rhG-CSF对单核细胞鞘氨醇激酶活性影响的初步研究

本研究旨在了解rhG—CSF对单核细胞鞘氨醇激酶（SphK）活性的影响。应用黏附法分离献血员和rhG—CSF动员第5天供者的外周血单核细胞并使用流式细胞术测定单核细胞富集效率，应用RT—PCR检测两种来源单核细胞G—CSF受体和SphK的表达情况，并应用γ^32 P—ATP掺入法测定rhG-CSF处理的单核细胞胞浆SphK活性变化。研究结果表明，献血员和rhG—CSF动员后供者的单核细胞均表达G-CSF受体和SphK；rhG—CSF处理献血员单核细胞对细胞SphK活性无明显影响；rhG—CSF处理供者动员后单核细胞使sphK活性增加（39.6—87．2）％（P〈0.05），且呈与剂量无明显关系的瞬时效应。结论：rhG—CSF能增加rhG-CSF动员后单核细胞的SphK活性。     

rhG-CSF动员对供者血浆S1P浓度的影响

1-磷酸鞘氨醇（SIP）是具有广泛生物学效应的磷脂代谢产物，多种生长因子均能通过影响细胞鞘氨醇激酶（SphK）活性而调节SIP的生成，重组人粒细胞集落刺激因子（dIG—CSF）是一种广泛用于外周血造血干细胞动员的一种细胞因子。本研究主要了解rhG—CSF动员对供者血浆SIP含量的影响。分离供者rhG—CSF动员前和动员第5天外周血单个核细胞和血浆，用RT—PCR检测动员前后单个核细胞SphK mRNA表达情况，并应用γ-^32P-ATP掺入法和SphK酶促反应检测动员前后血浆SIP变化。结果表明，供者动员前后外周血单个核细胞均表达SphK mRNA；在rhG—CSF动员前后供者血浆中均含有SIP，且SIP浓度在rhG—CSF动员前和动员后第5天无明显变化（P〉0．05）。结论：rhG—CSF动员对供者血浆SIP含量无明显影响。     

重组人G-CSF对健康供者外周造血干／祖细胞动员和采集效果的影响因素分析

应用重组人粒系集落刺激因子（rhG—CSF）对健康供者进行动员并采集造血干细胞用于异基因外周血造血干细胞移植已在临床广泛应用，本研究通过对影响外周干细胞动员和采集效果的多因素分析，进一步探讨最佳动员方案及采集时机。采取回顾性方法分析了431例健康供者外周血干细胞动员采集效果，并进一步分析了供者一般特征、rhG—CSF动员天数、每日皮下注射次数、剂量与采集效果的关系。结果表明：rhG—CSF在动员中平均应用剂量为5．7μg／（kg·d），平均采集1．7次，收获单个核细胞数平均为9．57×10^8／kg，CD34^＋细胞平均为4．91×10^6／kg。绝大多数供者不良反应轻微。多因素分析结果显示，采集效率主要与供者体重指数，采集天数相关。rhG—CSF动员第5天采集的供者，其MNC数、CD34^＋细胞数及第一次单采成功率均优于其他时间采集的供者。同时，本组供者应用rhG—CSF剂量较小且剂量范围较窄，rhG—CSF剂量不如采集时间对采集物质量的影响明显。结论：小剂量应用rhG—CSF动员并于第5天开始采集是健康供者造血干细胞动员的较理想方案。     

rhG—CSF对外周血T淋巴细胞功能的影响及其作用机制

人重组粒细胞集落刺激因子（rhG－CSF）动员的供乾外周血单个核细胞（G－PBMNCs）越来越多地用于异基因移植中。与骨髓移植相比，虽然输入10倍以上的成熟T淋巴细胞，但是急性移植物抗宿生病（aGVHD）的发生率和严重程度并未明显增加。临床数据和实验结果表明，G－PBMNCs具有特殊的免疫学特点：G－CSF作用后的T淋巴细胞增殖和反应能力下降，分泌Th2、Tc2细胞因子增加，杀伤能力下降以及CD4^-CD8^-TCRαβ^＋细胞数目增加。这些功能的改变均与aGVHD的下降有关，其原因与单核细胞的抑制作用，树突状细胞诱导向Th2转化以及G－CSF直接诱导向Th2细胞等机制有关。     

重组人白介素11联合粒细胞集落刺激因子动员的自体外周血造血干细胞移植

本研究旨在探索重组人白介素11（rhIL—11）联合重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）动员外周血造血干细胞进行自体外周血干细胞移植的作用。16例预行自体外周血干细胞移植的非霍奇金淋巴瘤及急性髓系白血病患者随机分为实验组（rhIL-11联合rhG—CSF动员）及对照组（rhG—CSF动员），两组均在动员性化疗后血象下降至最低值有回升迹象时应用rhIL—11及rhG—CSF；rhG—CSF5μg/（kg·d）动员中位时间5．5天，rhIL—1150μg/（kg·d）动员中位时间4天；动员后观察外周血白细胞和血小板计数，以及干细胞采集物单个核细胞、CD34^＋细胞、CFU—GM集落数的变化；按常规进行自体外周血干细胞移植后，观察粒细胞及血小板植活时间及单采血小板输注量。结果显示：实验组及对照组动员后外周血白细胞和血小板计数，以及干细胞采集物单个核细胞、CD54^＋细胞及CFU—GM集落数无显著性差异（P〉0．05）。自体外周血干细胞移植后，实验组中性粒细胞数≥0.5×10^9／L的中位时间为10．5天，对照组中为13天．实验组比对照组提前2.5天（P〈0．05）。实验组血小板数≥20×10^9／L的中位时间为11.5天，对照组为13天，实验组比对照组提前1.5天（p〈0．05）。实验组输注单采血小板中住数为3.5单位，对照组为5单位，实验组比对照组减少1．5单位（P〈0．05）。实验组使用动员剂的不良反应主要有低热、乏力、感冒样症状、食欲不振、头晕、肌肉酸痛等，对照组仅出现低热，患者对以上症状均可以耐受，停药后症状自行消失。结论：rhIL—11联合rhG—CSF动员外周血造血干细胞安全有效，在自体外周血干细胞移植后造血重建较快，单采血小板输注量少。     

rhG-CSF体内诱导造血干细胞移植供者外周血T细胞免疫耐受的初步研究

本研究探讨rhG CSF体内应用诱导健康供者外周血T淋巴细胞免疫耐受的机制。对 15例病人进行了外周血干细胞移植 ,借助三色和四色荧光标记技术 ,对供者rhG CSF动员前后外周血T细胞上共刺激分子CD2 8的表达、树突状细胞 (DC)亚群以及CD8 CD2 8- 抑制性T细胞的变化进行了流式细胞术测定。结果显示 ,rhG CSF动员后外周血采集物中CD3 CD2 8 细胞的相对数显著升高 (P <0 .0 1) ,CD2 8表达的平均荧光强度明显降低 (P<0 .0 5 ) ;CD8 CD2 8 细胞的相对数也显著升高 (P <0 .0 1)。但在T细胞上CD2 8总体表达的相对荧光强度无变化 (P >0 .0 5 )。动员前外周血中DC2的含量明显低于正常骨髓 (P <0 .0 1) ,动员后采集物中DC2的数量较动员前和正常骨髓均有显著增加 (P <0 .0 1) ,DC的数量也显著增加 (P <0 .0 1) ,DC1 DC2比值倒置 (P <0 0 1) ,而DC1在动员前后无变化 (P >0 .0 5 )。CD8 CD2 8- 细胞占有核细胞的百分比较动员前明显增加 (P <0 0 5 )。结论 :rhG CSF体内应用后 ,采集物中DC2和CD8 CD2 8- 抑制性T细胞数量的增加可能是外周血T细胞免疫耐受产生的重要机制。     

rhG-CSF动员正常人外周血干细胞过程中对T淋巴细胞增殖的影响

目的　探讨rhG CSF体内对T淋巴细胞增殖影响的作用机制。方法　取行异基因造血干细胞移植的HLA相合的同胞供者应用rhG CSF前后的静脉血和单采物 ,用MTT法测定去除单核细胞前、后的外周血单个核细胞 (MNC)对PHA增殖反应的改变。用流式细胞术检测单核细胞绝对数的改变、抗原呈递细胞 (包括单核细胞和B淋巴细胞 )协同刺激因子CD80 (B7 1 )、CD86(B7 2 )的表达以及贴壁前、后CD1 4+细胞比例。结果　rhG CSF体内作用后 ,外周血中单核细胞绝对数升高了 (4.2 0± 1 .74)倍 ,T细胞在去除单核细胞后增殖能力部分恢复 ,但仍较G CSF作用前平均降低 2 0 .58%。单核细胞表达共刺激信号CD86下降了 (66 .96± 1 3 .87) % ,相对平均荧光强度降低了 (31 .31± 1 2 .91 ) % ,B淋巴细胞中表达CD80 降低了 (45 .77± 2 6 .58) %。结论　G CSF体内作用后 ,单核细胞数量的改变抑制T淋巴细胞增殖 ,但它并不能完全解释T淋巴细胞的反应低下 ,而单核细胞和B淋巴细胞表达低水平的B7分子 ,提示这些抗原提呈细胞功能的改变可能参与T淋巴细胞增殖改变     

G-CSF动员对供者T淋巴细胞亚群功能和急性移植物抗宿主病的影响

为了研究粒细胞集落刺激因子（G—CSF）动员对供者T淋巴细胞亚群功能和急性移植物抗宿主病（aGVHD）的影响，对20例供者G—CSF动员前后的外周血样品，加入佛波醇酯、伊能霉素、莫能霉素体外刺激培养4小时，以3色荧光标记法流式细胞术检测T细胞亚群Ⅰ（分泌INF-γ、INF-α）、Ⅱ型（分泌IL-4、IL-5和IL-10）细胞比例。结果表明：G—CSF动员前外周血CD3^＋IFN-γ^＋、CD4^＋IFN-γ^＋和CD8^＋IFN-γ^＋T细胞的比例分别为3．2％（0％～45．9％）、1．3％（0％～23．8％）和1．5％（0％～22．2％），G—CSF动员后前述细胞比例显著升高，分别为19．2％（0％～53．9％）、9．5％（0％～49．5％）和7.5％（0％～38．1％）。动员前CD3^＋IL-2^＋、CD4^＋IL-2^＋、CD8^＋IL-2^＋T细胞比例分别为1．5％（0％～31％）、0．8％（0％～30.0％）和0％（0％～5．3％），动员后比例亦明显升高，分别为25．7％（0％～51％）、19．8％（0％～39．7％）、4．6％（0％～20．9％）。T细胞各亚群的IL-4阳性细胞比例在动员后升高不明显。移植早期aGVHD发生组供者的Tcl细胞比例显著高于无aGVHD组。动员后高Tc2比例组，其受者中、重度aGVHD的发生率明显低于低Tc2比例组（分别为20．0％和77．8％）。结论：G—CSF动员使供者外周血的Ⅰ型T细胞比例增加，动员后高Tcl细胞比例与移植早期aGVHD发生相关．Tc2比例与中重度aGVHD发生率负相关。     

粒系集落刺激因子对外周血T淋巴细胞亚群的影响及与CD34+细胞动员效果的相关性

本研究观察粒系集落刺激因子(G—CSF)作为造血干细胞动员剂对外周血T淋巴细胞亚群的影响及与CD34^ 细胞动员效果的关系。对26例行自体造血干细胞移植患在G—CSF动员前后收集外周血标本，用流式细胞术检测动员前后CD3^ 、CD3^ CD4^ 、CD3^ CD8^ 、CD3^ CD4^ CD8^ 及CD3^ CD4^-CD8细胞绝对数量的变化并与外周血CD34^ 细胞的动员效果进行相关性分析。结果表明：GCSF动员后外周血CD3^ 、CD3^ CD4^ 、CD3^ CD4^ CD8^ 及CD3^ CD4^-CD8细胞的绝对数量分别增加2.23，2．62，2.99及10．96倍，而CD3^ CD4^ CD8^ 细胞的变化无统计学意义(P=0．243)。各亚群细胞的变化与CD34^ 细胞动员效果比较，仅CD3^ CD4 CD8细胞的变化与CD34^ 细胞动员效果间具有良好的相关性，r=0．796，P=0.000。结论：G—CSF将造血干细胞由骨髓动员到外周血的同时，使外周血中T细胞亚群的绝对数量发生不同程度的变化。在各T淋巴细胞亚群中CD3^ CD8^-细胞的增加与CD34^ 细胞的动员效果间具有统计学意义的相关性。     

重组粒细胞集落刺激因子对血液恶性肿瘤病人外周血白细胞的影响

目的：探讨血液系统恶性肿瘤病人化疗后应用rhG—CSF外周血白细胞的形态变化。方法：采用血液分析仪进行外周血白细胞计数，新鲜血涂片瑞氏染色后油镜下观察白细胞形态，同时进行中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP)。结果：①应用rhG—CSF前，部分中性粒细胞胞浆内中性颗粒数减少；应用rhG--CSF后，中性粒细胞胞浆内“中毒”颗粒数、空泡数和Dohle小体数增加；用rhG—CSF前、后比较，各组中性粒细胞胞体大小和核分叶无明显变化，嗜酸、嗜碱细胞、单核细胞及淋巴细胞形态也无明显改变。②用rhG—CSF后，各组NAP积分显高于用药前。结论：G-CSF可引起外周血中性粒细胞形态出现变化，内、外源性G—CSF均能改变中性粒细胞形态，且变化相似。     

重组人粒细胞集落刺激因子动员对淋巴细胞功能相关抗原1／细胞间黏附分子1信号途径诱导CD4^＋T淋巴细胞活化及增殖的影响

目的：观察在异基因外周血造血干，祖细胞移植中重组人粒细胞集落刺激因子动员对淋巴功能相关抗原1/细胞间黏附分子1信号途径诱导的外周血CD4＋T淋巴细胞的影响，验证重组人粒细胞集落刺激因子动员对淋巴细胞功能相关抗原1/细胞间黏附分子1信号通路的抑制作用。 方法：选择2006—06/2007—06在解放军总医院血液科异基因外周血造血干细胞移植前进行重组人粒细胞集落刺激因子动员的10例健康供者，对治疗方案均知情同意，且得到医院伦理道德委员会批准。给予重组人粒细胞集落刺激因子10μg，（kg·d）进行动员，在动员前1天和动员后第5天取供者外周静脉血，用miniMACS磁珠分选系统分离纯化CD4＋T淋巴细胞，分别用CD3单克隆抗体OKT3＋细胞间黏附分子1、佛波酯＋离子霉素刺激活化CD4^＋T淋巴细胞，用双色荧光标记检测动员前后CD4^＋T淋巴细胞激活后活化标记CD69，CD25的表达；用四甲基偶氮唑盐法检测动员前后OKT3＋细胞间粘黏附分子1、佛波酯＋离子霉素刺激CD4^＋T淋巴细胞增殖能力变化。 结果：①纯化后CD4^＋T淋巴细胞纯度均在90％以上。②动员后OKT3＋细胞间黏附分子1组、佛波酯＋离子霉素组CD4^＋T淋巴细胞活化标记CD69和CD25的表达均明显低于动员前（P〈0．01）。②动员后OKT3＋细胞间黏附分子1组、佛波酯＋离子霉素组CD4^＋T淋巴细胞增殖率均明显低于动员前（P〈0．05）。 结论：重组人粒细胞集落刺激因子动员可能抑制了淋巴功能相关抗原1/细胞间黏附分子1协同刺激信号，从而使CD4^＋T淋巴细胞活化、增殖能力下降。     

低剂量rhG-CSF对56例非血缘供者外周造血干细胞动员

本研究观察低剂量人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对非血缘健康供者的影响,探讨用于中华造血干细胞捐赠者资料库提供的非血缘健康供者外周造血干细胞动员方案。56例非血缘健康供者接受rhG-CSF 5μg/(kg.d)皮下注射,在动员第4、5两天或第5、6两天采集干细胞,观察动员效果及不良反应,检测动员前后血常规指标、CD3+、CD4+、CD8+和CD20+细胞比例;对采集物进行单个核细胞(MNC)和CD34+细胞计数;对所有供者随访至2006年5月31日。结果显示:在rhG-CSF动员过程中出现1级毒副作用(按WHO分级标准):腰背酸痛17.9%(10/56)、焦虑失眠8.9%(5/56)、疲乏4.5%(3/56)等,无需特殊处理,无需终止动员。第4、5两天采集和第5、6两天采集所得的MNC分别是(5.95±1.52)×108/kg和(7.19±2.12)×108/kg;CD34+细胞分别是(3.03±1.09)×106/kg和(7.92±2.50)×106/kg。血红蛋白水平、血小板量、CD3、CD4、CD8、CD20百分比动员前后无变化。结论:5μg/(kg.d)rhG-CSF用于非血缘健康供者的动员是安全而有效的。     

Phenotypic and immunologic characteristics of docetaxel-mobilized peripheral blood stem cells in mice

Effective mobilization of peripheral blood stem cells is vital for transplantation of patients after high-dose chemotherapy and provides a convenient source of stem cells for genetic engineering and other studies, but optimal mobilization strategies have not been defined. Recent studies show that in the presence of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor (rhG-CSF), docetaxel (DXT) is an effective mobilization agent. This study was performed to evaluate the phenotype and immunologic properties of DXT-mobilized stem cells. Administration of DXT + rhG-CSF to normal C57Bl/6 mice induced a 75-fold increase in blood hematopoietic progenitors and a significant increase in both CD3(+) (T cell) and DX5(+) [natural killer (NK)] cells when compared to untreated mice. The cytotoxicity of DXT + rhG-CSF-mobilized cell populations against YAC-1 and B16F10 cell lines was not significantly different from that of untreated mice. When compared to cyclophosphamide + rhG-CSF, DXT + rhG-CSF-mobilized cell populations yielded a greater number of T and NK cells, with significantly higher cytotoxic effector function. These results suggest that DXT + rhG-CSF-mobilized PBSCs retain potent immunologic capacity with a high number of the functional cellular subsets than those normally present in peripheral blood, which may be important in maintaining the antitumor immunity after transplantation.     

重组人白细胞介素11联合重组人粒细胞集落刺激因子动员自体外周血干细胞移植治疗急性白血病

目的:观察重组人白细胞介素11(rhIL-11)联合重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员自体外周血干细胞治疗急性白血病的效果及不良反应。方法:急性白血病患者14例,其中治疗组6例(实验组)在化疗后外周血白细胞计数降至最低时,皮下注射rhIL-113μg/d及rhG-CSF250μg/d,连用至外周血白细胞升高至10×109/L左右时(采集干细胞时)停药。单用rhG-CSF组为对照组。结果:采集前外周血血小板、CD34+细胞数实验组高于对照组(P<0.05),采集产品的CD34+、CD34+/CD38-、CD34+/CD41a+、CD34+/CD42b+细胞数实验组均高于对照组(P<0.05);移植后实验组血小板>20×109/L平均时间为14.5d,对照组为20.2d(P=0.06)。不良反应主要是肌肉关节疼痛及水肿,均为Ⅰ～Ⅱ级。结论:rhIL-11与rhG-CSF动员外周血干细胞治疗急性白血病安全有效。     

中剂量rhG-CSF动员对供者外周血免疫细胞组成的影响

本研究观察12例健康供者在使用10μg/(kg·day)rhGCSF动员前后白细胞总数变化。应用外周血涂片瑞氏染色对白细胞进行形态学分类,使用流式细胞术分析动员前后外周血单个核细胞中T细胞、B细胞、NK细胞和单核细胞比例的变化。结果发现,动员前1天外周血白细胞计数中位数为6.25(4.7-7.8)×109/L,其中淋巴细胞中位数为2.07(1.63-3.1)×109/L,单核细胞中位数为0.163(0.078-0.414)×109/L;动员第5天外周血白细胞计数中位数为37.47(24-72.57)×109/L,其中淋巴细胞中位数为3.22(1.46-5.31)×109/L,单核细胞中位数为1.2(0.706-3.627)×109/L。供者外周血白细胞的增加为动员前的6.26±2.14倍(P<0.01),其中淋巴细胞的增加为动员前的1.45±0.76倍(P<0.05),单核细胞数增加为动员前的7.48±4.41倍(P<0.01)。流式细胞术分析发现,动员前CD3 T淋巴细胞占外周血单个核细胞(PBMNC)比例的中位数为46.96%[(32.36-57.45)%],动员后为40.94%[(25.31-48.9)%];动员前CD4 /CD8 淋巴细胞比例为1.27±0.46,动员后为1.36±0.51;动员前CD4 CD8 T淋巴细胞占PBMNC比例的中位数为0.41%[(0.16-1.51)%],动员后为0.49%[(0.09-2.0)%];动员前CD16 CD56 NK细胞占PBMNC比例的中位数为13.98%[(4.08-25.08)%],动员后为16.65%[(12.06-33.05)%];动员前CD3 CD16 CD56 NK-T细胞占PBMNC比例的中位数为2.75%[(0.37-6.38)%],动员后为3.13%[(0.46-5.95)%];动员前CD20 B淋巴细胞占PBMNC比例的中位数为9.28%[(5.97-16.33)%],动员后为9.94%[(7.36-20.41)%];动员前CD14 单核细胞占PBMNC比例的中位数为12.48%[(3.54-19.35)%],动员后为29.52%[(16.51-36.76)%]。动员后CD14 单核细胞在PBMNC中的比例比动员前增加2.87±1.51倍(P<0.05);动员前后T淋巴细胞、NK细胞、NK-T细胞、B淋巴细胞在PBMNC中的比例以及动员前后CD4 /CD8 淋巴细胞比均无显著变化(P>0.10)。结论:rhGCSF动员引起的单核细胞增加可能在异基因外周血造血干/祖细胞移植的相关事件中发挥着重要作用。     

人重组粒细胞集落刺激因子动员后采集骨髓对健康供者外周血采集物成份的影响

本研究探讨健康供者体内应用人重组粒细胞集落刺激因子（G—CSF）后采集骨髓对外周血采集物成份的影响。62例健康供者皮下注射rhG—CSF5μg/（kg·d），连用5天，其中31例供者在第4、5天分别采集骨髓和外周血采集物（A组）；另31例供者于第4、5天均单采集外周血单个核细胞（B组）。应用流式细胞术检测两组供者外周血采集物中的淋巴细胞、CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD14^＋、CD34^＋细胞以及CD3^＋CD4^-CD8^-T细胞的数量。结果显示，A组供者每微升外周血采集物中单个核细胞中CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD14^＋、CD34^＋细胞以及CD3^＋CD4^-CD8^-T细胞的中位含量分别1．56×10^5μ1、8．56×10^4μl、6．12×10^4μl、3．38×10^4μl、2．27×10^4μl、3．83×10^4μl、744μl及3588μl，与B组的1．40×10^5μl、7．34×10^4μ1、5．32×10^4l、3．06×10^4μl、1．83×10^4μl、3．21×10^4μl、554μl及3120μl的差异无统计学意义（p〉0．05）；A组外周血采集物中CD4^＋细胞与CD8^＋细胞的比值[1．52（0．54—2．87）]、单核细胞与CD3^＋细胞的比值[0．57（0．15—1．64）]以及CD3^＋CD4^-CD8^-T细胞与CD3^＋细胞[0．064（0．018—0．673）]的比值与B组[1．68（0．31—3．35）]、[0．59（0．18—1．25）]、[0．063（0．021—0．136）]的差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论：健康供者体内应用rhG—CSF后采集骨髓对外周血采集物成份无影响，对rhG—CSF动员的同一健康供者可单独采集骨髓、外周血采集物或同时采集两种采集物以满足临床移植的需要。