中国神方补肾生血药抗衰老分子机理的研究

本文就补肾生血药作用的分子基础作了深入研究。结果表明，补肾生血药能明显提高老龄大鼠ＤＮＡ合成代谢水平，提高骨髓有核细胞内ＤＮＡ、核酸含量，明显提高ＤＮＡ聚合酶活力，该药还能提高鼠肝ＤＮＡ甲基化酶活力及ＤＮＡ甲基化水平     

补肾生血和补肾调经方药促血管生成作用实验研究

利用鸡胚绒毛尿囊膜(Chicken ChorioallantoicMembrane,CAM)血管生成模型,检测补肾生血和补肾调经方药的动物血清血管生成作用,结果显示,两种中药均可产生特异性的血管生成作用,明显促进血管生长,明显增加血管数目(P<0.01),促进血管生成作用增加55％～124％。提出中药所具有的血管生成活性样作用有重要意义。     

益髓生血颗粒对辐射损伤小鼠骨髓细胞周期的影响

目的:观察补肾生血药益髓生血颗粒对骨髓细胞周期的影响,探讨其可能的造血调控机制。方法:将78只雄性昆明种小鼠随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、G-CSF组(C组)、益髓生血颗粒高剂量组(D组)、益髓生血颗粒中剂量组(E组)、益髓生血颗粒低剂量组(F组),每组13只。采用60Co-γ射线全身一次性照射造成小鼠骨髓急性损伤模型。造模前,先预防给药2 d,D-F组分别按12,6,3 g.kg-1.d-1灌胃益髓生血颗粒,A～C组给予等量蒸馏水。造模第2天,C组按30μg.kg-1.d-1皮下注射G-CSF注射液,其余各组给药方法同预防给药,连续14 d。收集各组小鼠骨髓有核细胞,采用流式细胞仪检测骨髓细胞周期的分布情况。结果:与正常组相比,模型组G0/G1期细胞比例为(67.6±7.1)%,明显降低;S期细胞比例为(25.3±5.7)%,G2/M期细胞比例为(7.1±1.8)%,均明显增加(均P<0.001);细胞增殖指数为(32.4±7.1)%,明显升高(P<0.001)。与模型组相比,益髓生血颗粒高剂量组G0/G1期细胞比例为(62.2±3.6)%,明显降低(P<0.05);细胞增殖指数为(37.8±3.6)%,明显升高(P<0.05);益髓生血颗粒各剂量组处于S期的细胞比例分别为(29.1±2.7)%,(29.2±4.8)%,(29.5±3.9)%,均明显升高(均P<0.05)。结论:补肾生血药益髓生血颗粒可通过促进骨髓细胞由G0/G1期进入S期而明显促进细胞增殖。     

从补肾生血药对衰老小鼠骨髓GM-CSF基因转录水平的影响探讨肾生髓的分子基础

目的：为探讨肾生髓的分子基础,阐述肾生髓的本质相关基因,我们观察了补肾生血药对衰老小鼠骨髓粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（GM－SF)基因转录水平的影响。方法：采用老年小鼠和D－半乳糖致衰老小鼠两种衰老肾虚动物模型,分别连续灌服补肾生血药2个月和1个月,应用半定量逆转录－聚合酶链式反应技术（RT－PCR）检测小鼠骨髓有核细胞GM－CSF基因转录水平的变化。结果：老年小鼠和D－半乳糖致衰老小鼠骨髓有核细胞GM－CSF基因转录水平明显低于青年小鼠和正常对照小鼠,给药后则可明显得到提高。结论：补肾生血药起到滋阴补肾,益髓生血作用的分子机理之一,是促进骨髓GM－CSF基因的转录。GMCSF是肾生髓的分子基础之一,GM－CSF基因是肾生髓的本质相关基因之一。     

补肾生血药对顺铂损伤的小鼠骨髓间充质干细胞的影响

目的：观察补肾生血药对顺铂损伤的骨髓间充质干细胞（BMSC）的影响,探讨补肾生血改善化疗后骨髓抑制的机制。方法：将50只SD雄性大鼠随机分为空白对照组、补肾生血药组,每组25只,分别制备补肾生血血清和空白血清,原代培养BALB/c小鼠BMSC,随机分组,CCK-8法确定顺铂和补肾生血血清干预浓度。干预48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期,酶联免疫吸附试验法检测培养液中造血调控因子含量。结果：干预48 h后,骨髓细胞凋亡率明显增高（P<0.01）,补肾生血血清组G1期细胞比例显著降低（P<0.05）,S期细胞比例显著增加（P<0.05）,增殖期细胞比例明显增加（P<0.05）。补肾生血血清组骨髓细胞凋亡率明显降低（P<0.001）,G1期细胞比例显著降低（P<0.05）,增殖期细胞比例显著增加（P<0.05）,IL-3含量明显升高（P<0.01）,TNF-α、TGF-β、IFN-γ含量显著降低（均P<0.05）。结论：补肾生血药能减轻顺铂造成的BMSC凋亡,促进细胞进入增殖期,促进造血生长因子分泌,减少造血抑制因子分泌,提示该药对化疗后骨髓抑制具有一定的改善作用。     

补肾益智方含药血清对AD细胞模型保护作用的实验研究

目的:通过利用血清药理学方法观察补肾益智方对由Aβ片段毒性诱导的NG108-15细胞老年性痴呆模型的影响,并评价其在研究中药药效学中的作用价值。方法:利用细胞计数、MTT方法确立Aβ25-35片段在建立细胞模型时的浓度及筛选含药血清作用的最佳浓度,分别观察5％、10％、20％正常大鼠(Rat)血清和补肾益智方含药血清培养液及不同浓度(0umol/L、5umol/L、10umol/L)Aβ25～35片段处理老年性痴呆细胞模型后的细胞存活率。结果:以上两种血清5％浓度组的细胞存活率均明显高于10％及20％浓度组(P<0.001.P<0.0001),10％与20％浓度组之间则差异无显著性意义;在5％血清浓度条件下,无Aβ及5μMAβ25-35浓度 组,含药Rat血清组细胞存活率均高于正常Rat血清组,差异有显著性意义(P<0.05)。在10μMAβ25-35浓度时两组组间差异无显著性意义。结论:选用5umol/L Aβ5-35及5％血清浓度条件时,建立NG108-15细胞老年性痴呆模型较为合适;补肾益智方含药血清能使该细胞模型细胞死亡率降低,表明该方能有效地保护Aβ片段对细胞的神经毒性作用。     

补肾生血汤联合间充质细胞治疗再生障碍性贫血临床研究

目的观察补肾生血汤联合间充质细胞对再生障碍性贫血患者免疫功能及骨髓造血微环境的影响。方法将86例再生障碍性贫血患者随机分为2组,对照组43例给予骨髓间充质细胞治疗,1次/周;研究组43例在对照组治疗基础上给予补肾生血汤治疗。2组均治疗4周。检测2组治疗前后血常规、骨髓象、T淋巴细胞亚群、骨髓血清碱性成纤维生长因子(b FGF)、骨髓微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果研究组治疗后Hb、WBC、Plt、中性粒细胞、CD4~+、CD4~+CD25~+Foxp3~+、CD3~+CD4~+IL-4~+、骨髓增生活跃率、骨髓b FGF、MVD、VEGF水平均明显高于对照组(P均0.05);转铁蛋白饱和度、CD8~+、CD3~+CD4~+IL-17~+、CD3~+CD4~+INF-γ~+、Th1/Th2、非造血细胞百分率均明显低于对照组(P均0.05)。结论补肾生血汤联合间充质细胞治疗再生障碍性贫血可调整机体免疫功能紊乱和改善骨髓造血微环境。     

补肾益气生血方对恶性肿瘤辅助化疗后骨髓抑制的影响

目的:探讨补肾益气生血方对恶性肿瘤患者辅助化疗后骨髓抑制的影响。方法:将化疗后出现骨髓抑制患者随机分为两组,各组30例,治疗组予补肾益气生血方治疗,1d1剂,早晚分服,连续治疗12d;对照组予重组人粒细胞刺激因子注射液(G-CSF)200μg,1d1次皮下注射,连续治疗3~5d。结果:停药后第4天,治疗组外周血白细胞计数、中性粒细胞计数、KPS评分及生活质量优于对照组。治疗组各不良反应发生率低于对照组。结论:补肾益气生血方能够持久稳定升高化疗后骨髓抑制患者WBC、NE计数,改善生存质量。     

补肾生血颗粒对肾性贫血大鼠抗氧化作用及血EPO含量的影响

目的:探讨补肾生血颗粒对慢性肾衰肾性贫血大鼠的抗氧化作用,改善肾性贫血效果及血EPO含量的影响。方法:采用腺嘌呤建立大鼠贫血模型,随机分为模型对照组、中药治疗组(补肾生血颗粒)、西药治疗组(促红素EPO)、中西药联合治疗组(补肾生血颗粒、EPO联用)。测血RBC、HCT、肾功、超氧化物歧化酶(SOD)及血EPO含量。结果:补肾生血颗粒治疗肾性贫血的效果与EPO无明显差异(P>0.05),稍逊于中西药联合应用组(P<0.05),并能明显降低血BUN、Cr的含量,减轻肾组织病理损害,提高血SOD及EPO的水平(P<0.05)。结论:补肾生血颗粒能有效治疗肾性贫血并能明显改善肾功能,提高血EPO含量,还有增强机体抗氧化能力的作用。     

生血胶囊对免疫介导的再生障碍性贫血小鼠骨髓增殖的影响

目的：探讨生血胶囊对免疫介导的再生障碍性贫血（再障）小鼠骨髓增殖的影响。方法：建立免疫介导的再障小鼠模型,胃饲生血胶囊水提液,0.1ml/10g体重／次,2次／日,连续9天,并以生血丸1号为对照。实验第10天处死动物,检测外周血白细胞数及股骨骨髓有核细胞数（BMNC）,股骨中段骨髓切片HE染色行病理形态学观察。结果：生血胶囊组白细胞数、股骨BMNC及骨髓造血组织容量均显高于模型对照组（P＜0.05-0.01),生血胶囊大剂量组与生血丸1号组比较无显差异（P＞0.05)。结论：生血胶囊能促进再障小鼠骨髓增殖,其作用与生血丸1号相似。     

补肾生血法治疗再生障碍性贫血300例疗效分析

目的：观察中医治疗再生障碍性贫血的临床疗效。方法：根据患者不同临床表现分为急劳热毒溢血型、肾阴虚型及肾阳虚型,三型分别给予清瘟败毒饮、补肾I号及补肾Ⅱ号加减。结果：300例患者中基本治愈者10例,缓解者58例,明显进步者159例,无效者73例。结论：中医辨证治疗再生障碍性贫血具有显著疗效。     

补肾化瘀生新方对不同代次骨髓间充质干细胞增殖、凋亡影响的研究

目的:探讨补肾化瘀生新方对不同代次骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖、凋亡的影响。方法:对BMSCs进行提取纯化、分选及培养,第3代细胞随机分为正常组,加入杜氏培养液(Dulbecco’s modified eagle medium,DMEM);补肾化瘀生新组,加入补肾化瘀生新含药血清;生理盐水组,加入生理盐水含药血清。MTT法检测各组不同时间点和不同代次BMSCs细胞活性、生长曲线和群体倍增时间;比色法检测β-半乳糖苷酶活性变化。流式细胞术检测不同时间点和不同代次羧基荧光素乙酰乙酸(Carboxy-fluorescein diacetate succinimidyl ester,CFDA-SE)标记、BMSCs增殖率和细胞周期变化;实时荧光PCR技术检测不同代次BMSCs端粒酶活性表达情况。结果:与正常组比较,生理盐水组β-半乳糖苷酶活性、24 h、48 h、72 h时间点不同代次BMSCs增殖率和群体倍增时间、端粒酶活性、不同代次G0/G1期差异无统计学意义(P 0.05);与生理盐水组比较,补肾化瘀生新组不同代β-半乳糖苷酶活性、端粒酶活性降低,24 h、48 h、72 h时间点不同代次BMSCs增殖率、群体倍增时间、不同代次G0/G1期升高(P 0.05)。结论:补肾化瘀生新方延缓细胞衰老作用可能与降低β-半乳糖苷酶活性、激活端粒酶活性、提高BMSCs增殖分化能力有关。     

补气生血精胶囊对环磷酰胺致小鼠骨髓抑制干预效应的实验研究

目的:观察补气生血精胶囊干预环磷酰胺致小鼠骨髓抑制的效应.方法:将60只小鼠随机分为空白对照组、骨髓抑制模型组(简称模型组)、贞苠扶正胶囊组、补气生血精胶囊低、中、高剂量组6组,每组10只.分别灌胃给药(20mL/kg),一日1次,连续11天,空白对照组及模型组给予等容积蒸馏水.除空白对照组外,其余各组均于第8、9两天腹腔注射环磷酰胺(100mg/kg),给药第12天摘取眼球取血,计数白细胞数, 取股骨进行骨髓有核细胞计数.结果:模型组小鼠骨髓有核细胞及外周血白细胞显著低于空白对照组(P<0.05);补气生血精胶囊低、中、高剂量组骨髓有核细胞及白细胞数显著高于模型组(P<0.05).结论:补气生血精胶囊能够明显升高环磷酰胺致骨髓抑制小鼠骨髓有核细胞、外周血白细胞.     

补肾化瘀药对HL—60细胞凋亡的诱导作用

本研究观察了补肾化瘀药对HL-60细胞程序化死亡的诱导作用,结果表明:经1～10mg/ml补肾化瘀药作用24小时的HL-60细胞苔盼蓝拒染细胞与对照组比较无明显差异,但其对细胞增殖抑制率明显增高,且细胞形态、DNA电泳、DNA含量检测均有程序化死亡细胞所具有的典型变化。     

补肾生血法治疗再生障碍性贫血的作用机制研究

目的探究补肾生血法治疗再生障碍性贫血的作用机制。方法选取2018年3月—2019年5月收治的再生障碍性贫血患者98例,采用随机数字表法分为对照组和观察组,各49例。两组均进行抗感染、补充血液成分等对症支持治疗,对照组给予环孢素软胶囊口服治疗,观察组加用补肾生血汤口服治疗。两组均治疗6个月。治疗结束后观察两组血红蛋白、白细胞、血小板、网织红细胞计数以及淋巴细胞百分率,血清白细胞介素,T淋巴细胞亚群,相关基因转录因子孤独核受体γt,叉状转录因子mRNA的表达情况,外周血免疫细胞Treg及Th17的水平。结果观察组总有效率为97. 95%(48/49),明显高于对照组的83. 67%(41/49)(P <0. 05)。观察组治疗后外周血WBC、HGB、PLT、RET及Ly百分率明显优于对照组(P <0. 05)。观察组治疗后血清白细胞介素IL-6、IL-17、IL-23均明显低于对照组(P <0. 05)。观察组治疗后CD₄⁺、CD₄⁺/CD₈⁺     

理气药类中药对生血丸辅助作用的疗效观察

目的:观察生血丸对化疗所致骨髓抑制的临床疗效;探讨理气类中药对生血丸受试对象脾胃功能的辅助保护作用。方法:选择64例确诊为非小细胞肺癌、肠癌、胃癌、乳腺癌的肿瘤患者随机分为两组,两组均给予常规剂量化疗方案:A组(生血丸组)于化疗前7天开始,口服生血丸;B组(生血丸合理气药组)于化疗前7天开始,口服生血丸合理气药,均观察1个疗程(28 d)。比较两组血细胞、免疫功能指标、中医证候积分、消化道症状评分、KPS评分、体重变化及安全性指标等。结果:生血丸与生血丸+理气药对化疗后不同阶段WBC、HGB、PLT水平的影响差异无统计学意义,P>0.05;两组均能不同程度提高患者免疫功能、临床症状、卡氏评分,与服药前相比差异有统计学意义,P<0.05;生血丸+理气药组能明显改善患者的消化道症状,差异有统计学意义,P<0.05;两组对患者体重的影响疗效差异无统计学意义,P>0.05。结论:生血丸有助于癌症患者化疗后血象的恢复,具有保护骨髓功能的功效;可有效改善临床症状,明显提高生活质量,在一定程度上改善机体免疫功能;合并理气药可在不影响其功效的前提下明显改善化疗以及服药过程中产生的消化道症状,未见明显毒副反应,值得推广应用于临床。     

生血灵补血作用的实验研究

生血灵由当归、黄芪、紫草等组成,经加工制成。临床用于治疗气血两虚、气不摄血型紫癜、贫血等病症取得了良好的疗效。我们用多种动物模型,进行药效学观察,现将结果报告如下。1　实验材料1.1　药物　生血灵由湖南省冷水滩医药保健品公司提供(批号941018,10g/包,2.2g生药/g);驴胶补血冲剂由原长沙市第二制药总厂提供(批号930426);三七粉由广西百色地区制药厂生产(批号921014);归脾丸由原长沙中药一厂生产(批号950426);环磷酰胺由上海第十二制药厂生产(批号890415)。1.2　动物和仪器　清洁级昆明种和BALB/C小鼠,体重20～22g,雌雄兼用;豚鼠,…     

生血康口服液升血作用的实验研究

生血康口服液对荷瘤（S180）小鼠、正常动物接受化疗环磷酰胺、丝裂霉素）及荷瘤（U14）小鼠、正常小鼠接受^60Co照射所致外周血白细胞和血红蛋白降低有显著的对抗作用;对正常动物化疗引起的骨髓有核细胞及脾脏重量降低有显著的对抗作用;对荷瘤（S180）小鼠腹水癌的动物存活时间有一定的延长作用。