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1.
目的 探索黄芩-黄连防治神经炎症的配伍优势,并基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路,阐明黄芩-黄连配伍优势的作用特点及机制。方法 选取体外具有代表性的小鼠小胶质细胞(BV2),将BV2分为8组,分别为正常组、模型组、黄芩-黄连组、吡拉西坦组、黄芩组、黄连组;利用细菌脂多糖(LPS)建立BV2细胞炎症模型,通过细胞增殖活性检测(CCK-8)试剂盒检测细胞活性;明场下观察细胞形态;酶联免疫吸附测定法(ELISA)、免疫荧光法测定药物对BV2细胞促炎因子产生及释放的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达;细胞免疫荧光检测NF-κB p65核转位情况;通过TLR4信号转导抑制剂CLI-095、NF-κB阻断剂PDTC进行黄芩-黄连抗神经炎症作用靶点的确认。结果 与正常组比较,LPS诱导的模型组细胞大多处于激活状态,培养液及细胞内的IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著升高(P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65的mRNA表达显著升高(P<0.01),NF-κB p65的入核现象明显;与模型组比较,黄芩-黄连、吡拉西坦组预处理后,BV2细胞形态大部分恢复,IL-6、TNF-α、IL-1β水平均显著降低(P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65 mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),NF-κB p65大多存在于细胞质中;黄芩组、黄连组与模型组比较,细胞形态略有恢复,促炎因子水平及TLR4、MyD88、NF-κB p50、NF-κB p65 mRNA表达量有所降低;与黄芩-黄连组比较,黄芩组、黄连组的促炎因子抑制作用效果显著低于药对组;与模型组比较,应用信号通路特异抑制剂“黄芩-黄连+CLI-095”组、“黄芩-黄连+PDTC”组,能够明显降低TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65的mRNA表达(P<0.05,P<0.01),并明显抑制NF-κB p65转入细胞核内。结论 黄芩与黄连相须配伍后的抗神经炎症作用明显优于单味黄芩或黄连;该药对的抗神经炎症优势与抑制小胶质细胞中的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路激活密切相关;通过验证说明TLR4、MyD88、NF-κB为黄芩-黄连发挥药对配伍优势的潜在靶点。 相似文献
2.
目的 观察痰瘀同治对糖尿病大鼠心肌Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/核转录因子-κB抑制蛋白(IκB)信号通路的干预作用,探讨其改善糖尿病大鼠心肌炎症病变的相关机制。方法 选取清洁级雄性SD大鼠45只,随机分为正常组、化痰组、化瘀组、痰瘀同治组、阿拉氯胺组、模型组。除正常组外,其余各大鼠单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)55 mg·kg-1建立糖尿病模型,正常喂养3周后,化痰组、化瘀组、痰瘀同治组每日分别给予小陷胸汤(4.05 g·kg-1),血府逐瘀汤(7.02 g·kg-1),抵当陷胸汤(8.10 g·kg-1)灌胃,阿拉氯胺组每日予阿拉氯胺(3 mg·kg-1)灌胃,连续给药8周后麻醉取材。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测心肌组织TLR4蛋白及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平;免疫组化法检测NF-κB p65和NF-κB抑制蛋白α(IκBα)表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠心肌TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α的mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,各用药组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平均有不同程度下降(P<0.01);组间比较发现,痰瘀同治组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平比化瘀组和化痰组下降更明显(P<0.05,P<0.01)。结论 痰瘀同治法能够改善糖尿病大鼠心肌炎症病变,且效果优于单独使用化痰法或化瘀法,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB/IκB信号通路的激活有关。 相似文献
3.
目的 研究补肾化痰方对双侧卵巢切除术(OVX)诱导的骨质疏松大鼠脂多糖(LPS)及Toll样受体4(TLR4)/髓样细胞分化蛋白88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法 将60只SPF级6月龄的雌性大鼠随机分为假手术组,模型组,戊酸雌二醇组,补肾化痰方低、中、高剂量组,使用双侧OVX造模,造模后1周,每组中挑选8只,戊酸雌二醇组按0.184 mg·kg-1,补肾化痰方低、中、高剂量组分别按4.7,9.4,18.8 g·kg-1灌胃,假手术与模型组给予0.9%生理盐水4 mL灌胃,干预12周后处死取材。运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清LPS含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测骨组织中TLR4,MyD88,磷酸化(p)-NF-κB p65的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测骨组织中TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA水平及通路相关炎症因子白细胞介素(IL)-1β,IL-6 mRNA的表达。结果 与假手术组比较,模型组的血清LPS水平,骨组织中TLR4,MyD88,p-NF-κB p65蛋白表达水平,TLR4,MyD88,NF-κB p65,IL-1β,IL-6 mRNA水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,戊酸雌二醇组和补肾化痰方高剂量组血清LPS水平,骨组织中TLR4,MyD88,p-NF-κB p65的蛋白表达,TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA水平,以及下游炎症因子IL-1β,IL-6 mRNA水平有不同程度降低(P<0.05)。结论 补肾化痰方可以降低血清LPS含量,调控TLR4/MyD88/NF-κB通路中TLR4,MyD88,NF-κB p65,p-NF-κB p65的mRNA水平及蛋白表达,降低骨组织中IL-1β,IL-6 mRNA水平,改善骨微结构,抑制绝经后骨质疏松症的病情发展。 相似文献
4.
目的 观察苓桂术甘汤对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)模型小鼠的疗效及相关作用机制。方法 将72只7周龄SPF级C57BL/6小鼠按体质量随机分为正常组、模型组、地塞米松组(5 mg·kg-1)、苓桂术甘汤高、中、低剂量组(9.36、4.68、2.34 g·kg-1),每组12只。除正常组外,其余各组采用鼻滴法予LPS(50 μg/只)构建小鼠ALI模型。给药组分别在造模前连续灌胃给药7 d。造模后12 h取小鼠肺组织,测定双肺湿/干质量比(W/D);苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态学变化;支气管肺泡灌洗液(BALF)采用细胞计数仪计算总细胞数,瑞氏吉姆萨染色检测炎性细胞的分类(中性粒细胞、巨噬细胞)与数量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测BALF中炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测核转录因子-κB(NF-κB)炎症通路中NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、NF-κB p65及二者磷酸化蛋白的表达,并计算磷酸化蛋白/总蛋白比值。结果 与正常组比较,模型组小鼠肺组织严重损伤,肺泡完整结构被破坏,肺泡壁增厚,大量炎性细胞与红细胞浸润,肺水肿显著加重(P<0.01)。BALF中总细胞与炎性细胞数量,IL-6、TNF-α及肺组织NF-κB p65、IκBα磷酸化蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型组比较,苓桂术甘汤高、中、低剂量组与地塞米松组小鼠肺损伤明显缓解,肺水肿显著减轻(P<0.01)。BALF中总细胞与中性粒细胞数量,IL-6、TNF-α及肺组织NF-κB p65、IκBα磷酸化蛋白表达显著下调(P<0.01),巨噬细胞数量明显减少(P<0.05)。结论 苓桂术甘汤对LPS-ALI小鼠具有抗炎保护作用,能有效减轻炎症、利水消肿,其机制可能与抑制NF-κB通路活化有关。 相似文献
5.
目的 观察五味消毒饮对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾系膜细胞(HBZY-1)核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,并探讨其作用机制。方法 将大鼠肾系膜细胞随机分为正常组、模型组、贝那普利组(50 μmol·L-1)、五味消毒饮高、低剂量组(2.75、0.69 g·kg-1)。正常组、模型组、贝那普利组使用10%正常大鼠血清,五味消毒饮高、低剂量组使用10%含药血清。除正常组外,其余4组给予LPS(100 μg·L-1)以体外干预。倒置显微镜观察细胞形态的变化;免疫荧光法(IF)检测NF-κB p65的表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、层粘连蛋白(LN)和纤连蛋白(FN)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中IL-1β、FN、NF-κB p65 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶β(p-IKKβ)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)、NF-κB p65蛋白的表达。结果 与正常组比较,模型组细胞增殖显著增多(P<0.01),细胞上清中IL-1β、ICAM-1、LN、FN的含量显著增多(P<0.01),IL-1β、FN、NF-κB p65 mRNA表达显著升高(P<0.01),p-IKKβ、p-IκBα、NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组细胞增殖明显降低(P<0.05,P<0.01),细胞上清中IL-1β、ICAM-1、LN、FN的含量明显减少(P<0.05,P<0.01),IL-1β、FN、NF-κB p65 mRNA的表达明显降低(P<0.05,P<0.01),p-IKKβ、p-IκBα、NF-κB p65蛋白的表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论 五味消毒饮可减轻由LPS诱导的肾系膜细胞损伤,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的启动有关。 相似文献
6.
目的 观察黄芩-黄连对动脉粥样硬化(AS)小鼠斑块稳定性的影响,并基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨其可能的作用机制。方法 10只正常C57BL/6J小鼠作为正常组,同品系的载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠高脂饲料喂养12周构建动脉粥样硬化模型,随机分为5组,即模型组、阿托伐他汀组、黄芩-黄连低、中、高剂量组,每组10只。正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,黄芩-黄连低、中、高剂量组分别给予1.95、3.9、7.8 g·kg-1药物灌胃8周。观察小鼠一般状态;苏木素-伊红(HE)染色观测主动脉根部斑块病理情况并计算斑块面积百分比;马松(Masson)染色、油红O染色联合F4/80、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化检测主动脉根部斑块组分并计算斑块易损指数;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠主动脉组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测MMP-2、MMP-9、TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA表达水平。结果 与模型组比较,各用药组小鼠一般状态改善,未见明显不良反应;与模型组比较,黄芩-黄连中、高剂量组AS小鼠主动脉根部斑块面积百分比明显降低(P<0.05);黄芩-黄连高剂量组斑块中胶原纤维及平滑肌细胞含量显著增多(P<0.01),脂质及巨噬细胞含量明显减少(P<0.05),黄芩-黄连各剂量组斑块易损指数明显降低,其中黄芩-黄连中、高剂量组显著降低(P<0.01);黄芩-黄连中、高剂量组主动脉组织中MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05);黄芩-黄连中、高剂量组AS小鼠血清中TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05);黄芩-黄连中、高剂量组主动脉组织中TLR4、MyD88蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05),其NF-κB p65磷酸化水平明显降低(P<0.05)。结论 黄芩-黄连可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路发挥抗炎稳斑的作用。 相似文献
7.
目的 基于Toll样受体9/髓样分化因子88/核转录因子-κB(TLR9/MyD88/NF-κB)信号通路研究白芍总苷(TGP)对MRL/lpr狼疮模型小鼠肾脏损伤的干预作用,探讨TGP防治系统性红斑狼疮(SLE)的部分免疫学机制。方法 将SPF级MRL/lpr雌性小鼠随机分为4组,模型组、地塞米松组(0.15 g·kg-1)、TGP高、低剂量组(0.078、0.039 g·kg-1),雌性C57BL/6J小鼠设为空白组,每组7只;各组小鼠每天同一时间段给予相应药物或生理盐水灌胃。4周后采集标本,称取肾脏、脾脏质量,计算脏器指数;生化分析法检测各组血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肾脏组织病理学变化;马松(Masson)染色评估小鼠肾脏组织纤维化程度;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-2、干扰素-α(IFN-α)、IL-4和抗核抗体(ANA)的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾组织中TLR9、MyD88、NF-κB p65的mRNA表达;免疫荧光法检测肾组织中TLR9、NF-κB p65蛋白表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾、脾组织中TLR9、MyD88、NF-κB p65蛋白的表达水平。结果 与空白组比较,模型组小鼠SCr、BUN及脾脏指数和肾脏指数明显升高(P<0.05),肾组织病理损伤和纤维化程度明显增强;血清IFN-α、IL-4及ANA水平显著升高,IL-2水平明显降低(P<0.05);肾脏和脾脏中TLR9、MyD88及NF-κB p65的mRNA和蛋白水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,TGP高、低剂量组小鼠SCr、BUN及脾脏指数和肾脏指数明显降低(P<0.05),肾组织病理损伤和纤维化程度明显减轻;血清IFN-α、IL-4及ANA水平明显下降(P<0.05),IL-2水平明显升高;肾脏和脾脏组织中TLR9、MyD88和NF-κB p65等分子mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论 TGP可能通过调控TLR9/MyD88/NF-κB信号通路,进而抑制其下游相关炎症因子表达,发挥免疫调节及抗SLE肾脏损伤作用。 相似文献
8.
目的 观察蛤蚧提取物的抗抑郁作用,并探讨其作用机制。方法 腹腔注射利血平(0.5 mg·kg-1)诱导大鼠抑郁模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,氟西汀组(1.8 mg·kg-1),蛤蚧提取物高、低剂量组(12,6 g·kg-1),分别给予相应剂量药物,1次/d,连续给药10 d。给药结束后,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清和前额皮层中神经递质及炎症因子的水平;通过苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马组织中细胞的变化情况;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠海马组织中白细胞介素-6(IL-6),核转录因子-κB(NF-κB),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的水平;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马组织中Toll样受体4(TLR4),NF-κB蛋白水平。 结果 与正常组比较,蛤蚧提取物能明显缩短大鼠的悬尾不动时间和游泳不动时间;与模型组比较,蛤蚧提取物能明显减少大鼠眼睑下垂现象和圈内保留时间(P<0.05);升高血清中5-羟色胺(5-HT),多巴胺(DA)的水平(P<0.05),降低血清和前额皮层中MAO,IL-6,TNF-α的水平(P<0.05);降低大鼠海马组织中炎症因子IL-6,NF-κB,TNF-α mRNA的水平以及TLR4,NF-κB蛋白的表达(P<0.05,P<0.01);改善大鼠海马组织的病理症状。结论 蛤蚧提取物通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低大鼠海马组织中NF-κB,IL-6等炎症因子的表达,减轻抑郁病理损伤,从而减轻抑郁症状。 相似文献
9.
目的 观察五味消毒饮对免疫球蛋白(Ig)A肾病(IgAN)大鼠核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,并探讨其治疗IgA肾病的作用机制。方法 将40只SD大鼠随机分为正常组,模型组,贝那普利组(10 mg·kg·d-1),五味消毒饮组(2.75 g·kg·d-1),每组10只。采用牛血清白蛋白(BSA)灌胃,四氯化碳(CCl4)皮下注射以及脂多糖(LPS)尾静脉注射方法共9周建立IgAN大鼠模型,各组给予相应剂量的药物灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水,连续给药28 d。检测大鼠24 h尿蛋白(UTP),血肌酐(SCr),尿素氮(BUN),血清白蛋白(ALB)水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)的含量,苏木素-伊红(HE)染色,免疫荧光及透射电镜观察肾脏病理改变,免疫组化法(IHC),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测肾组织中IL-6,IκB激酶β(IKKβ),磷酸化IκB激酶β(p-IKKβ),NF-κB抑制蛋白α(IκBα),磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα),NF-κB p65,磷酸化NF-κB p65(p-p65)的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠UTP水平显著升高(P<0.01),肾小球系膜细胞增生,系膜基质增多,系膜增厚,电子致密物沉积增多,大量IgA沉积于肾小球系膜区并呈现不规则颗粒及团块状分布;血清中TNF-α,IL-1β,IL-6水平显著升高(P<0.01);肾组织中IL-6,IKKβ,p-IKKβ、IκBα,p-IκBα,NF-κB p65,p-p65的表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠UTP水平显著降低(P<0.01),肾组织损伤情况均有所减轻;血清中TNF-α,IL-1β,IL-6水平显著降低(P<0.01);肾组织中IL-6,IKKβ,p-IKKβ,IκBα,p-IκBα,NF-κB p65,p-p65的表达显著降低(P<0.01)。各组间SCr,BUN,血清白蛋白相比无明显差异。结论 五味消毒饮可降低IgAN大鼠的蛋白尿,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路及其相关炎症因子的过度表达有关。 相似文献
10.
目的 观察通络蠲痹颗粒对膝骨关节炎(KOA)兔软骨细胞凋亡及Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,研究其防治KOA的作用机制。方法 30只新西兰兔按随机数字表法分为假手术组、模型组、通络蠲痹颗粒低、高剂量组(4.1、8.2 g·kg-1·d-1)、塞来昔布组(10.9 mg·kg-1·d-1),每组6只。采用内侧半月板失稳法(DMM)建立兔KOA模型,造模6周后给药,干预8周,每日1次。用苏木素-伊红(HE)染色和番红O-固绿染色观察关节软骨病理改变;原位末端标记法(TUNEL)荧光染色检测关节软骨细胞凋亡;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测关节液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组关节软骨退变严重,Mankin评分升高(P<0.01),关节液IL-1β、TNF-α含量升高(P<0.01),软骨细胞凋亡数量增加(P<0.01),软骨组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达上调(P<0.01),而Bcl-2的mRNA及蛋白表达下调(P<0.01);与模型组比较,通络蠲痹颗粒低、高剂量组软骨退变得到改善,Mankin评分降低(P<0.01),IL-1β、TNF-α含量降低(P<0.01),软骨细胞凋亡数量减少(P<0.01),软骨组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达下调(P<0.01),Bcl-2的mRNA及蛋白表达上调(P<0.01),且在上述观察指标中通络蠲痹颗粒高剂量组均明显优于低剂量组。结论 通络蠲痹颗粒可抑制KOA兔关节软骨细胞凋亡,改善软骨退变,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导的炎症反应有关。 相似文献