栀子苷单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备特异性的栀子苷(Geniposide,GEN)单克隆抗体。方法:采用高碘酸钠氧化法合成栀子苷免疫抗原,通过对BALB/c小鼠进行免疫;对血清进行检测阳性后,取上述免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14按10∶1的比例融合;用间接竞争ELISA法和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选;用阳性细胞株诱导制备腹水抗体;用辛酸硫酸铵法纯化抗体,并进行交叉反应检测。选择血清效价高且敏感性好的小鼠,采用杂交瘤细胞技术进行细胞融合,筛选分泌栀子苷单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用体内诱生腹水法制备栀子苷单克隆抗体,并通过正辛酸纯化的方法纯化腹水中抗体蛋白,采用SDS-PAGE法对抗体蛋白的纯化纯度进行检测。结果:获得了能分泌抗栀子苷单克隆抗体稳定的杂交瘤细胞株。SDS-PAGE结果说明经过纯化腹水中大量的杂蛋白能够被除去,获得的栀子单克隆抗体纯度较高,纯化后腹水中抗体效价与纯化前比均为60 000∶1左右。结论:成功获得了能分泌栀子苷单克隆抗体稳定的杂交瘤细胞株,特异性、灵敏度都比较高,为样品中的栀子苷快速微量检测及免疫亲和色谱柱的制备奠定了基础。     

抗Trastuzumab单克隆抗体制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立

本研究利用曲妥珠单抗（Trastuzumab）4次腹腔免疫 6-8 周龄BALB/c 雌性小鼠.通过淋巴细胞杂交瘤技术、间接ELISA 筛选技术及腹水制备等技术制备并获得抗Trastuzumab单克隆抗体.试验结果表明,通过细胞融合获得了一株能稳定分泌抗Trastuzumab的杂交瘤细胞株A6E8,其制备的腹水单克隆抗体纯化后效价为256000,该抗体属于IgG1亚类,链的类型为k链.利用制备的单克隆抗体（McAb）建立Trastuzumab双抗体夹心ELISA检测方法,试验结果显示,该检测方法特异性良好,不与其他抗体及蛋白发生交叉反应,所建立的Trastuzumab双抗体夹心ELISA 方法最低检测限为1ng/mL.     

抗Trastuzumab单克隆抗体制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立

本研究利用曲妥珠单抗(Trastuzumab)4次腹腔免疫 6-8 周龄BALB/c 雌性小鼠.通过淋巴细胞杂交瘤技术、间接ELISA 筛选技术及腹水制备等技术制备并获得抗Trastuzumab单克隆抗体.试验结果表明,通过细胞融合获得了一株能稳定分泌抗Trastuzumab的杂交瘤细胞株A6E8,其制备的腹水单克隆抗体纯化后效价为256000,该抗体属于IgG1亚类,链的类型为k链.利用制备的单克隆抗体(McAb)建立Trastuzumab双抗体夹心ELISA检测方法,试验结果显示,该检测方法特异性良好,不与其他抗体及蛋白发生交叉反应,所建立的Trastuzumab双抗体夹心ELISA 方法最低检测限为1ng/mL.     

人参皂苷Rg1人工抗原的合成及免疫原性鉴定

目的 合成人参皂苷Rg1的人工免疫原和包被原,为后续制备人参皂苷Rg1的单克隆抗体及建立相应的免疫分析方法奠定基础.方法 采用NaIO4氧化法分别合成人参皂苷Rg1免疫抗原(Rg1-BSA)和包被抗原(Rg1-PLL);紫外光谱和薄层色谱法鉴定人工抗原偶联是否成功;用间接ELISA方法检测免疫小鼠血清中抗体效价,用间接竞争ELISA检测抗体特异性.结果 经紫外光谱和薄层色谱法检测,人参皂苷Rg1与BSA/PLL偶联成功;免疫小鼠后Rg1-BSA可以使小鼠体内产生抗Rg1抗体;利用合成的偶联物成功建立间接ELISA和间接竞争ELISA方法,测得小鼠血清抗体效价在1∶80 000以上,并且所得抗体能特异性结合人参皂苷Rg1.结论 成功合成了人参皂苷Rg1人工免疫原和包被原,可用于下一步的人参皂苷Rg1单克隆抗体制备及建立相应免疫分析方法.     

刺五加多糖（ASPS）对小鼠免疫功能的影响

本实验研究观察了刺五加多糖(ASPS)对小鼠免疫功能的影响。结果表明,ASPS腹腔注射剂量为125、25、50和100mg/kg时,可明显增强小鼠脾分泌IgM的PFC;剂量为100mg/kg时,可明显增强小鼠脾分泌IgG的PFC和小鼠对BSA诱导的迟发型超敏反应性(DTH)。     

斯皮诺素人工抗原的合成及免疫原性鉴定北大核心CSCD

采用高碘酸钠法,以BSA,OVA为载体蛋白合成斯皮诺素的免疫抗原和包被抗原,通过紫外扫描法鉴定,偶联率分别为17,13.7。采用间接ELISA和间接竞争ELISA测定小鼠血清,其最高效价达1∶32 000,灵敏度为211.6μg·L-1且交叉反应率低,表明小鼠经斯皮诺素-BSA免疫后可产生高效价、特异性好的抗斯皮诺素抗体。该实验首次成功制备了具有免疫原性的斯皮诺素人工抗原,为进一步制备斯皮诺素的单克隆抗体及建立斯皮诺素的免疫分析方法提供参考。     

甲型H1N1流感病毒NA蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备

目的:利用原核系统表达甲型H1N1流感病毒NA蛋白,制备NA特异性单克隆抗体。方法:采用RT-PCR技术扩增A/Shenzhen/71/09病毒株NA基因,通过原核表达系统表达含6×His标签NA重组蛋白,利用镍离子亲和柱进行纯化。使用NA蛋白以100g/只剂量免疫BALB/C小鼠,3次免疫后,利用杂交瘤技术筛选分泌NA特异性单克隆抗体的细胞株,采用Western-blot方法对单抗进一步验证。结果:成功克隆A/Shenzhen/71/09NA基因,长度约1400bp。将NA基因克隆入原核表达载体pET-21b(+),经IPTG诱导后在大肠杆菌包涵体中检测到目的蛋白,分子量约50kd。采用尿素变性处理后借助6×His标签对蛋白进行纯化。用纯化蛋白免疫小鼠,将脾细胞与SP2/0细胞融合,使用ELISA检测细胞上清NA抗体,共筛选1株持续分泌NA抗体的杂交瘤细胞株7C11。Western-blot验证该单克隆抗体可以特异性结合NA抗原。结论:成功表达甲型H1N1流感NA蛋白,获得1株分泌NA抗体的单克隆细胞株,从而为后续甲流诊断及疫苗研制奠定基础。     

斯皮诺素人工抗原的合成及免疫原性鉴定

采用高碘酸钠法,以BSA,OVA为载体蛋白合成斯皮诺素的免疫抗原和包被抗原,通过紫外扫描法鉴定,偶联率分别为17,13.7。采用间接ELISA和间接竞争ELISA测定小鼠血清,其最高效价达1∶32 000,灵敏度为211.6μg·L-1且交叉反应率低,表明小鼠经斯皮诺素-BSA免疫后可产生高效价、特异性好的抗斯皮诺素抗体。该实验首次成功制备了具有免疫原性的斯皮诺素人工抗原,为进一步制备斯皮诺素的单克隆抗体及建立斯皮诺素的免疫分析方法提供参考。     

低分子灵芝多糖体内抗肿瘤活性研究及其作用机制探讨

目的：考察三种灵芝多糖（GLPH、GLPM、GLPL）的抗肿瘤活性及其作用机制。方法：采用小鼠移植瘤研究方法检测了三种灵芝多糖对S180（骨肉瘤）、Heps（肝癌）、EAC（腹水癌）及BB16BL6（黑色素瘤）的抑制作用,并通过各种免疫因子及TH1/TH2比值检测来研究其可能的作用机制。结果：灵芝多糖（GLPL）对S180、Heps、EAC、B16BBL6均有明显的抑制作用,而灵芝多糖（GLPH、GLPM）的作用不明显。且研究显示GLPL能够显著增加细胞因子IFN-γ、IL-2表达水平,而对IL-6、IL-10作用不明显。结论：灵芝多糖（GLPL）具有良好的抑制肿瘤S180、Heps、EAC、BB16BL6生长的活性,且这种抑制活性可能是通过促进免疫细胞因子的分泌而发挥作用。     

灵芝蝙蝠蛾拟青霉菌丝体复合物增强免疫作用研究北大核心

目的:考察灵芝蝙蝠蛾拟青霉菌丝体复合物对正常小鼠免疫功能的影响。方法:480只SPF级Balb/c小鼠,随机分到8个试验中,分别从细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性及生化水平考察灵芝蝙蝠蛾拟青霉菌丝体复合物对小鼠免疫功能的影响,每个试验随机分为5组,每组12只。分别为:空白对照组、金水宝胶囊组及灵芝蝙蝠蛾拟青霉菌丝体复合物低、中、高剂量组。每天灌胃给药1次,持续30 d。喂食结束后,检测各指标。结果:细胞免疫方面:二硝基氟苯诱导小鼠DTH耳肿胀法试验结果为阳性,ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验结果为阴性,灵芝蝙蝠蛾拟青霉菌丝体复合物低、中剂量组CD8^(+)细胞比例降低,CD4^(+)/CD8^(+)升高。体液免疫方面:血清溶血素为阳性结果,抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)为阳性结果。单核-巨噬细胞功能方面:小鼠碳廓清为阴性结果,小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞为阳性结果。NK细胞活性检测为阳性结果。灵芝蝙蝠蛾拟青霉菌丝体复合物中、高剂量组小鼠IgM、IgA、TNF-α水平显著升高,高剂量组IgG显著升高。结论:灵芝蝙蝠蛾拟青霉菌丝体复合物具有增强免疫功能的作用,其机制可能与增强体液免疫作用及部分细胞免疫作用有关。