组蛋白H3S10磷酸化在镧所致子代大鼠空间记忆损伤中的机制研究

目的 探讨海马组蛋白H3第10位丝氨酸磷酸化（P-H3S10）在镧暴露所致子代大鼠空间记忆损伤中的作用。方法 将32只雌性Wistar大鼠,随机分为对照组和0.25%、0.50%、1.00% LaCl3暴露组,从妊娠0 d开始以饮水方式进行LaCl3暴露,至子代大鼠断乳后1个月结束。采用Morris水迷宫实验检测子代大鼠的空间记忆能力;采用免疫荧光法分析P-H3S10在海马CA1区的分布和表达情况;采用Western blot法测定不同组子代大鼠海马中磷酸化的丝裂原和应激激活的蛋白激酶1（P-MSK1）、P-H3S10、蛋白磷酸酶1（PP1）和早期生长反应蛋白1（EGR1）的蛋白表达水平;采用Real-time PCR法测定海马中EGR1的转录水平。结果 在Morris 水迷宫实验中,LaCl3暴露组子代大鼠搜索隐匿平台的策略受到影响,其寻找隐匿平台的潜伏期长于对照组（F=18.103,P<0.05）;随着LaCl3暴露剂量的增加,P-H3S10在海马神经元CA1区的阳性细胞数逐渐减少,排列愈加紊乱,表达减弱（F=28.065,P<0.05）;0.50%和1.00%LaCl3组子代大鼠海马中P-MSK1、P-H3S10和EGR1蛋白表达均低于对照组（F值分别为110.034,44.478,28.817,P均<0.05）;LaCl3暴露组海马中PP1表达显著高于对照组（F=211.384,P<0.05）,EGR1 mRNA的转录水平显著低于对照组（F=58.478,P<0.05）。 结论 LaCl3可能是通过抑制海马组织中P-MSK1的表达,进而干扰组蛋白H3S10的磷酸化和去磷酸化平衡,影响基因EGR1的转录和表达,从而损伤子代大鼠的空间记忆能力。     

亚砷酸钠对人永生化皮肤角质形成细胞组蛋白H3K9me2及组蛋白去甲基化酶JHDM2A和JHDM2B表达的影响

目的探讨亚砷酸钠对人永生化皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)组蛋白H3K9me2及组蛋白去甲基化酶JHDM2A、JHDM2B表达的影响。方法将对数生长期HaCaT细胞暴露于含终浓度分别为0.00 (对照)、2.50、5.00、10.00μmol/L亚砷酸钠的DMEM高糖培养基染毒24 h。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中的JHDM2A、JHDM2B mRNA表达水平,采用免疫印迹法检测H3K9me2修饰水平和JHDM2A、JHDM2B蛋白表达水平。结果与对照组比较,5.00、10.00μmol/L亚砷酸钠染毒组HaCaT细胞H3K9me2蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05),且亚砷酸钠剂量与H3K9me2蛋白的表达水平呈负相关(r=-0.898)。各亚砷酸钠染毒组HaCaT细胞中JHDM2A和JHDM2B mRNA和蛋白的表达水平与对照组比较无明显变化,差异均无统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸钠可以诱导组蛋白H3K9me2表达降低,但不能改变组蛋白去甲基化酶JHDM2A和JHDM2A的表达水平,JHDM2A、JHDM2B可能不参与砷致HaCaT细胞组蛋白H3K9me2的去甲基化作用。     

孕哺期母鼠镧暴露对子代神经系统的影响

目的探讨孕哺期母鼠镧暴露对子代神经系统的影响。方法Wistar母鼠从妊娠起至仔鼠断乳止通过饮水连续染镧21 d,跳台实验检测仔鼠学习记忆能力,荧光分光光度计法测定细胞内Ca2+浓度,流式细胞仪法测定海马细胞凋亡率。结果随着三氯化镧(LaCl3)剂量的增加,镧暴露子代大鼠潜伏期显著下降,而错误次数显著增加;细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)显著升高;镧暴露组海马细胞凋亡率显著增加,而且差异均有统计学意义(P0.05)。结论孕哺期母鼠镧暴露可以损害子代大鼠学习记忆功能,可能与镧暴露使海马细胞内游离Ca2+浓度升高和细胞凋亡增加有关。     

镧对子代大鼠学习记忆能力、海马神经细胞钙稳态及ERK蛋白表达的影响

雌性Wistar大鼠随机分为4组,对照组饮用蒸馏水,3个染毒组分别饮用不同浓度的氯化镧(2.5 g/L,5 g/L,10 g/L)水溶液,从雌鼠受孕起至子鼠断乳后1个月连续染镧。采用Morris水迷宫检测子代大鼠学习记忆能力,Fura-2/AM探针法检测海马神经细胞内游离Ca2+浓度,Western blot法检测海马组织ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平。结果表明,随氯化镧染毒剂量的增加,子代大鼠寻找平台的潜伏期和游泳距离增加(P<0.05),在目标象限的停留时间减少(P<0.05),神经细胞内游离Ca2+水平升高(P<0.05),p-ERK1/2蛋白表达水平下降(P<0.05)。提示氯化镧染毒可以造成子代大鼠学习记忆能力下降,其原因可能与其导致神经细胞内钙稳态失衡及p-EPK1/2蛋白表达水平下降有关。 更多还原     

Hp感染与胃癌组织中PRC2和H3K27me3蛋白的相关性分析

目的探究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染与胃癌组织中多梳抑制复合物2(Polycomb Repressive Complex 2,PRC2)与H3K27me3组蛋白之间的相关性,探究Hp感染在胃癌发病中的作用。方法选取2017年1月-2018年5月于新疆医科大学第三临床医学院接受治疗的106例胃癌患者为研究对象,根据患者是否发生Hp感染将患者分为两组,其中发生Hp感染的49例患者为试验组,未发生Hp感染的57例患者为对照组。使用快速尿素酶检测法、PCR检测以及Giemsa染色法检测患者Hp感染情况;使用免疫组织化学法检测两组患者胃癌组织中PRC2家族成员以及H3K27me3组蛋白的表达情况并进行比较;检测试验组患者胃癌组织与癌旁组织中PRC2家族成员以及H3K27me3组蛋白的表达情况并进行比较;使用Logistic多因素探究Hp感染与胃癌组织中PRC2和H3K27me3组蛋白的相关性。结果快速尿素酶检测法、PCR检测以及Giemsa染色法检测的Hp感染率分别为44.34%、40.57%、46.23%,无统计学差异。试验组患者PRC2阳性率83.67%、H3K27me3组蛋白阳性率79.59%,高于对照组患者的24.56%、19.30%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。试验组患者胃癌组织中PRC2阳性率73.46%、H3K27me3组蛋白阳性率67.35%,高于癌旁组织的15.79%、12.28%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Logistic多因素回归分析显示,Hp感染与胃癌组织中PRC2和H3K27me3组蛋白的表达存在相关性,Hp感染与PRC2和H3K27me3组蛋白含量呈正相关关系,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Hp感染与胃癌组织中PRC2和H3K27me3组蛋白的表达呈正相关关系,发生Hp感染的患者PRC2和H3K27me3组蛋白更易表达,在胃癌发病中有一定的作用。     

镧对大鼠海马CA3区cAMP应答元件结合蛋白磷酸化和及刻早期基因表达的影响

目的研究镧(La)对大鼠海马CA3区钙调蛋白(CaM)活性、钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV(CaMKIV)和cAMP应答元件结合蛋白(CREB)磷酸化以及c-fos、c-jun和egr1基因表达的影响。方法 40只成年雌性大鼠随机分成对照组和低、中、高剂量LaCl3染毒组,LaCl3组仔鼠在出生至断乳前通过母乳染毒,断乳后通过自由饮水的方式染毒1个月。采用磷酸二酯酶法检测仔鼠海马CA3区CaM活性,Western blot法检测仔鼠海马CA3区p-CaMK IV和p-CREB蛋白表达水平,RT-PCR法检测仔鼠海马CA3区c-fos、c-jun和egr1mRNA表达水平。结果各LaCl3染毒组海马CA3区CaM活性和p-CaMK IV、p-CREB蛋白表达水平均显著低于对照组,且具有一定的剂量-反应关系。低、中剂量LaCl3染毒组c-fos和c-jun mRNA表达显著低于对照组,中剂量LaCl3染毒组egr1 mRNA表达显著低于对照和低剂量LaCl3染毒组,高剂量LaCl3染毒组c-fos、c-jun和egr1 mRNA表达显著低于对照和低、中剂量LaCl3染毒组。结论镧可通过降低海马CA3区CaM活性和CaMK IV、CREB磷酸化以及c-fos、c-jun和egr1基因转录水平,从而损害大鼠的学习记忆能力。     

组蛋白H3第27位赖氨酸在脑膜瘤分级中的临床诊断意义

目的 探讨组蛋白H3第27位赖氨酸(H3K27me3)在不同WHO级别脑膜瘤组织中的表达情况及其临床诊断意义。方法 收集宁波市临床病理诊断中心2018年—2021年经病理诊断的142例脑膜瘤患者，采用免疫组化学方法检测不同级别脑膜瘤组织中H3K27me3蛋白的表达，并分析其与临床病理指标的关系。结果 142例患者中，WHO 1级81例(57.0%)、WHO 2级55例(38.7%)、WHO 3级6例(4.3%)。脑膜瘤中H3K27me3蛋白在WHO 1级(85.2%)阳性表达率高于WHO 2级(25.5%)及WHO 3级(16.7%)阳性表达率，二者比较差异有统计学意义(P<0.05);WHO 2级与WHO 3级阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。脑膜瘤中H3K27me3蛋白的表达与肿瘤大小、坏死、侵犯脑组织及KI67指数相关(P<0.05)。结论 H3K27me3蛋白在WHO 2级和3级脑膜瘤中明显低表达，有助于脑膜瘤的病理分级。     

孕哺期氯化镧暴露对子代大鼠学习记忆及细胞外信号调节激酶通路的影响

目的研究孕哺期氯化镧暴露对子代大鼠大脑皮质细胞外信号调节激酶(extracellular-signal-regulated kinases,ERK)、MAPK/ERK(MEK)及磷酸化水平和Raf-1表达的影响。方法将32只健康成年雌性Wistar大鼠随机分成对照和低、中、高剂量氯化镧组,与雄性成年Wistar大鼠按1∶1比例同笼交配。自受孕起对照组饮用蒸馏水,低、中、高剂量染镧组分别饮用含1.25、2.5、5.0 g/L LaCl3的蒸馏水溶液,并哺育其子代大鼠,至子代大鼠断乳后结束染毒。采用Morris水迷宫测试子代大鼠空间辨别性学习记忆能力,采用透射电镜法研究子代大鼠大脑皮质神经突触超微结构的改变,采用Western blot法测定子代大鼠大脑皮质Raf-1、MEK、ERK蛋白水平和MEK、ERK磷酸化水平。结果各染镧组仔鼠学习记忆能力与对照组相比明显下降,且随着染镧剂量的增加下降越来越明显。与对照组相比,各染镧组仔鼠大脑皮质神经突触超微结构出现异常改变,如突触活性带变短、突触后致密物变薄,其中5.0 g/L LaCl3组神经突触超微结构异常改变最为明显。各染镧组Raf-1蛋白水平低于对照组(P0.05),且随着染镧剂量的增加而下降。各染镧组p-MEK和p-ERK蛋白水平低于对照组(P0.05),且随着染镧剂量的增加而降低,其中5.0 g/L LaCl3组p-MEK和p-ERK蛋白水平与对照组、1.25和2.5 g/L LaCl3组比较均下降(P0.05)。而各染镧组MEK和ERK蛋白水平与对照组比较无明显变化(P0.05)。结论孕哺期氯化镧暴露导致子代大鼠大脑皮质中Raf-1表达、MEK和ERK磷酸化水平降低,这可能是氯化镧对神经系统毒性损伤的机制之一。     

调控组蛋白H3K27me3水平对砷致肝细胞凋亡过程中BCL2表达的影响

目的:探讨在砷诱导肝细胞凋亡过程中,组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（H3K27me3）水平对抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2（BCL2）基因表达的影响。方法:体外培养大鼠肝细胞BRL-3A,根据砷处理因素将实验分为两部分,未染砷时分为正常、转染试剂、阴性转染、JMJD3（H3K27me3特异性去甲基化酶）小干扰RNA（si...     

氯化镧对大鼠大脑皮质即早基因表达的影响

目的 研究大鼠生长发育期氯化镧(lanthanum chloride,LaCl3)暴露对大鼠大脑学习记忆能力和皮质即刻早期基因c-jun、egr1和Arc表达的影响.方法 将40只Wistar孕鼠随机分为饮用0.25%、0.5%、1.0%LaCl3蒸馏水溶液的3个染毒组和饮用蒸馏水的对照组.染毒组仔鼠断乳后继续分别自行...     

X线三维成像和三维显示

本文对Ｘ线三维成像和三维显示进行了研究。首先讨论了基于锥形束扫描成像结构的直接体积重建的理论和应用问题，接着形成并实现了基于体积显示的三维显示方法，体积显示在某些特定情形下优于表面显示。结果表明Ｘ线三维成像和三维显示对于应用于临床和计算机辅助手术和医疗评价等的三维影像系统具有重要的价值。     

3-羟基-3-甲基戊二酸尿症患儿的临床诊治及3-羟基-3-甲基戊二酰裂解酶基因新突变分析

目的探讨3-羟基-3-甲基戊二酸尿症患儿的主要临床表现、生化特点及3-羟基-3-甲基戊二酰裂解酶(HMGCL)基因突变检测结果。 方法收集2014年12月7日于北京大学第一医院儿科就诊的1例3-羟基-3-甲基戊二酸尿症患儿的临床病历资料为研究对象。采用回顾性研究方法分析该患儿的入院查体及辅助检查结果、诊疗情况;对患儿及父母进行HMGCL基因检测,并于患儿出院后6个月,对其进行随访。本研究遵循的程序符合北京大学第一医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,对患儿及其父母进行基因检测均获得受试对象及受试对象监护人的知情同意。 结果患儿年龄为1岁1个月,男性。因"不明原因腹泻、呕吐,反复呕血,发热2 d,昏迷3 h"收入本院。入院查体及辅助检查结果示：白细胞计数升高、肝功能损害、电解质紊乱、低血糖、凝血功能异常、低蛋白、血氨水平高、代谢性酸中毒;头颅MRI检查结果示：双侧侧脑室旁及双侧额颞顶皮层下异常信号。确诊为3-羟基-3-甲基戊二酸尿症。经限制蛋白质摄入,静脉滴注葡萄糖和左旋肉碱治疗后症状缓解。该患儿HMGCL基因c.509G >T(鸟嘌呤>胸腺嘧啶)发生点突变,c.348＋1G > C(鸟嘌呤>胞嘧啶)发生剪切位点突变,导致外显子拼接错误,其中c.509G >T是来自母亲的杂合突变,c.348＋1G > C是患儿新出现纯合突变,c.348＋1G > C剪切位点突变,导致第170位的半胱氨酸剪切突变为苯丙氨酸。出院后6个月后随访结果示：患儿年龄为1岁7个月,智力运动发育稍落后,但无明显倒退,无抽搐发作,全身情况良好,各项生化指标及尿3-羟基-3-甲基戊二酸水平降低。 结论3-羟基-3-甲基戊二酸尿症系少见的常染色体隐性遗传疾病,通过HMGCL基因检测及HMGCL基因分析不仅有助于诊断该病,对于指导家系遗传咨询及产前诊断亦至关重要。     

Synthesis and selective human monoamine oxidase inhibition of 3-carbonyl, 3-acyl, and 3-carboxyhydrazido coumarin derivatives

Several 3-carbonyl (1-26), 3-acyl (27-52), and 3-carboxyhydrazido (53-58) coumarins have been synthesized in high yields (72-99%) and tested in vitro for their human monoamine oxidase A and B (hMAO-A and hMAO-B) inhibitory activity. Different substituents on the coumarin nucleus were evaluated for their effect on biological activity and isoform selectivity. Substitution at position C7 of the 3-ethyl ester coumarin ring, or the introduction of a hydrazido substituent at C3, were important to obtain highly potent and selective hMAO-B inhibitors with IC₅₀ values in the nanomolar range. Some derivatives were also submitted to a stability test and showed no chemical cleavage in vitro.     

STAT3,pSTAT3与TFF3在甲状腺乳头状癌中的临床意义

目的探讨甲状腺乳头状癌(Papillary Thyroid Carcinomas,PTC)STAT3及其磷酸化水平与三叶因子3(Trefoil Factor 3,TFF3)表达及相关性。方法采用免疫组织化学检测31例组织芯片中PTC及癌旁组织STAT3、p STAT3和TFF3阳性率与平均光密度(AOD)值;Western Blot检测6例PTC和癌旁手术标本中相应蛋白的含量,并进行相关分析。结果 (1)免疫组化:TFF3蛋白在PTC中均高表达(P0.001),TFF3阳性率与AOD值在直径2 cm组、淋巴结转移组和临床Ⅲ~Ⅳ病例明显高于直径≤2 cm组、无淋巴结转移组和Ⅰ~Ⅱ期者(χ~2=12.120,P=0.001,χ~2=7.517,P=0.043,χ~2=10.490,P=0.003;AOD值:t=2.810,P=0.0064,t=2.234,P=0.039,t=2.926,P=0.0058);PTC中STAT3阳性率和AOD值与临床资料无关。p STAT3为胞核阳性,阳性率和AOD值在PTC组织低于癌旁组织,直径2 cm组、淋巴结转移组和临床Ⅲ~Ⅳ病例明显低于直径≤2 cm组、无淋巴结转移组和Ⅰ~Ⅱ期者(χ~2=4.963,P=0.046,χ~2=4.882,P=0.033;AOD值:t=2.195,P=0.041,t=2.790,P=0.0068,t=2.018,P=0.042);TFF3与STAT3呈正相关,与p STAT3呈负相关(P0.01)。(2)Western Blot:TFF3和STAT3蛋白在PTC的表达高于癌旁组织(t=2.841,P=0.008,t=2.925,P=0.007),但p STAT3却明显低于癌旁组织(t=2.713,P=0.009)。结论甲状腺乳头状癌TFF3和STAT3高表达、p STAT3低表达对PTC不良预后的预测有指导意义。     

2HRZE/4H3R3和2H3R3Z3E3/4H3R3治疗初治涂阳肺结核病社会效果评价

目的 对2HR ZE/4H3R3和2H3R3Z3E3／4H3R3治疗初治涂阳肺结核病患者社会效果评价，为结核病的社会控制提供依据。方法 应用中国卫生部结核病控制项目2HR Z E/4H3R3方案，治疗初治涂阳肺结核病人的监测资料和2003年对《中国结核病控制规划(2001—2010)))阶段评估，抽查“世界银行贷款 中国结核病控制项目”2H3R3Z3E3/4H3R3方案治疗初治涂阳肺结核病人治疗的资料进行分析。结果 在落实较好的全程督导服药治疗下，两方案已达到国家规划目标。目前2H3R3Z3E3/4H3R3未能达到国家规划目标，治愈率明显较强化期每日服药方案低，而失败率、丢失率、副反应停药率明显较高。结论 经费落实不到位导致患者全程督导服药治疗不能很好落实，是影响化疗效果的主要原因。由于全程督导服药治疗不能很好落实，致使全程隔日服药方案不能胜任规划目标的要求，提示结核病控制的方向。     

子宫内膜癌组织中LAG - 3、TIM - 3、BTLA 的表达情况及意义

目的 研究子宫内膜癌组织中LAG - 3、TIM - 3、BTLA 的表达及其临床意义。方法 选取2012年1月 - 2016年12月于徐州医科大学附属医院行全子宫切除术患者120例,其中术后病理证实为子宫内膜癌组织60例、子宫内膜不典型增生组织30例、正常子宫内膜组织30例。采用免疫组化染色方法,检测LAG - 3、TIM - 3、BTLA 在不同内膜组织中的表达情况,并分析三者的表达与子宫内膜癌患者临床病理特征的相关性。采用 Kaplan - Meier生存分析,COX回归模型分析方法,探索子宫内膜癌患者预后的影响因素。结果 子宫内膜癌组织中,LAG - 3、TIM - 3、BTLA的表达率较子宫内膜不典型增生组、正常子宫内膜组均增高（P均＜0.05）。患者的年龄、分化程度、病理类型均不影响LAG - 3、TIM - 3、BTLA的阳性表达（P均＞0.05）,而肿瘤临床分期、淋巴结转移可以影响LAG - 3、TIM - 3、BTLA的表达（P均＜0.05）;肿瘤肌层浸润程度会影响TIM - 3、BTLA的阳性表达,但对LAG - 3的表达无显著影响。Cox回归分析结果显示:FIGO分期、淋巴结转移、LAG - 3、TIM - 3、BTLA蛋白的阳性表达与患者预后相关（P均＜0.05）,LAG3、TIM3、BTLA是患者生存的独立危险因素。结论 LAG - 3、TIM - 3、BTLA在子宫内膜癌组织中均有较高表达,且均为患者预后的负性影响因子。     

Serum levels of 3-keto-desogestrel after oral administration of desogestrel and 3-keto-desogestrel

In a cross-over study with orally administered desogestrel (0.150 mg) plus ethinyloestradiol (0.030 mg) and 3-keto-desogestrel (0.150 mg) plus ethinyloestradiol (0.030 mg) in ten women under steady-state conditions, the serum levels of 3-keto-desogestrel were monitored by radioimmunoassay.

No statistically significant differences between treatment groups were found with respect to the areas under the curve of the serum levels versus time (AUC), peak heights and peak times.

The individual AUCs for 3-keto-desogestrel after dosing with desogestrel (plus EE) or 3-keto-desogestrel (plus EE) show a similar degree of variation.

The biotransformation of desogestrel into 3-keto-desogestrel is rapid and appears not to be limited by the metabolic capacity of the normal liver.     

小鼠ZnT3 cDNA片断的克隆及其mRNA表达

为了解ZnT3(zinc transporter3)mRNA在小鼠各组织中的表达状况，用反转录多聚酶链反应法（RTPCR）克隆ZnT3 cDNA片段，荧光标记的全自动测序法确定ZnT3 cDNA片断的减基顺序，RT－PCR法检测小鼠各组织ZnT3mRNA表达并比较在组织中的表达量，结果：RT－PCR获得单一条带的片断，其大小700bp，碱基顺序与文献报道序列一致，在大脑皮层，海马和睾丸中检测到ZnT3 mRNA表达，其中睾丸中表达量最高，大脑皮层，海马表达量无显著性差别，心，肝脾，肺，肾，小肠及嗅球，小脑等组织中未见ZnT3 mRNA表达，说明克隆到正确的ZnT3 cDNA片断，ZnT3 mRNA主要表达于睾丸，大脑皮层，海马，提示ZnT3可能在脑功能和生殖功能中具有重要作用。