钙激活钾通道在重症失血性休克血管反应性下降中的作用

目的探讨大电导钙激活钾通道(largeconductancecalci um_activatedpotassiumchannel,BKCa)在重症失血性休克中的变化及其特异性阻断剂charybodotoxin(CTX)对休克血管反应性的恢复作用。方法1.复制大鼠重症失血性休克模型 ,分离一侧股静脉用以测量血压和放血 ;2.酶法分离出单个肠系膜A2、A3血管平滑肌细胞 ;3.应用膜片钳的细胞贴附式记录法记录休克组及假手术组大电导钙激活钾通道电流变化 ,并用 pClamp7.0软件对所记录通道的相关数据进行分析和处理 ;4.整体动物静脉给药比较观察生理盐水和CTX对休克动物平均动脉压(MAP)的影响及对去甲肾上腺素(NE)升压作用的影响 ,并计算对比休克动物24h存活率和平均存活时间的变化。结果大鼠重症失血性休克后BKCa 异常激活 ,在高钾细胞外液中 ,单通道电导由对照组的(131±4)pS(n=52)增加为休克时的(172±6)pS(n=38,P<0.01) ;通道的开放概率(Po)在膜电位为20、40和60mV时 ,比正常组增加 ,但没有显著意义(P>0.05) ,而随着膜电位的增加 ,休克组开放概率的增加速率明显大于对照组(使Po增加e倍的电压增幅由14mV降为11mV) ,当膜电位去极化为80和100mV时 ,Po分别由对照组的(15.5±2.8) %和(19.6±3.8) %增加为休克组的(21.2±2.6) %(P<0.05)和(30.3±3.4) %(P<0.01)。休克120m     

血管平滑肌细胞钾通道的研究进展

血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）上分布着多种钾通道，它们参与了细胞膜电位的复极与超极化，影响细胞膜的兴奋性，调节VSMCs的舒缩活动，对血管紧张度的调控具有十分重要的作用。己有的研究表明，VSMCs上有4种类型的钾通道，即电压依赖性钾通道（Kv）、     

丹参素对猪冠脉平滑肌细胞钙激活钾通道的作用

目的观察丹参素(DS-182)对原代培养猪冠脉平滑肌细胞钙激活钾通道(KCa)的作用,从单个钾通道水平揭示其扩冠机制。方法采用膜片钳单通道电流记录技术。结果①猪冠脉平滑肌细胞KCa的单通道电导值高,为(291.74±4.89)pS;对膜电位变化及细胞内钙离子浓度变化敏感,能被5~20 mmol/L膜内侧四乙基铵(TEA)所阻断。②在细胞贴附式膜片方式下,细胞外应用10~20μmol/L的DS-182对通道具明显的激活效应;而在内面向外式膜片方式下,细胞内应用5~30μmol/L的DS-182对通道均无明显作用。结论DS-182对通道的激活作用是非直接的,需要一系列的胞内过程。     

钙激活钾通道参与重症失血性休克大鼠肠系膜细动脉平滑肌细胞膜的超极化

目的血压降低、血管反应性低下是导致创伤、脓毒性等休克病人死亡的重要原因之一.我室曾提出了致血管反应性降低的细胞膜超极化理论,并报道了ATP敏感钾通道在血管反应性低下中的作用认为随着休克的发展,组织细胞缺血、缺氧加重,ATP耗竭,细胞内乳酸堆积,从而激活了ATP敏感钾通道,使细胞膜超极化,血管舒张.除ATP敏感钾通道外,在微动脉平滑肌细胞中还有两种钾通道,即内向整流钾通道(Kir)和钙激活钾通道(KCa).其中钙激活钾通道(KCa)在血管平滑肌细胞上尤其丰富,而且在血管平滑肌细胞的肌源性调节中起着重要的作用.本文目的在于进一步阐明钙激活钾通道在休克大鼠肠系膜细动脉平滑肌细胞膜超极化中的作用,从而为临床治疗提供理论基础.     

血管平滑肌钙激活钾通道及其在高血压发病中的功能异常

目的:血管平滑肌大电导钙激活钾通道(BKCa)是血管平滑肌细胞膜电位的主要调控器,它调节血管张力。研究表明高血压时出现脉管张力增高及对扩张的血管的缓冲能力下降等多种病理状态与血管平滑肌BKCa功能变化有关,包括与BKCa对Ca2 火花的调节反应发生变化相关。本文综述高血压时血管平滑肌BKCa功能和结构变化的研究报道。     

血管内皮细胞钙激活钾通道

自1980年Eurchgott和Zawadzki报道兔主动脉内皮依赖性舒张以来^[1],内皮细胞已被认为不仅是一层衬贴于血管壁内面的屏障,而是具有多种生理功能的组织甚至器官。它可分泌释放多种生物活性物质调节血管张力和平滑肌生长,参与凝血及抗血栓形成,影响血管通透性和物质交换^[2]。尤其是内皮细胞产生的一氧化氮（NO）,其多方面的生理功能引进人们高度重视。因为它“在心血管系统可作为信息分子从而给予生物学信息系统一个崭新的原理”而成为1998年诺贝尔医学和生理学浆的内容^[3]。正是由于这些发现,对于内皮细胞功能的研究越来越令人瞩目。内皮细胞众多生物功能的发挥依赖于胞内钙浓度的升高。钙库释放和外钙内流是胞内钙浓度升高的基础。前者引起胞内钙浓度一过性的快速提高,后者将促使外钙缓慢大量内流,形成胞内钙浓度平台,它对于内皮细胞持续产生NO尤其重要^[4]。由于促进外钙内流的电化学驱动力和外钙内流通道的关闭和开放都受控于内皮细胞静息膜电位,因而参与静息膜电位形成的钾通道在内皮细胞功能发挥中所处的地位不容忽视。     

二十二碳六烯酸对大鼠肺动脉平滑肌细胞大电导钙激活性钾通道的影响

 目的： 探讨二十二碳六烯酸（DHA）对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）大电导钙激活性钾离子通道（BKCa）的作用。方法：采用酶解法获得单个活性良好的PASMC,PASMCs的BKCa电流变化采用全细胞膜片钳技术记录,PASMCs胞浆内游离钙离子浓度(［Ca2+］i)采用激光共聚焦显微镜技术测定。结果：DHA 0.01 μmol/L对BKCa无显著激活作用;0.1、1、10 μmol/L DHA可显著激活BKCa。不同浓度的DHA（0、0.1、1、10 μmol/L）在指令电压为+60 mV时,BKCa电流密度分别为(30.5±6.5) pA/pF、(59.4±5.8) pA/pF、(87.2±4.3) pA/pF和(117.3±7.1) pA/pF (P<0.01)。急性缺氧在指令电压为+60 mV时,BKCa电流密度从(32.7±8.5) pA/pF降低至(11.9±5.8) pA/pF (P<0.01)。DHA (10 μmol/L) 能明显逆转急性缺氧对BKCa的抑制作用（P<0.01）,同时DHA触发PASMCs内［Ca2+］i的增加,最大增加速率为（71.9±4.1）%（P<0.01）。结论：DHA通过增加PASMCs［Ca2+］i激活BKCa,逆转急性缺氧对BKCa的抑制作用,具有舒张肺血管的作用。     

钩藤碱对人体肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的影响

目的:探讨钩藤碱(Rhy)对人体肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BKCa)的作用.方法:切取人体肠系膜动脉并分离细胞,以膜片钳测BKCa活性.结果:(1)高血压病组(EH)与非高血压组(NH)比较,前者BKCaPo较高,Tc较低;加入Ca2 后,与加Ca2 前相比NH组Po的增加幅度高于EH组.(2)加入Rhy后,在细胞贴附式BKCa无反应;在内面向外式EH组BKCa Po增加的幅度高于NH组,同一浓度下,前者Po较高,Tc较低.结论:(1)EH组BKCa活性高于NH组.(2)Rhy可直接激活BKCa,且在EH组更为显著.     

ATP敏感性和Ca^2＋激活的钾通道对血管平滑肌的作用

动脉平滑肌的钾通道开放，可导致膜超极化，而使血管舒张；阻断钾通道，则导致膜去极化，血管收缩。本文主要讨论ＡＴＰ敏感性钾通道（Ｋ（ＡＴＰ））以及Ｃａ（２＋）激活的钾通道（Ｋ（Ｃａ））在血管乎滑肌功能性调控中的作用及特性。Ｋ（ＡＴＰ）细胞代谢变化起反应，它是合成的和内源性血管扩张剂的靶部位。Ｋ（Ｃａ）对细胞内Ｃａ（２＋）浓度和膜电位的变化产生反应，可调节阻力血管的内部张力，并有助于调节动脉对压力和缩血管物质的反应。     

缺氧对肺动脉平滑肌细胞钾通道Kv1.2、Kv1.6基因表达的影响

目的:研究不同缺氧时间对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)不同亚型钾通道(Kv)mRNA和蛋白质表达的影响。方法:采用半定量RT-PCR和Western-blot方法对常氧和不同缺氧时间后PASMC上Kv1.2、Kv1.6mRNA和蛋白质的表达进行测定。结果:(1)PASMC在常氧和缺氧时均有Kv1.2、Kv1.6mRNA和蛋白质表达;(2)缺氧18h使Kv1.2mRNA和蛋白质表达增强,缺氧48h则使其表达减弱且低于常氧时的表达;(3)缺氧18h、48h对Kv1.6的mRNA和蛋白质表达无影响。结论:Kv1.6不是氧敏感的钾通道;作为氧感受器的Kv1.2,其mRNA和蛋白质表达随缺氧时间而改变。     

血管平滑肌细胞L—型钙通道的调控

血管平滑肌细胞Ｌ－型钙通道的调控桂培春（中国医学科学院基础所生理室,北京１００００５）电压和时间依赖性Ｌ－型钙通道是血管平滑肌（ＶＳＭ）细胞外钙离子经细胞膜进入细胞内的主要途径,当血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）兴奋时,胞外的钙离子经Ｌ－型钙通道进入细胞内...     

失血性休克对大鼠血管平滑肌BKCa通道酪氨酸磷酸化水平的影响

目的:探讨失血性休克对大鼠肠系膜上动脉血管平滑肌BK_Ca通道酪氨酸磷酸化的影响以及NO对BK_Ca通道酪氨酸磷酸化的调控。方法:建立大鼠失血性休克模型[(35±5)mmHg]并提取肠系膜上动脉总裂解蛋白,采用免疫沉淀及免疫印迹技术,观察休克血管平滑肌BK_Ca通道酪氨酸磷酸化的变化情况;采用原代培养的大鼠肠系膜上动脉血管平滑肌细胞,观察NO对BK_Ca通道酪氨酸磷酸化的调控及其时-效、量-效关系。结果:失血性休克2 h及4 h后大鼠肠系膜上动脉血管平滑肌BK_Ca通道α亚基酪氨酸磷酸化明显增强 (P＜0.01 );L-精氨酸(5×10^-5-5×10^-4 mol/L)孵育30 min即可诱导培养血管平滑肌细胞BK_Ca通道α亚基酪氨酸磷酸化增强,2 h内无明显下降;且L-精氨酸诱导BK_Ca通道α亚基酪氨酸磷酸化具有剂量依赖性。结论:重症失血性休克可增强血管平滑肌BK_Ca 通道酪氨酸磷酸化,且NO参与了该调控过程。     

在inside-out膜片上caffeine对猪冠状动脉平滑肌细胞钙激活钾通道的调节作用及ryanodine的影响

目的:利用膜片钳技术,研究咖啡因对钙激活钾通道(calcium-activated potassium channel,KCa)的作用机制,及咖啡因存在时兰尼定(ryanodine)对KCa的影响以阐明冠状动脉平滑肌的调控机制。方法:采用急性酶分离方法,应用膜片钳单通道电流记录技术记录猪冠状动脉平滑肌钿胞上KCa电流活动。电流信号经放大、滤波及A/D、D/A转换后输入微机进行采样和储存。应用PCLAMP9.0软件系统进行数据采集及分析。结果:在内面向外式(inside-out)膜片下,咖啡因(0.1、0.5、1.0、5.0mmol/L)可浓度依赖性地增加通道开放概率,而对电流幅值无明显影响,开放概率增加是通过明显缩短平均关闭时间实现的(n=8,P0.01);洗去药物后通道活性可以恢复到对照水平;5.0mmol/L咖啡因对KCa激活作用最大(P0.01)。在细胞贴附式(cell-attached)膜片上,咖啡因激活KCa后,ryanodine(10-40μmol/L)浓度依赖性地抑制通道开放概率,开放时间缩短,关闭时间延长,对电流幅度无明显影响。结论:在inside-out膜片下,咖啡因能够直接激活猪冠状动脉平滑肌细胞KCa通道。在cell-atta-ched构型上,ryanodine可通过胞内一定的信号通路浓度依赖性间接抑制咖啡因对KCa激活。     

蛋白激酶C在血管平滑肌细胞中的调控作用及其检测

蛋白激酶Ｃ是细胞内诸多信息传递系统相互影响的中心环节。它受胞内钙离子、磷酸肌醇代物产物。ＣＡＭＰ、ＣＡＮＰ等的影响．对血管平滑肌等有调节作用。目前已有５种较稳定的ＰＫＣ检测方法。     

COPD合并慢性缺氧患者肺血管对急性缺氧反应变化中肺动脉平滑肌细胞钾通道的作用

目的：以人离体肺动脉环缺氧张力变化为对象研究钾通道在缺氧性肺血管收缩（HPV）发生中的作用。 方法： 从手术室切取人肺动脉环，进行人肺动脉环张力试验，分正常对照组，单纯慢性阻塞性肺病（chronic obstructive pulmonary disease ，COPD）组和COPD合并慢性缺氧组，分别利用相应的特异性阻断剂观察电压门控性钾通道（KV），钙离子激活的钾通道（KCa）， ATP敏感的钾通道（KATP），在缺氧性肺血管收缩（HPV）的作用。 结果： （1）3组肺动脉环在急性缺氧时血管收缩张力均增加，同时COPD＋慢性缺氧组增加百分比显著低于对照组；COPD组与对照组无显著差异。（2）4-AP阻断Kv后较阻断前，3组肺血管环缺氧张力增加幅度均显著降低（P<0.05），同时正常对照组和COPD组降低幅度明显大于慢性缺氧组。TEA阻断KCa后以及格列苯脲（glybenclamide）阻断KATP后二者较阻断前，3组肺血管环缺氧张力均显著增加（P<0.05），同时COPD＋慢性缺氧组增加的幅度明显大于正常组（分别是P<0.01和P<0.05）。 结论： （1）慢性缺氧可降低肺血管的收缩性及肺血管对急性缺氧的收缩反应；（2）Kv在3组人离体肺动脉环HPV反应中均起介导作用，慢性缺氧可使此介导作用加强；KCa和KATP在3组人离体肺动脉环HPV反应中均起调节作用，慢性缺氧可使此调节作用加强。     

重症休克大鼠细动平滑肌膜电位变化在血管反应性降低中的作用

目的；研究查明重症失血性休克血管反应性降低的机制。方法：测定大鼠脊斜肌细动脉对去甲肾上腺素（ＮＥ）的反应性，在反应性下降时用微电极记录离体主动脉及细动脉条平滑肌静息膜电位；用激光共聚集显微镜动态测定单个细动脉平滑肌细胞膜电位变化，观察ＡＴＰ毓四通道（ＫＡＴＰ）阻滞剂优降糖对细动脉平滑肌细胞膜电位和血管反应性的作用。结果：在失血性休克代偿期，细动脉平滑肌膜电位负值减小，血管对ＮＥ反应性增高；失血性休     

血管平滑肌钙信号研究进展

钙离子是各型细胞中普遍存在的第二信使,能调节细胞的许多生理过程,其中包括血管平滑肌的收缩过程。血管平滑肌细胞内由兰尼定受体与三磷酸肌醇受体介导产生的胞内钙释放,对胞内钙离子浓度的调节极为重要。     

缺血预处理对失血性休克大鼠血管反应性及钙敏感性的影响

目的：观察缺血预处理对失血性休克血管反应性和钙敏感性的影响。方法：通过观察不同缺血预处理方法对失血性休克大鼠存活时间和24 h存活率的影响,选择最适缺血预处理方法。在体实验,观察缺血预处理对失血性休克大鼠肠系膜上动脉（SMA）血管管径对去甲肾上腺素（NE）收缩反应性和NE升压反应的影响;离体实验,应用离体血管环张力测定技术,观察缺血预处理对失血性休克后大鼠SMA环血管反应性和钙敏感性的影响。结果：确定最适缺血预处理方法为：夹闭腹主动脉1 min,开放5 min,重复3次,2 h后复制失血性休克模型,这种方法可显著增加失血性休克大鼠的存活时间和24 h存活率。在体实验,缺血预处理可显著增加休克晚期NE的升压效应和在体SMA对NE的收缩反应（P<0.01）。离体实验,与失血性休克对照组比较,缺血预处理组SMA在休克早期(休克即刻)对NE的收缩反应性和钙敏感性明显下降（P<0.05）,但与正常对照组比较无显著差异（P>0.05）;在休克后期（休克2 h、3 h、4 h）,缺血预处理组SMA对NE的收缩反应性和钙敏感性显著增加（P<0.05）,且与正常对照组比较无显著差异（P>0.05）。结论：缺血预处理可能通过改善血管钙敏感性发挥对休克后期血管反应性的保护效应。     

NO对新生大鼠下丘脑钙激活钾通道的直接激活作用

目的：研究NO对下丘脑神经元钙激活钾通道（K_Ca）的作用及其机制。方法：采用膜片钳技术内面向外式。结果：NO可显著提高通道的开放概率，这种增强作用是通过延长通道开放时间及增加开放频率实现的。结论：下丘脑神经元中NO可直接激活K_Ca，它的病理生理作用还有待于进一步研究。     

细胞外基质对血管平滑肌细胞的作用

血管平滑肌细胞表型的转变、迁移、增殖和凋亡,与血管成型术后再狭窄的发生关系密切,细胞外基质通过与平滑肌细胞表面整合素受体的粘连,形成粘着斑,激活粘着斑激酶,影响细胞内的信号转导,从而对再狭窄的发生和发展产生一定作用。