霉酚酸酯对脓毒症肝损伤的保护作用

目的:探讨霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)对脓毒症小鼠肝脏的保护作用。方法:将48只雄性Balb/c小鼠随机分为脓毒症模型组、MMF预处理[10 mg/(kg·d),2 d]的脓毒症模型组。两组分别于造模后1 h、6 h和24 h及假手术后检测丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)水平并行肝脏HE染色及病理评分。采用Western印迹法检测自噬相关蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ表达并观察7 d存活率。结果:与假手术组相比,脓毒症小鼠造模后6 h和24 h病理评分显著增高[(3.17±0.75)比(0.50±0.55)](P     

镉对小鼠精母细胞钙离子及IRE1信号通路的影响

目的:研究镉通过钙离子和IRE1通路对生精细胞(GC-2 spd细胞)自噬的影响。方法:利用CCK-8实验检测GC-2 spd细胞活性,确定染毒浓度;采用MDC法检测细胞自噬体形成情况;采用激光共聚焦和流式细胞仪检测细胞胞质和内质网Ca²⁺水平;采用Western印迹法检测IRE1信号通路和自噬相关蛋白的表达水平。结果:随着CdCl₂染毒浓度增加,细胞存活率逐渐下降,CdCl₂染毒浓度确定为2.5、5、10μmol/L。与对照组相比,CdCl₂染毒组内MDC荧光强度的IOD值均升高(P<0.05),自噬标志物LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ的比值升高,Beclin-1蛋白表达量上调(P<0.05)。细胞胞质内Ca²⁺水平逐渐上升,内质网内Ca²⁺水平逐渐下降(P<0.05)。内质网Ca²⁺释放通路IP3R蛋白表达上调(P<0.05)。CdCl₂染毒组IRE1、XBP1s、CHOP、GRP78表达上调...     

积雪草酸对高血脂小鼠骨量丢失的保护作用

目的探讨积雪草酸对高血脂小鼠骨量丢失的保护作用。方法 60只8周龄SPF级雄性C57BL/6 J小鼠按体重随机分为6组,每组10只:空白对照组[CON,生理盐水:5 m L/(kg·d)]、高脂饲料组[HFD,生理盐水:5 m L/(kg·d)]、高脂饲料+低剂量积雪草酸组[HFD+AA-L:5 mg/(kg·d)]、高脂饲料+中剂量积雪草酸组[HFD+AA-M:10 mg/(kg·d)]、高脂饲料+高剂量积雪草酸组[HFD+AA-H:20 mg/(kg·d)]、高脂饲料+辛伐他汀组[HFD+SIM:20 mg/(kg·d)]。除空白组之外,其他组别采用高脂饲料连续喂养16周并同时给药进行干预。实验结束后,经眼眶采血收集血清、两侧股骨和胫骨。结果高脂饲料引起小鼠血清胆固醇(TC)、丙二醛(MDA)和I型胶原C末端肽(CTX-I)水平升高,超氧化物歧化酶(SOD)和I型前胶原氨基端前肽(PINP)水平下降(均P0.05),且胫骨近端骨密度下降,骨微结构受损,骨形成率下降,其股骨生物力学指标降低。HFD+AA-M、HFD+AA-H和HFD+SIM组均可明显降低小鼠血清TC、MDA、CTX-I水平,升高SOD和PINP水平(均P0.05),增加骨密度和改善骨微结构,提高骨生物力学指标,HFD+AA-H组效果稍优于HFD+AA-M,但稍逊于HFD+SIM组。HFD+AA-L组小鼠血指标、骨密度、骨微结构和骨生物力学均无明显改善(P0.05)。结论积雪草酸[10、20 mg/(kg·d)]灌胃给药可预防高血脂小鼠的骨量丢失,其机制可能通过促进骨形成,抑制骨吸收,增加机体的抗氧化能力。     

不同浓度白藜芦醇对破骨细胞分化的影响及自噬的作用

目的研究不同浓度白藜芦醇(RSV)对破骨细胞分化的影响及自噬在其中的作用。方法RANKL诱导RAW264.7细胞分化过程中,加入不同浓度(0、0.1、0.5、1、5及10μmol/L)RSV,CCK-8检测干预后12、24、48、72 h时的细胞活力;TRAP染色观察破骨细胞分化程度。加或不加入3-甲基嘌呤(3-MA)抑制自噬,RT-PCR检测破骨分化相关标志物TRAP、MMP-9、CTSK和自噬相关标志物LC3、Beclin-1、P62的mRNA表达情况;Western blot检测自噬相关蛋白LC3II/I、Beclin-1、P62的表达情况。结果RANKL诱导分化过程中,细胞增殖活力提高,加入0.1~10μmol/L的RSV,细胞活力先上升后下降,在0.5μmol/L时达到最大;0.1μmol/L和0.5μmol/L的RSV能提高TRAP染色阳性的破骨细胞数和TRAP、MMP-9、CTSK、LC3、Beclin-1、P62的mRNA表达,自噬相关蛋白LC3II/I和Beclin-1也增加,P62的蛋白表达则减少;而1~10μmol/L RSV随浓度升高相关mRNA及蛋白LC3II/I和Beclin-1的表达减少,P62的蛋白表达增加;加入3-MA后,相关mRNA及蛋白LC3II/I和Beclin-1的表达减少,P62的蛋白表达增加。结论RSV浓度在0.1~10μmol/L范围内,破骨细胞分化和自噬水平先升高后降低,抑制自噬可以抑制破骨细胞的分化。白藜芦醇影响破骨细胞分化可能部分是通过调节自噬发挥作用。     

MGRN1对小鼠睾丸支持细胞自噬的影响

目的:研究MGRN1对小鼠睾丸支持细胞自噬的影响。方法:体外培养小鼠睾丸支持细胞株(TM4细胞)利用RNAi下调TM4细胞中MGRN1的表达,然后利用Western印迹(WB)检测自噬相关蛋白(LC3-II/I、ATG-5和ATG-7)的表达,免疫荧光及电镜检测MGRN1下调后TM4细胞的自噬小体。结果:MGRN1下调后,WB发现TM4细胞中自噬相关蛋白(LC3-II/I、ATG-5和ATG-7)表达增加,荧光显微镜可观察到TM4细胞中自噬小体增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05),电镜可观察到TM4细胞中自噬小体增加。结论:MGRN1影响睾丸支持细胞的自噬,具体分子机制有待进一步研究。     

索拉非尼通过调节Beclin-l的表达诱导肝癌细胞自噬的实验研究

探讨索拉非尼诱导肝癌细胞自噬的作用及机制。选取人肝癌HepG2细胞,随机分为对照组、2.5μmol/L组、5μmol/L组和10μmol/L组,其中2.5μmol/L组、5μmol/L组和10μmol/L组分别给予2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L索拉非尼,采用MTT法检测细胞增殖,倒置荧光显微镜观察自噬小体,Western blot检测LC3-Ⅱ、Beclin-l表达。2.5μmol/L组、5μmol/L组和10μmol/L组培养24、48和72 h时吸光度(A)值明显低于对照组(P<0.05),其中10μmol/L组培养24、48和72 h时A值分别为0.289±0.097、0.310±0.100和0.411±0.103,明显低于2.5μmol/L和5μmol/L组(P<0.05);2.5μmol/L组、5μmol/L组和10μmol/L组自噬小体形成数明显高于对照组(P<0.05),其中10μmol/L组自噬小体形成数为(37.40±4.45)个,明显高于2.5μmol/L组和5μmol/L组(P<0.05);2.5μmol/L、5μmol/L组和10μmol/L组LC3-Ⅱ、Beclin-1相对表达量明显高于对照组(P<0.05),其中10μmol/L组LC3-Ⅱ、Beclin-1相对表达量为1.022±0.105和0.562±0.102,明显高于2.5μmol/L组和5μmol/L组(P<0.05)。索拉非尼可抑制肝癌细胞增殖,促进自噬小体生成,可能与调控Beclin-1表达有关。     

同种异体皮肤移植家兔注射重组人IL-10后血清IL-17家族水平的变化观察

目的:观察同种异体皮肤移植家兔注射重组人IL-10后血清IL-17家族水平的变化,探究重组人IL-10抑制免疫反应的机制。方法:30只健康新西兰白兔依据随机平均原则分为A组[重组人IL-10低剂量组,5μg/(kg·d)]、B组[重组人IL-10高剂量组,10μg/(kg·d)]、C组[环孢菌素低剂量组,5mg/(kg·d)]、D组[环孢菌素低剂量组,10mg/(kg·d)]、E组[重组人IL-10低剂量,5μg/(kg·d)+环孢菌素低剂量组,5mg/(kg·d)]、F组[生理盐水空白对照组,0.9%氯化钠溶液1ml/d]六组,每组5只,均经肌肉注射于皮肤移植术前1d给药,共给药10d,各组分别于术前1d,术后1d、4d、1周、2周、3周、4周取兔耳中动脉血,分离制得血清后,依酶联免疫法测定IL-17家族各成员(IL-17A~F)的浓度。结果:家兔同种异体皮肤移植术后IL-17A、IL-27(IL-17B/C/D)、IL-17E(IL-25)、IL-17F的浓度均高于术前,且在术后2周达到高峰,随后逐渐降低;rhIL-10能抑制IL-17A、IL-27、IL-17F的分泌,且抑制效应随着rhIL-10剂量的增多而加强;rhIL-10可促进IL-25的分泌,但无明显量效关系。结论:同种异体皮肤移植家兔注射rhIL-10后血清IL-17家族水平明显提高,rhIL-10对免疫反应的抑制作用可能与IL-17家族介导的炎性反应及炎性因子分泌有关。     

黄芩素对小鼠睾丸支持细胞TM4缝隙连接功能的影响

目的 :探讨黄芩素对小鼠睾丸支持细胞TM4缝隙连接功能的影响及相关机制。方法:MTT法检测黄芩素对TM4细胞的毒性作用;细胞接种荧光示踪法测定TM4细胞间荧光传递功能;Western印迹和细胞免疫荧光法分别检测黄芩素对TM4细胞中Cx43总蛋白及胞膜Cx43蛋白表达的影响。结果:MTT结果显示黄芩素在0~60μmol/L浓度范围内对TM4细胞无毒性作用;细胞接种荧光示踪法结果显示0~20μmol/L的黄芩素可以显著增强TM4细胞荧光传递功能(P0.01);Western印迹结果表明黄芩素在0~20μmol/L时可以显著增加TM4细胞Cx43蛋白的表达(P0.01);细胞免疫荧光法表明,0~20μmol/L的黄芩素可以显著增加TM4细胞膜Cx43蛋白表达。结论:在一定浓度范围内(0~20μmol/L),黄芩素能够通过增加小鼠睾丸支持细胞TM4中Cx43蛋白表达而显著增强细胞缝隙连接功能。     

维生素E对邻苯二甲酸二异辛酯致雄性大鼠生殖毒性的拮抗作用

目的:探索维生素E(VE)对青春期邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)暴露致雄性大鼠生殖毒性的干预作用以及其机制。方法:将30只35日龄雄性SD大鼠(体重96~122 g)随机分为对照组(玉米油),低[10 mg/(kg·d)]、中[100 mg/(kg·d)]、高[500 mg/(kg·d)]DEHP组,以及VE干预组[(500 mg/(kg·d)DEHP+100 mg/(kg·d)VE],各组给予相应食物30 d。在染毒干预结束后,分别检测大鼠睾丸组织氧化应激指标、附睾尾部精子参数、血清生殖激素水平、凋亡相关靶基因及蛋白的表达。结果:与对照组比较,中、高DEHP组血清中FSH、LH和T水平明显降低,精子运动参数VAP、VCL明显降低,SOD和GSH-Px活力显著降低,Bak、Bax基因表达和Bax/Bcl-2基因表达比值显著升高,细胞色素C mRNA表达及细胞色素C和Caspase-3蛋白表达均显著上调(P均0.05);高DEHP组MDA含量[(3.32±0.87)nmol/mg pro vs(2.13±0.49)nmol/mg pro]明显升高,精子运动参数VAP、VCL、VSL、STR、LIN、WOR均明显降低(P0.05)。与高DEHP组比较,VE干预组的LH和T水平明显升高;VAP、VSL、VCL、STR和WOB明显升高;SOD和GSH-Px活力显著升高;MDA含量明显降低;Bak、Bax基因表达和Bax/Bcl-2基因表达比值显著降低;细胞色素C、Caspase-3 mRNA表达及蛋白表达均显著下调(P均0.05)。结论:青春期DEHP暴露可抑制生殖激素分泌或释放,导致雄性大鼠睾丸组织氧化损伤,激活细胞线粒体凋亡通路,也可导致附睾精子质量下降;而VE对DEHP所诱导的雄性生殖毒性具有一定的拮抗作用。     

自噬激活对带状疱疹后神经痛模型小鼠脊髓背角GABA能神经元凋亡的影响

目的探讨不同自噬程度对带状疱疹后神经痛(postherpetic neuralgia,PHN)模型小鼠脊髓背角GABA能神经元凋亡的影响。方法使用SPSS 19.0的随机数字发生器将48只昆明小鼠,6~8周龄,体重18~22 g,随机分为树脂毒素+自噬诱导剂组(PHN+Rapa组)、树脂毒素组(PHN组)、树脂毒素+自噬抑制剂组(PHN+3-MA组)和空白对照组(C组),每组12只。C组不做任何处理,其余各组均腹腔注射0.2μg/g树脂毒素(resiniferatoxin,RTX)制备PHN模型。在构建模型成功后,PHN+Rapa组给予1μg·kg-1·d-1的自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rapa),PHN组给予生理盐水,PHN+3-MA组给予2μg·kg-1·d-1的自噬抑制剂3-MA,连续14 d腹腔注射。检测机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)、热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)至稳定后处死各组小鼠,采用荧光Tunel法检测脊髓凋亡细胞数;提取脊髓L4~6节段组织,采用Western blot法检测抑凋亡蛋白bcl-2、促凋亡Bax和自噬相关蛋白LC3的相对表达量;免疫荧光标记脊髓背角GABA能神经元数。结果与C组比较,PHN+Rapa组、PHN组和PHN+3-MA组的LC3-II/I和Bax的蛋白相对表达量均明显升高,凋亡细胞数量明显增多,bcl-2蛋白相对表达量明显降低,脊髓背角GABA能神经元数明显减少(P0.05);与PHN组比较,PHN+Rapa组的LC3-II/I比值和Bax的蛋白相对表达量,凋亡细胞数量明显增多,bcl-2蛋白相对表达量明显降低,脊髓背角GABA能神经元数明显减少(P0.05)。与PHN组比较,PHN+3-MA组的LC3-II/I比值和Bax的蛋白相对表达量明显降低,凋亡细胞数量明显减少,bcl-2蛋白相对表达量明显升高,脊髓背角GABA能神经元数明显增多(P0.05)。结论自噬过度激活可能是导致带状疱疹后神经痛脊髓背角GABA能神经元凋亡的机制之一。     

褪黑素调控足细胞昼夜节律介导的自噬在糖尿病肾病中的作用

目的探讨体外高糖环境和糖尿病肾病小鼠模型足细胞昼夜节律的变化, 以及褪黑素改善糖尿病肾病足细胞损伤的作用机制。方法体外培养原代足细胞并将其分为对照组、高糖(30 mmol/L)组和高糖(30 mmol/L)+褪黑素(0.1 mmol/L或0.5 mmol/L)组。地塞米松(100 nmol/L)作用足细胞2 h, 记为授时因子时间0点, 每4 h收获细胞, 持续24 h。6～8周龄体重20 g左右雄性C57BL/6J小鼠被随机(区组随机分组)分为对照组、糖尿病肾病(高脂饮食+尾静脉注射120 mg/kg链脲菌素)组和糖尿病肾病(高脂饮食+尾静脉注射120 mg/kg链脲菌素)+褪黑素(20 mg/kg灌胃)治疗组(褪黑素组)。采用实时荧光定量PCR法检测足细胞生物钟基因的mRNA表达量。Western印迹法检测生物钟基因蛋白Clock、Bmal1, 足细胞标志蛋白Nephrin、Synaptopodin、WT1、Desmin, 以及自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白的表达量;免疫荧光染色法检测小鼠肾组织WT1蛋白表达;免疫组化法检测小鼠肾组织P62和Cleaved-c...     

中药生精冲剂对生精障碍小鼠治疗作用的实验研究

目的:研究生精冲剂对环磷酰胺所致生精障碍小鼠的治疗作用。方法:46只雄性昆明小鼠随机分为正常组(n=10)、模型组(n=12)、对照组(n=12)和中药组(n=12),后3组腹腔注射环磷酰胺,建立生精障碍模型。造模完成后,中药组和对照组分别灌胃中药生精冲剂[16 g/(kg.d)]和克罗米芬[21.6 mg/(kg.d)],正常组与模型组每天灌胃等量生理盐水,连续15 d。次日,测量睾丸重量,并计算睾丸指数;放射免疫法测定血清FSH、LH、T水平;对睾丸组织进行组织学观察。结果:中药组小鼠血清T[(7.046±0.291)nmol/L]、FSH[(2.947±0.587)mIU/ml]、LH[(3.254±0.492)mIU/ml]、睾丸指数[(3.958±0.342)g/kg]与模型组各检测值相比[(6.231±0.317)nmol/L、(5.428±0.719)mIU/ml、(5.155±0.460)mIU/ml、(3.525±0.462)g/kg]差异有显著性(P<0.05)。组织学观察中药组睾丸生精小管生精细胞层数及管腔内精子数明显高于模型组。结论:生精冲剂治疗小鼠生精障碍有效。     

肾阳虚与肾阴虚模型小鼠睾丸生殖相关差异蛋白的比较研究

目的:比较氢化可的松诱导的肾阳虚和肾阴虚模型小鼠睾丸表达的差异蛋白,探讨两种肾虚导致雄性不育共同和特异的物质基础。方法:将30只昆明小鼠随机分为对照组、肾阳虚组和肾阴虚组,对照组:腹腔注射生理盐水0.2 ml,1次/d,连续7 d;肾阳虚组:腹腔注射氢化可的松25 mg/(kg·d),连续10 d;肾阴虚组:腹腔注射氢化可的松50 mg/(kg·d),连续7 d。HE染色分析睾丸组织病理变化,同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术及生物信息学方法比较两种肾虚小鼠睾丸表达的差异蛋白。结果:与对照组相比,Sod1为两种肾虚小鼠睾丸表达的生殖相关节点差异蛋白,且在肾阴虚组表达显著高于肾阳虚组(P0.05);两种肾虚小鼠睾丸共同表达的生殖相关节点蛋白有5个,上调的为Rps28,下调的为Rpl11、Rplp2、Svs2和Svs3a(P0.05)。结论:Sod1可能是区别两种肾虚不育小鼠的关键物质基础之一,Rps28、Rpl11、Rplp2、Svs2和Svs3a则可能是两种肾虚不育小鼠共同的重要的物质基础。     

大鼠精索静脉曲张氧化应激介导附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1损伤及对附睾功能的影响

目的:探索精索静脉曲张(VC)大鼠模型中氧化应激介导附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1损伤及对附睾功能影响。方法:将45只体重220～235 g的SD大鼠随机分为假手术组(单纯暴露并分离左肾静脉)、实验组(部分缩窄左肾静脉并充分结扎精索静脉侧支)和治疗组[造模术后给予150 mg/(kg·d)维生素E灌胃60 d],每组各15只。模型构建后60d分别观察左侧附睾组织学改变,采用qPCR、免疫组化染色、免疫荧光染色及Western印迹等检测左侧附睾上皮连接蛋白ZO-1及连接相关蛋白表达水平,同时检测附睾组织超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)活性,丙二醛(MDA)、α葡糖苷酶含量以及精子活力指标。结果:与假手术组相比,实验组左侧附睾上皮结构紊乱,上皮细胞数量减少,可见部分上皮细胞脱落至附睾管腔。qPCR检测claudin11、β-catenin、JAM-A、cadherin12、ZO-1等多个连接蛋白表达,结果显示除实验组较假手术组ZO-1表达明显下调外(P0.05),其余蛋白均无显著差异。免疫组化染色、免疫荧光染色Western印迹结果显示,与假手术组相比,实验组ZO-1表达明显降低(P0.05);经维生素E治疗后,治疗组ZO-1表达较实验组明显升高(P0.05)。实验组较假手术组大鼠附睾组织中MDA明显升高[(1.21±0.18)nmol/mg protein vs(0.41±0.05)nmol/mg protein,P0.05)],SOD[(298.62±67.84)U/mg protein vs(814.65±73.64)U/mg protein,P0.05)]、T-AOC[(0.24±0.04)nmol/mg protein vs(0.84±0.07)nmol/mg protein,P0.05)]、α葡糖苷酶[(5.82±1.24)U/mg protein vs(11.72±2.72)U/mg protein,P0.05)]明显降低;经维生素E干预后,治疗组SOD [(497.73±48.03)U/mg protein]、T-AOC[(0.42±0.06)nmol/mg protein]、α葡糖苷酶[(9.11±1.91)U/mg protein]较实验组明显回升(P0.05),MDA[(0.69±0.12)nmol/mg protein]明显下降(P0.05)。附睾精子活力检测,实验组较假手术组前向运动精子百分率明显降低[(31.33±6.32)%vs(71.21±5.21)%,P0.05],经维生素E干预后治疗组[(60.68±5.31)%]明显提高(P0.05)。结论:精索静脉曲张通过氧化应激导致附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1表达下调,附睾功能损伤。抗氧化剂维生素E能有效改善精索静脉曲张附睾氧化应激水平,促进ZO-1表达上调,改善附睾功能。     

基质细胞衍生因子-1对小鼠关节软骨细胞自噬水平的影响

目的：通过研究基质细胞衍生因子-1（stromal derived factor?1, SDF?1）对小鼠关节软骨细胞自噬的影响,探讨SDF?1在骨性关节炎中的作用及机制。方法分离并体外培养小鼠关节软骨细胞,分别予以0、1、10、100、1000μg/L浓度的五组重组SDF?1蛋白干预24 h。运用RT?PCR检测各组细胞的微管相关蛋白1轻链3（microtubule associated protein 1 light chain 3, LC3）和UNC?51样激酶复合物1（uncoordinated?51 like kinase 1, ULK1）mRNA表达情况,运用Western Blot方法检测LC3?Ⅱ、LC3?Ⅰ、ULK1及泛素连接蛋白62（ubiquitin?binding protein p62, p62）蛋白表达水平,通过透射电镜观察自噬溶酶体。结果 RT?PCR结果显示10、100、1000μg/L浓度条件下LC3、ULK1的mRNA水平明显高于对照组,且差异具有统计学意义（P＜0.05）。Western Blot结果显示1、10、100、1000μg/L的各组细胞的LC3?Ⅱ/LC3?Ⅰ比值、ULK?1表达水平较对照组升高,p62蛋白表达水平较对照组明显降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。透射电镜结果显示经SDF?1干预后,自噬溶酶体较对照组增多,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 SDF?1可诱导小鼠关节软骨细胞自噬的发生,SDF?1可能通过调节软骨细胞自噬水平参与了骨性关节炎的进展。     

雷公藤多苷诱导小鼠睾丸生殖相关基因异常表达及补肾中药的干预作用

目的:探讨雷公藤多苷诱导小鼠睾丸生殖相关基因的表达及补肾中药的干预作用。方法:成年Balb/C雄性小鼠,以雷公藤多甙30 mg/(kg.d)灌胃3周,造成生殖减退模型。随后,分别予生理盐水0.25 ml/d、雷公藤多甙30 mg/(kg.d)、肉苁蓉煎液[相当于生药10 g/(kg.d)]、熟地煎液[相当于生药10 g/(kg.d)]、肉苁蓉、熟地等比例的煎液[相当于生药20 g/(kg.d)]每日1次灌胃进行干预;另设肉苁蓉预处理组持续给予雷公藤多甙30 mg/(kg.d)和肉苁蓉煎液[相当于生药10 g/(kg.d)],每日1次灌胃,灌胃3周。检测各组睾丸生殖相关基因Dzip1、Fas、c-jun、Wnt4的表达量的变化。结果:雷公藤模型小鼠Y染色体微缺失相关基因Dzip1表达下调,生殖细胞凋亡相关基因Fas表达上调,原癌基因c-jun表达上调,信号转导相关基因Wnt4表达上调,补肾中药干预后均有不同程度改善,其中以补益肾阳药物肉苁蓉与补益肾阴药物熟地联合应用效果最显著。结论:雷公藤多苷对生殖相关基因的表达有影响;补益肾阳药物肉苁蓉能够部分拮抗雷公藤生殖毒性,补益肾阴药物熟地亦表现出一定的拮抗雷公藤生殖毒性作用,联合应用肉苁蓉和熟地则加强了拮抗雷公藤生殖毒性的作用,揭示了阴中求阳、阴阳互根互用的现代药理基础。肉苁蓉有一定的预防雷公藤生殖毒性的作用。     

五味子乙素调节AMPK/mTOR信号通路对高糖诱导骨髓间充质干细胞功能障碍和自噬的影响

目的 探究五味子乙素（SchB）对高糖（HG）条件下骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖和成骨分化的影响及机制。方法 分离大鼠BMSCs并筛选SchB的实验浓度。将BMSCs分为正常（NC）组、高糖（HG）组、HG+10 μmol/L SchB组、HG+20 μmol/L SchB组、HG+40 μmol/L SchB组、HG+40 μmol/L SchB+AMPK抑制剂Compound C（CC）组。CCK-8法检测细胞活力,碱性磷酸酶（ALP）活性测定和茜素红染色评估BMSCs成骨分化能力;qRT-PCR检测BMSCs中成骨分化相关基因（RUNX2、COl1a1、OCN、BMP2）表达;透射电子显微镜（TEM）观察自噬体数量;Western blot检测自噬（LC3A/B、Beclin-1、P62）,以及AMPK/mTOR信号通路相关蛋白表达。结果 HG环境能抑制BMSCs增殖和成骨分化,并降低自噬体数量、Beclin-1蛋白水平和LC3II/LC3I、p-AMPK/AMPK比值,升高P62蛋白水平和p-mTOR/mTOR比值（均P＜0.05）,抑制AMPK/mTOR通路介导的自噬。SchB可促进HG条件下BMSCs的增殖和成骨分化,并升高自噬体数量、Beclin-1蛋白水平和LC3II/LC3I、p-AMPK/AMPK比值,降低P62蛋白水平和p-mTOR/mTOR比值（均P＜0.05）,激活AMPK/mTOR通路介导的自噬。Compound C可阻断HG条件下SchB对BMSCs增殖、成骨分化和自噬的促进作用。结论 SchB可能通过激活AMPK/mTOR介导的自噬促进HG条件下BMSCs的增殖和成骨分化。     

CMTM2改善环磷酰胺致转基因小鼠模型生殖毒性作用并影响StAR蛋白的表达

目的:探讨在转基因小鼠模型中CMTM2能否改善环磷酰胺(CP)引起的生殖毒性作用以及其对固醇合成快速调节蛋白(StAR)表达的影响。方法:随机选取CMTM2转基因小鼠20只分成2组:CMTM2+CP[CMTM2转基因小鼠腹腔内连续7 d注射50 mg/(kg.d)CP]组和CMTM2+NS(CMTM2转基因小鼠腹腔内连续7 d注射等量生理盐水)组,另取同源野生型C57BL/6J小鼠20只分成2组:WT+CP[野生型C57BL/6J小鼠腹腔内连续7 d注射50 mg/(kg.d)CP]组和WT+NS(野生型C57BL/6J小鼠腹腔内连续7 d注射等量生理盐水)组。30 d后各组小鼠处死取相应标本,放免法检测血清睾酮水平,分析各组小鼠精子浓度、精子活动率差异,Western印迹检测睾丸StAR蛋白表达。结果:对比CMTM2+NS组,CP能够降低CMTM2+CP组小鼠的血清睾酮含量[(42.98±3.25)nmol/L vs(46.74±3.38)nmol/L]、精子浓度[(16.89±1.17)×106/ml vs(24.68±0.95)×106/ml]以及精子活动率[(72.75±1.25)%vs(85.14±1.12)%](P<0.05),表现出明显的生殖毒性;对比WT+CP组,CMTM2+CP组小鼠血清睾酮[(42.98±3.25)nmol/L vs(37.97±4.17)nmol/L]、精子浓度[(16.89±1.17)×106/ml vs(12.75±1.02)×106/ml]以及精子活动率[(72.75±1.25)%vs(50.52±1.37)%]下降程度均明显减弱(P<0.05),而CMTM2+CP组的StAR蛋白表达水平则较高(1.16±0.07 vs 0.69±0.08,P<0.05)。结论:CMTM2可能通过调节StAR蛋白表达对抗CP引起的生殖毒性,从而在生殖系统中发挥一定的保护作用。     

L-肉碱对奥硝唑所致弱精子症大鼠的治疗作用

目的:探讨L-肉碱(LC)对奥硝唑(ORN)所致的弱精子症雄性大鼠的治疗作用。方法:性成熟雄性SD大鼠(200～230g)40只,随机均分为5组,连续灌胃20d,1次/d,每次1ml。A组(对照组):0.5%的羧甲基纤维素钠(溶剂);B组:ORN[400mg/(kg.d)];C组:ORN[400mg/(kg.d)]+LC[100mg/(kg.d)];D组:ORN[800mg/(kg.d)];E组:ORN[800mg/(kg.d)]+LC[100mg/(kg.d)]。将各组半数大鼠末次给药24h后,麻醉处死,取附睾,进行精子活力检测,并对附睾尾精子进行计数,剩余大鼠进行交配实验。结果:①与A组相比,B组,D组附睾头和附睾尾精子活力显著降低(P<0.05);精子数目显著减少(P<0.05)。②与B组相比,C组精子活力明显升高(P<0.05),精子数目明显增多(P<0.05),与A组比较无显著差异(P>0.05)。③E组大鼠的精子活力没有显著的提高,精子数目无明显增多,并且与D组相比没有差别(P>0.05)。结论:LC治疗后能提高ORN所致弱精子症大鼠的精子活力,增加精子密度。     

氯化镉对雄性小鼠的生殖毒性作用

目的研究氯化镉对雄性小鼠生殖器官和生殖细胞的毒性作用以及对雄性小鼠生殖功能的影响。方法分别以每公斤体重0..5mg/kg、2mg/kg、8mg/kg体重腹腔染毒4周龄雄性小鼠,共10次。第50天以雌雄2:1同笼交配,观察雌鼠受孕率、生育子胎数、胎鼠重量。同时观察染毒雄鼠第50天时睾丸发育和睾丸指数、附睾精子数量、精子活动率和精子畸形率以及生殖细胞减数分裂。结果2mg/kg和8mg/kg组染毒小鼠睾丸发育受到影响,睾丸指数显著低于对照组和0.5mg/kg组(p<0.05,p<0.001)。2mg/kg组中部分小鼠(6/11)和8mg/kg组存活小鼠睾丸发育不良,无精子,不育。2mg/kg组小鼠1周受孕率和3周受孕率显著低于对照组和0.5mg/kg组(p<0.05),但染毒组异常妊娠率与对照组比差异无显著性。0.5mg/kg组雄鼠生育力、附睾精子数量、精子活动率和精子畸形率与对照组比较差异无显著性。结论2mg/kg浓度和更高浓度氯化镉致4周龄雄鼠睾丸发育不良,导致无精子症和不育,是造成生殖力降低的主要原因。