淡豆豉药材发酵前后活性成分的变化研究

目的对淡豆豉药材发酵前后的异黄酮苷和苷元成分、总异黄酮、纤溶酶的含量进行测定,并对其含量变化进行比较。方法采用HPLC法测定淡豆豉中大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素的含量,紫外可见分光光度法测定淡豆豉中总异黄酮的含量,纤维蛋白平板法测定淡豆豉纤溶酶活力。结果原料大豆经过发酵后,大豆苷、染料木苷含量减少,大豆苷元、染料木素含量增加,总异黄酮无明显变化,黑大豆中苷元成分略高于黄大豆。发酵过程还产生一种具有溶栓作用的纤溶酶。结论淡豆豉发酵过程为结合型糖苷向游离型苷元转化的过程,同时产生原料大豆中没有纤溶酶活性,不同原料大豆的发酵,其活性成分也有差异。     

淡豆豉与黑豆提取物抗癌细胞增殖作用及4种异黄酮成分的含量测定

目的:探讨淡豆豉和黑豆提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的调节作用,并检测提取物中4种异黄酮成分的含量。方法:MTT法观察淡豆豉和黑豆提取物对乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖率的影响,Annexin/PI法流式细胞仪分析检测细胞的早期凋亡,高效液相色谱法检测淡豆豉和黑豆提取物中4种异黄酮成分大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素的含量变化。结果:淡豆豉和黑豆提取物对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用且诱发癌细胞凋亡,但高浓度淡豆豉提取物的抑制癌细胞增殖作用明显高于黑豆(P0.05)。淡豆豉提取物中大豆苷、大豆苷元和染料木素的含量显著高于黑豆提取物(P0.01),但染料木苷的含量未见明显变化。结论:淡豆豉提取物与黑豆相比具有较强的抑制癌细胞增殖作用,淡豆豉中含量较高的异黄酮成分大豆苷、大豆苷元和染料木素,可能是其较强的抗癌细胞增殖作用的物质基础。     

淡豆豉中的化学成分

目的:研究淡豆豉的化学成分.方法:对淡豆豉的化学成分进行提取分离,通过理化数据及波谱分析鉴定化合物的结构.结果:从淡豆豉中分离得到8个化合物,分别为大豆苷(Ⅰ)、染料木苷(Ⅱ)、6″-乙酰基-大豆苷(Ⅲ)、6″-乙酰基-染料木苷(Ⅳ)、丁香酸(Ⅴ)、染料木素(Ⅵ)、大豆素(Ⅶ)和6-甲氧基-大豆素(Ⅷ).结论:上述化合物均是首次从该药材中分得.     

大豆加工品大豆黄卷和淡豆豉的质量评价

目的对不同品种大豆(黑豆、青豆、黄豆、褐豆)为原料加工的大豆黄卷和淡豆豉进行含量测定,分析大豆黄卷和淡豆豉的实验室加工品和市售品中异黄酮含量的差异,为大豆黄卷和淡豆豉的制备研究及临床用药提供科学依据。方法以不同品种大豆为原料加工大豆黄卷和淡豆豉,采用紫外分光光度法测定总黄酮含量,使用HPLC法对药材中大豆苷、大豆苷元、染料木素、染料木苷含量进行测定。采用C_(18)色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-1%醋酸溶液为流动相,进行梯度洗脱,检测波长260 nm,柱温30℃,流速1.0 ml·min~(-1)。结果黄豆加工成的大豆黄卷中结合型糖苷大豆苷和染料木苷总量最大,含量范围为0.1090%～0.1431%,黑豆加工成的淡豆豉中游离型苷元大豆苷元和染料木素总量最大,含量范围为0.0937%～0.1628%。结论黄豆适宜加工成大豆黄卷,黑豆适宜加工淡豆豉,这也是市售品大豆黄卷和淡豆豉质量参差的原因。     

大豆与其生物发酵制品淡豆豉异黄酮含量研究

目的:探讨大豆与其生物发酵制品淡豆豉中异黄酮的含量变化。方法:大豆通过传统的发酵方法制备成淡豆豉,通过比色法测定了大豆和淡豆豉总黄酮含量;高效液相色谱法对大豆和淡豆豉中大豆黄素和染料木素含量进行测定。结果:大豆总黄酮含量0.637mg.g-1,游离苷元含量0.152mg.g-1;淡豆鼓中总黄酮含量0.731mg.g-1,游离苷元含量1.701mg.g-1。结论:大豆和淡豆豉总黄酮含量基本相当,淡豆豉中大豆异黄酮游离苷元含量是大豆中的10～40倍。     

UPLC法测定中药淡豆豉中3种主要异黄酮苷元的含量

目的：建立同时测定淡豆豉中3种异黄酮苷元（大豆苷元、黄豆黄素、染料木素）的超高效液相色谱（UPLC）分析方法。方法：采用UPLC色谱系统,C18色谱柱（100mm×2．1mm,1．71xm）,乙腈-0．1％甲酸水溶液（24：76）为流动相,样品经80％甲醇提取后,用UPLC—UV进行分析检测,检测波长260nm。结果：淡豆豉中大豆苷元、黄豆黄素、染料木素在5min完全分离并进行含量测定,大豆苷元、黄豆黄素、染料木素在相应的浓度范围内呈现良好线性关系,其平均加样回收率分别为100．5％,99．06％,97．84％。结论：本方法快速、准确,灵敏度高,可用于同时测定淡豆豉中大豆苷元、黄豆黄素和染料木素的含量,为更好地评价淡豆豉药材质量提供新方法。     

淡豆豉中豆豉多糖、大豆异黄酮的超声提取及含量检测

目的:提取中药淡豆豉中大豆异黄酮和豆豉多糖,并分别检测两种活性成分的含量。方法:采用超声提取大豆异黄酮和豆豉多糖;聚酰胺薄膜层析定性、HPLC定量检测大豆异黄酮;硫酸-苯酚法显色,在紫外分光光度计下对豆豉多糖的含量进行检测。结果:实验结果表明,聚酰胺薄膜层析法最佳展开剂系统为甲醇∶醋酸∶水(18∶1∶1)。HPLC最佳流动相:甲醇∶乙酸∶水(12∶1∶10),染料木苷、大豆苷元和染料木素在20 min内分离良好。中药淡豆豉含有染料木苷1076.8μg/g、大豆苷元310.48μg/g、染料木素141.93μg/g、豆豉多糖0.91%。结论:精密度实验和加样回收实验均RSD<3%,证明检测方法及结果准确、可靠。     

细菌型淡豆豉发酵底物及前酵、后酵工艺研究

目的:研究细菌型淡豆豉发酵底物及前酵、后酵工艺。方法:分别以黄豆和黑豆为底物,以枯草芽孢杆菌为发酵菌种,以4种异黄酮成分的含量为指标考察淡豆豉前酵和后酵工艺。结果:以黄豆和黑豆为底物前酵过程都出现大豆苷和染料木苷的含量下降,大豆苷元和染料木素含量上升的结果,后酵样品中除黄豆后酵组大豆苷元的含量继续升高外,其他异黄酮成分的含量均有不同程度的下降;发酵后黄豆组结合型糖苷含量低于黑豆组,苷元含量则高于黑豆组。结论:从结合型糖苷的降解和苷元的转化角度分析,生产细菌型淡豆豉不需要后酵过程,以黄豆为底物优于黑豆。     

淡豆豉和黑豆乙醇提取物的促成骨细胞增殖活性及HPLC-MS分析

目的比较分析淡豆豉和黑豆乙醇提取物促大鼠颅骨成骨细胞增殖活性及二者的化学成分。方法采用MTT法对淡豆豉和黑豆的乙醇提取物进行促大鼠颅骨成骨细胞增殖活性的研究,并通过高效液相色谱-质谱联用技术对二者化学成分进行比较分析。结果淡豆豉和黑豆的乙醇提取物对大鼠成骨细胞的促增殖率分别可达到36.5%和28.2%,其主要有效成分为异黄酮类化合物,经液质联用分析共鉴定出15个黄酮类成分。结论黑豆发酵成淡豆豉后的成分变化主要体现在由苷类成分脱糖转化为苷元,含有量显著增加的大豆苷元和染料木素两种苷元主要由丙二酰大豆苷(大豆苷元-G-M)和丙二酰染料木苷(染料木素-G-M)脱丙二酰基和葡萄糖转化而来。     

淡豆豉关键质量指标的确定及标准修订

目的:拟根据淡豆豉的质量问题,选择适合的质量控制指标,采用生药鉴定学、薄层鉴别、含量测定等方法,开展淡豆豉质量标准研究工作,为淡豆豉药材质量标准的提升和完善提供参考。方法:采用传统生药鉴定方法,对淡豆豉及其伪品的性状特征进行比较,找出具有鉴别专属性的性状特征,修订淡豆豉的性状鉴别项;对淡豆豉标准薄层鉴别中的展开剂进行优化,建立专属性强的薄层鉴别方法;根据淡豆豉发酵前后的成分差异,以能体现发酵程度的大豆苷元、染料木素为指标,建立含量测定方法,以Agilent SB C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱为固定相,以乙腈-1%冰醋酸(25∶75)为流动相,流速为1 mL·min~(-1),柱温为40℃,检测波长为260 nm。结果:建立的性状鉴别项,能从种脐特征区分伪品黑芸豆;建立的薄层鉴别方法也能有效地区分伪品;选择的大豆苷元、染料木素作为含量测定指标,可以有效地区分正伪品及未发酵品,考虑到不同发酵工艺的差异造成的含量差异,建议淡豆豉中染料木素、大豆苷元的总量不得少于0.040%。结论:建立的性状鉴别项、薄层鉴别项和含量测定方法能够更好地控制淡豆豉质量,可为2020年版《中华人民共和国药典》关于淡豆豉药材质量标准的修订提供参考。     

UPLC同时测定淡豆豉中6种异黄酮的含量

目的:建立同时测定淡豆豉中的大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、黄豆苷元、黄豆黄素、染料木素6种异黄酮类成分含量的UPLC方法。方法:采用ACQUITY UPLC~ BEH C_(18)色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相为0.1%冰乙酸-乙腈,梯度洗脱;流速0.3 mL/min;检测波长254 nm;柱温25℃;进样量10μL。结果:大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、黄豆苷元、黄豆黄素、染料木素分别在0.088~5.280μg/mL(r_1=0.9997)、0.092~5.520μg/mL(r_2=0.9998)、0.152~9.120μg/mL(r_3=0.9998)、0.100~6.000μg/mL(r_4=0.9999)、0.072~4.320μg/mL(r_5=0.9998)、0.048~3.840μg/mL(r_6=0.9995)范围内线性关系良好,精密度、重现性、回收率均符合要求。结论:该方法快速、简便,重复性好,适用于同时测定淡豆豉中大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、黄豆苷元、黄豆黄素、染料木素的含量。     

优化HPLC法测定淡豆豉中大豆异黄酮的含量

目的:优化淡豆豉中大豆异黄酮的高效液相色谱含量测定方法。方法:采用色谱柱为Agilent Hyper-sil C18(4.0 mm×250 mm 5,μm),流动相为甲醇-0.09%醋酸(48:52),流速1.0 mL.min-1,测定波长为254nm,检测温度为25℃的色谱条件测定。结果:线性范围:大豆苷40.6～203μg(r=0.9998),染料木苷11.15～55.75μg(r=0.9926),大豆苷元12.05～60.25μg(r=0.9933),染料木素5.5～27.5μg(r=0.9946)。测定精密度:大豆苷RSD=1.59%,染料木苷RSD=1.7%,大豆苷元RSD=0.8%,染料木素RSD=1.6%。大豆异黄酮总量24h稳定性RSD=1.49%,重复性RSD=1.06%,加样回收率:大豆苷为(99.24±3.77)%,染料木苷为(99.66±5.82)%,大豆苷元为(99.41±4.33)%,染料木素为(99.06±7.09)%。结论:本法简便、可靠、灵敏,可作为大豆异黄酮的质量控制方法。     

人肠道微生物中抗菌活性菌株的筛选及其代谢产物研究

目的:从肠道菌群中筛选抗菌活性菌株,明确其抗菌活性物质,为认识肠道微生物之间的相互作用乃至与宿主健康的关系奠定基础。方法:对肠道混合菌群进行体外培养,以抗菌活性为指标筛选活性单菌株;采用生化鉴定法和16S rDNA鉴定法对菌株进行鉴定;通过活性追踪手段,运用各种色谱分离技术对菌株的代谢产物进行分离纯化,并利用光谱技术鉴定其结构;采用微量孔板法测定各化合物的最低抑菌浓度(MIC)。结果:筛选得到具有抗菌作用的普通变形杆菌Proteus vulgaris HA-3151菌株;从其发酵液中分离得到13个化合物:D-3-苯基乳酸、环(丙-苯丙)二肽、环(酪-酪)二肽、环(酪-亮)二肽、环(酪-异亮)二肽、丁香酸、黄豆黄苷、大豆苷、大豆苷元、染料木苷、5-甲氧基大豆苷元、3-甲氧基没食子酸和染料木黄酮;其中,D-3-苯基乳酸、大豆苷元、染料木苷、染料木黄酮以及环(丙-苯丙)二肽、环(酪-酪)二肽具有抑菌作用。结论:首次得到了有抗菌活性的普通变形杆菌Proteus vulgaris菌株并证明其可产生有机酸、黄酮和二肽类抗菌活性物质,这些物质有助于其形成定植优势,进而对人体健康产生各种影响。     

染料木素及大豆苷元调控线粒体介导的细胞凋亡减轻京尼平诱导的肝细胞损伤

目的:通过探究淡豆豉主要药效成分染料木素、大豆苷元对栀子致毒成分京尼平所致HepG2细胞损伤的保护作用,进一步揭示栀子与淡豆豉配伍减毒的机制。方法:采用250μmol/L京尼平建立HepG2细胞损伤模型,将不同浓度染料木素、大豆苷元(0.5～10)μmol/L与京尼平共孵育于HepG2细胞,测定细胞存活率及氧化应激水平(胞内锰-超氧化物歧化酶Mn-SOD、过氧化氢酶CAT活力,谷胱甘肽GSH含量及活性氧ROS水平);高内涵技术(high content screening, HCS)检测线粒体功能(线粒体膜电位mitochondrial membrane potential, MMP和细胞色素C水平)及细胞凋亡情况;Western Blot法检测线粒体凋亡通路蛋白Bcl-2、Bax、Bcl-xL、Bik、Caspase-3表达水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组细胞存活率显著下降(P<0.01);Mn-SOD、CAT活力及GSH水平显著降低(P<0.01);ROS释放量显著增加(P<0.01);细胞色素C水平及细胞膜通透性显著增加、MMP显著降低、细胞核固缩、浓染及细胞数量显著下降(P<0.01);Bax、Bik、Caspase 3蛋白表达水平显著上调,Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达显著下调(P<0.01)。与模型对照组相比,1、2.5、5、10μmol/L染料木素、大豆苷元可明显升高细胞存活率(P<0.05或P<0.01);2.5、5、10μmol/L染料木素、大豆苷元可明显升高细胞Mn-SOD活力及GSH含量,2.5、5、10μmol/L染料木素及5、10μmol/L大豆苷元可显著升高细胞CAT活力(P<0.05或P<0.01)。5μmol/L染料木素、5μmol/L大豆苷元、2.5μmol/L染料木素+2.5μmol/L大豆苷元可使ROS释放量显著减少,细胞色素C含量和细胞膜通透性下降,MMP上升,显著改善核固缩及核内染色质凝集等凋亡情况(P<0.05或P<0.01);且Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达显著上调,Bax、Bik、Caspase-3蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:染料木素和大豆苷元可通过保护线粒体,减少线粒体介导的细胞凋亡显著改善京尼平诱发的肝细胞损伤,栀子与淡豆豉配伍减毒的机制与此相关。     

番石榴苷或番石榴属植物提取物治疗与二肽基肽酶Ⅳ活性相关的疾病

WO 2007053865 A1利用番石榴苷(guaijaverin)或其盐、或其酯,或番石榴属植物如Psidium cattleianum、P.cattleianum ssp.lucidum、番石榴P.guajava L、P.guineense、草莓番石榴P.littorale、P.molle、P.schiedeanum的提取物作为活性物质制成药物、食品或化妆品,治疗与二肽基肽酶Ⅳ或其类似酶的活性相关的病症或异常,糖代谢障碍,如糖尿病、肥胖症、动脉硬化等。体外实验表明:番石榴苷对二肽基肽酶Ⅳ活性具抑制作用。     

大豆发酵制品中总异黄酮的含量测定

目的建立一种测定大豆发酵制品——淡豆豉中异黄酮类成分含量的紫外分光光度法分析方法。方法以染料木素为对照品，利用染料木素与氢氧化钠产生反应，在271nm波长处有最大吸收点，用紫外分光光度法测定淡豆豉中总异黄酮的含量。结果淡豆豉中总异黄酮的含量为9．884mg／g，加样回收率为99．3％，相对标准偏差为2．1％。结论方法简便、准确、重现性好，可作为测定淡豆豉中总异黄酮的含量的一种手段，适用于淡豆豉及其它豆制品的日常分析和质量控制。     

高速逆流色谱法分离制备淡豆豉中大豆素和染料木素

淡豆豉是经大豆Glycine maa T（L．）Merr．发酵而来的传统中药，其中所含的大豆异黄酮是该药主要活性成分之一。近年来的研究结果表明，大豆异黄酮是一类重要的生理活性物质，具有预防心血管疾病、防癌抗癌、治疗骨质疏松、降低妇女更年期综合症等功效。经发酵处理后大豆异黄酮中游离型苷元的质量分数明显提高，如大豆素和染料木素，而游离型大豆异黄酮比结合型大豆异黄酮具有更强的生物活性。因此，如何简便、快速从淡豆豉中分离制备大豆异黄酮苷元对进一步进行药效与作用机制研究、     

正交设计优选大豆中总异黄酮的提取工艺

大豆是由豆科植物大豆[Glycine max(L.)Merr.]的成熟种子,在华北地区分布广泛。大豆可以作为油料经济作物,亦可作为常用中药淡豆豉的原料。大豆含有12种异黄酮,分为游离型的苷元(aglycon)和结合型的糖苷(glucoside)两类[1],经发酵后部分苷转变为苷元[2],两种含量较高的苷元成分为:染料木素(genistein)和大豆素(daidzein)[。1]异黄酮具有增强免疫、抗氧化、延缓衰老、改善心功能状态、抗癌等广泛的药理作用[3-7]。对大豆提取工艺的研究应以异黄酮为主。本实验以大豆中染料木素为质量控制指标,采用正交设计,考察了药材粒度、乙醇浓度、提取…     

淡豆豉UPLC指纹图谱

目的建立淡豆豉UPLC指纹图谱。方法淡豆豉80%甲醇提取液的分析采用ACQUITY UPLCBEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm);流动相0.1%冰乙酸-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.3 m L/min;检测波长260 nm;柱温25℃;进样量10μL。通过SPSS1 21.0软件进行聚类分析。结果 11批样品的指纹图谱中有10个共有峰,其中6个为大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、黄豆苷元、黄豆黄素、染料木素,相似度均高于0.900,可分为2类。结论该方法简便快速,可用于淡豆豉的质量控制。     

中药淡豆豉高效发酵菌株的筛选

目的：以大豆异黄酮的含量为指标,筛选淡豆豉的高效发酵茵株并进行初步鉴定.方法：将从自然发酵淡豆豉中分离出来的菌株在无菌条件下分别接种于大豆中进行纯种发酵实验,通过比较各个菌株发酵后淡豆豉中主要药效成分大豆异黄酮（染料木素和大豆黄素）的含量,筛选高效发酵菌株,并对菌株的菌落形态、菌体特征和生理生化特征进行鉴定.结果：从自然发酵淡豆豉中分离出两株高效的发酵菌株,经鉴定均为枯草芽孢杆菌.