小肠黏膜下层组织膜与骨髓基质干细胞联合培养的实验研究

目的:检测骨髓基质干细胞(BMSCs)与小肠黏膜下层(SIS)复合培养的生物相容性及成骨能力。方法:山羊BMSCs体外成骨诱导至第3代,接种到预湿的SIS上复合培养,以单纯BMSCs相同条件下培养作为对照。通过相差显微镜、扫描电镜及改进的HE染色等方法观察细胞在材料中的生长情况。MTT法检测BMSCs在材料上的增殖活性,碱性磷酸酶(ALP)活性测定及裸鼠皮下异位成骨实验评价其成骨能力,采用配对资料t检验进行统计学处理。结果:扫描电镜及组织学观察发现,细胞材料复合后,BMSCs在SIS上能够良好地粘附和增殖;定量法检测碱性磷酸酶活性显示,细胞加材料组OD值为0.683±0.044,单纯细胞组OD值为0.696±0.039,ALP及MTT测定结果均证实,BMSCs细胞活性及成骨性能不受SIS的影响,与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。体内异位成骨实验表明,BMSCs/SIS复合物植入体内后成骨良好,以软骨内成骨方式为主。结论:SIS对BMSCs的生长和成骨功能无影响,具有良好的细胞相容性,且作为一种脱细胞基质的天然膜性材料,SIS具有构建组织工程化骨膜的可行性。     

猪小肠黏膜下层作为盖髓剂的初步研究

目的 探讨猪小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)的生物相容性及作为盖髓材料的可行性。方法 用Abraham法制备的猪小肠黏膜下层,与人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPCs)在体外复合培养并进行矿化诱导,观察细胞生长情况,并分别在复合培养第7、14、21天检测牙髓细胞的碱性磷酸酶活性水平,无材料的牙髓细胞矿化诱导组作为对照组。结果 牙髓细胞在猪小肠黏膜下层上生长良好,细胞表面有矿化晶体形成,说明其具有良好的生物相容性,其碱性磷酸酶活性水平在第7、14、21天均高于对照组。结论 Abraham方法制备的猪小肠黏膜下层有良好的生物相容性,在体外能促进牙髓细胞矿化,有望成为一种新型的盖髓剂。     

口腔黏膜上皮细胞与猪小肠黏膜下层体外复合培养的实验研究

目的探讨体外快速培养犬口腔黏膜上皮细胞（OMECs）及其与猪小肠黏膜下层（SIS）体外复合培养的方法,为组织工程化黏膜研究提供实验依据。方法采用混合酶消化法,于6%胎牛血清的上皮细胞无血清培养基（DKSFM）中培养OMECs,观察OMECs的形态特征、绘制生长曲线并进行细胞表面标志物检测。将第2代犬OMECs接种在SIS上,行苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色、扫描电镜等观察OMECs在SIS上的生长状况。结果OMECs在DKSFM中生长良好,CK19细胞角蛋白免疫组化染色阳性。OMECs接种在SIS上呈单层生长,多角形,铺路石样排列,复合培养8 d呈多层生长。结论采用混合酶消化法,用含6%胎牛血清的DKSFM培养犬OMECs,方法简便,适合推广应用。SIS与OMECs有良好的相容性,可作为构建组织工程化黏膜的理想支架材料。     

一种新型纳米羟基磷灰石材料应用于牙周组织工程的可行性研究

目的:对一种新型纳米羟基磷灰石材料 -纳米羟晶 -胶原仿生骨材料 (nHAC)进行细胞相容性和细胞毒性的研究,以初步探讨其应用于牙周组织工程的可行性。方法:将体外培养的人牙周膜细胞(PDLCs)接种于nHAC三维支架上复合培养,采用细胞计数和扫描电镜观察PDLCs在nHAC支架上的附着、生长情况,并通过MTT测试法和碱性磷酸酶(ALP)活性检测法研究nHAC浸提液对PDLCs增殖和功能表达的影响。结果:人PDLCs在nHAC支架上形成良好贴附并增殖,扫描电镜可见nHAC具有良好的多孔网状结构,细胞在nHAC上生长旺盛,伸展充分,而PDLCs在不同浓度的材料浸提液中的生长、增殖及ALP活性与空白对照组相比无显著性差异。结论:nHAC具有良好的三维空间结构和细胞相容性,且无细胞毒性,有望成为牙周组织工程的支架材料。     

Periodontal regeneration enhanced by the application of cancellous bone matrix scaffolds seeded with periodontal ligament cells

目的 观察牙周膜细胞(PDLCs)接种松质骨基质(CBM)支架复合移植对牙周组织再生修复的影响和意义.方法 将体外培养的狗自体PDLCs接种到CBM三维支架上,体外进行细胞计数和扫描电镜观察,并植入狗人工牙周组织缺损处,表面覆盖聚四氟乙烯膜(e-PTFE),以单纯翻瓣组和只覆盖e-PTFE组作为对照.术后8周对动物组织标本进行组织学观察和测量,分析比较各组牙周组织的再生情况.结果 PDLCs在CBM支架材料上形成良好的贴附并增殖,扫描电镜可见CBM具有良好的多孔网状结构,细胞在CBM上生长旺盛,伸展充分.自体PDLCs/ CBM / e-PTFE膜复合植入组较单纯翻瓣组和e-PTFE组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成,且未见上皮长入.结论 PDLCs接种松质骨基质支架复合移植能更有效地促进牙周组织再生和重建,CBM有望用作牙周组织工程的支架材料.     

人牙周韧带细胞与β-磷酸三钙多孔生物陶瓷三维培养的实验研究

目的 :通过将人牙周韧带细胞 (humanperiodontalligamentcells ,PDLCs)接种到三维多孔 β -磷酸三钙( β -tricalciumphosphate ,β -TCP)陶瓷支架材料上 ,探讨以 β -TCP为牙周组织工程支架材料的可能性。 方法 :取新鲜拔除的健康第一前磨牙牙周膜 ,用组织块培养法培养PDLCs。β -TCP多孔陶瓷加工成片状 ,作为细胞支架 ,将 4-7代PDLCs与 β -TCP进行体外三维培养 ,2周后观察细胞生长状况。 结果 :PDLCs在 β -TCP支架材料上附着、增殖并复层生长。结论 :β -TCP具有良好的生物相容性 ,有望成为牙周组织工程的支架材料     

小肠黏膜下层作为组织工程支架材料的性能研究

目的:对小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)的理化性能进行检测,探讨其作为组织工程支架材料的可行性。方法:通过电镜观察、SIS浸提液的pH值测定、皮肤致敏试验、热原试验等方法,对SIS的理化性能进行评价。结果:电镜观察结果显示,SIS具有光滑面和粗糙面两个面,孔隙率可达60%左右;浸提液的pH值接近中性,热原试验及皮肤致敏试验表明SIS无致热性、无抗原性,致敏反应轻微。结论:SIS具有作为组织工程支架材料的良好生物理化性能,是一种较好的生物支架材料。     

牙周膜细胞松质骨基质支架复合移植促进牙周组织再生的研究

目的观察牙周膜细胞（PDLCs）接种松质骨基质（CBM）支架复合移植对牙周组织再生修复的影响和意义。方法将体外培养的狗自体PDLCs接种到CBM三维支架上,体外进行细胞计数和扫描电镜观察,并植人狗人工牙周组织缺损处,表面覆盖聚四氟乙烯膜（e-PTFE）,以单纯翻瓣组和只覆盖e-PTFE组作为对照。术后8周对动物组织标本进行组织学观察和测量,分析比较各组牙周组织的再生情况。结果PDLCs在CBM支架材料上形成良好的贴附并增殖,扫描电镜可见CBM具有良好的多孔网状结构,细胞在CBM上生长旺盛,伸展充分。自体PDLCs／CBM／e-PTFE膜复合植入组较单纯翻瓣组和e—PTFE组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成,且未见上皮长入。结论PDLCs接种松质骨基质支架复合移植能更有效地促进牙周组织再生和重建,CBM有望用作牙周组织工程的支架材料。     

组织块法培养原代人PDLCs技术的新探讨

目的探讨组织块法培养原代人PDLCs生长情况和成功率,以及提高组织块法培养原代人PDLCs成功率的方法。方法采用组织块法培养原代人PDLCs。免疫组化ABC法进行波形丝蛋白（VIM）和细胞角蛋白（CK）的免疫组化染色．进行细胞来源鉴定。倒置显微镜下进行形态学观察,取第4代人PDLCs用MTT法绘制生长曲线。计算细胞培养成功率。结果组织块法培养原代人PDLCs成功率52．4％。波形丝蛋白染色阳性,细胞角蛋白染色阴性。细胞大多呈长梭形．胞体丰满,伸展良好,核仁清晰,细胞排列均匀,呈漩涡状,火焰状。生长曲线示细胞第3天开始进入对数生长期。结论本实验组织块法培养原代人PDLCs的成功率为52．4％,为人PDLCs作为种子细胞的牙周组织工程的研究．提供了实验基础和理论依据。     

细胞-支架构建方式的牙周组织工程实验研究

目的　观察评价细胞 支架构建方式的组织工程方法对牙周组织再生修复的影响和意义。方法　体外培养动物自体牙周膜细胞 (PDLCs) ,传代扩增后接种到纳米羟基磷灰石材料 (nHAC)三维支架上 ,扫描电镜观察PDLCs在nHAC支架上的附着及生长情况 ;同时 ,将PDLCs nHAC复合物植入动物牙周组织缺损中 ,术后 8周观察 ,评价其牙周组织的再生情况。结果　扫描电镜显示 ,nHAC具有良好的多孔网状结构 ,PDLCs在nHAC上贴附牢固 ,生长旺盛。动物实验可见 ,PDLCs nHAC植入组较对照组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成 ,缺损处牙周组织几乎完全再生 ,且未见上皮长入。结论　应用细胞 支架构建方式的牙周组织工程方法能获得理想的牙周组织再生和重建。