急性白血病T细胞与免疫球蛋白受体基因重排的临床意义

目的：探讨急性白血病化疗效应差异及基因受体重排在急性非淋巴细胞白血病中序列交叉存在。方法：应用聚合酶链反应技术对免疫球蛋白（ＩｇＨ）及Ｔ细胞受体（ＴＣＲγ）基因重排者测定。结果：该方法敏感性达１０＾－５,完全缓解（ＣＲ）后１８０ｄ检测,阳性率仍５５．５％（２５／４５）,２０例ＡＮＬＬ中５例检测到ＩｇＨ受体基因重排,观察６０ｄ有复发。结论：ＩｇＨ、ＴＣＲγ基因重排是检测残留白血病的敏感指标,但在ＡＮＬＬ中有失真现象。化疗效应的定量评价,有助于制定个体化的治疗方案。     

人T细胞白血病细胞株Jurkat的TCR基因重排

背景与目的:近年的一些体外实验研究发现,重组激活基因(recombi-nationactivatinggene)编码的RAG1与RAG2(recombinationactivatinggenes,RAGs)蛋白能够介导DNA链的转位(transposition)作用,因而,可能与淋巴系统肿瘤性疾病的发生有关,但迄今尚未有明确定论。我们在实验中发现,代表T细胞发育成熟阶段的人白血病细胞株Jurkat同时表达重组激活基因RAG1和RAG2,并且经适当诱导后有RAGs表达的变化。本研究旨在确证Jurkat细胞是否发生RAGs介导的T细胞受体(T-cellreceptor,TCR)基因重排。方法:采用巢式和半巢式PCR检测T细胞受体D!-J!之间的信号结合T细胞受体删除DNA环(signaljointT-cellreceptorexcisionDNAcircles,sjTRECs);连接介导的PCR(LM-PCR)法检测TCRβ链位点重排中间物-重组信号序列(recombinationsignalsequence,RSS)断点;RT-PCR法检测V(D)J重排第二阶段非同源末端连接(non-homologousendjoining,NHEJ)途径中的核心蛋白Ku70/Ku80及末端脱氧核苷酸转移酶(terminaldeoxynucleotidyltransferase,TdT)。结果:在Jurkat细胞DNA中检测到结合区具有多样性特征的TCRDβ2-Jβ2sjTRECs和RSS5′端和3′端断裂点,并检测到TdT、Ku70/Ku80的表达。结论:Jurkat细胞有TCR基因重排的发生。Jurkat细胞可能成为研究RAGs和TCR基因重排与T细胞淋巴瘤的一个潜在的细胞模型。     

Twist-1基因在髓系白血病细胞中的表达及其作用

目的:检测Twist-1基因在白血病患者和造血系统恶性肿瘤细胞系中的表达情况,并探讨其高表达对髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响.方法:用Real-time PCR检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)、急性淋巴细胞白血病(acute lymphoid leukemia,ALL)、慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者和正常人的骨髓单个核细胞对照以及造血系统恶性肿瘤细胞系中Twist-1 mRNA表达情况.构建Twist-1过表达及干扰载体,制备慢病毒并感染髓系白血病细胞系K562、U937、KG-1a,通过细胞计数实验、集落形成实验、流式细胞术、Annexin V/PI方法评价Twist-1对白血病细胞增殖、集落形成能力、周期、凋亡的影响.结果:Twist-1在AML及CML患者中的表达水平显著高于对照(均P＜0.05),而ALL患者与对照组没有显著差异(P＞0.05).在K562、U937、KG-1a中过表达及干扰实验证实,Twist-1高表达促进肿瘤细胞增殖、集落形成并抑制细胞凋亡;干扰Twist-1表达则效果相反.结论:Twist-1高表达于AML、CML髓系白血病细胞,并促进白血病细胞的增殖和抑制凋亡.     

以T细胞受体γ链基因重排为标志研究白血病克隆演化

通过多采酶链反应（ＰＣＲ）及限制酶分析，确定白血病克隆ＴｃＲγ重排方式。１８例发生ＴｃＲγ重排的ＡＬＬ病人中，４例初诊与复发时重排方式发生变化。ＴｃＲγ重排变化的发生不限于免疫表型或某一年龄的病人。病程中ＴｃＲγ基固重排的变化反映了白血病细胞仍可不断演化，是白血病克隆演化的基因证据。探讨了这一研究的临床意义。     

慢性髓系白血病患者体外热休克诱导自身T细胞杀伤活性的研究

本项目研究了21例CML患者,探讨热休克能否诱导CML细胞表达HSP70和促进自身T细胞对CML细胞的杀伤(ALK)活性,并了解γδT细胞与此活性的关系.结果显示热休克对CML靶细胞的自然释放率无影响.当E/T比为50:1时,T细胞对自身CML靶细胞具有不同程度的ALK活性,T细胞对自身未热休克的CML靶细胞的ALK活性为(9.32±12.78)%,而对自身热休克的CML靶细胞的ALK活性为(25.43±22.56)%(P<0.01).有12例患者对自身未热休克CML靶细胞的ALK活性为0,而对自身热休克CML靶细胞的ALK活性为(40.2±22.4)%.若以ALK活性>15.00%为阳性,则21例患者中仅有4例(19.05%)其T细胞对自身未热休克的CML靶细胞ALK阳性(33.13±9.67)%,但有10例(47.62%)患者T细胞对热休克后的CML靶细胞ALK阳性,活性为(43.80±17.39)%,两者有显著性差异(P<0.01).     

急性髓系白血病患者HOX11基因的表达及意义

目的 探讨HOX11基因在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中的表达及对预后的影响,为个体化治疗提供依据.方法 应用多重巢式RT-PCR方法对73例初诊AML患者的融合基因进行检测,对HOX11基因表达阳性和阴性的患者进行标准治疗后的疗效进行分析.结果 在预后良好组、预后中等组及预后不良组AML患者的标准治疗中,HOX11基因阳性表达患者的第一疗程完全缓解率(complete remission rate)并不高于阴性表达的患者(P＞0.05),而复发或死亡率(relapse or mortality rate)与HOX11基因阴性表达的患者比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HOX11基因的表达可能影响AML患者的预后.     

PCR-SSCP检测非霍奇金淋巴瘤患者骨髓克隆性T细胞受体基因重排及其临床意义

背景与目的：进一步了解非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin‘s lymphoma,NHL)患者骨髓标本克隆T细胞受体（T cell receptor,TCR)基因重排情况及临床意义。方法：应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR)联合单链构象多态性（single-strand conformation polymorphism,SSCP),分析43例NHL患者骨髓标本TCRVγI-Jγ基因重排情况。结果：43例NHL患者有26例（60．5％）存在克隆性TCRVγI－Jγ基因重排。16例骨髓形态学检查未发现淋巴瘤细胞浸润者中有3例（18．8％）发现克隆性TCRVγ－Jγ基因重排。此3例患者分别于4－9个月后行骨髓形态检查时发现淋巴瘤细胞浸润。27例骨髓形态学检查有淋巴瘤细胞浸润者有23例（85．2％）存在克隆性TCRVγI－Jγ基因重排阳性,26例PCR扩增阳性病例经SSCP分析发现7例（26．9）％存在寡／亚克隆重排。7例存在寡／亚克隆重排患者经3－11个月有5例（71．4％）发展为白血病,存在寡／亚克隆重排NHL患者1年内转化为白血病的发生率显著高于无寡／亚克隆重排患者（10．5％）（P＜0．005）。结论：应用PCR检测NHL患者骨髓标本克隆性TCRVγ－Jγ基因重排可较骨髓形态学检查更早发现NHL患者骨髓浸润微小病灶。具有寡／亚克隆NHL患者更易发展为白血病,还可发展为急性非淋巴细胞白血病。     

流感疫苗促进髓系白血病骨髓细胞来源树突状细胞的功能

目的: 研究流感疫苗对髓系白血病骨髓源性树突状细胞（dendritic cells,DCs）功能的影响及其机制。方法：分离髓系白血病患者\[急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia, AML)19例, 慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML) 8例\]骨髓单个核细胞（mononuclear cell,MNC）,用GMCSF和IL4诱导7 d,获得未成熟白血病DCs,然后加入全病毒灭活流感疫苗（whole inactivated influenza vaccine, WIV）、裂解病毒流感疫苗（split influenza vaccine,SIV）或TNFα继续培养24 h。R显带法分析DCs染色体核型,流式细胞仪检测DCs表型,ELISA法测定DCs培养上清IL12的水平,CCK8法检测DCs诱导的CTL对自体白血病细胞的细胞毒作用。结果：19例AML患者中的15例及8例CML患者的MNC全部成功诱导出DCs。与TNFα刺激的白血病DCs相比,流感疫苗刺激的白血病DCs表面分子（CD80、CD83、CD86、HLADR）表达明显上调（P<005）,培养上清中IL12的分泌水平明显增加（P<0.05）,其诱导的CTL可显著杀伤自体白血病细胞（P<0.05）;WIV刺激的DCs在表型、IL12分泌水平及细胞毒作用方面均较SIV刺激的DCs显著增高（P<0.05）。结论： 流感疫苗促进髓系白血病源DCs表型成熟及IL12的分泌,增强其诱导的CTL对自体白血病细胞的杀伤作用。     

急性髓系白血病17种基因异常的检测

目的:探讨应用多重巢式RT-PCR、荧光定量PCR、PCR-SSCP银染技术检测初诊急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中17种基因异常表达及在各亚型的分布情况,为个体化治疗提供依据.方法:采用多重巢式RT-PCR检测融合基因,PCR检测FLT3-ITD,荧光定量PCR检测NPM1的突变类型(A、B、D、I和R)及C-kit/D816V,PCR-SSCP银染技术检测CEBPA.对140例初诊AML患者(APL除外)的骨髓进行17种基因异常分析,并与骨髓染色体检测结果进行对比.结果:在140例初诊AML患者中检出基因异常占69例(49.3％),其中包括FLT3-ITD、NPM1、C-kit/D816V、CEBPA、HOX11、CBFβ/MYH11、AML-ETO、MLL/AF6、MLL/AF10、dupMLL、EVI1.同时对140例初治AML患者采用G显带技术行染色体核型分析,128例获得可供分析的染色体核型,其中57例(44.5％)检出染色体结构和数目异常.PCR在急性髓系白血病基因检测中较染色体核型分析具有更高的检出率.结论:PCR协同染色体核型分析检测初诊AML患者的基因异常,能提高临床诊断率、指导疾病危险度分组,为判断预后及监测微小残留病提供更好的理论依据.     

线粒体DNA在急性髓系白血病中的检测意义

目的探讨线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)拷贝数改变在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中的临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测60例AML患者骨髓及外周血的mtDNA;以20例健康人外周血为对照,评估mtDNA(ND1单拷贝基因)拷贝数和核基因组人球蛋白(human globulin,hGB)的相对值在AML中的检测意义。结果初发或复发/难治AML患者外周血和骨髓液中mtDNA相对拷贝数高于治疗后缓解组(P<0.01);而同一患者外周血与骨髓液中mtDNA相对含量无明显差异(初发或复发/难治组,P=0.112;治疗后缓解组,P=0.667)。治疗后缓解AML患者外周血mtDNA含量与健康人差异无统计学意义(P=0.13),而初发或复发/难治AML患者外周血mtDNA含量高于健康人(P<0.01)。结论初发或复发/难治的AML患者骨髓液及外周血mtDNA含量均高于治疗后缓解AML患者,且同一患者外周血与骨髓液mtDNA含量无差异。检测AML患者外周血mtDNA相对拷贝数在一定程度上可以反映疾病状态。     

急性粒—单核细胞白血病及急性单核细胞白血病MLL基因重排的检测

了解ＭＬＬ基因重排在急性粒－单核细胞白血病（Ｍ４）及急性单核细胞白血病（Ｍ５）中的发生率及其特点。方法用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法对１０例Ｍ４及２７例Ｍ５患者进行ＭＬＬ基因重排的检测。结果共发现５例Ｍ５患者伴有ＭＬＬ基因异常,此组患者发病年龄轻,发病时白细胞数高,肝脾肿大明显,易并发中枢神经系统白血病,完全缓解率低,平均生存期短。结论ＭＬＬ基因重排在Ｍ５中发生率高,且此基因异常是预后不佳的标志。     

c-kit在急性白血病中的表达及其临床意义

目的 :研究c kit受体 (c kitR ,CD1 1 7)在急性白血病 (AL)中的表达。重点了解c kitR表达对急性非淋巴细胞白血病 (ANLL)的诊断价值及其与ANLL的临床和生物学特征的关系。方法 :采用流式细胞术 (FCM)分别检测并比较 2 4例急性淋巴细胞白血病 (ALL)和 47例ANLL初诊患者骨髓单个核细胞 (MNC)跨膜c kitR表达的阳性率及阳性水平 ,并设立 1 0例正常人骨髓标本作为阴性对照组。结果 :ALL患者的c kitR表达的阳性率及阳性水平与正常人相比无显著性差异 (P >0 .0 5)。ANLL患者的c kitR表达率及阳性水平则均显著高于正常人和ALL患者(P均 <0 .0 1 )。c kitR阳性率以M1 、M2 最高 ,M4最低。ANLL患者c kitR表达与外周血白细胞计数、肝脾肿大无关(P >0 .0 5) ,但与染色体核型异常及LDH水平增高有关 (P均 <0 .0 5)。结论 :ANLL患者的c kitR阳性表达率及阳性水平均显著高于正常人和ALL患者 ,提示c kitR可作为AL患者MIC分型诊断的髓系免疫表型依据 ,可用以协助ANLL的诊断以及ANLL与ALL的鉴别诊断     

应用特异性基因标志早期诊断中枢神经系统白血病

目的 探讨特异性基因标志对急性淋巴细胞白血（ＡＬＬ）患者中枢神经系统白细胞９ＣＮＳＬ）早期诊断的价值。方法 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法扩增ＡＬＬ患者不同期脑脊液免疫球蛋白重锭（ＩｇＨ）基因重排和Ｔ细胞受体γ（ＴＣＲγ）基因重排。结果 １２例ＡＬ 脊液标本两种ＰＣＲ基因扩增６例（９份）获阳性配临床结果相符；２例患者临床不符ＣＮＳＬ，但ＰＣＲ阳性淋巴经观察治疗后确诊。结论 本法特异性强，且有较高的灵     

急性白血病MLL基因重排检测的临床意义

 目的　研究混合谱系白血病（MLL）基因重排在急性白血病（AL）中的发生率、产生融合基因的常见类型及其临床意义。方法　采用多重巢式RT-PCR法对109例AL患者进行免疫表型检测,分析MLL基因重排阳性患者的临床特征。结果　109例AL中7例发生MLL基因重排,发生率为6.4 %,其中AML 4例（1例为M2,1例为M4,2例为M5）, ALL 3例,均为B-ALL。多重巢式RT-PCR检测到的融合类型为MLL-AF4、MLL-AF6、MLL-AF9、MLL-AF10、MLL-ENL。MLL基因重排阳性患者外周血WBC高于MLL基因重排阴性患者,差异有统计学意义（P＝0.019）。结论　多重巢式RT-PCR是检测MLL基因重排快速有效的方法。伴MLL基因重排的AL患者WBC较高,预后差。     

慢性粒细胞性白血病FLT3基因及FLT3/ITD基因突变的检测及意义

背景与目的:大部分急性髓细胞性白血病(acutemyeloidleukemia,AML)患者出现FLT3基因异常表达,20%～30%AML患者会出现FLT3/ITD基因突变并与临床预后相关。本研究旨在了解慢性粒细胞白血病(chronicmyeloidleukemia,CML)患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变情况。方法:采用聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)检测53例CML慢性期和34例CML加速期或急变期患者DNA水平FLT3基因及FLT3/ITD基因突变。结果:53例CML慢性期患者3例(5.7%)出现FLT3基因阳性,34例加速期或急变期患者有19例(55.9%)出现FLT3基因阳性,CML加速期和急变期患者FLT3基因阳性率显著高于慢性期患者(P<0.001),87例CML患者,仅2例(2.3%)出现FLT3/ITD基因突变。结论:在CML患者中,FLT3基因表达主要见于加速期或急变期患者;CML很少发生FLT3/ITD基因突变;FLT3基因及FLT3/ITD基因突变阳性CML患者可能提示预后不佳,此方面研究尚需深入。     

WT1基因在急性白血病中的表达及其临床意义

 【摘要】　目的　探讨急性白血病（AL）患者体内WT1基因的表达情况及其临床意义。方法　采用荧光定量聚合酶链反应对急性髓系、淋巴细胞白血病66例患者WT1基因进行检测,并比较髓系各亚型之间的基因表达量差异,观察基因表达水平与病程及预后之间的相关性,同时分析造血干细胞移植患者的病程与WT1基因表达之间的关系。结果　66例患者中,87.5 %（14／16）的急性淋巴细胞白血病及76.0 %（38／50）的急性髓系白血病患者WT1基因表达阳性;髓系各亚型中,M3的表达水平低于其他各亚型（与M1、M2、M4、M5相比,P值分别为0.040、0.007、0.006、0.010）。WT1基因的表达水平与疾病状态密切相关,完全缓解组表达水平明显低于未缓解组（P＝0.018）及复发组（P＝0.003）,其滴度的再次升高可提前1.5个月预测复发。WT1基因与造血干细胞移植患者的预后相关,WT1基因转阴的患者较持续表达及一度下降后再次上升的患者预后好。结论　WT1基因在AL患者中的表达可代表微小残留病灶,急性髓系白血病各亚型中M3表达水平相对较低,WT1表达水平与临床病程及预后密切相关。     

SSX2基因在急性白血病中表达的临床意义

目的：研究滑膜肉瘤X断裂点基因2（SSX2）在急性白血病中的表达及临床意义。方法：逆转录聚合酶链反应检测72例急性白血病（AL）中SSX2的表达,包括23例急性淋巴细胞白血病（ALL）及急性髓细胞白血病（AML）。结果：在72例AL患者中有38例SSX2表达阳性（52.78%）,在ALL中SSX2表达阳性率为56.52%,而在AML中SSX2表达阳性率为51.02%,两者之间没有显著性差别（P〈0.05）。在非M3型AML患者中SSX2表达阳性的完全缓解率（CR）为60.87%,而在SSX2表达阴性的完全缓解率为89.47%。在随访的16例SSX2表达阳性患者观察治疗后的SSX2表达阳性率,完全缓解后SSX2表达可以转为阴性,SSX2表达持续阳性的患者会较早复发。如果患者没有完全缓解,则SSX2表达不会转为阴性。结论：在AML及ALL患者中SSX2表达没有差别（P〉0.05）,SSX2阳性表达非M3型AML患者中CR率较低,SSX2可以作为AML患者较差的预后指标。     

FLT3/ITD基因突变在不同血液肿瘤患者的表达及其临床意义

Objective:To analyze Fms-like tyrosine kinase 3(FLT3)/intemal-tandem duplications(ITD)murations in various kinds of hematologic malignancy patients.Methods:FLT3/ITD gene mutations were detected by polymerase chain reaction (PCR)in 103 acute myeloid leukemia(AML)cases,63 acute lymphocytic leukemia(ALL)cases,53 chronic myelogenous leukemia(CML)cases in chronic phase(CML-CP),34 CML cases in biast crisis(CML-BC),11 chronic lymphatic leukemia(CLL)cases,36 myelodysplastic syndrome (MDS)cases,9 multiple myeloma(MM)cases and 13 non-hodgkin's lymphoma (NHL)cases with marrow infiltration.Results:The expressions of FLT3/ITD gene mutations were detected in 22.3% AML cases.in 6.5%CML-BC cases.in 5.6%MDS cases and in 2.6%ALL cases.The two ALL cases with FLT3/ITD mutation were diagnosed as ALL-L2 with morphology and both with myeloid antigen expression,but finally were diagnosed as acute mixed-lineage leukemia after immunology examination.FLT3/ITD gene muIations were not detected in CML-CP,MM.NHL and CLL cases.In the 23 AML patients with FLT3/ITD gene mutation,including 2 of 8 M1(2.5%),8 of 33 M2(24-2%),7 of 24 M3(29.3%),2 of 11 M4(18.2%).3 of 21 M5(14.3%),1 of 5 M6(20%),and 0 of 1 M7 cases,and there were no significant differences in the positive rates of FLT3/ITD mutations between the FAB subtypes(P＞0.05).Statistical analyses showed that in AML patients,FLT3/ITD was associated with a higher pefipheral blood white cell(WBC)counts[(41.23±32.56)x 100/L vs (11.36±9.89)x109/L(P＜0.01)],higher percentage of bone marrow blast cells[(72.78±21.79)%vs(51.26±20.78)%(P＜0.05)],and higher cumulative relapse rates(63.6%vs 27.7%,P＜0.025)than those negative.Conclusion:FLT3/ITD gene mutation mainly pccurred in AML patients.and might be a strong prognostic factor which was associated with high peripheral WBC counts.bone marrow blast cell proportion and a increased relapse risk in AML.Detection of FLT3/ITD gene mutation might provide insights to explore a more accurate genotyping of leukemia,differential diagnosis between AML and ALL.subdivide risk level in AML and estimate prognosis of leukemia.