巨细胞病毒单克隆抗体的研究进展

自Ｐｅｒｅｉｒａ等１９８２年制备出巨细胞病毒单克隆抗体以来，国内外学者先后建立了多种不同性质的巨细胞病毒单克隆抗体。本文概述了这些单克隆抗体在巨细胞病毒的预防、诊断方面的应用，以及对巨细胞病毒的生物学特性和致病机理的研究。     

巨细胞病毒单克隆抗体的制备及其初步应用

用CMV AD-169株感染自制人胚肺纤维母细胞,制备抗原,免疫BALB/c小鼠,取其牌细胞与Sp2/0-Ag14细胞融合,建立了一株稳定分泌抗HCMV特异性McAb的3B_6杂交瘤细胞株。3B_6McAb经鉴定属于IgG_3亚类。用间接免疫荧光法和间接酶免疫法证实为抗CMV特异性抗体。用微量细胞培养中和试验证实3B_6McAb在加有豚鼠血清后可阻止HCMV感染后细胞病变的出现。3B_6 McAb经间接免疫荧光法检测中,晚期孕妇羊水细胞中HCMV抗原,在68例标本中有一例为阳性,阳性率为1.47％。该法方便,快速可为在胎儿时期诊断先天性HCMV感染提供依据。     

抗巨细胞病毒早晚期抗原单克隆抗体制备及在病毒培养物鉴定中的初步应用

目的 制备抗CMV早晚期抗原单克隆抗体并在病毒培养物鉴定中初步应用.方法 CMV感染MRC-5细胞24h、48h和72h后甲醛灭活的可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞NS-1进行融合.酶免法筛查阳性杂交瘤并有限性稀释法进行克隆.免疫荧光及印迹对筛选后的克隆进行鉴定,最终获得的杂交瘤制备腹水并使用Protein G进行纯化.纯化后单抗应用于CAP室间质评标本以及临床标本CMV培养物的鉴定.结果 3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合后初步筛查出约110株阳性克隆.剔除与其它抗原有交叉反应、抗体效价低、非全覆盖早晚期抗原的克隆最终获得抗CMV单抗杂交瘤1株,即23B5-1.免疫荧光显示23B5-1株单抗与CMV感染后3h-120h的MRC-5细胞均反应,即覆盖即刻、早期和晚期抗原.免疫印迹试验显示23B5-1株单抗与CMV抗原25KD-50KD之间的5个蛋白条带结合.23B5-1株单抗免疫球蛋白亚型为IgG1.Protein G纯化腹水后的单抗效价≥1∶12800.纯化单抗染色鉴定6份室间质评及10份临床标本CMV培养物全部符合.结论 初步应用显示制备的抗CMV早晚期抗原单克隆抗体性能良好.     

巨细胞病毒新分离株外感染健康人白细胞的实验研究

为研究巨细胞病毒感染免疫细胞能力，本文选择６株从婴儿肝炎综合征患儿尿中新分离的ＣＭＶ体外感染健康人外周血各类白细胞后检测ＣＭＶ早期抗原，结果显示新分离病毒体外可感染粒细胞，单核细胞，淋细胞表达早期抗原，其感染阳性率明显高于已适应实验室生长的ＣＭＶ，ＡＤ１６９株病毒，培养液中加入ｒＩＬ２，ＩＦＮ－ｒ可增加分离病毒对淋巴细胞的感染，而加入丝裂原ＰＨＡ，ＣｏｎＡ无此作用，提示巨细胞病毒感染免疫能力较强。     

一株与正常人细胞成分反应的巨细胞病毒单克隆抗体的鉴定

用ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株抗原建立了一株分泌ＨＣＭＶＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株Ｎ４Ｅ６。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现ＭｃＡｂ与ＨＣＭＶ抗原和正常人成纤维细胞（ＨＥＦ）抗原均有多条免疫沉淀带出现：与ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株抗原反应的沉淀带为８９Ｋ，８７Ｋ，７３Ｋ和４２Ｋ；与Ｄａｖｉｓ株抗原反应的为８９Ｋ，８７Ｋ，４４Ｋ；与８１６地方株抗原反应的为８９Ｋ，８７Ｋ，７３Ｋ，４４Ｋ；与ＨＥＦ抗原反应的为８９Ｋ，８７Ｋ，４４Ｋ。表明Ｎ４Ｅ６除能识别ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株和８１６地方株特异成分７３Ｋ，外，尚能识别ＨＣＭＶ和ＨＥＦ共同成分８９Ｋ，８７Ｋ和４４Ｋ。     

巨细胞病毒单克隆抗体的研究进展

自Ｐｅｒｅｉｒａ等１９８２年制备出巨细胞病毒单克隆抗体以来，国内外学者先后建立了多种不同性质的巨细胞病毒单克隆抗体。本文概述了这些单克隆抗体在巨细胞病毒的预防、诊断方面的应用，以及对巨细胞病毒的生物学特性和致病机理的研究。     

抗入巨细胞病毒极早期抗原单克隆抗体的制备（文摘）

作者用杂交瘤技术制备出抗人巨细胞病毒(HCMV)极早期抗原的单克隆抗体(McAb)，探讨HCMV感染的早期临床诊断。     

肾移植术后巨细胞病毒抗原检测及其临床意义

目的 建立一种早期、快速诊断人巨细胞病毒（ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＨＣＭＶ）感染的抗原检测方法,以了解肾移植术后受者的ＨＣＭＶ感染情况并探讨其临床意义。方法 利用抗ＨＣＭＶ前早期抗原和早期抗原的单克隆抗体,建立了免疫组化Ｅｎｖｉｓｉｏｎ＾ＴＭ二步法。用于检测外周血多形核白细胞（ＰＭＮＬ）中ＨＣＭＶ抗原（前早期抗原和早期抗原）,诊断ＨＣＭＶ活动性感染。结果 检测肾移植术后受者８６     

1426例育龄妇女巨细胞病毒的检测分析

巨细胞病毒(CMV)感染在人群中广泛存在.而且越来越多的证据证明,妇女在妊娠初期受CMV原发感染是引起起胎儿宫内感染和发育缺损的重要原因.甚至有人认为目前它在致畸方面比风疹更重要.自1997年11月开始,对荣成地区育龄妇女进行了巨细胞病毒的检测,检测及治疗随访结果现报告如下.     

单克隆抗体与原位杂交检测早期培养细胞中巨细胞病毒的比较（文摘）

巨细胞病毒(CMV)感染人群(如AIDS病人，化疗患者和新生儿等)日益增多．追切需要一种快速敏感检测诊断CMV的方法。目前，检验诊断CMV的方法有：用免疫荧光法检测CMV早期抗原和分离培养病毒，观察CPE的出现等。本文详细地比较了4种检测早期培养细胞CMV诊断方法。这4种方法是(1)直接McAb荧光染色法(DFA)；(2)间接McAb荧光染色法(IFA)；(3)生物素标记DNA探针的原位杂交及(4)辣根过氧化物酶直接标记DNA(HRP—DNA)探针的原位杂交。     

一株与正常人细胞成分反应的巨细胞病毒单克隆抗…

用ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株抗原建立了一株分泌ＨＣＭＶ ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株Ｎ４Ｅ６。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｏｌｔ分析发现ＭｃＡｂ与ＨＣＭＶ抗原和正常人成纤维细胞抗原均有多条免疫沉淀带出现：与ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株抗原反应的淀淀带为８９Ｋ，８７Ｋ，７３Ｋ和４２Ｋ；与Ｄａｖｉｓ株抗原反应的为８９Ｋ，８７Ｋ，４４Ｋ，与８１６地方株抗原反应的为８９Ｋ，８７Ｋ，７３Ｋ，４４Ｋ；与ＨＥＦ抗原反应的为８９Ｋ，８７Ｋ     

原位DNA杂交和单克隆抗体染色法对离心培养的临床标本中巨细胞病毒的检测

一种巨细胞病毒(CMV)的原位DNA杂交检测盒用以捡测离心培养物中的CMV，对其检测效果进行了评价。61份临床标本，以单克隆抗体染色法有17份CMV阳性(27．8％)．而DNA杂交法对17份阳性标本中有15份显示阳性(24．5％)。早期检出的比较中，离心后DNA杂交法需要58h，而作为对照的单克隆抗体染色法只需16h。虽然DNA杂交法对CMV感染的研究和捡测是一种好方法，但对离心培养物的检测，现在DNA杂交技术还不能完全取代单克隆抗体的应用。