当归药材HPLC指纹图谱及其液相色谱-质谱联用分析

目的：建立当归的HPLC指纹图谱,并对其化学成分进行分析。方法：采用高效液相色谱法,以甲醇-0.05％磷酸水溶液系统进行线性梯度洗脱,测定了来源于岷县的多批当归药材和市售当归饮片的指纹图谱,应用相似度分析和聚类分析进行分类;并采用液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）方法对岷县当归药材中的化学成分进行定性分析。结果：在选定的色谱条件下,得到当归HPLC指纹图谱,标定出12个共有峰;根据相似度分析和聚类分析的结果,将当归药材和当归饮片各分为1类。HPLC-MS鉴定出阿魏酸,6,7-二羟基藁本内酯,洋川芎内酯I、H、A,阿魏酸松柏酯,E-藁本内酯,Z-藁本内酯,3-正丁烯基苯肽共9个化学成分。结论：应用本方法评价当归的质量是可行的。     

盐析辅助水蒸气蒸馏法对川芎挥发油提取的影响研究

目的:探讨盐析辅助水蒸气蒸馏法对川芎挥发油提取的影响。方法:采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)仪对氯化钠、磷酸氢二钠辅助水蒸气蒸馏法和传统水蒸气蒸馏法提取的川芎挥发油成分进行分析,同时以丁烯基苯酞和藁本内酯的总含量为指标进行定量比较。结果:水蒸气蒸馏所得挥发油中得到17种化合物,挥发油提取率为0.15%,丁烯基苯酞和藁本内酯的平均总含量为4.09 mg/g;氯化钠辅助水蒸气蒸馏法得到15种化合物,挥发油取率为0.29%,丁烯基苯酞和藁本内酯的平均总含量为4.15 mg/g;磷酸氢二钠辅助水蒸气蒸馏法得到15种化合物,挥发油提取率为0.11%,丁烯基苯酞和藁本内酯的平均总含量为3.31 mg/g。结论:盐析辅助水蒸气蒸馏法与传统水蒸气蒸馏法相比,所提川芎挥发油成分差别不大,氯化钠辅助可提高出油率,但对丁烯基苯酞和藁本内酯含量无明显影响;磷酸氢二钠辅助会降低出油率,丁烯基苯酞和藁本内酯含量也稍有降低。     

不同产地川芎中丁烯基苯酞的HPLC分析

目的建立川芎药材中丁烯基苯酞的含量测定方法。方法采用RP-HPLC法对不同产地川芎中丁烯基苯酞的含量进行测定。色谱柱:C18(200 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-水(体积比67∶33);流速:1.0 mL/m in;检测波长:230 nm。结果丁烯基苯酞在6.96~69.60μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9996),平均回收率为97.79%(RSD=1.7%)。结论本法简便准确,重现性好,可用作川芎药材的质量控制,为不同产地的川芎药材的收购及栽培等提供有效监控依据。     

RP-HPLC法测定川芎中丁基苯酞

川芎为伞形科植物川芎Ligusticum wallichii Franch.的干燥根茎，具有活血行气、祛风止痛之功效。川芎中的苯酞类成分藁本内酯（ligustilide）、丁基苯酞（butylphthalide）、丁烯基苯酞（butylidenephthalide）、新蛇床内酯（neocinidilide）等是其主导香味成分，并具有广泛的生理活性。日本也曾以苯酞类成分来评价川芎的质量。虽然藁本内酯在川芎中的量较高，但藁本内酯很不稳定，易分解，这给质量检测带来了很大的麻烦。     

茶芎挥发油中抗惊有效成分的分离和鉴定

从中药茶芎LigusticumsinenseOliv.cv.Chaxiong的挥发油中分得5个具抗惊活性的苯酞类化合物，经化学和光谱分析鉴定为丁烯基苯酞（Ⅰ）、藁本内酯（Ⅱ）、丁基苯酞（Ⅲ）、新蛇床内酯（Ⅳ）和东川芎内酯（Ⅴ）。     

紫外线-B辐射对当归苯酞类成分含量的影响

目的研究紫外线(UV)-B辐射对当归苯酞类成分含量的影响。方法在大田试验条件下,设置自然光(CK,只用灯罩,不安装灯管)、UV-B辐射T1[7.11 KJ/(m2·d)]、UV-B辐射T2[8.67 KJ/(m2·d)]3个处理,11月初采收当归,采用高效液相色谱(HPLC)法检测当归药材中阿魏酸松柏酯、欧当归内酯A、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、藁本内酯6种苯酞类成分的含量,并进行比较。结果在UV-B辐射T2处理下,当归阿魏酸松柏酯、欧当归内酯A、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、藁本内酯含量及总含量均大于CK和UV-B辐射T1处理,差异有统计学意义(P0.05)。结论 UV-B辐射增强有利于当归中苯酞类成分的积累,提示当归在高海拔UV辐射强度大的条件下,有利于高品质的形成。     

川芎药材薄层指纹色谱鉴别研究

目的:建立川芎药材薄层指纹色谱鉴别方法。方法:以阿魏酸对照品、欧当归内酯A对照品、藁本内酯对照品和川芎对照药材为对照,且与藁本、山川芎作比较,采用薄层色谱法进行鉴别研究,并计算其相似度。结果:川芎供试品色谱中,在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,以甲苯-冰醋酸-甲醇(3∶1∶3)、正己烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶1∶0.05)、正己烷-乙酸乙酯-甲酸(7∶1∶0.05))展开后Rf值适中,斑点清晰且与藁本、山川芎薄层指纹色谱上有明显的区别。结论:建立的薄层指纹色谱鉴别方法对川芎中阿魏酸、欧当归内酯A和藁本内酯鉴别有较好的适应性,重现性好,为提升其质量标准提供了技术支撑。     

TLC Fingerprint Identification of Ligusticum Chuanxiong

目的:建立川芎药材薄层指纹色谱鉴别方法.方法:以阿魏酸对照品、欧当归内酯A对照品、藁本内酯对照品和川芎对照药材为对照,且与藁本、山川芎作比较,采用薄层色谱法进行鉴别研究,并计算其相似度.结果:川芎供试品色谱中,在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,以甲苯-冰醋酸-甲醇(3∶1∶3)、正己烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶1∶0.05)、正己烷-乙酸乙酯-甲酸(7∶1∶0.05))展开后Rf值适中,斑点清晰且与藁本、山川芎薄层指纹色谱上有明显的区别.结论:建立的薄层指纹色谱鉴别方法对川芎中阿魏酸、欧当归内酯A和藁本内酯鉴别有较好的适应性,重现性好,为提升其质量标准提供了技术支撑.     

我国不同产地当归药材质量的分析与评价

目的 对我国当归不同产地的药材质量进行分析与综合评价。方法 采集 2008 年我国各主产区传统采收期的25批次当归药材样品,采用 HPLC 法、UV 法测定当归药材中总挥发油、藁本内酯、正丁烯基酜内酯、阿魏酸、总多糖的量;运用主成分分析法对当归多指标进行综合评价。结果 岷归、云归、川归、窑归的多指标成分比较分析与综合评价,以甘肃产岷归质量为优;主成分分析中藁本内酯的因子载荷量最大,说明其对当归质量的影响较为显著。结论 基于我国不同产地当归药材质量的分析评价,建立了较为系统、客 观的多成分类型多指标现代分析评价体系,为药材地道性科学内涵的揭示提供了依据和方法学参考。     

临洮当归与岷县当归8种有效成分比较

目的通过测定岷县当归与临洮当归中阿魏酸、阿魏酸松柏酯、藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、正丁基苯酞、欧当归内酯等8种有效成分的含量,对比评价新产区临洮所产当归的药材质量。方法采用高效液相色谱(HPLC)法测定岷县当归与临洮当归中以上8种有效成分的含量,色谱柱为Merk RP-C₁₈柱(250.0 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(B)-1%乙酸(A),梯度洗脱,检测波长280 nm,柱温30℃,流速1 m L/min,进样量20μL;采用SPSS 21.0统计软件比较2个产地8种有效成分的含量差异。结果该色谱条件可以将当归中以上8种有效成分完全分离并同时测定其含量; 8种有效成分在各自线性范围内均呈现良好的线性关系; 2个产地当归中有效成分除洋川芎内酯I与洋川芎内酯H外,其余6种有效成分含量差异均有统计学意义(P<0.05)。结论该方法简单可行、重复性好,可为临洮合理引种当归及其规范化栽培提供参考。     

基于指纹图谱及化学模式对当归酒洗前后的比较分析

目的建立当归酒洗前后的HPLC指纹图谱,并结合主成分分析、定量分析及出膏率对当归酒洗前后做比较分析,为其质量控制提供参考。方法采用HPLC法,以InertSustainSwiftTM C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相梯度洗脱,检测波长230 nm,体积流量1 mL/min,进样量15μL,分别建立当归酒洗前后指纹图谱,并且采用指纹图谱相似度评价,主成分分析,定量分析及出膏率进行比较研究。结果分别建立了当归和酒洗当归HPLC指纹图谱,标定了30批次16个共有峰;15批酒洗前后的当归分别与对照图谱比较,相似度均大于0.9,当归和酒洗炮制品的对照图谱相似度也大于0.9;主成分分析中当归酒洗前后样品都聚集一起;对15批当归酒洗前后指标性成分阿魏酸进行含量测定,酒洗后阿魏酸含量较生品降低;同时该15批生当归的出膏率高于酒洗当归。结论本研究所建立的方法稳定可行,为比较当归酒洗前后的相似性和差异性及其质量控制提供了依据,同时结合多种方法,更有助于当归酒洗前后的评价。     

HPLC-MS/MS法测定人血浆中普罗布考浓度

目的建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术测定人血浆中普罗布考浓度的方法。方法血浆经乙酸乙酯∶二氯甲烷(1∶1,V/V)提取后,采用HPLC-MS/MS测定。以ultimate CN(50mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,乙腈∶水∶氨水=97∶3∶0.05(甲酸调pH=7.20)为流动相进行分离。质谱采用负离子模式检测,以大黄素甲醚为内标,检测离子515.5→236.1(普罗布考)和283.0→239.9(内标)。结果普罗布考在2.5～6000ng/mL范围内线性关系良好,最低定量限为2.5ng/mL,方法回收率在93.02%～104.12%之间,日内、日间精密度分别小于4.67%及5.72%。结论本研究所建立的方法准确、灵敏,可用于普罗布考血药浓度测定及药代动力学研究。     

HPLC-MS/MS测定血浆中甜菜碱和游离胆碱及其稳定性研究

【目的】 建立高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定血浆甜菜碱和游离胆碱水平,并研究血浆中两种物质的稳定性。【方法】 以d9-氯化胆碱&#65380;d9-甜菜碱为内标,血浆经乙腈除蛋白后,采用SiO2柱(2.1 mm × 100 mm, 5 μm)乙腈-甲酸铵缓冲液(15 mmol/L,pH = 3.5)等度洗脱,经电喷雾电离,选择多反应监测模式(MRM)同时测定血浆中甜菜碱和游离胆碱。【结果】 血浆中甜菜碱和游离胆碱得到良好分离,最低定量限均为0.62 μmol/L,线性范围均为0.62 ~ 400 μmol/L。对游离胆碱的测定,日内相对标准差(RSD)为5.10% ~ 5.85%,日间RSD为4.54% ~ 13.26%,回收率94.15% ~ 103.70%;对甜菜碱的测定,日内RSD为3.60% ~7.30%,日间RSD为2.70% ~ 8.10%,回收率90.03% ~ 103.88%。稳定性研究中,游离胆碱和甜菜碱浓度随保存时间及温度增加,游离胆碱在血浆分离48 h内变化小于15%,甜菜碱超过3 h后变化即大于15%。3个反复冻融循环内游离胆碱浓度稳定;甜菜碱变化明显,第一个冻融循环后即增加至原始浓度3倍。【结论】 高效液相色谱串联质谱法同时检测血浆中甜菜碱和游离胆碱是一种快速、准确且灵敏的方法。血浆保存时应注意保存温度、时间及反复冻融对血浆中甜菜碱和游离胆碱浓度的影响。     

施图伦滴眼液中化学成分的LC-MS/MS法鉴定

目的 建立LC-MS/MS法,对施图伦滴眼液中化学成分进行鉴定。方法 采用HPLC-MS/MS法对各色谱峰进行质谱分析,结合对照品以及水解试验,并参考文献确认各成分。结果 确认了15个成分,其中包括七叶亭苷和14个洋地黄强心苷类成分。结论 该方法快速、灵敏,可为施图伦滴眼液的质量控制及稳定性研究提供依据,为洋地黄化学成分进一步研究提供参考。     

Fast evaluation of oxidative DNA damage by liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry coupled with precision-cut rat liver slices

Objective To establish a fast and sensitive method for the detection of 8-hydroxy-2’-deoxyguanosine (8-OHdG) in precision-cut rat liver slices by HPLC-MS/MS and to investigate isoniazid (INH) -induced oxidative DNA damage. Methods Precision-cut liver slices (300 μm) were prepared from male rats, and incubated with INH (0.018 mol/L) for 2 h after 1 h preincubation. DNA in the slices was extracted and digested into free nucleosides at 37℃ . The samples were injected into HPLC-MS/MS after the proteins were removed. The level of oxidative DNA damage was estimated using the ratio of 8-OHdG to deoxyguanosine (dG). Results The limit of detection of 8-OHdG was 1 ng/mL (S/N=3) and the intra-assay relative standard variation was 3.38% when one transition 284.3/168.4 was used as a quantifier and another two transitions 284.3/140.2, 306.1/190.2 as qualifiers. 8-OHdG and dG were well separated, as indicated by elution at 10.02 and 7.37 min, respectively. INH significantly increased the ratio of 8-OHdG to dG in rat liver slices (P<0.05). Conclusion 8-OHdG in precision-cut liver slices could be sensitively determined by HPLC-MS/MS. HPLC-MS/MS coupled with precision-cut tissue slices is a fast and reliable analytical technique to evaluate oxidative DNA damage of target tissues caused by procarcinogens and cytotoxins.     

HPLC-MS/MS测定人血浆中伏立康唑质量浓度及其生物等效性研究

目的 建立高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）法测定人血浆中伏立康唑的方法,并进行伏立康唑片生物等效性研究。方法 采用双周期随机交叉自身对照试验设计,48例健康男性受试者分别单次空腹口服两种伏立康唑片200 mg,采用HPLC-MS/MS法测定人血浆中伏立康唑质量浓度,以WinNonlin?6.1软件计算主要药动学参数,并评价两种伏立康唑片的生物等效性。结果 伏立康唑标准曲线范围均为1~5 000 ng/mL,日内及日间精密度〔相对标准偏差（RSD）〕均小于11%,准确度在100.00%~109.73%之间,以内标基质效应校准后的伏立康唑基质效应RSD小于15%,萃取回收率大于50%,各项稳定性考察结果合格。伏立康唑峰浓度(Cmax)和药-时曲线下面积(AUC0-t、AUC0-∞)的90%置信区间在80.00%~125.00%等效区间之内,受试制剂与参比制剂间达峰时间(Tmax)差异无统计学意义(P>0.05)。结论 所建立的HPLC-MS/MS方法可用于人血浆中伏立康唑质量浓度的测定,伏立康唑片受试制剂与参比制剂生物等效。     

HPLC—MS／MS测定益智合剂中芍药苷的含量

目的：建立HPLC—MS／MS法测定益智合剂中芍药苷含量的方法。方法：采用高效液相串联质谱法对益智合剂中痕量的芍药苷进行分析，选用ZORBAXC。8反相柱（2．1min×30mm，3．5um）为色谱柱，流动相为甲醇-5mmol/L甲酸铵（75：25），流速0．4ml／min，柱温25℃。质谱条件为电喷雾离子源（ESI），检测方式为多离子反应监测（MRM），负离子模式，用于定量分析的离子为m／z525→449。结果：用外标法定量分析，线性范围为20～5000ug/L，r=0．9999；益智合剂中芍药苷的最低检测限为2ug/L；精密度RSD为0．84％；平均加样回收率为96．34％，RSD为2．45％（n=5）；测得益智合剂中芍药苷的含量为31．45ug／L。结论：本法操作简单、快捷，结果准确可靠，可作为目前有效检测益智合剂中的痕量成分芍药苷的含量。     

柱前衍生化HPLC-MS/MS法测定人血浆中5-HT、AD和NA方法的建立

目的建立衍生化高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中5-羟色胺（5-HT）、肾上腺素（AD）和去甲肾上腺素（NA）质量浓度。方法采用Ultimate C18 (50 mm×4.6 mm, 5 μm)色谱柱,流动相为乙腈∶水∶甲酸为95∶5∶0.05（V∶V∶V）,流速为0.2 mL/min,柱温为室温。检测方式为多反应离子监测,正离子模式,电喷雾离子源。血浆样品经沉淀蛋白后,在pH 10.5条件下与丹酰氯发生衍生化反应,产物经乙酸乙酯萃取浓集后进样。结果标准曲线线性范围为2.5~200 ng/mL;日内精密度相对标准偏差（RSD）为1.33%~8.13%,日间RSD 2.86%~7.73%,均小于9%;方法回收率95.44%~109.71%,基质效应4.86%~12.81%。结论本法简单、快速,可用于人血浆中5-HT、AD和NA质量浓度测定和研究。     

HPLC-MS法快速定量分析人血浆中硫普罗宁浓度(英文)

目的:建立快速测定人血浆中硫普罗宁浓度的HPLC-MS联用分析方法。方法:在全血中加入抗氧剂半胱氨酸后,于分得的血浆中加入霉酚酸为内标,酸化后经乙酸乙酯提取,进行HPLC-MS测定。色谱柱为Shim-pack VP-ODSC18 column(250mm×2.0mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%乙酸(70∶30),流速为0.2mL/min。结果:方法的线性范围为30～4000ng/mL,提取回收率大于70%,批间和批内精密度均小于8.5%,单样品分析时间7.5min。并将所建立的方法成功地应用于硫普罗宁片生物等效性研究。结论:本方法操作简单、快速,灵敏度、准确度、精密度和定量分析线性关系均良好,符合生物样品测定要求。     

基于网络药理学角度探讨当归四逆汤对子宫内膜异位症的干预机制

目的 基于网络药理学探讨当归四逆汤治疗子宫内膜异位症（EMS）的作用机制。方法 利用中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）筛选当归四逆汤有效活性成分及潜在靶点，在Genecard、OMIM和TTD数据库中寻找EMS相关靶点基因取当归四逆汤靶点基因与EMS相关靶点基因共同靶点。通过Cytoscape 3.5.0软件构建“当归四逆汤活性成分-潜在靶点-EMS”网络图。运用String数据库构建构建蛋白质互作（PPI）网络图。对潜在靶点基因进行基因本体（GO）富集分析和京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路分析。结果 数据库筛选的得到当归四逆汤有效活性成分151个，与EMS相关潜在作用靶基因71个，KEGG富集通路分析主要包括化学致癌受体激活，脂质和动脉粥样硬化通路等。结论 当归四逆汤具有多活性成分，能通过多靶点，多通路发挥EMS保护作用。