羟氯喹抑制MEK/ERK/ROS通路减少中性粒细胞胞外诱捕网形成改善葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎

目的：探讨羟氯喹（hydroxychloroquine，HCQ）对葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium salt，DSS）诱导的结肠炎模型鼠肠道炎症的影响及其影响中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular trap，NET）形成的机制。方法：雄性C57BL/6鼠随机分为正常组、DSS组（自由饮用3%DSS溶液+200 μL纯水每天灌胃）、DSS+HCQ组［自由饮用3%DSS溶液+200 μL HCQ（60 mg/kg）每天灌胃］。评估小鼠疾病活动指数（disease activity index，DAI），造模7 d后处死小鼠，分析小鼠结肠长度，肠组织HE 染色评估肠道炎症水平，荧光显微镜及荧光酶标仪检测各组小鼠结肠组织NET水平。收集志愿者外周血提取中性粒细胞进行细胞实验， 荧光显微镜及荧光酶标仪检测NET水平，DCFH-DA荧光探针孵育后荧光酶标仪检测活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平，蛋白质印迹法检测p-MEK、MEK、p-ERK、ERK蛋白水平。结果：HCQ减轻DSS诱导的小鼠结肠炎并可抑制结肠炎模型鼠肠组织中NET形成。在细胞实验中，HCQ可抑制体外培养中性粒细胞ROS释放和NET形成，同时抑制MEK/ERK信号通路的激活。MEK 激动剂 C16-PAF 可逆转 HCQ 对 MEK/ERK 信号通路的抑制作用，增加 ROS 的释放，并增加 NET 的形成。结论： HCQ 可减轻 DSS 小鼠肠道炎症，机制可能是通过抑制中性粒细胞 MEK/ERK 信号通路，减少 ROS 释放，从而减轻 NET 导致的肠道损伤。     

白头翁皂苷B4基于调节巨噬细胞极化对小鼠溃疡性结肠炎的影响

目的 探究白头翁皂苷B4基于调节巨噬细胞极化对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的溃疡性结肠炎（UC）小鼠的作用。方法 将40只SPF级雄性C57BL/6小鼠（体重18～20 g）按随机数字表法分为对照组、模型组、B4组和阳性药组,每组10只。模型组、B4组和阳性药组连续给予3%DSS 5 d构建UC模型,造模成功后B4组灌胃白头翁皂苷B4(5 mg/kg,1次/d),阳性药组灌胃美沙拉秦（400 mg/kg,1次/d）,对照组和模型组灌胃等量生理盐水,四组均连续干预7 d。观察干预期间小鼠体重的变化。干预结束后对小鼠结肠组织进行苏木精-伊红染色并进一步评估其病理组织学指数,并对四组炎症相关指标进行检测。q RT-PCR检测四组结肠组织中核因子κB(NF-κB)p50、p65及M1型巨噬细胞特异性指标诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、M2型巨噬细胞特异性指标精氨酸-1(Arg1)的mRNA表达水平。对四组结肠组织进行免疫组织化学染色,观察四组结肠组织中巨噬细胞极化的情况。结果 模型组干预6、9、12 d的体重均低于对照组,B4组干预12 d的体重高于模型组（P<0.05或P<0.01...     

双酚 A 对小鼠腹腔巨噬细胞极化影响的体外研究

目的：探讨体外实验条件下,双酚 A（BPA）对小鼠腹腔巨噬细胞极化的影响。方法提取 C57BL/6J 雄性小鼠腹腔巨噬细胞,用（10 ng/ ml）干扰素-γ（IFN-γ）和（500 ng/ ml）细菌脂多糖（LPS）诱导其向 M1型极化;用（10 ng/ ml）白介素-4（IL-4）诱导其向 M2型极化;同时加入0.1、1、10μmol/ L BPA 处理细胞,并设立空白对照组和溶剂对照组。流式细胞术检测 M1型和 M2型巨噬细胞比例,ELISA 法检测 M1型和M2型巨噬细胞各自分泌的诱导型一氧化氮合酶（ iNOS）和精氨酸酶（Arg-1）活性。结果不同浓度 BPA 促进 IFN-γ和LPS 诱导的小鼠腹腔巨噬细胞向 M1型极化,1、10μmol/ L BPA 组 M1型巨噬细胞比例较空白对照组分别升高11.3%和17.4%,M1型巨噬细胞分泌的 iNOS 活性分别升高1.95和2.29倍,差异均有统计学意义。不同浓度 BPA 抑制 IL-4诱导的小鼠腹腔巨噬细胞向 M2型极化,1、10μmol/ L BPA组 M2型巨噬细胞比例分别较空白对照组降低9.0%和14.3%,M2型巨噬细胞分泌的 Arg-1活性分别下降0.37和0.49倍,差异均有统计学意义。结论体外条件下,低剂量BPA 促进小鼠腹腔巨噬细胞向 M1型极化,抑制其向 M2型极化。     

氧化纳米铈清除活性氧改善DSS诱导的小鼠结肠炎疾病活动度的研究

目的·探究氧化纳米铈-聚乙二醇（ceria nanoparticles-polyethylene glycol,CeNP-PEG）清除活性氧（reactive oxygenspecies, ROS）、改善葡聚糖硫酸钠（dextransulphatesodium, DSS）诱导的小鼠结肠炎疾病活动度的效果。方法·首先应用醋酸铈的水合物、油胺与二甲苯等合成氧化纳米铈,经聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（mPEG-DPSE）修饰并提纯后得到纯化的CeNP-PEG。应用透射电子显微镜（transmission electron microscopy,TEM）和动态光散射（dynamic light scattering,DLS）观察测定CeNP-PEG粒径和zeta电位等。体外培养小鼠巨噬细胞（Raw264.7）并诱导成为促炎表型（M1表型）。采用0.5μg/mL和1.0μg/mL CeNP-PEG分别处理M1表型巨噬细胞后应用Western blotting检测核因子-κB (nuclear factors-κB,NF-κB)信号通路相关蛋白表达的变化。构建DSS诱导的小鼠结肠炎模型并在造模期...     

核因子κB"诱饵"寡核苷酸对小鼠葡聚糖硫酸钠结肠炎的影响

目的 探讨核因子κB“诱饵”寡核苷酸（NF-κB Decoy ODN）对葡聚糖硫酸钠（DSS）结肠炎的影响,为寻找一种治疗溃疡性结肠炎（UC）的新药提供实验依据.方法36只BALB/C小鼠按编号抽签随机分为：正常对照组;DSS＋NF-κB“诱饵”ODN组;DSS＋错配物ODN组;DSS＋生理盐水组,每组9只.方法（1）测定各组小鼠血清中尿素氮、肌酐、随机血糖、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶浓度.（2）取小鼠结肠组织进行大体及组织形态学观察.（3）免疫组织化学染色观察NF-κB p65在结肠黏膜细胞内的表达.（4）酶联免疫吸附法（ELISA）测定结肠黏膜组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量.（5）共聚焦显微镜观测NF-κB“诱饵”ODN在小鼠结肠黏膜内的分布.结果（1）5%DSS处理的3组小鼠的DAI评分和组织学评分及肠黏膜组织内TNF-α表达均明显高于正常对照组（均P＜0.05）;而NF-κB“诱饵”ODN组的上述指标均明显低于错义NF-κB“诱饵”ODN组和生理盐水组（均P＜0.01）.（2）5%DSS处理的3组小鼠其肠黏膜组织NF-κB p65的表达以胞核为主,而且这3组间NF-κB p65胞核表达差异无统计学意义.相反,正常对照组小鼠NF-κB p65以胞质表达为主.（3）NF-κB诱饵ODN可有效进入小鼠结肠黏膜层和黏膜下层组织.（4）各实验组小鼠肝、肾功能及血糖比较差异无统计学意义.结论NF-κB“诱饵’ODN对小鼠DSS结肠炎有较好的保护作用.     

高脂饮食下核因子κB调控自噬在小鼠溃疡性结肠炎中的作用及其机制

目的 观察核因子κB (NF-κB)调控自噬在高脂饮食下葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎中的作用及其机制。方法 将小鼠分为正常对照组（Control组）、高脂饮食组（HFD组）、DSS组、DSS+高脂饮食组（DSS+HFD组）,每组12只。采用体质量差值、疾病活动指数（DAI）和结肠组织病理学结果评估小鼠一般情况和结肠组织炎症程度,采用ELISA检测小鼠血清炎性细胞因子水平,采用实时PCR检测小鼠结肠组织中NF-κB和LC3 mRNA的表达情况。结果 DSS+HFD组体质量差值小于Control组和DSS组（均P <0.05）。DSS+HFD组DAI、结肠组织病理学评分大于Control组和DSS组（均P <0.05）。DSS+HFD组血清白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)以及结肠组织NF-κB mRNA水平高于Control组和DSS组（均P <0.05）。DSS+HFD组结肠组织LC3 mRNA水平低于Control组和DSS组（均P <0.05）。DSS+HFD组血清IL-10水平低于Control组（P <0.05...     

溶酶体在巨噬细胞极化中的作用研究

目的 探讨溶酶体在巨噬细胞极化中的作用。方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7,用脂多糖（LPS）100 ng/ml+ 伽马干扰素（IFN-γ）20 ng/ml 诱导其向经典活化型（M1）极化,用白细胞介素4（IL-4）20 ng/ml 诱导其向替代活化型（M2）极化,建立巨噬细胞极化模型。以未诱导细胞作为对照组。通过流式细胞术、ELISA、Western blot 及实时PCR（real-time PCR）法,检测M1 型及M2 型巨噬细胞比例及标志物表达,验证巨噬细胞极化模型是否建立成功。通过Western blot、real-time PCR 及免疫荧光染色检测M1 型及M2 型巨噬细胞中溶酶体标志物表达,包括溶酶体膜相关蛋白1、2（LAMP-1、LAMP-2）及溶酶体整合膜蛋白2（LIMP-2）。给予溶酶体抑制剂氯喹（chloroquine）25 μmol/L 刺激巨噬细胞,流式细胞术检测M1、M2 型巨噬细胞比例。结果 成功建立巨噬细胞极化模型。与对照组比较,溶酶体标志物（LAMP-1、LAMP-2 及LIMP-2）转录及蛋白水平表达在M1 型极化组中降低,而在M2 型极化组中增加。溶酶体抑制剂氯喹处理可降低M2 型极化比例,增加M1 型极化比例。结论 溶酶体参与巨噬细胞极化过程,抑制溶酶体可促进巨噬细胞向M1 型极化。     

心肌缺氧状态下间充质干细胞对巨噬细胞 M2 极化的影响及其机制研究

目的 探讨心肌缺氧状态下间充质干细胞（MSC）对巨噬细胞极化的影响,并揭示其调控巨噬 细胞极化的机制。方法 在M0 型巨噬细胞培养液中加入无糖无氧培养的心肌细胞上清液,与MSC 共培养。 采用流式细胞术、Western blotting 及逆转录聚合酶链反应检测M1/M2 型巨噬细胞生物学标志,以判断MSC 在模拟心肌缺氧状态下对巨噬细胞极化的影响,并观察MSC 对巨噬细胞髓样分化因子88 及其上游TLR2、 TLR4 受体表达的影响,以及其下游的细胞核转录因子-κB（NF-κB）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK） 信号通路磷酸化的水平。结果 与M0 组比较,模拟心肌缺氧状态下培养的M0 巨噬细胞成功诱导M1 极化 （P <0.05）;与MSC 共培养促进M1 向M2 极化（P <0.05）。同等条件下加入不同浓度髓样分化因子88 抑制剂后, 与M0+OGD 组比较,M2 型巨噬细胞比例随着ST2825 剂量的增加逐渐升高（P <0.05）。与M0+OGD 组比较, M0+OGD+MSC 组白细胞介素10、转化生成因子-β1 表达水平升高（P <0.05）。Western blotting 检测显示 MSC 共培养后,巨噬细胞TLR2、TLR4 及髓样分化因子88 表达下调,其下游的NF-κB 和MAPK 信号通 路标志分子P65、IKKAα/β、JNK1/2、P38、ERK1/2 等磷酸化水平降低。结论 在心肌缺氧状态下,MSC 促进巨噬细胞M2 极化。其机制之一可能是MSC 下调巨噬细胞TLR2、TLR4 及髓样分化因子88 表达,抑制 TLR2/4- 髓样分化因子88 信号及其下游的NF-κB 和MAPK 通路。     

抗巨噬细胞移动抑制因子单抗对结肠炎小鼠结肠NF-κB、IκB表达的影响

目的探讨抗巨噬细胞移动抑制因子单抗对结肠炎小鼠结肠NF-κB p65、IκBα表达的影响。方法采用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导制备小鼠急性溃疡性结肠炎(UC)的模型,应用抗MIF单抗干预,观察抗MIF单抗对小鼠UC发病的干预作用。该实验分为正常对照组、UC模型组、抗MIF单抗干预组和生理盐水组。造模及药物干预期间观察小鼠一般情况并行疾病活动指数(DAI)评分,第8天断颈处死全部小鼠,行结肠大体损伤评分,HE染色光镜下观察结肠病理改变,免疫组化染色观察NF-κB p65、IκBα在结肠组织炎症细胞的表达情况。结果与正常组相比,UC模型组中NF-κB p65的表达显著增加,而IκBα的表达稍增加,在抗MIF单抗治疗后,NF-κB p65的水平明显低于UC模型组,并且IκBα含量增高。结论抗MIF单抗对DSS诱导的急性UC的小鼠具有保护作用,减低了小鼠结肠组织NF-κB p65的表达水平,提高IκBα的表达水平,从而达到抑制UC小鼠结肠组织NF-κB通路的过度激活的作用。     

LPS诱导巨噬细胞M1型极化对肿瘤生长的影响

目的 研究脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导巨噬细胞M1型极化对肿瘤生长的影响。方法 将Balb/c雌性小鼠随机分为对照组和实验组。Renca细胞皮下建模,待肿瘤体积生长至50mm3时瘤旁注射生理盐水（100μl/只, 1次/2d）或LPS（100μg/只,1次/2d）,采用流式细胞术检测肿瘤相关巨噬细胞M1型极化水平。将小鼠肿瘤细胞系（ML-1、MC38、Renca）分成三组：空白组（完全培养基加入50%DMEM基础培养基）、对照组（完全培养基加入50%巨噬细胞培养基上清液）和实验组（完全培养基加入50%LPS预处理的巨噬细胞培养基上清液）。采用细胞计数试剂-8（cell counting kit-8,CCK-8）实验检测肿瘤细胞增殖情况;采用流式细胞术检测肿瘤细胞周期及凋亡情况。 结果 经LPS处理后肿瘤相关巨噬细胞M1型比例增多（P<0.001）,从而增强其抗肿瘤功能;LPS诱导巨噬细胞M1型极化可显著抑制肿瘤细胞的增殖（Renca：P=0.023;ML-1：P=0.045）;LPS诱导巨噬细胞M1型极化可引起肿瘤细胞周期G0/G1（MC38：P=0.011;ML-1：P=0.022）或S期（Renca：P=0.022）阻滞,进而抑制细胞分裂;LPS诱导巨噬细胞M1型极化可引起肿瘤细胞凋亡（Renca：P=0.04;ML-1：P=0.007）。结论 LPS可通过诱导巨噬细胞M1型极化发挥抗肿瘤功能。     

贝壳杉烷型二萜类化合物PV006对THP-1源性巨噬细胞M1型极化的调节作用

目的 利用体外诱导巨噬细胞向M1型极化的模式,初探贝壳杉烷型二萜类化合物PV006对M1型极化的影响。方法 用佛波酯（PMA）联合脂多糖（LPS）及重组人干扰素-γ（rhIFN-γ）刺激人单核细胞株THP-1细胞,促使其向M1型巨噬细胞分化。通过显微镜观察细胞形态学变化,qRT-PCR法检测诱导后的细胞内IL-1β、TNF-α、IL-6以及IL-8 mRNA表达水平,Western blot法检测核转录因子-κB磷酸化P65蛋白（NF-κB p-P65）和磷酸化信号转导与转录激活物1（p-STAT1）蛋白的表达,确认THP-1细胞向M1型极化,同时检测PV006处理后对上述指标的影响。结果 经PMA联合LPS及rhIFN-γ诱导后,THP-1细胞形态由圆形转变为特征的长梭形或纺锤形,IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8 mRNA表达升高,NF-κB p-P65和p-STAT1蛋白表达增强。不同浓度PV006同步处理后,作M1型极化诱导的THP-1细胞未出现特征性的长梭形或纺锤形,大部分细胞仍为圆形。IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8 mRNA表达水平下调（P<0.05）,NF-κB p-P65和p-STAT1蛋白表达减弱。结论 PMA联合LPS及rhIFN-γ可诱导THP-1源性巨噬细胞向M1型极化,PV006有抑制巨噬细胞向M1型分化的作用。     

DSS诱导的急性实验性肠炎免疫细胞内GSH/GSSG与炎症损伤及细胞因子的关系

目的探讨硫酸葡聚糖钠(dextran sodium sulphate,DSS)诱导的小鼠肠炎模型腹腔巨噬细胞和脾细胞中还原型谷胱甘肽(GSH),氧化型谷胱甘肽(GSSG)的变化特征及其与Th1/Th2型细胞因子IFN-γ,IL-4的分泌及黏膜GSH表达与炎症损伤的关系.方法实验组小鼠给予含5%DSS的蒸馏水自由饮用7天之后处死,采集腹腔巨噬细胞及脾细胞,检测腹腔巨噬细胞及脾细胞中GSH与GSSG的变化.分离出的病变结肠一部分评价其病理学,另一部分结肠及脾脏培养后检测其IL-4、IFN-g的表达.结果DSS诱导的实验性肠炎小鼠腹腔巨噬细胞中的GSH较对照组降低,而GSSG较对照组增多,且GSH/GSSG比值明显减低.其脾细胞内GSH较对照组明显降低,GSH/GSSG比值较对照组降低但差异不明显.DSS诱导的实验性肠炎组病变结肠的IL-4明显升高,而其脾脏分泌的IFN-γ明显降低.结论DSS实验性肠炎中腹腔巨噬细胞是以氧化型巨噬细胞表形为主的.腹腔巨噬细胞及脾细胞中GSH的消耗、GSH/GSSG比值的减低与黏膜损坏及IL-4分泌增多、IFN-γ分泌减少相关.     

绿原酸调控巨噬细胞极化治疗溃疡性结肠炎的机制研究

[目的] 探讨绿原酸(chlorogenic acid，CGA)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium，DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)的治疗作用及分子机制。[方法] C57BL/6小鼠50只，用3%DSS腹腔注射7 d，建立UC动物模型并随机分为5组，除UC模型组外，其余4组分别给予柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine，SZ)100 mg/kg·d和CGA 30、60、120 mg/kg·d灌胃10 d，另以C57BL/6小鼠10只设为正常对照组。检测小鼠疾病活动指数(disease activity index，DAI)；以苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色观察结肠组织病理变化；酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测结肠组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、IL-10、IL-1β水平；定量实时聚合酶链式反应(quantitative real time-polymerase chain reaction，qRT-PCR)检测结肠组织中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)、精氨酸酶-1(arginase-1，Arg-1)的mRNA表达；免疫印迹检测结肠组织小鼠无翅型乳腺肿瘤病毒整合位点家族成员5a(wingless type 5a，Wnt5a)、C1型尼曼-匹克蛋白(Nieman-Pick type C1，NPC1)的蛋白表达；流式细胞术检测结肠组织M1型及M2型巨噬细胞比例。[结果] 与正常对照组比较，UC模型组DAI评分显著增高，结肠组织出现明显炎症病理改变，M1型巨噬细胞比例，TNF-α、IL-6、IL-1β水平，iNOS mRNA表达，Wnt5a及NPC1蛋白表达均显著增高，M2型巨噬细胞比例、IL-10水平及Arg-1 mRNA表达均显著降低(P<0.01)。与UC模型组比较，CGA可显著降低小鼠DAI评分，减轻结肠组织炎症病理改变，降低结肠组织M1型巨噬细胞比例，TNF-α、IL-6、IL-1β水平，iNOS mRNA表达，以及Wnt5a和NPC1蛋白表达，增加M2型巨噬细胞比例、IL-10水平及Arg-1 mRNA表达(P<0.05，P<0.01)。[结论] CGA可通过减少巨噬细胞向M1型极化，从而减轻由DSS诱导的炎症反应以治疗UC，其机制与抑制Wnt5a/NPC1信号通路活化有关。     

5-羟色胺4受体激动剂对糖尿病小鼠结肠黏膜巨噬细胞极化的影响

目的研究5-羟色胺4受体（5-hydroxytryptamine 4 receptor, 5-HT4R）激动剂对糖尿病结肠黏膜巨噬细胞极化的影响。方法使用链脲佐菌素（streptozotocin, STZ）建立小鼠1型糖尿病模型,使用5-HT4R激动剂RS67333进行治疗干预,实验动物随机分为3组,即非糖尿病组、糖尿病对照组和糖尿病给药组。通过免疫荧光方法验证巨噬细胞标记物F4/80和iba1在CX3CR1-GFP+细胞中的表达;通过激光共聚焦显微镜观察CX3CR1-GFP+细胞形态和数目分析结肠黏膜巨噬细胞的活化数量;通过RNAscope技术检测精氨酸酶1（arginase 1, Arg1）和一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）的表达和分布变化。结果免疫荧光结果显示F4/80和iba1免疫阳性的细胞与CX3CR1-GFP+的细胞基本共定位。与非糖尿病小鼠相比,STZ诱导的1型糖尿病模型小鼠结肠黏膜层活化的巨噬细胞数目增多（P<0.001）,且M1型巨噬细胞产物iNOS在黏膜层腔侧表达增加（P<0.001）,而M2型巨噬细胞产物Arg1在黏膜固有层表达下降（P<0.001）;与糖尿病对照组相比,给予5-HT4R激动剂可以抑制活化的巨噬细胞数目（P<0.001）,结肠黏膜iNOS的表达上调（P<0.01）和Arg1的表达下调（P<0.05）。 结论5-HT4R激动剂可以抑制糖尿病小鼠结肠黏膜巨噬细胞向M1型极化。     

Toll样受体4、核转录因子-κB p65在小鼠溃疡性结肠炎中的表达及意义

目的探索Toll样受体4（TLR4）和核转录因子-κB（NF-κB）在小鼠溃疡性结肠炎（UC）中的表达及意义,从而探讨该信号通路在UC发病机制中可能的作用。方法将20只雄性Balb/c小鼠随机分为正常组（N组）和模型组（M组）,每组各10只。采用葡聚糖硫酸钠诱导UC模型,各组于造模后7 d取病变处结肠组织,进行组织学评分,HE染色观察大体形态、组织学评分和免疫组化染色观察NF-κB和TLR4的表达情况。结果 TLR4和NF-κB在M组小鼠结肠黏膜表达显著高于N组（P〈0.05）;且TLR4与NF-κB的表达呈正相关,Pearson相关系数r为0.816。结论TLR4和NF-κB的高表达提示该信号传导通路激活导致下游炎症因子的释放可能是UC发生的机制之一。     

高糖环境下cGAS-STING通路在巨噬细胞活化中的作用

目的 探讨高糖环境下cGAS-STING通路在巨噬细胞活化及炎性反应中的作用。方法 免疫组织化学及免疫荧光双染法检测糖尿病肾病(DN)患者肾脏M1型巨噬细胞及STING的表达及定位。体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,分为:①正常对照组(NG组):培养基葡萄糖浓度为5.5mmol/L;②高糖组(HG组):葡萄糖浓度为30mmol/L; ③HG+C-176组:加入STING抑制剂C-176(1μmol/L);④NG+C-176 组。培养24h,流式细胞术检测M1型及M2型巨噬细胞比例;Western blot法检测cGAS、STING及p-p65 NF-κB表达量;RT-PCR检测细胞cGAS、STING、p-p65 NF-κB及TNF-α、IL-1β的表达量。结果 DN患者肾脏CD86⁺ M1型巨噬细胞明显浸润、STING表达量增加,二者存在共定位。流式细胞术结果表明,与NG组比较,HG组M1型巨噬细胞比例明显增加(P<0.05);Western blot法检测及RT-PCR结果表明,HG组cGAS、STING、p-p65 NF-κB的蛋白及mRNA表达量均明显高于NG组(P<0.05),TNF-α、IL-1β的mRNA水平也显著高于NG组(P<0.05)。STING抑制剂C-176可明显抑制HG组M1型巨噬细胞活化及STING、p-p65 NF-κB、TNF-α,IL-1β的表达(P < 0.05)。结论高糖环境下,巨噬细胞cGAS-STING信号通路被激活、该通路可进一步介导M1型巨噬细胞活化、促进下游炎性反应。     

PF4通过NF-κB上调巨噬细胞MMP-9表达

目的观察血小板因子4(PF4)是否通过核因子κB(NF-κB)上调THP-1单核源性巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达。方法佛玻酯诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞。巨噬细胞分别在NF-κB抑制剂(PDTC)缺乏或存在情况下与溶媒或PF4(100μg/L)孵育一定时间,RT-PCR检测MMP-9 mRNA水平;同时,巨噬细胞与PF4(25~200μg/L)单独或结合Toll样受体4(TLR4)阻断剂(抗体HTA125,anti-TLR4)孵育,ELISA法检测NF-κB含量。结果 PF4较对照组上调巨噬细胞MMP-9 mRNA水平。而NF-κB抑制剂抑制PF4诱导的巨噬细胞MMP-9表达上调。PF4呈浓度依赖性增加巨噬细胞的NF-κB含量,最大效应浓度为100μg/L。TLR4阻断剂逆转PF4诱导的巨噬细胞NF-κB含量增加。结论 PF4可能通过NF-κB上调巨噬细胞MMP-9的表达。TLR4可能是PF4-NF-κB通路中NF-κB的上游信号分子。     

清肠栓脐贴调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻小鼠溃疡性结肠炎

目的:研究清肠栓脐贴对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的作用,并基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路探讨其作用机制。方法:取40只雄性Balb/c小鼠,采用3.5%DSS自由饮用连续7 d的方法制备UC模型,另取10只小鼠作为正常组。造模7 d后,造模小鼠随机分为模型组、美沙拉嗪组、清肠栓方组和清肠栓脐贴组,每组10只。美沙拉嗪组灌胃给予0.1 g/kg美沙拉嗪溶液;清肠栓方组和清肠栓脐贴组分别采用灌胃和脐贴方式给予0.118 g/kg清肠栓生药;正常组和模型组灌胃给予等量0.9%NaCl溶液。均每日1次,连续9 d。造模期间,观察小鼠的一般活动和排便情况,计算疾病活动指数(DAI)。末次给药后采集血液和结肠样本,HE染色后光镜下观察各组结肠组织的病理学变化;ELISA检测血清TNF-α和IL-6水平,PCR检测结肠组织TNF-α、IL-6、IL-1β基因表达,Western blot检测结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达。结果:①造模第7天,造模小鼠均出现明显血便,且精神萎靡、体质量明显下降;DAI评分较正常组显著升高(P0.01)。②结肠组织病理观察显示,与正常组比较,模型组小鼠结肠上皮组织部分缺损,腺管萎缩或消失,结构紊乱,杯状细胞减少,炎症细胞浸润严重。美沙拉嗪组、清肠栓方组、清肠栓脐贴组小鼠结肠黏膜及黏膜下层可见少量炎症细胞浸润,病变程度较模型组明显减轻。③与正常组比较,模型组小鼠血清IL-6和TNF-α水平显著升高(P0.01);与模型组比较,美沙拉嗪组、清肠栓方组、清肠栓脐贴组血清IL-6和TNF-α水平显著降低(P0.05,P0.01)。不同药物组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。④与正常组比较,模型组小鼠结肠TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达水平及TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平显著升高(P0.01);与模型组比较,美沙拉嗪组、清肠栓方组、清肠栓脐贴组结肠TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达水平及TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平显著下调(P0.01)。不同药物组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:清肠栓脐贴可明显改善UC小鼠的一般活动及排便情况,减轻肠道黏膜上皮损伤和炎症浸润,其作用机制与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。     

酪酸梭菌对实验性溃疡性结肠炎小鼠ITF、NF-κB和TNF-α表达的影响及意义

目的观察酪酸梭菌对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的实验性溃疡性结肠炎（UC）小鼠结肠粘膜中ITF、NF-κB和TNF-α表达的影响,了解酪酸梭菌治疗UC的效果及可能的作用机制。方法用3%的DSS建立小鼠溃疡性结肠炎的模型。60只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型（空插灌胃针）组、阴性对照（生理盐水）组、阳性对照（美沙拉嗪）组、酪酸梭菌低剂量（106CFU/ml）组、高剂量（107CFU/ml）组。观察小鼠疾病活动指数（DAI）评分和肠道病理形态改变,以检测各处理组的效果;免疫组化法检测结肠组织中ITF和NF-κB的表达;放射免疫法检测TNF-α的表达。结果酪酸梭菌可以影响急性期UC小鼠的一般情况,降低DAI积分,减轻肠道的组织学损伤程度;与模型组和阴性对照组相比,结肠中ITF的表达升高（P〈0.05）;NF-κB和TNF-α的表达下降（P〈0.05）,其中低剂量组和阳性对照组效果相当（P〉0.05）。结论酪酸梭菌对急性UC有治疗作用,疗效与剂量有一定的相关性,其部分机制可能与酪酸梭菌增加ITF的表达,抑制NF-κB和TNF-α的表达有关。     

泽兰对小鼠溃疡性结肠炎急性期病理的影响

目的探讨泽兰水煎剂对实验性小鼠溃疡性结肠炎急性期结肠黏膜病理的影响。方法健康雄性昆明小鼠60只,按随机数字表法分为对照组、模型组和泽兰组,每组20只。对照组自由饮用蒸馏水＋生理盐水灌胃,模型组饮用含5%葡聚硫酸钠（DSS）的蒸馏水＋生理盐水灌胃,泽兰组饮用含5%DSS的蒸馏水＋泽兰水煎剂灌胃。实验结束时处死小鼠,取近肛门2 cm处结肠组织,制作病理组织切片,光镜下观察。结果模型组、泽兰组均成功建立小鼠溃疡性结肠炎急性期模型。实验结束时对照组、泽兰组小鼠体重均明显大于模型组（P〈0.05）,但对照组小鼠体重与泽兰组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。实验结束时对照组、泽兰组小鼠体重均明显高于实验前（P〈0.05）,实验结束时模型组小鼠体重明显低于实验前（P〈0.05）。对照组和泽兰组小鼠结肠标本大体形态和组织形态学评分均明显低于模型组（P〈0.05）;而泽兰组结肠标本大体形态和组织形态学评分与对照组比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论泽兰能明显减轻DSS所致小鼠溃疡性结肠炎的急性期病理改变。