取MSCs。     

大肠癌细胞株浸润人羊膜时Ⅳ型胶原酶表达的影响因素

目的：探讨有关层粘连蛋白受体（ＬＮＲ）、上皮性钙调蛋白（Ｅ－ｃａｄ）及Ⅳ型胶原酶（Ⅳｃｏｌ）在大肠癌浸润中的相互关系。方法：利用人羊膜浸润模型，观察ＬＮＲ、Ｅ－ｃａｄ对大肠癌细胞株与羊膜粘附及细胞内Ⅳｃｏｌ表达的影响。结果：高转移细胞株ＬｏＶｏ与羊膜的粘附率高于转移力较低细胞株ＨＴ２９。瘤细胞用Ｅ－ｃａｄ单抗封闭后培养于羊膜上，两细胞株内Ⅳ型胶原酶表达明显增高；但用ＬＮＲ单抗封闭细胞后，细胞内Ⅳ型胶原酶表达降低，并且均以高转移株变化更为明显。结论：Ｅ－ｃａｄ与ＬＮＲ通过细胞内信使传递作用影响细胞内Ⅳ型胶原酶的表达，从而对肿瘤浸润和转移产生影响。     

大肠癌及其转移灶中MMP-2和TIMP-2的表达和意义

目的研究基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及其抑制物组织基质金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）在大肠癌进展中的作用及其临床意义。方法通过免疫组化的方法检测104例大肠癌组织及其转移灶中MMP-2和TIMP-2的表达。结果MMP-2在转移灶中的阳性率（72．1％）显著高于原发灶中的阳性率（53．8％）（P〈0．05）,而TIMP-2在转移灶中的阳性率（35．6％）显著低于原发灶中的阳性率（66．3％）（P〈0．05）;MMP-2和TIMP-2在大肠癌原发及转移灶中表达均具有相关性,且呈负相关。结论MMP-2和TIMP-2的表达与大肠癌转移密切相关,而且转移灶癌细胞MMP-2的表达明显增强,TIMP-2的表达明显下降,可作为临床判断大肠癌恶性程度、转移及预后的重要参考指标。     

p53和nm23蛋白表达与大肠癌浸润转移的关系

目的：探讨大肠癌组织中ｐ５３和ｎｍ２３蛋白表达与癌组织分化浸润转移的关系,以及它们之间的相关性。方法：应用免疫组织化学（ＳＡＢＣ）方法对４１例大肠癌组织中ｐ５３和ｎｍ２３蛋白表达情况进行检测。结果：大肠癌组织中ｐ５３和ｎｍ２３蛋白表达的阳性率分别为５８．５％和５３．７％,ｐ５３过表达、ｎｍ５３低表达与大肠癌浸润深度和淋巴转移具有相关性,ｐ５３过表达在低分化腺癌中明显高于高分化腺癌（Ｐ〈０．０１）;而ｎｍ２３高表达与大肠癌的分化程度无关（Ｐ〉０．０５）。ｎｍ２３低表达与ｐ５３高表达有相关性。结论：ｐ５３高表达、ｎｍ２３低表达在大肠癌的浸润转移中起重要作用,ｐ５３高表达与大肠癌组织分化程度有关,大肠癌组织浸润与淋巴转移可能与多基因异常改变有关。     

nm23-H1、p53、PCNA表达与大肠癌浸润转移的关系

目的：研究大肠癌中ｎｍ２３－Ｈ１、ｐ５３、ＰＣＮＡ的表达与浸润转移的关系。方法：应用ＬＳＡＢ免疫组织化学方法检测７４例大肠癌中ｎｍ２３－Ｈ１、ｐ５３、ＰＣＮＡ和Ⅳ型原的表达。结果：大肠癌中ｎｍ２３－Ｈ１、ｐ５３和ＰＣＮＡ的阳性率分别为７１．６％、５２．７％和８１．１％。大肠癌中ｎｍ２３－Ｈ１低表达与淋巴结转移有关（Ｐ＜０．０２５），ｎｍ２３－Ｈ１的表达在Ⅳ型胶原表达不同的肠癌中无明显差异（Ｐ＞０．０５）；ｐ５３和ＰＣＮＡ过表达与浸润程度和淋巴结转移有关（Ｐ＜０．０５），ｐ５３和ＰＣＮＡ的表达在Ⅳ型胶原表达不同的肠癌中有非常显著的差异（Ｐ＜０．００５）；大肠癌中ｐ５３过表达与ｎｍ２３－Ｈ１低表达有关（Ｐ＜０．０１）。结论：实验结果揭示ｐ５３基因突变对于ｎｍ２３－Ｈ１基因的失活有一定影响，其作用机制有待深入研究。ｎｍ２３－Ｈ１低表达可能仅在大肠癌转移过程中发挥作用，ｐ５３过表达可在大肠癌浸润转移过程及细胞增殖中起重要作用。     

着丝粒蛋白A在原发性肝癌中的表达

目的研究乙肝病毒X蛋白（HBx）上调的基因着丝粒蛋白A（centromere protein A,CENP-A）在原发性肝细胞癌（HCC）及癌旁组织的表达差异,并初步探讨其意义。方法应用RT-PCR和即时定量PCR（real-time quantitative PCR）方法,检测20例HCC及配对癌旁肝组织中CENP-A基因mRNA的表达水平,应用免疫组织化学方法检测80例HCC和癌旁肝组织中CENP-A蛋白、p53蛋白的表达情况。结果CENP-A mRNA在癌及癌旁组织中的相对表达水平分别为（0．64±0．18）和（0．09±0．09）,二者差异有统计学意义（t=12．78,P〈0．01）。免疫组织化学结果显示：CENP-A在HCC组织中的总阳性率为71．25％（57／80）,高于配对癌旁组织的总阳性率43．75％（35／80）（x^2=12．38,P〈0．01）。p53在癌组织中的总阳性率为75％（60／80）,高于配对癌旁组织中的总阳性率16．25％（13／80）（x^2=55．65,P〈0．01）,p53与CENP-A在癌组织中的表达一致性达88．75％（71／80）,呈正相关（r=0．57,P〈0．01）。结论CENP-A在肝癌组织中的过表达与细胞恶性增殖相关,且这种过表达是由转录水平引起的,其机制可能与p53基因的转录调节有关。     

大肠癌中胰岛素样生长因子2基因的印迹状态和表达

目的：研究胰岛素样生长因子2（insulin-like growth factor 2,IGF2)基因的印迹状态和表达与大肠癌的关系，为研究大肠癌的发生机理提供线索。方法：用逆转录－聚合酶链反应半定量检测IGF2的表达量，比较其在大肠癌及癌旁组织中有无差异，用限制性片段长度多态检测IGF2的印迹状态，分析印迹状态、表达量与大肠癌的关系。结果：82．4％（28／34）大肠癌有IGF2的表达增加，IGF2的表达量在肿瘤组织与癌旁组织中差异有显著性（P＜0．01，t=3.01)。IGF2在87．5％（14／16）大肠癌组织中发生了印迹丢失，但其相对应的癌旁组织也有71．4％（10／14）存在IGF2的印迹丢失。结论：IGF2的表达增加是大肠癌发生的相关因素，IGF2的印迹丢失可能是大肠癌发生的前期表现。     

结直肠癌及结直肠粘膜p16基因5‘CpG岛甲基化状态的研究

目的 了解国人结直肠癌及正常肠粘膜Ｐ１６基因５＇ＣｐＧ岛甲基化状况,并探讨其意义。方法 用甲基化敏感的限制笥内切酶消化结合ＰＣＲ法检测６０例结直肠癌及其正常结直肠粘膜Ｐ１６基因５＇ＣＰＧ岛中ＨｐａⅡ、ＳａｃⅡ、Ｓｍａ位 甲基化状况。结果 结直肠癌与正常结直肠粘膜的Ｐ１６基因５＇ＣＰＧ岛均有不同程度的甲基化,比较结直肠癌与正常结直肠粘膜的Ｐ１６基因甲基化状态及其与临床病理资料的关系,差异均无显性。     

Behaviour of basement membrane antigens in gastric and colorectal cancer. Immunohistochemical study

Eighty gastric and colorectal lesions including cases of dysplasia and carcinoma were studied by immunohistochemical techniques to investigate the behaviour of laminin, type IV collagen and fibronectin. Their distribution was examined on frozen and formalin-fixed, paraffin-embedded samples. In the same lesions, interruption, fragmentation and absence of basement membrane (BM) antigen-staining were observed. Carcinomas with well differentiated glandular structures were always surrounded by a well defined BM as in normal, non-pathological tissues. On the contrary, undifferentiated areas arranged in nests or sheets were usually negative for laminin and type IV collagen. Anomalous BM staining was strictly related to the degree of differentiation of tumor tissue, while no correlation existed between carcinoma staging and BM antigen presence, either in gastric or colorectal neoplasms. Immunostaining with antibody against type IV collagenase showed a massive positivity in the early gastric carcinomas examined, while in colorectal cancer only granulocytes showed it.     

BEHAVIOUR OF BASEMENT MEMBRANE ANTIGENS IN GASTRIC AND COLORECTAL CANCER: Immunohistochemical Study

Eighty gastric and colorectal lesions including cases of dysplasia and carcinoma were studied by immunohistochemical techniques to investigate the behaviour of laminin, type IV collagen and fibronectin. Their distribution was examined on frozen and formalin-fixed, paraffin-embedded samples. In the same lesions, interruption, fragmentation and absence of basement membrane (BM) antigen-staining were observed. Carcinomas with well differentiated glandular structures were always surrounded by a well defined BM as in normal, non-pathological tissues. On the contrary, undifferentiated areas arranged in nests or sheets were usually negative for laminin and type IV collagen. Anomalous BM staining was strictly related to the degree of differentiation of tumor tissue, while no correlation existed between carcinoma staging and BM antigen presence, either in gastric or colorectal neoplasms. Immunostaining with antibody against type IV collagenase showed a massive positivity in the early gastric carcinomas examined, while in colorectal cancer only granulocytes showed it.     

大肠癌相关抗原LEA在大肠癌诊断中的意义

目的:探讨LEA在大肠癌中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学S-P法检测140例大肠癌组织和100例大肠非癌组织LEA与CEA的表达。结果:LEA表达与肿瘤分化程度有相关性,对高分化腺癌表现出更高的选择性（P<0.01）,CEA单抗对高、中、低分化腺癌选择性相似（P>0.05）,LEA在腺瘤中表达的阳性率,明显高于癌旁粘膜和正常粘膜;LEA在正常粘膜标记的阳性率明显低于CEA（P<0.05）。结论:LEA的表达与大肠癌组织的分化程度有关,LEA可作为大肠癌早期诊断的辅助指标。     

胃癌浸润转移与整合蛋白、IV型胶原酶及细胞外基质的关系

应用免疫组化方法研究整合蛋白ａ＿６亚基、ＩＶ型胶原酶、层粘连蛋白、ＩＶ型胶原及ｒａｓｐ２１在胃癌中的表达。结果表明：ａ＿６亚基与层粘连蛋白在膨胀型胃癌中常呈连续的或断续的线状表达，而在浸润型胃癌中常呈断续斑点小片状表达或甚至几乎消失。提示层粘连蛋白受体和配体的相互作用可影响胃癌的生长方式。ＩＶ型胶原酶在胃癌中表达增强，尤其在浸润性生长和有淋巴结转移的胃癌中更明显，可以作为反映胃癌细胞浸润和转移的标志，且与ｒａｓｐ２１在胃癌中增强表达呈正相关。ＩＶ型胶原的表达与层粘连蛋白的表达常一致，而与ＩＶ型胶原酶的表达呈反比。     

细胞色素P450ⅡE1在肠道血吸虫病并结直肠癌患者肠黏膜中的表达

目的 探讨细胞色素P450ⅡE1（CYPⅡE1）的蛋白表达与肠道血吸虫病并结直肠癌之间的相关性及其可能的作用机制。方法 采用免疫组织化学SP法,检测60例肠道血吸虫并结直肠癌癌组织、60例单纯结直肠癌癌组织（无肠道血吸虫感染）、60例单纯肠道血吸虫感染组、50例无血吸虫感染的正常肠道组织中的CYPⅡE1蛋白的表达情况;分析肠道血吸虫病并结直肠癌癌组织中CYPⅡE1的表达与患者的性别、年龄、病理分型、淋巴结转移等临床病理参数的关系。 结果 肠道血吸虫病并结直肠癌组织中CYPⅡE1的表达阳性为73.33%,单纯肠道血吸虫感染组表达阳性为46.67%,60例单纯结直肠癌癌组织（无肠道血吸虫感染）表达阳性为31.67%,而正常组织中的表达为16%。在黏液腺癌中CYPⅡE1蛋白表达明显增高（P＜0.01）。血吸虫并结直肠癌组CYPⅡE1蛋白表达阳性与性别、年龄、肿瘤部位、淋巴结转移无关,与组织分化程度和病理分型有关。逐步回归法进行 Logistic多因素分析结果显示,组织学分型是CYPⅡE1表达阳性的唯一危险因素（OR=11.4,P=0.024）。 结论 CYPⅡE1可能在肠道血吸虫病并结直肠癌的发病机制中有一定的作用。CYPⅡE1的表达与结直肠癌组织的病理分型有关。     

E-cadherin在结直肠癌中的表达及其与侵袭转移的关系

目的：探讨E-cadherin在结直肠癌（colorectal carcinoma,CRC）中的表达及其与侵袭转移的关系。方法：采用免疫组织化学SABC法及原位杂交技术检测E-cadherin mRNA和蛋白在大肠正常黏膜、大肠腺瘤和CRC组织中的表达。结果： E-cadherin的mRNA和蛋白在CRC中的阳性率显著低于正常黏膜组织和腺瘤（P＜0.01）;随着CRC分化的降低和Dukes分期的增加,E-cadherin表达阳性率降低;E-cadherin的阳性率在有淋巴结和远处器官转移的CRC中均显著低于未转移组（P＜0.01,P＜0.05）。结论：E-cadherin表达减少或缺失在CRC的侵袭转移过程中发挥重要的作用。     

胸苷磷酸化酶在结直肠癌中的表达及与血管生成的关系

目的：研究结直肠癌组织中胸苷磷酸化酶（thymidine phosphorylase,TP)表达与癌组织分化程度，淋巴结转移及肿瘤内微血管密度（MVD）的关系。方法：对50例结直肠癌标本及21例正常结直肠黏膜组织进行免疫组化S－P法测定癌组织中TP的表达情况；通过CD34免疫组化染色检测癌组织中的MVD。结果：结直肠癌细胞的TP表达阳性率高于正常结直肠黏膜上皮（P＜0．01）；TP阳性组中局部淋巴结转移率高TP阴性组；TP阳性组的MVD高于TP阴性组；它们的差别均具有统计学意义，结直肠癌中高、中、低分化癌组之间的TP阳性率无明显差异。结论：癌细胞中TP的表达与肿瘤的血管生成及淋巴结转移有关。但与结直肠癌的组织化学级别无关。     

大肠癌中survivin基因的表达及相关性研究

目的　探讨survivin凋亡抑制基因的表达变化与大肠癌生物学行为及cyclinD1、bcl 2、p5 3和凋亡指数 (AI)的相关性。方法　利用免疫组织化学EnVision法检测 98例大肠癌、2 4例正常大肠黏膜和 2 9例大肠息肉组织中survivin、bcl 2、cy clinD1,并用TUNEL法测定AI。结果　survivin、bcl 2、cyclinD1和 p5 3在 98例大肠癌组织中的阳性表达率分别为 6 8 37%、6 0 2 %、4 0 8%和 5 2 %。survivin表达在癌细胞胞质内 ,核内未见表达 ,bcl 2表达在细胞质内 ,cyclinD1和 p5 3均在核内表达。survivin的表达与组织学类型和淋巴结转移密切相关 (P均 <0 0 5 ) ,其阳性表达组的AI显著低于阴性组 (P <0 0 1) ,其阳性表达者术后 5年复发转移率均较阴性者显著增高 (P <0 0 1) ,而 5年生存率则显著降低 (P <0 0 5 ) ,survivin表达与bcl 2、p5 3无相关性 ,与cyclinD1表达呈正相关 (P <0 0 5 )。bcl 2和cyclinD1的阳性表达与组织学类型关系密切 (P均 <0 0 5 ) ,bcl 2阳性组的AI明显低于阴性组 (P <0 0 5 ) ,cyclinD1的阳性表达与 5年生存率明显相关 (P <0 0 5 )。 结论　survivin、bcl 2、cy clinD1和p5 3基因在大肠癌的发生、发展中起着不同程度的作用 ,它们的检测对大肠癌恶性程度的判定 ,预后分析和进一步治疗提