人参总皂甙对人血细胞生成的研究

从人参中提取有效成份人参总皂甙（ＴＳＰＧ），测定它对人骨髓粒单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ），红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ，ＢＦＵ－Ｅ）和多向祖细胞（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）的刺激增殖作用。结果显示：在培养中加入不同浓度的ＴＳＰＧ５．２５，５０，７５，１００ｍｇ／Ｌ，可促进造血细胞增殖，在体外形成集落。在ＴＳＰＧ５－７５ｍｇ／Ｌ时，ＣＦＵ－ＧＭ集落产率均明显高于不加ＴＳＰＧ的对照组浓度的ＴＳＰＧ使集落产率明显高于对     

人纤维母细胞条件培养液对CFU－GM生长的影响

采用单个集落、亚融合和全融合的人类纤维母细胞条件培养液（ＨＦ－ＣＭ）对人骨髓细胞ＣＦＵ－ＧＭ生长的影响进行了研究。结果表明，加入同样浓度的ＨＦ－ＣＭ时，亚融合纤维母细胞条件培养液所刺激的ＣＦＵ－ＧＭ产率明显高于全融合及单个集落ＨＦ－ＣＭ所刺激的ＣＦＵ－ＧＭ产率（Ｐ＜０．０５）；在加入不同浓度的亚融合ＨＦ－ＣＭ时，以１０％亚融合ＨＦ－ＣＭ对ＣＦＵ－ＧＭ产率表现出最大的刺激活性。     

ATG和抗CD3McAb对再障患者CFU—GM生长的体外影响研究

用ＣＦＵ－ＧＭ半固体琼脂培养技术研究了抗人胸腺细胞球蛋白和抗ＣＤ３单克隆抗体对１８例再生障碍性贫血患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ体外生长的影响。结果表明，１．加入１６．７μｇ／ｍｌＡＴＧ或１：５０抗ＣＤ３ＭｃＡｂ，体外均可增加ＡＡ患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的集落数，再者的作用无显著差异。     

慢性肾功能衰竭患者外周血T淋巴细胞亚群变化的观察

检测３０例慢性肾功能衰竭患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群的变化。结果显示：ＣＲＦ患者Ｔ淋巴细胞总数（ＣＤ３）、辅助性Ｔ细胞（ＣＤ４）、ＣＤ４／ＣＤ８明显低于正常对照组（Ｐ＜０．０１）；ＣＤ３、ＣＤ４与ＢＵＮ、ＳＣｒ呈负相关，抑制性Ｔ细胞（ＣＤ８）与ＢＵＮ、ＳＣｒ呈正相关。提示ＣＲＦ患者细胞免疫功能低下；Ｔ淋巴细胞亚群的变化可作为肾功能状况的指标。     

慢性肾功能衰竭患者血清 SIL-2R 水平与外周血 T 淋巴细胞亚群变化的观察

检测３０例慢性肾功能衰竭（ＣＲＦ）患者血清可溶性白介素２受体（ＳＩＬ－２Ｒ）和外周血Ｔ淋巴细胞亚群，结果表明：ＣＲＦ患者ＳＩＬ－２Ｒ水平显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０１），ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ８显著低于正常对照组（Ｐ＜０．０１）；ＳＩＬ－２Ｒ水平与ＣＤ３、ＣＤ４呈负相关，与ＣＤ８呈正相关；ＳＩＬ－２Ｒ与ＢＵＮ、ＳＣｒ呈正相关，ＣＤ３、ＣＤ４与ＢＵＮ、ＳＣｒ呈负相关，ＣＤ８与ＢＵＮ、ＳＣｒ呈正相关。提示：ＣＲＦ患者细胞免疫功能低下；ＳＩＬ－２Ｒ水平与Ｔ淋巴细胞亚群变化有一定关系；ＳＩＬ－２Ｒ水平与Ｔ淋巴细胞亚群变化可作为肾功能恶化的指标。     

ATG和抗CD_3McAb对再障患者CFU－GM生长的体外影响研究

用ＣＦＵ－ＧＭ半固体琼脂培养技术研究了抗人胸腺细胞球蛋白（ＡＴＧ）和抗ＣＤ３单克隆抗体（ＭｃＡｂ）对１８例再生障碍性贫血（ＡＡ）患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ体外生长的影响。结果表明，１．加入１６．７μｇ／ｍｌＡＴＧ或１：５０抗ＣＤ３ＭｃＡｂ，体外均可增加ＡＡ患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的集落数（Ｐ＜０．０５），两者的作用无显著差异（Ｐ＞０．０５）。２．ＡＴＧ和抗ＣＤ３ＭｃＡｂ对ＡＡ患者干细胞缺乏型和免疫介导型的作用无显著差异（Ｐ＞０．０５）。用此项技术对ＡＡ患者作药敏试验，并加测外周血ＣＤ８＋、ＤＲ＋细胞比值，可作为选择免疫抑制疗法的参考。     

分枝杆菌多糖对小鼠造血功能的影响

观察了分枝杆菌多糖（ＭＰＳ）对环磷酰胺抑制ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨髓作用的影响。结果表明：给予ＣＰＡ使小鼠骨髓ＧＭ－ＣＦＵ抑制约３０％左右。１．０ｍｇ／ｋｇ的ＭＰＳ对ＧＭ－ＣＦＵ有促进作用（第１批实验ＣＰＡ对照组３１６．５±３４．６，实验１组４５４．５±１９．１，Ｐ＜０．０５；第２批实验ＣＰＡ对照组２０８．７±４３．７，实验２组４３７．８±５４．１，Ｐ＜０．０２）；而０．１５ｍｇ／ｋｇＭＰＳ无促进作用。在０．１５和１．０ｍｇ／ｋｇ剂量下，小鼠血清ＧＭ－ＣＳＦ活性水平明显提高；０．１５和１．０ｍｇ／ｋｇＭＰＳ可分别刺激小鼠每０．１ｍＬ血清产生５００Ｕ和８５０ＵＧＭ－ＣＳＦ。分析认为ＭＰＳ与日本的Ｚ－１００活性水平相当，这些作用可能通过激活单核或Ｔ细胞而间接产生。     

再生障碍性贫血患者细胞免疫功能及抗T细胞单克隆抗体的免疫调节及造血调控的研究

观察了再生障碍性贫血（ＡＡ）１６５例的淋巴细胞比值，用ＡＰＡＡＰ法和ＥＬＩＳＡ法测定Ｔ１３８例的Ｔ细胞亚群、８９例ＨＩＪＡ－ＤＲ抗原的表达及１６例ＰＢＭＮＣ培养上清的ＴＮＦα水平，用抗Ｔ淋巴细胞单克隆抗体ＳＭＵ３和ＳＭＵ８治疗了ＡＡ患者６３例。结果表明，ＡＡ患者体内细胞免疫功能紊乱，表现为Ｔ细胞亚群比例失衡，ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达增高，ＴＮＦα分泌增加；用ＳＭＵ３、ＳＮＵ８单抗治疗ＡＡ的总有效率为７９．３％，且具有疗效快、副作用小、重复应用仍安全有效等优点。     

多发性硬化患者T淋巴细胞亚群的研究

采用间接免疫荧光染色加流式细胞术检测１８例多发性硬化（ＭＳ）活动期外周血及脑脊液中的Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８。结果表明，ＣＳＦ中ＣＤ４明显增高，ＣＤ８显著降低；ＣＤ４及ＣＤ４／ＣＤ８比值显著高于自身外周血，提示ＭＳ患者存在Ｔ细胞辅助免疫功能明显增强，免疫抑制功能明显缺陷。     

用小鼠骨髓内皮细胞条件培养液代替造血刺激因子培养CFU— …

利用大于１０ｋＤ组分的小鼠骨髓内此细胞条件培养液（ｍＢＭＥＣ－ＣＭ）作刺激物体外琼脂培养ＣＦＵ－ＧＭ,与ｍＧＭ－ＣＳＦ合用培养ＨＰＰ－ＣＦＣ获得成功。就培养ＣＦＵ－ＧＭ和ＨＰＰ－ＣＦＣ而言,用细胞因子作刺激物与并用大于１０ｋＤ组分的ｍＢＭＥＣ－ＣＭ作刺激物相比较,以后者的ＣＦＵ－ＧＭ及ＨＰＰ－ＣＦＣ产率最高。     

Rhodaminel23介导的光动力学疗法对小鼠淋巴细胞增殖及骨髓干祖细胞集落形成的影响

目的　探讨Rhodamine12 3(Rh12 3)介导的光动力学疗法对小鼠淋巴细胞增殖及骨髓干祖细胞集落形成的影响。方法　以C5 7B/ 6小鼠为供鼠 ,BALB/c小鼠为受鼠 ,脾脏淋巴细胞混合培养 ,比较单纯Rh12 3、单纯激光照射、光动力学疗法对小鼠混合淋巴细胞增殖 (MTT法 )及骨髓粒单核巨噬细胞集落形成 (CFU -GM)的影响 (甲基纤维素培养基法 ) ;流式细胞仪检测混合淋巴细胞中CD3 CD6 9 阳性率。结果　Rh12 3组及单纯激光组对细胞增殖无显著影响 ,光动力学组 2 0mW/cm2 以下剂量激光对细胞增殖无明显影响 ,30mW/cm2 以上明显抑制细胞增殖 ;30mW/cm2 以下剂量对CFU -GM集落无明显影响。光动力学疗法后细胞培养 2 4h ,CD3 CD6 9 表达明显下降。结论　光动力学疗法在 30mW/cm2 激光照射时可抑制淋巴细胞增殖 ,降低早期活化T细胞表达 ,但不影响骨髓CFU -GM集落形成     

CD8~+CD57~+T细胞在体外对MDS骨髓造血的影响

目的 观察异常激活的CD8 T细胞(CD8+CD57+T细胞)在体外对骨髓增生异常综合征(MDS)造血情况的影响.方法 用免疫磁珠体外剔除44例中低危MDS患者(MDS组)及5例正常人(正常对照组)骨髓单个核细胞(BMNC)中CD8+CD57+T细胞,对剔除和加回CD8+CD57+T细胞(4倍)的BMNC分别培养,比较培养后细胞集落的生长情况和克隆细胞比例,观察培养前后髓系细胞标志的变化.结果 ①在MDS组中,剔除CD8+CD57+T细胞培养后,18例可见集落和集簇均有生成;7例仅见集簇生长;19例仅见细胞密集分布.加回CD8+CD57+T细胞的BMNC培养后,MDS组均无集落和集簇生成,且细胞密度明显低于剔除CD8+CD57+T细胞的BMNC.正常对照组剔除和加回CD8+CD57+T细胞的BMNC培养后,均有集落生成,集落计数无统计学差异.②2例单纯+8异常低危MDS病例,剔除CD8+CD57+T细胞培养后,+8克隆细胞比例较培养前增加;2例20q-异常的初治病例,剔除CD8+CD57+T细胞培养后,异常克隆细胞比例较培养前增加.③MDS组BMNC中CD34+、CD33+和CD13+细胞百分比均高于正常对照组(P<0.05),剔除CD8+CD57+T细胞培养后,CD34+和CD33+细胞百分比均低于培养前(P<0.05),而CD13+细胞百分比与培养前比较无统计学差异(P>0.05).正常对照组的CD34+、CD33+和CD13+细胞百分比在剔除培养前后差异无统计学意义(P>0.05).结论 在体外选择性剔除骨髓中CD8+CD57+T细胞,可以增加MDS患者骨髓体外集落形成,且集落中髓系细胞明显向较成熟阶段分化,提示CD8+CD57+T细胞可能通过免疫途径参与骨髓无效造血.而剔除CD8+CD57+T细胞造成克隆细胞明显增加,提示其介导的免疫过程主要是针对MDS骨髓恶性克隆细胞.     

Immunophenotype of myeloid cells in myelodysplastic syndromes and its clinical implications.

OBJECTIVE: To explore the immunophenotype of myeloid cells in myelodysplastic syndyomes (MDS) and its clinical implications. METHODS: A panel of monoclonal antibody was used to detect CD13+, CD33+, CD15+ and CD14+ antigens on the membrane surfaces of myeloid cells in the bone marrow from 51 MDS, 21 aplastic anemia (AA), 21 paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) patients. 10 acute myeloblastic leukemia (AML) patients and 15 normal subjects by immunoenzymatic assay. The morphology and chromosome karyotype of bone marrow cells of MDS patients were also examined. RESULTS: CD14+, CD13+ and CD33+ cells in the bone marrow were more in MDS patients than in normal controls, AA patients and PNH patients. CD15+ cells in the bone marrow were less in MDS patients than in normal controls. CONCLUSIONS: The percentages of CD14+, CD13+ and CD33+ positive cells in the bone marrow of MDS patients were related to the percentage of myeloblasts, the chromosomal aberrations and the response to treatment. It indicated that there is immunophenotypic misexpression of myeloid cells in MDS patients. Immunophenotype analysis of myeloid cells might be useful for the diagnosis and treatment of MDS patients.     

骨髓增生异常综合征患者血清造血抑制活性的研究

目的：通过研究骨髓增生异常综合征患者血清造血抑制活性,探讨致ＭＤＳ无效造血的可溶性因素。方法：以甲基纤维素半固体细胞培养法,观察患者血清对正常骨髓ＢＦＵ－Ｅ,ＣＦＵ－ＧＭ的抑制作用,及对单个核细胞素集落生成的刺激作用;以ＤＮＡ末端标记技术,检测１例ＭＤＳ患者血清与正常骨髓单个核细胞共育后的凋亡细胞。     

Immunohistochemical study of T lymphocyte subsets on frozen substituted plastic embedding section of the bone marrow from patients with myelodysplastic syndrome and its clinical implication

Ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅｓ（ＭＤＳ）ａｒｅｕｓｕａｌｌｙｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄｂｙｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｃｙｔｏｐｅｎｉａ,ｔｒｉｌｉｎｅａｇｅｄｙｓｐｌａｓｉａａｎｄｈｙｐｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ（ＢＭ）．Ａｃｃｏｒｄ－ｉｎｇｔｏｔｈｅＦｒｅｎｃｈ,Ａｍｅｒｉｃａ－Ｂｒｉｔｉｓｈｃｌａｓｓｉｆｉ－ｃａｔｉｏｎ［１］,ＭＤＳｆａｌｌｓｉｎｔｏｆｉｖｅｓｕｂｇｒｏｕｐｓ：ｒｅ－ｆｒａｃｔｏｒｙａｎｅｍｉａ（ＲＡ）,ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙａｎｅｍｉａｗ…     

BURDEN OF ABNORMAL HEMATOPOIETIC CLONE IN PATIENTS WITH MYELODYSPLASTIC SYNDROMES

MYELODYSPLASTIC syndromes (MDS) is agroup of clone hematopoietic stem cell diseasescharacterized by dysplasia and ineffective hem-atopoiesis in one or more of the myeloid cell lines·1Studiesindicated that recurring chromosomal abnormalities werefound in4…     

组胺和甲氰咪胍对粒-单系祖细胞的影响

用体外琼脂培养法研究组胺和甲氰咪胍对小鼠粒-单系祖细胞的影响,结果表明,10~(-9)M～10~(-5)M 组胺和10~(-8)M～10~(-4)M 甲氰咪胍分别作用时,对粒-单系祖细胞的产率没有影响,用甲氰咪胍阻断 H_2-受体后,组胺可增加粒-单系祖细胞的产率和自杀率。对此结果的理论意义和临床意义进行了讨论。     

在人胎盘条件培养液中白细胞介素2对粒-巨噬系祖细胞生长的影响

在正常骨髓粒-巨噬系祖细胞(CFU-GM)常规培养体系中加入白细胞介索2(IL-2),所有18例CFU-GM的集落产率明显上升,平均上升46.37％,t=11.152,P<0.001。结果提示IL-2和人胎盘条件培养液(HPCM)之间具有协同作用,但IL-2单独并无刺激CFU-GM生长的作用。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓铁调素水平的研究

目的 研究铁调素及其相关因素对骨髓增生异常综合征（MDS）患者铁过载水平的评估价值。方法 选取64例MDS患者,采用ELISA法对患者的外周血和骨髓铁调素水平进行测定;Real-Time PCR法测定骨髓生长分化因子15（GDF15）和扭转原肠胚形成同系物1（TWSG1）mRNA的表达;流式细胞仪对T淋巴细胞亚型（CD4+、CD19+）和极化进行测定;采用磁共振成像T2*（MRI T2*）技术对心脏和肝脏铁沉积程度进行测定;结合患者的血清铁蛋白（SF）、C反应蛋白（CRP）和促红细胞生成素（EPO）资料,对数据进行分析。结果 64例MDS患者外周血与骨髓的铁调素表达水平无明显差异（P=0.134）。根据WHO 2008分型分组,难治性贫血伴环形铁粒幼细胞增多（RARS）亚型的骨髓铁调素表达水平最低[（105.40±5.13）ng/mL],难治性贫血伴原始细胞增多（RAEB）亚型的骨髓铁调素表达水平最高[（335.71±25.16）ng/mL],各组间比较差异有统计学意义（P=0.041）。根据IPSS积分和WPSS积分分组,低危组和高危组骨髓铁调素表达水平比较差异均有统计学意义（P<0.05和P<0.01）;但与WPSS低危组相比,WPSS高危组的SF和GDF15 mRNA均明显高表达（P<0.05）,而IPSS低危组与高危组比较差异无统计学意义（P>0.05）。根据T淋巴细胞亚型和极化分组,CD4+高表达组骨髓铁调素水平较正常组高（P<0.05）;CD19+高表达和正常组间骨髓铁调素水平比较无统计学意义（P=0.206）;Th1/Th2>70.6组骨髓铁调素水平高于Th1/Th2≤70.6组（P<0.001）。将铁调素与SF、心脏T2*值、肝脏铁浓度（LIC）（由肝脏T2*值换算得到）做逐步回归分析,仅有LIC水平与铁调素存在相关性（r=0.582,P<0.001）。结论 炎症对于调节铁调素表达至关重要,T淋巴细胞的活化及极化趋势可能在其中起到部分作用。MRI T2*对于评估MDS患者铁过载水平的效能优于SF。     

Expression of CD123 and CD114 on the bone marrow cells of patients with myelodysplastic syndrome

Background Recent studies have shown that interleukin-3 receptor α （CD123） is highly expressed on leukemia stem cells of patients with acute myeloid leukemia, and is correlated with tumor load and poor prognosis.The expression of CD123 may also be high in patients with myelodysplastic syndrome （MDS）.In this study, the expression and clinical significance of CD123 and granulocyte colony stimulating factor （G-CSF） receptor （CD114） on the bone marrow cells of patients with MDS were investigated to explore the molecular marker of the malignant clone of MDS.Methods Forty-two patients with MDS, who were diagnosed in the Hematological Department of General Hospital of Tianjin Medical University from 2008 to 2009, and twelve normal controls were enrolled in this study.Fluorescence activiated cell sorter （FACS） was used to measure the expression of CD123 on CD34＋CD38- cells and CD114 on CD34＋cells of the bone marrow of these patients and controls and the clinical significance was analyzed.The expression of CD114 on CD123＋CD34＋CD38- cells was further measured to explore the molecular marker of the malignant clone in MDS.Results MDS patients displayed significantly higher proportion of CD34＋CD38-/CD34＋ （（14.03±5.27）%） than normal controls （（7.70±4.36）%, P 〈0.05）.The expression rate of CD123＋CD34＋CD38-/CD34＋CD38- was significantly higher in MDS patients （（48.39±28.15）%） than that in normal controls （（8.75±11.71）%, P 〈0.01）.The expression level of CD123 was significantly correlated with the proportion of bone marrow blasts （r=0.457, P 〈0.05）.The expression rate of CD114＋CD34＋/CD34＋ was lower in MDS patients （（33.05±21.71）%） than that in normal controls （（38.99±19.07）%） but was not statistically significant （P 〉0.05）.The expression of CD114 on CD123＋CD34＋CD38- cells （（34.82±29.58）%） was significantly lower than that on CD123-CD34＋CD38- cells （（53.48±27.41）%） of M DS patients （P 〈0.05）.Conclusions MDS patients displayed higher proportion of CD34＋CD38-/CD34＋ than normal controls.CD123 was highly expressed in the bone marrow of the patients with MDS, significantly correlated with the proportion of bone marrow blasts, and thus might be the marker of MDS malignant clone.CD123＋CD34＋CD38- cells exhibited lower expression of G-CSF receptors, which might partly explain why MDS clone responds worse to G-CSF in vitro and in vivo.