不同发育阶段Fmr1基因敲除小鼠睾丸组织iNOS的变化

目的:对不同周龄的Fmr1(fragile X mental retardation 1)基因敲除和野生型雄性小鼠睾丸组织诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达进行分析比较,探讨Fmr1基因敲除小鼠睾丸组织中iNOS表达的差异,为脆性X综合征的研究提供背景资料。方法:不同周龄(4、6、8、10周)的Fmr1基因敲除型和野生型雄性小鼠各6只,先采用PCR技术对基因敲除和野生型小鼠进行基因型鉴定,之后所有小鼠麻醉取睾丸组织,采用石蜡包埋切片免疫组化染色技术对基因敲除和野生型小鼠睾丸iNOS的表达进行检测并作对比分析。结果:iNOS在4周野生型小鼠睾丸间质细胞呈弱阳性表达,在6周小鼠呈阳性表达,在8周和10周小鼠呈强阳性表达,且基因敲除小鼠睾丸的iNOS表达均弱于野生型小鼠。结论:Fmr1基因敲除小鼠在缺失FMR1蛋白(FMRP)后的睾丸组织中iNOS的表达降低。     

前列环素对小鼠肾脏及血管系统发育的影响

目的探讨前列环素(prostacyclin, PGI2)在小鼠肾脏及血管系统发育过程中的作用。方法构建C57BL/6J小鼠前列环素合成酶(prostacyclin synthase, PGIS)敲除模型, 通过基因型鉴定观察PGIS敲除对小鼠存活率的影响;应用HE染色和PAS染色观察PGIS敲除对小鼠肾脏和血管系统发育的影响;观察PGIS敲除小鼠的肾脏大体形态;检测小鼠血尿素氮水平评估小鼠肾脏功能;应用实时荧光定量PCR分析PGIS敲除对前列腺素合成酶PGES和TXAS mRNA表达水平的影响;应用免疫荧光染色观察血管系统中PGIS的表达部位;采用尾套法测定小鼠的血压和心率。结果多数PGIS基因全身敲除纯合子(PGIS-/-)胎鼠在母鼠孕晚期死亡, 个别PGIS-/-胎鼠出生后可存活;PGIS-/-胎鼠肾脏发育明显异常, 表现为间质稀疏, 组织分化异常, 生肾囊泡延长, 折叠形成的"S"形结构数量明显减少(P<0.01);存活的PGIS-/-小鼠肾脏大体表现为组织萎缩、表面不规则和囊泡形成, 血清尿素氮水平显著高于野生型(PGIS+/+)小鼠[(36.89±5.39)mmol/L...     

X-盒结合蛋白1条件性基因敲除小鼠模型的建立

目的建立可进行条件性敲除X-盒结合蛋白1(Xbp1)基因的flox杂合子小鼠。 方法通过ET-clone的方法构建基于cre-loxp系统和FLP-frt系统的条件性基因打靶载体。载体线性化后电转JM8A3 ES细胞,经G418和Ganc筛选获得抗性ES细胞克隆。经长片段PCR鉴定获得正确同源重组的阳性克隆。阳性ES细胞经克隆扩增后,注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得嵌合鼠,筛选出高比例嵌合小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得阳性F1代小鼠,并分别进行PCR和测序鉴定。 结果成功构建打靶载体,共获得144个抗性ES细胞,克隆经长片段PCR鉴定,共获得4个正确同源重组的阳性克隆。获得4只阳性F1代小鼠,经测序鉴定正确。Xbp1基因flox杂合子小鼠表型无明显异常。 结论成功构建了条件性敲除Xbp1基因的flox杂合子小鼠,为未来研究器官或组织特异性的Xbp1生物学作用奠定了基础。     

软骨细胞条件性敲除PTEN基因的FGFR3功能增强型点突变小鼠的获得及其表型初步分析

目的 获得在软骨细胞中条件性敲除PIEN基因的FGFR3增强型点突变小鼠并进行初步表型分析.方法 通过FTEN条件性基因敲除小鼠(Ptenflox/flox小鼠),与软骨细胞特异表达Cre重组酶的小鼠(Col2aCre)交配,获得在软骨细胞中特异敲除PTEN基因小鼠(Col2aCre:Ptenfolox/flox);同时,利用Ptenflox/flox小鼠与FGFR3增强型点突变小鼠(Fgfr3G369C/+小鼠,即ACH小鼠)交配,子代杂合子小鼠(Ptenflax/:ACH)之间再交配,获得Ptenflox/flox:ACH小鼠;通过Col2aCre:Ptenflox/flox和Ptenflox/flox:ACH交配即可获得在软骨细胞中特异性敲除PTEN基因的FGFB3增强型点突变小鼠((Col2aCre:Ptenflox/flox:ACH).采用PCR对小鼠基冈型进行鉴定,免疫荧光染色检测PTEN基因的敲除效率,通过X光平片摄影对小鼠的表型进行初步分析.结果 获得了在软骨细胞中敲除PTEN的FGFR3点突变小鼠,免疫荧光染色证实Col2aCre:Ptenflox/flox:ACH小鼠软骨细胞中PTEN蛋白因为基因敲除而表达很低.初步的表型分析显示:Col2aCre:Ptenflox/flox:ACH小鼠身长、尾长均较Pten flox/flox:ACH小鼠长(P＜0.05,n=5).Col2aCre:Ptenflox/flox:ACH小鼠表型,较Ptenflox/flox:ACH小鼠的侏儒表型有所缓解.结论 采用基于Cre/LoxP系统的条件性基因敲除策略,获得了在软骨细胞中敲除PTEN基因的FGFR3增强型突变小鼠,表型分析初步显示,软骨细胞特异性敲除PTEN基因可部分缓解由FGFR3增强型点突变所导致的小鼠侏儒表型.该小鼠的获得,为研究P13K/AKT信号通路在FGFR3突变介导的软骨生长抑制中的作用提供了实验动物平台.     

外源性IL-6促进IL-6基因敲除小鼠移植肝再生的研究

目的 观察外源性重组白细胞介素6(rIL-6)对白细胞介素6(IL-6)基因敲除小鼠原位肝移植后存活时间和移植肝再生过程的影响.方法 动物为C57BL/6野生型小鼠和IL-6基因敲除小鼠,分为4组进行实验:基因敲除对照组,肝移植供、受者均为IL-6基因敲除小鼠；野生型对照组,以IL-6基因敲除小鼠为供者,野生型C57BL/6小鼠为受者；基因敲除rIL-6组,供、受者均为IL-6基因敲除小鼠,肝移植前1h于受者皮下注射rIL-6,1 mg/kg;野生型rIL-6组,以IL-6基因敲除小鼠为供者,野生型C57BL/6小鼠为受者,受者应用rIL-6,用法和用量同前组.观察受鼠的存活情况.获取移植肝,进行组织学和免疫组织化学检查.结果 供肝冷缺血时间约为50 min.基因敲除对照组受鼠平均存活2.2d,野生型对照组受鼠平均存活1.9 d,基因敲除rIL-6组受鼠平均存活＞17.6 d,野生型rIL-6组受鼠平均存活＞20.4 d.各组间存活时间的差异均有统计学意义(P＜0.01).基因敲除对照组和野生型对照组受鼠移植肝有片状坏死和肝细胞气球样变,有极少数溴脱氧尿核苷染色阳性的细胞存在.基因敲除rIL-6组和野生型rIL-6组受鼠的移植肝无细胞坏死等改变,有散在的肝细胞溴脱氧尿核苷染色阳性.结论 外源性的IL-6能够延长IL-6基因敲除小鼠肝移植后的存活时间,促进其移植肝细胞再生.     

条件性敲除Osterix基因获得先天性脊柱侧凸小鼠动物模型及表型分析

目的 通过Osterix基因敲除获得先天性脊柱侧凸动物模型及表型分析.方法 应用Cre-LoxP系统繁育成骨细胞特异性敲除Osterix基因小鼠.取4、12周龄的敲除小鼠各10只,以同龄同系野生型小鼠各10只为对照,行全身及脊柱X线摄像观察;收集脊柱标本行苏木素-伊红(HE)染色及抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察并检测.结果 成功获得成骨细胞特异性敲除Osterix基因小鼠,X线显示敲除小鼠中75％出现严重的脊柱侧凸,Cobb角平均值为35..HE染色显示敲除小鼠椎体生长板增宽,椎体骨量增加,TRAP染色显示腰椎中破骨细胞数量显著减少(P＜0.05).结论 小鼠成骨细胞中条件性敲除Osterix基因后成功获得先天性脊柱侧凸模型,提示Osterix在先天性脊柱侧凸的发病中有重要作用.     

血管紧张素1a型受体基因敲除小鼠肾脏局部肾素-血管紧张素系统的变化及其对糖尿病肾小球硬化的影响

目的 探讨血管紧张素1a型受体（AT1aR）基因敲除小鼠肾脏局部肾素-血管紧张素系统（RAS）的组分改变对糖尿病肾病（DN）肾小球硬化的影响及其可能机制。 方法 AT1aR基因敲除小鼠和野生型小鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ，300 mg/kg）诱导糖尿病模型12周后，取肾脏组织作冰冻组织切片，用激光捕获微切割技术分离肾小球，提取RNA。用实时定量PCR的方法检测肾小球内AT1aR、血管紧张素1b型受体（AT1bR）、血管紧张素2型受体（AT2R）、血管紧张素原、血管紧张素转化酶（ACE）、肾素、醛固酮合成酶（CYP11B2）的mRNA表达。PAS染色观察肾脏病理变化。免疫组化检测转化生长因子β1（TGF-β1）、1型纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)和肾素的表达。比较不同基因型小鼠肾小球细胞外基质和各细胞因子的表达变化。 结果 与野生型小鼠相比，AT1aR基因敲除小鼠肾小球内AT1bR、血管紧张素原、肾素、CYP11B2的表达明显上调（P < 0.05），AT2R表达下调，ACE无明显改变；AT1aR基因敲除小鼠肾小球细胞外基质明显增加（P < 0.05），TGF-β1、PAI-1、MCP-1和肾素的表达均明显增加（P < 0.05）。 结论 AT1aR基因敲除并不能使糖尿病小鼠肾脏病变改善。RAS组分的表达改变（AT1bR的上调和AT2 的下调，肾素的上调和CYP11B2的上调）参与糖尿病肾小球病变过程。     

低氧诱导因子-1α在绝经后骨质疏松中调控作用的实验研究

目的探讨在绝经后骨质疏松的发生、发展过程中,低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对于成骨细胞功能的调控作用。方法2004年10月至2006年5月,应用Cre—Loxp重组酶技术,建立成骨细胞条件性敲除HIF-1α小鼠,取3个月龄雌性野生型和敲除型小鼠各24只行卵巢切除术,术后0、4、8周取材行HE染色、四环素荧光双标记、Micro-CT、RT—PCR、Western-blotting检测。结果与野生型小鼠相比,敲除型小鼠骨小梁的数目、体积、厚度,骨密度,骨矿沉积速度,血管内皮生长因子（VEGF）、RunX2、ALP、OC基因在mRNA水平的表达,VEGF、RunX2在蛋白水平的表达均明显降低,尤其以术后8周最为明显。结论在绝经后骨质疏松的发生、发展过程中,成骨细胞条件性敲除HIF-1α后成骨功能降低,HIF-1α能够调控成骨细胞的成骨功能。     

ACE2对5/6肾切除小鼠肾损伤的保护作用

目的:研究血管紧张素转换酶抑制剂(ACE2)在肾素血管紧张素系统(RAS)过度激活和进行性肾损害的作用并探讨其可能的作用机制。方法:选取雄性ACE2基因敲除(KO)小鼠及野生型(WT)小鼠,随机分成5/6肾脏切除模型组和假手术组,每2周测量血压,12周后检测肾脏损伤指标血肌酐,并对残余肾组织进行PAS染色观察病理变化;用RT-PCR检测肾组织纤维化指标α-SMA和炎症指标TNF-α的表达。结果:与野生型小鼠比较,ACE2基因敲除型小鼠出现血压明显升高,血肌酐增加。PAS染色分析结果提示ACE2基因敲除型小鼠较野生型出现更严重的系膜区增宽,系膜基质增生。用RT-PCR检测肾组织α-SMA和TNF-α的表达变化,提示ACE2基因敲除模型组小鼠肾脏纤维化和炎症因子的表达较野生型模型组小鼠显著增加。结论:ACE2基因敲除组小鼠较野生型小鼠在5/6肾脏切除术后出现更严重的肾脏损伤,血压增高,肾脏炎症和纤维化改变。     

基于Cre/LoxP系统建立睾丸Occludin基因敲除小鼠模型

目的:基于Cre/LoxP系统建立睾丸Occludin基因敲除小鼠模型,并进一步观察其表型变化差异。方法:使用Cre-LoxP系统构建Occludin-floxed(基因型Floxp/-)小鼠,与AQP2-cre(基因型Cre/-)小鼠进行杂交,得到睾丸内Occludin条件性敲除小鼠(基因型Floxp/Floxp Cre/-。利用PCR及Southern印迹技术鉴定F1代敲除小鼠基因型,利用qPCR,Western印迹以及免疫组化鉴定Occludin敲除小鼠中Occludin蛋白表达来验证Occludin敲除小鼠获得成功。比较实验鼠与正常鼠的精子数量,分析其生育能力。结果:Southern印迹和PCR结果我们成功地获得了Occludin基因敲除的目标小鼠。Occludin基因敲除小鼠较正常小鼠Occludin蛋白表达减少,精子数量减少,生育能力降低。差异显著(P0.05)。结论:采用Cre-LoxP技术可成功构建Occludin基因敲除小鼠,并且Occludin的缺乏会对小鼠的生殖功能产生影响。     

肝细胞特异性HuR基因敲除小鼠模型的表型研究

目的 探讨肝细胞特异性敲除HuR基因对小鼠肝脏功能的影响。方法 从美国Jackson实验室引进LoxP标记的人抗原R（human antigen R,HuR）基因小鼠（HuR^fl/fl）和Alb-Cre转基因小鼠。杂交后,经数代选育配种,建立肝细胞特异性HuR基因敲除小鼠（HuR^LKO）模型。PCR技术鉴别小鼠基因型,蛋白免疫印迹和免疫荧光实验检验小鼠肝脏的HuR表达水平,同时HE染色观察肝脏结构变化。高脂喂养HuR^fl/fl/Alb-Cre和HuR^fl/fl两组小鼠,观察小鼠体重、肝重和肝体比变化,提取血清检测肝脏损伤和脂肪代谢相关指标。结果 PCR成功检测筛选子代小鼠基因型,包括HuR^fl/fl/Alb-Cre和HuR^fl/fl小鼠。蛋白免疫印迹实验和免疫荧光实验证明小鼠肝细胞特异性HuR基因敲除成功。HE染色结果提示HuR^LKO小鼠的肝细胞出现变性水肿、局部坏死。高脂喂养实验提示两组小鼠在肝重、肝体比、AST、ALT、HDL-C、血糖上的差异具有统计学意义（P＜0.05）,但在体重、TG、LDL-C的差异没有统计学意义（P＞0.05）。结论 HuR基因是维持小鼠肝细胞功能的必要基因,Cre-LoxP技术可成功构建HuR^LKO小鼠模型,且特异性高,表型明显,为研究HuR在肝脏各项疾病的发生发展中所扮演的角色,提供了一个很好的疾病模型。     

利用Cre/loxP系统构建胰岛α细胞特异性敲除血管紧张素转换酶2基因的小鼠模型

目的构建α细胞特异性血管紧张素转换酶2(ACE2)敲除小鼠模型, 为研究胰岛α细胞ACE2功能提供基础。方法利用Cre/loxP系统, 将雌性ACE2loxP/WT与雄性Gcg-cre+/-小鼠进行交配, 取鼠尾组织, 通过PCR法鉴定子代基因型。选取基因型为ACE2loxP/y Gcg-cre+/-的雄性小鼠为实验所需要构建的模型小鼠(αACE2KO小鼠)。采用免疫荧光和免疫组织化学法检测ACE2表达。采用独立样本t检验。结果免疫荧光分析提示, 在Gcg-Cre小鼠胰岛中, (55.14±25.33)%的α细胞表达ACE2, 然而αACE2KO小鼠胰岛α细胞中未检测到ACE2表达(t=14.202, P<0.01), 同时αACE2KO小鼠的肝、肾、肺、心和骨骼肌中仍然表达ACE2。结论成功利用Cre/loxP原理特异性敲除α细胞ACE2, 为研究胰岛局部α细胞ACE2功能提供动物模型和基础。     

XBP1s条件性过表达定点敲入小鼠模型的建立

目的获得可进行条件性过表达XBP1s基因的Rosa 26定点敲入杂合子小鼠。 方法通过In-Fusion Cloning的方法构建胚胎干细胞(ES细胞)打靶载体,并进行线性化,电转染JM8A3 ES细胞。药物筛选获得抗性ES细胞克隆,经长片段PCR鉴定获得正确同源重组的阳性克隆。阳性ES细胞经克隆扩增后,注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得嵌合鼠,筛选出高比例嵌合小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得阳性F1代小鼠,并分别进行PCR和测序鉴定。 结果经酶切鉴定证明打靶质粒构建成功,经胚胎干细胞打靶共获得144个抗性ES细胞克隆,通过长片段PCR的方式对同源重组阳性克隆进行筛选和克隆经测序确认,共获得21个正确同源重组的阳性克隆。阳性ES细胞克隆E3、C6经扩增后注射C57BL/6J小鼠囊胚96个,通过胚胎移植,共获得2只高嵌合雄鼠,与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得3只F1代杂合小鼠,经PCR及测序鉴定正确。 结论成功建立了XBP1s基因的Rosa26定点敲入F1代杂合子小鼠,为未来获得免疫细胞、肾脏固有细胞及腹膜间皮细胞XBP1s条件性敲入小鼠奠定了基础。     

过氧化物还原酶4在睾丸热应激时的保护作用

目的:以过氧化物还原酶4(PRDX4)基因全敲除(PRDX4~(-/y))小鼠为模型,研究PRDX4在睾丸热应激时的保护作用。方法:采用CRISPR/Cas 9技术对C57BL/6小鼠进行PRDX4基因全敲除,以野生型小鼠为对照,各24只。生长至性成熟(9周),PRDX4~(-/y)和野生型组各12只小鼠睾丸43℃水浴热应激15 min,1次/d,连续3 d;每组以25℃水浴作为热应激处理的对照。处理前、处理后1 d和处理恢复5周后,各组均分别处死4只小鼠,取双侧睾丸组织,采用HE染色观察组织学变化、TUNEL法检测细胞凋亡率、Western印迹检测PRDX4表达水平、免疫组化染色观察氧化应激因子(HNE和8-OHdG)表达水平。结果:与野生型小鼠比较,PRDX4基因全敲除小鼠的睾丸组织学、细胞凋亡和氧化应激因子表达差异不显著(P>0.05)。43℃水浴热应激处理后PRDX4~(-/y)小鼠[(38.65±2.57)%]和野生型小鼠[(13.21±1.434)%]生精细胞凋亡均显著升高(P<0.01),PRDX4~(-/y)小鼠生精细胞凋亡率增加2倍,5周后生精功能恢复较野生型差。热应激处理后,PRDX4~(-/y)小鼠睾丸8-OHdG(38.25±1.19)较野生型小鼠(24.30±1.65)表达水平显著增加(P<0.01),而两组HNE的表达水平无显著差异(P>0.05);恢复5周后,PRDX4~(-/y)小鼠生精细胞凋亡仍显著高于野生型小鼠[(3.09±0.16)%vs(1.45±0.11)%,P<0.01)],PRDX4~(-/y)小鼠睾丸生精细胞HNE的表达水平也高于对照组(28.57±0.56 vs 19±1.35,P<0.01),8-OHdG的表达水平也仍较对照组升高,但差异无显著性。结论:PRDX4在睾丸处于应激状态时具有重要的保护性作用,并促进睾丸生精功能恢复。     

运动神经元生存蛋白基因敲除在顺铂致小鼠急性肾损伤中的作用

目的探讨运动神经元生存蛋白(survival motor neuron, SMN)基因敲除在顺铂诱导的急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)小鼠中的作用。方法构建顺铂诱导的AKI小鼠(C57BL/6)模型, 将雄性8～10周龄体重22～24 gSMN+/+野生型小鼠及SMN基因敲除杂合子(SMN+/-)小鼠随机分为4组:SMN+/+生理盐水组(野生型空白对照组, n=5)、SMN+/-生理盐水组(SMN基因敲除杂合子空白对照组, n=5)、SMN+/+顺铂组(野生型顺铂组, n=5)和SMN+/-顺铂组(SMN基因敲除杂合子顺铂组, n=5)。腹腔注射20 mg/kg顺铂溶液或0.9%生理盐水, 72 h后处死小鼠, 收集血清及肾组织。采用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测SMN mRNA和蛋白表达水平, 采用肌氨酸氧化酶法和脲酶法分别测定血清肌酐和尿素氮水平, PAS染色观察肾组织病理改变, TUNEL免疫荧光检测细胞凋亡水平, Western印迹和免疫组化法检测细胞凋亡标志蛋白多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和内质网应激标志蛋白CHOP的表达。结...     

生长激素促分泌素受体基因敲除小鼠胚胎干细胞的建立

目的建立生长激素促分泌素受体（ghrelin receptor，GHS-R）基因敲除小鼠胚胎干细胞（ES细胞）杂合子模型，为研究GHS—R基因的功能奠定基础。方法用TK-neo置换原X-pPNT载体的PGK—neo构建目标载体。以小鼠基因组DNA为模板，用PCR方法扩增2条同源臂，将其按照一定方向装入含有TK—neo的X—pPNT载体，并测序鉴定。载体线性化及纯化后电穿孔转染小鼠ES细胞，用G418和更昔洛韦（Gancyclovir）对电穿孔转染后的ES细胞进行正、负筛选培养，得到双药抗性ES细胞，克隆后抽提基因组DNA，分别用PCR方法鉴定2条同源臂，并测序确定成功同源重组的ES细胞克隆。结果改建X—pPNT载体成功，PCR获得2条同源臂片段，测序正确，并按一定方向装入打靶载体，ES细胞转染后经双药筛选得到328个阳性ES细胞克隆，PCR及测序鉴定证实3个克隆发生同源重组。结论本研究成功获得了GHS-R（-／＋）杂合子小鼠ES细胞克隆，为进一步通过显微注射及杂交育种获得GHS—R基因敲除小鼠打下了基础。     

Nrf2基因敲除小鼠脊髓损伤后脊髓内TNF-α及MMP-9的变化

目的 探讨转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)对小鼠脊髓损伤后脊髓内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响.方法 分别利用野生型Nrf2(+/+)小鼠及Nrf2(-/-)基因敲除小鼠制作脊髓钳夹损伤模型.在小鼠脊髓损伤后48 h用干湿比法测定脊髓水肿程度.在脊髓损伤后24 h,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定脊髓组织MMP-9 mRNA含量的变化;酶联免疫吸附试验测定脊髓组织中TNF-α及MMP-9蛋白的含量;明胶酶谱法测定脊髓组织中MMP-9的酶活性.用SPSS 16.0软件进行统计学分析.结果 脊髓损伤后48 h,Nrf2(-/-)基因敲除小鼠及Nrf2(+/+)小鼠的脊髓均出现明显水肿,但Nrf2(-/-)基因敲除小鼠尤为严重(P＜0.05).脊髓损伤后24 h,Nrf2(-/-)基因敲除小鼠及Nrf2(+/+)小鼠的脊髓内TNF-α与MMP-9的表达均增加,但Nrf2(-/-)基因敲除小鼠尤为显著(P＜0.01).同时,Nrf2(-/-)基因敲除小鼠在脊髓损伤后24 h,脊髓内MMP-9明胶酶活性较Nrf2(+/+)小鼠的损伤组明显增强(P＜0.01).结论 Nrf2在小鼠脊髓损伤后可能是通过减少炎性介质TNF-α及MMP-9的表达,降低MMP-9的明胶酶活性来减轻炎症反应,减轻脊髓水肿程度,起到神经保护的作用.     

基因敲除技术在睾丸功能研究中的应用

基因敲除(gene knock-out)是基因打靶的一种方法,是根据DNA同源重组的原理而设计的一项技术.通过DNA分子的同源重组,特异性地在基因组的某个位点引入预定的突变,进而获得基因型发生了改变的基因打靶小鼠,以研究目的基因的体内功能或相关疾病的致病机制.     

TIPE2在小鼠脓毒症心肌损伤中的作用：与AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路的关系

目的评价肿瘤坏死因子α诱导蛋白家族8样蛋白2(TIPE2)在小鼠脓毒症心肌损伤中的作用及其与丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)/糖原合酶激酶3β(GSK-3β)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的关系。方法选择16只雄性野生型C57BL/6N小鼠和16只雄性TIPE2基因敲除C57BL/6N小鼠, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 按照随机数字表法分为野生型假手术组(WT-Sham组)、野生型CLP组(WT-CLP组)、TIPE2基因敲除型假手术组(WT-Sham组)和TIPE2基因敲除CLP组(KO-CLP组), 每组8只。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症小鼠急性心肌损伤模型。术后24 h时采集下腔静脉血标本, 采用ELISA法检测血清心肌cTnI浓度, 然后处死小鼠, 取心肌组织, HE染色观察病理学结果, 采用q-PCR法检测TNF-α、IL-1β及IL-6的mRNA表达, Western blot法检测TIPE2、磷酸化AKT(p-AKT)、磷酸化(p-GSK-3β)及β-catenin表达。结果与相应Sham组比较, 相应CLP组血清cTnI浓度升高, 心肌组织TNF-...     

免疫球蛋白样结构域受体2缺失加重缺血再灌注诱导的肾纤维化

目的探究免疫球蛋白样结构域受体2(immunoglobulin-like domain-containing receptor 2, Ildr2)在缺血再灌注诱导肾纤维化中的作用。方法利用CRISPR/Cas9技术构建Ildr2敲除小鼠(KO组), 其对照组为野生型小鼠(WT组)。通过夹闭左侧肾蒂构建单侧肾脏缺血再灌注(unilateral renal ischemia reperfusion, UIR)模型(UIR组), 造模后分为KO-UIR组和WT-UIR组;假手术小鼠(Sham组)不进行缺血处理。采用肌氨酸氧化酶法检测血清肌酐水平;二乙酰肟比色法检测血尿素氮水平;酶联免疫吸附测定法检测尿白蛋白水平, 计算尿白蛋白/肌酐比值;HE、PAS及MASSON染色检测肾组织炎性细胞浸润情况和纤维化程度;实时荧光定量PCR检测Ildr2, 肾损伤相关分子中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)和肾损伤分子1(kidney injury molecule-1, KIM-1), 纤维化标志分子Ⅰ型胶原α1(...