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目的探讨长链非编码RNA H19(Long non-coding RNA H19,LncRNA H19)对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的影响及作用机制。方法将24只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠分为四组:Normal组、AIA组、AIA+AAV8-CMA组、AIA+AAV8-CMV-H19组,每组6只。Normal组在左侧踝关节周围皮下注射30μL生理盐水;其余组在相同位置注射30μL含结核分枝杆菌的弗氏完全佐剂(CFA);AIA+AAV8-CMA组于建模前3周,向AIA小鼠左侧踝关节注射5μL腺相关病毒(AAV8)空载;AIA+AAV8-CMV-H19组于建模前3周,向AIA小鼠左侧踝关节注射5μL携带H19的AAV8过表达LncRNA H19;肿胀测量仪记录各组关节肿胀程度;建模8 d后,处死小鼠收集踝关节标本;HE染色观察各组踝关节炎症病变,qRT-PCR检测各组TNF-α、CCL-2、CCR-7的表达情况,Western blot检测IRF5、p-IRF5表达。结果 AIA+AAV8-CMV-H19组小鼠踝关节肿胀程度明显超过其他组(P&... 相似文献
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目的 研究非编码长链RNA H19(Long noncoding RNA H19,LncRNA H19)对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响以及作用机制.方法 以结肠癌HT-29细胞作为研究对象,将Smart silencer NC、Smart silencer H19、siR-NC、siR-STAT1、siR-NC+Smar... 相似文献
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绞股蓝总皂苷调节THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇平衡的作用机制 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]通过体外实验研究绞股蓝总皂苷调节THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇平衡的作用机制。[方法]采用体外培养人THP-1巨噬细胞,以氧化低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导THP-1巨噬细胞泡沫化为模型,用绞股蓝总皂苷进行干预。通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况和酶比色法定量检测细胞内总胆固醇(TC)和胆固醇酯(CE)的变化,并利用RT-PCR方法检测CD36、ABCA1、LXR-α、PPAR-α受体mRNA表达。[结果]与ox-LDL诱导组相比,绞股蓝总皂苷组(GPS组)巨噬细胞的油红O染色阳性细胞数和细胞内脂质含量均显著减少,同时CD36受体mRNA表达明显降低,而ABCA1、LXR-α、PPAR-α受体mRNA表达明显升高。[结论]绞股蓝总皂苷可抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞泡沫化,降低细胞内脂质积累,促进细胞内的脂质向细胞外转运,有利于防止泡沫细胞的形成及动脉粥样硬化的进程。该作用可能与绞股蓝总皂苷下调巨噬细胞CD36受体表达,上调巨噬细胞ABCA1、LXR-α、PPAR-α受体表达从而减弱巨噬细胞对ox-LDL的摄取和促进... 相似文献
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目的 研究长链非编码RNA(LncRNA) H19对雨蛙素刺激的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J细胞凋亡的影响.方法 在体外通过用雨蛙素刺激AR42J细胞建立AP模型,采用qRT-PCR和Western blot检测沉默以及过表达H19后凋亡相关基因Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率.结果 H19沉默后,凋亡相关基因Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白水平下降,细胞凋亡率也相对减少(P<0.05);而过表达H19后,Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白水平增加,细胞凋亡率也是升高的(P<0.05).结论 沉默LncRNA H19可减少雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞凋亡,提示其可能成为治疗急性胰腺炎的潜在有效靶点. 相似文献
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目的:观察结核分枝杆菌19 kDa脂蛋白(Mtb P19)对THP-1细胞凋亡的影响。方法:从培养的结核杆菌H37Ra制备Mtb P19,以5、10、20μg/ml Mtb P19作用于佛波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,37℃、5%CO2孵箱孵育4 h。Wright-Giemsa染色观察细胞形态变化;AnnexinV-FITC染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:终浓度为5μg/ml的Mtb P19即可诱导THP-1细胞凋亡,且凋亡率随Mtb P19作用浓度的升高而增加(P〈0.01);Wright-Giemsa染色镜下可见部分细胞体积变小、圆缩,核固缩,核断裂。结论:结核分枝杆菌P19以剂量依赖方式诱导THP-1细胞凋亡。 相似文献
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目的 探讨穗花杉双黄酮调节体外诱导的M1型巨噬细胞极化的相关机制。方法 设实验组、溶媒对照组和无药对照组,实验组:不同浓度的(5、10 μmol/L)穗花杉双黄酮干预用联合脂多糖及重组人干扰素-γ诱导的M1型巨噬细胞;溶媒对照组:溶媒3‰DMSO;无药对照组:不加穗花杉双黄酮处理。显微镜下观察细胞形态学;通过ELISA检测干预后细胞上清液L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β各自的表达水平;通过CCK-8法检测计算出穗花杉双黄酮对细胞的安全浓度;通过分子对接建模确定穗花杉双黄酮的靶蛋白,利用RT-qPCR、Western blot检测L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β、PPAR-α/γ、Arg-1、Fizz1基因和蛋白表达。结果 穗花杉双黄酮干预后可以阻止被诱导引起的THP-1细胞向M1极化;穗花杉双黄酮可下调M1极化时高表达的IL-6、TNF-α的mRNA,上调M2型主要标志细胞因子IL-8和TGF-β的mRNA表达(P<0.05),同时上调M1极化状态下的细胞内Arg1和Fizz1蛋白的表达(P<0.05)。随着穗花杉双黄酮浓度的增加和作用时间的延长,其抑制细胞的增殖效果增强(P<0.05),且高浓度具有杀伤作用。穗花杉双黄酮可与PPAR-α/γ关键靶点蛋白活性位点非共价结合并激活该蛋白。结论 穗花杉双黄酮可通激活PPAR-α/γ,恢复Arg-1、Fizz1基因表达,抑制巨噬细胞向M1型分化。 相似文献
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大蒜素诱导THP-1细胞凋亡的作用及机制 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨大蒜素对急性单核细胞白血病细胞株THP-1凋亡及凋亡基因Fas/FasL表达的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定大蒜素对THP-1细胞增殖抑制率;AO/EB染色观察细胞凋亡形态;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术(FCM)检测凋亡率的变化;FCM检测细胞凋亡率和细胞周期分布;免疫细胞化学法和Western blot观察细胞Fas、FasL蛋白表达。结果:MTT显示大蒜素能抑制THP-1细胞增殖,呈时间-剂量依赖性,72h中效浓度(IC50)为12.8mg/L。Annexin V-FITC/PI检测凋亡率随大蒜素浓度增加而增加。6.4、12.8mg/L大蒜素作用THP-1细胞72h后,FCM检测G0/G1期细胞比率明显上升,而S期比率明显下降,均出现凋亡峰,凋亡率分别为(22.93±2.93)%和(36.73±2.88)%,呈剂量依赖性,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。在荧光显微镜下可区分早、晚期凋亡细胞、活细胞和坏死细胞。免疫组化显示大蒜素作用后Fas/FasL蛋白上调,主要分布在细胞浆和细胞膜。Western blot结果显示Fas/FasL蛋白表达量随大蒜素浓... 相似文献
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目的 探讨H19与神经生长因子(NGF)在心肌梗死(MI)后室性快速性心律失常(VAs)发生过程中的作用与调控关系.方法 采用左冠状动脉结扎法建立大鼠MI模型.①将14只健康SD大鼠分为MI组和假手术组(sham组),每组7只,采用qRT-PCR法检测MI后7d长链非编码RNA H19(LncRNA H19)的表达;②... 相似文献
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探讨熊果酸对THP-1细胞的保护作用及其机制.以脂多糖诱导的THP-1炎症细胞为模型,观察不同浓度的熊果酸(10,30,50 μmol/L)对细胞黏附、迁移功能的影响,RT-PCR法检测MCP-1、CCR2 mRNA的表达,继而探讨NF-kB活性.结果显示,与模型组比较,熊果酸(30,50 μmol/L)能够显著降低I... 相似文献
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目的 分析长链非编码RNA(lncRNA)H19在炎症性肠病(IBD)患者血清中的表达情况及其与疾病活动度的关系。方法 选取2020年1月-2022年6月浙江省金华市人民医院就诊并确诊为IBD的患者168例为IBD组,其中溃疡性结肠炎(UC)78例,克罗恩病(CD)90例,采用改良Mayo评分评估UC患者的疾病活动度,分为UC活动期患者(45例)和UC缓解期患者(33例);采用CD活动性指数(CDAI)评分评估CD患者的疾病活动度,分为CD活动期患者(39例)和CD缓解期患者(51例);选取同期来医院体检且与IBD患者一般资料匹配的健康者60例为对照组。检测所有受试者血清炎性因子和血常规指标水平;采用实时荧光定量PCR法检测血清lncRNA H19水平;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA H19水平对UC患者活动期、CD患者活动期的预测价值。结果 对照组、UC缓解期、UC活动期患者血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、平均血小板体积(MPV)、中性粒细胞计数(N)依次升高,白蛋白(ALB)、血小板分布宽度(PDW)... 相似文献
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长链非编码RNA(LncRNA)是一组长度超过200个核苷酸且不具备编码蛋白质功能的RNA分子。LncRNA OTUD6B反义RNA 1(LncRNA OTUD6B-AS1)与其相对DNA链上的蛋白质编码基因OTUD6B呈反义方向。最近的研究揭示了LncRNA OTUD6B-AS1在脑胶质瘤、甲状腺癌、肝细胞性肝癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤中的重要作用,可以调节肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移及凋亡,影响患者的预后。本文就LncRNA OTUD6B-AS1在恶性肿瘤中的作用及机制研究进展进行综述,旨在探索新的潜在治疗靶点,为后续小分子靶向药物研究提供理论依据。 相似文献
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目的 探讨可溶性血管内皮生长因子受体1[sFlt-1(1-3)]对人单核细胞系THP-1细胞向血管内皮生长因子(VEGF)迁移的抑制作用.方法 应用腺病毒包装系统构建携带人sFlt-1(1-3)/FLAG融合基因的重组腺病毒载体(Ad-sFlt-1/FLAG).应用酶联免疫吸附实验(ELISA)和免疫荧光分析所构建的重组腺病毒载体在L293细胞中的表达.通过Transwell实验观察sFlt-1(1-3)对THP-1细胞向VEGF迁移的抑制作用.分别观察5种浓度(0、0.1、1、10和100 ng/mL)的VEGF对THP-1的趋化作用.观察4种浓度(0.1、1、10和100 ng/mL)的sFlt-1(1-3)/FLAG表达上清对THP-1细胞向VEGF迁移的抑制作用.结果 成功构建了Ad-sFlt-1/FLAG融合基因的重组腺病毒载体,通过ELISA和免疫荧光检测显示构建的腺病毒载体携带的sFlt-1(1-3)基因能够在L293细胞中得到表达.在感染重组腺病毒(Ad-sFlt-1/FLAG)的L929细胞培养上清可以检测到sFlt-1(1-3)/FLAG蛋白的表达,浓度为503.7 ng/mL.VEGF终浓度为1、10和100 ng/mL时,迁移的THP-1细胞数高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).sFlt1(1-3)/FLAG浓度为100 ng/mL时THP-1细胞迁移数约为sFlt1(1-3)/FLAG浓度为0 ng/mL时的25.7%.结论 VEGF对THP-1细胞具有趋化作用,sFlt-1(1-3)可以有效地抑制THP-1细胞向VEGF迁移. 相似文献
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目的:探讨急性炎症反应与甲型H1N1流感的关系及其临床意义.方法:12例正常儿童为空白对照组(A组),观察组12例甲型H1N1流感患儿分为B组(6例检测前已使用激素)和C组(6例检测前未使用激素).结果:①与A组比较,C组患儿单核细胞百分比(MONO%)明显升高,嗜酸性粒细胞计数(EOS)明显降低;B组EOS及EOS%均明显降低(P<0.05).②与C组比较,B组患儿MONO%下降.结论:甲型H1N1流感重症患儿单核/巨噬细胞系统被激活,激素可抑制其急性炎症反应,本研究对甲型H1N1重症患儿临床治疗有指导价值. 相似文献
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乌索酸是一种常见的五环三萜类化合物,本文考察了其对原单核白血病细胞株THP-1的分化诱导作用。乌索酸作用72 h后,通过显微镜形态观察,部分THP-1细胞贴壁生长,形态具有向巨噬细胞分化的特征。结晶紫染色结果显示细胞贴壁程度呈剂量依赖型增长。利用流式细胞分析技术分化标志物,发现CD11b和CD14阳性细胞百分比均有显著上调。Western blotting结果表明乌索酸能上调分化相关蛋白C/EBPα的p42亚基并且下调分化负调控因子c-myc的蛋白水平,且对二者的表达调控作用具有浓度和时间相关性。因此,乌索酸能够诱导THP-1细胞向单核/巨噬细胞方向分化。其作用机制可能是上调C/EBPα的p42亚基,进而下调c-myc,从而达到分化诱导作用。 相似文献
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外源性硫化氢通过抑制SR-A表达减少THP-1源性巨噬细胞内脂质蓄积 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探索外源性硫化氢对THP-1源性巨噬细胞脂质蓄积的影响及机制。方法以硫氢化钠(NaHS)做为外源性硫化氢的供体,采用油红O染色结合光密度法测细胞内脂质含量,RT-PCR和Westernblot法测SR-A mRNA和蛋白表达。结果氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)显著诱导巨噬细胞内脂质蓄积和SR-A表达,而NaHS呈浓度依赖性降低ox-LDL诱导的细胞内脂质蓄积,并显著下调SR-A mRNA和蛋白水平。结论外源性硫化氢可能通过抑制SR-A表达减少ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞脂质蓄积。 相似文献
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目的研究核因子-κB(NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对THP-1巨噬细胞脂质蓄积和胆固醇流出的影响。方法 60 nmol/L PMA孵育THP-1巨噬细胞24 h后,分为3组:对照组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组(100 μg/mL)和PDTC组(100 μg/mL ox-LDL+50 μmol/L PDTC)。用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内胆固醇水平,用液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出。 结果 PDTC抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,明显降低细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量,增加载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)介导的胆固醇流出,但对HDL介导的胆固醇流出无明显影响。结论 PDTC抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,促进apoA-Ⅰ介导的胆固醇流出。 相似文献
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目的 观察不对称二甲基精氨酸(ADMA)对单核细胞THP-1来源的巨噬细胞和泡沫细胞中胆固醇酞基转移酶-1(ACAT-1)的表达及胆固醇含量的影响.方法 分别采用RT-PCR和Westem blot技术检测ACAT-1mRNA和蛋白表达水平.采用酶偶联比色法检测细胞内胆固醇含量.结果 不同浓度的ADMA (0,3.75,7.5,15,or30 μmol/L)对THP-1来源的巨噬细胞和泡沫细胞作用不同时间(6 12,24h)后,巨噬细胞和泡沫细胞内ACAT-1mRNA和蛋白的表达明显上调,细胞内总胆固醇的含量明显升高.结论 ADMA在巨噬细胞形成泡沫细胞过程中可能发挥了重要作用.抑制巨噬细胞和泡沫细胞内ACAT-1可能成为治疗动脉粥样硬化的潜在靶点.Abstract: Abstract:Objective To investigate the effects of asymmetric dimethylarginine(ADMA)on ACAT-I expression and cholesterol content in THP-1-derived macrophages and foam cells. Methods THP-1 cells were induced to differentiate into macrophages and further into foam ceIls.The macrophages and foam cells were exposed to different concentrations(0,3.75,7.5,15,and 30umol/K)of ADMA for varying time lengths(6,12,and 24 h),and the changes in ACAT-1 mRNA and protein levels in the cells were measured with RT-PCR and Western blotting.The cellular cholesterol content Was measured with enzyme-linked colorimetry assay.Results In THP-1-derived macrophages and foam cells,the expression levels of ACAT-1 mRNA and protein and cellular cholesterol content increased significantly in response to ADMA treatment in a time- and concentration-dependent manner. Conclusion ADMA may play all important role in inducing foam cell formation from macrophages. ACAT-1 inhibition targeting the macrophages and foam cells may serve as a potential therapeutic target IN the treatment of atherosclerosis. 相似文献