听源性惊厥大鼠惊厥后NMDA受体NR1亚基蛋白表达和功能研究

目的 :探讨惊厥后大脑皮质N 甲基 D 门冬氨酸 (NMDA)受体亚基NR1蛋白表达及其功能改变与癫痫发病机制的关系。方法 :P77PMC大鼠按惊厥后不同时间随机分为 6组 ,免疫组化每组 6个样本 ,配基结合实验每组 5个样本 ,制备大脑冰冻切片和大脑皮质突触膜。利用免疫组化技术 ,观察听源性癫痫易感大鼠P77PMC惊厥后不同时间NR1亚基蛋白的表达 ,应用配基结合实验观察听源性惊厥大鼠P77PMC惊厥后大脑皮质突触膜对3H MK80 1的结合改变 ,以及NMDA受体激动剂对其结合的影响。结果 :大脑皮质在惊厥后 4hNR1蛋白表达即开始增加 ,2 4～48h达高峰。反应体系中无任何NMDA受体激动剂时 ,惊厥后大脑皮质突触膜对 3H MK80 1的结合有增加趋势 ,但差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;当反应液中加入NMDA受体激动剂时 ,惊厥后大脑皮质突触膜对 3H MK80 1的结合明显增加 ,除惊厥后 4h与正常对照组比较差异无显著性外 ,其他惊厥后各时间点与正常对照组比较差异均有显著性(P <0 0 1)。结论 :听源性惊厥大鼠P77PMC惊厥后 ,大脑皮质NMDA受体NR1亚基蛋白表达增加 ,NMDA受体对其激动剂的敏感性增加 ,提示NR1亚基参与了P77PMC大鼠惊厥的发生与发展 ;受体兴奋性的改变可能与神经网络兴奋性增高及癫痫易感性的保持有关     

惊厥易感大鼠听源性惊厥后脑内c—fos蛋白表达

目的：探讨遗传性癫痫易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ听源性惊厥的神经回路。方法：Ｐ７７ＰＭＣ大鼠以标准化听刺激诱发Ⅴ级吸源性惊厥，分别在惊厥后０、５、１、２、４、２４ｈ断头、取脑切片，行Ｆｏｓ免疫组化染色观察。结果：惊厥后脑内Ｆｏｓ样免疫洒色强度 呈明显的时间依赖和区域特点。多数核团在惊厥后０．５－１ｈ开始出现Ｆｏｓ表达，２－４ｈ达高峰，２４ｈ明显回落，不同核团其时程也存在差异，Ｆｏｓ表达最先出现在下丘平面尾     

NMDA受体亚基NR1的体外表达及功能检测

目的：体外表达ＮＭＤＡ受体亚基ＮＲ１并了解其电生理学特性,探讨体外表达受体亚基的意义。方法：将克隆的ＮＭＤＡ受体亚基ＮＲ１质粒ＤＮＡ经体外转录成ＲＮＡ,显微注射到爪蟾卵母细胞后进行受体表达,采用双电极电压钳位技术记录表达的ＮＲ１亚基的激活电流。结果：注射ＮＲ１亚基ＲＮＡ的爪蟾卵母细胞能表达出具有电生理学功能的受体,其激活电流能被Ｄ－ＡＰ５阻断等特性,说明该表达的ＮＲ１亚基具有ＮＭＤＡ受体的功能。结     

新生大鼠反复惊厥对NMDA受体表达的长期影响

目的：研究反复惊厥对大鼠脑内N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体表达，以及成年期认知功能和惊厥阈的长期影响。方法：生后6d(用P6表示，下同)的Wistar大鼠随机分成两组，每组6只，惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作1次，每次持续30min，连续6d；对照组同样操作但不吸入三氟乙醚。两组大鼠于P60-P65行Morris水迷宫实验，检测大鼠的学习记忆功能。于P75时给予大鼠腹腔注射戊四唑(PTZ)测定大鼠的惊厥阈。随即断头处死大鼠，分离大脑皮质和海马，匀浆提取细胞膜蛋白，应用免疫印记法测定NMDA受体亚基l(NRl)和NR2A-2D表达的变化。结果：从P6l至P65，两组大鼠寻找平台时间均逐渐缩短，惊厥组大鼠在P65的平均寻找平台时间较对照组显著延长。惊厥组大鼠注射PTZ后发生惊厥的潜伏期与对照组比较差异无显著性。在大脑皮层，惊厥组大鼠较对照组NRl和NR2B表达水平明显下调，在海马这两种亚基表达水平无明显改变，在大脑皮层和海马区，惊厥组较对照组NR2A表达水平明显下调，NR2C表达水平明显上调。两组在皮层和海马均无NR2D表达。结论；新生大鼠反复惊厥可导致远期认知障碍，同时伴有NMDA受体的数量和结构上的长期改变，NMDA受体表达的这种改变可能在发育期惊厥导致的脑长期认知功能损害中起重要作用。     

听源性惊厥易感性大鼠在惊厥发作后上丘神经元内c—fos的表达

目的 观察听源性惊厥易感性大鼠惊厥发作时上丘内ＦＯＳ免疫阳性神经元的分布。方法 实验动物分４组。ＰＳ组：电铃（１０６ｄＢ，１０－２０ｋＨｚ，６０ｓ）刺激下呈急性惊厥发作的惊厥鼠；ＰＮ组：非急性惊厥发作的惊厥鼠；ＷＳ组：电铃刺激的正常鼠：ＷＮ组；无电铃刺激的正常鼠，每组各５只，ＰＳ和ＷＳ组电铃刺激后存活２ｈ。结果 （１）只有在ＰＳ大鼠的上丘可见有典型的ＦＯＳ样免疫阳性神经元，且其只分布在第Ⅳ，Ⅵ，Ⅶ     

听源性惊厥易感大鼠海马苔藓纤维发芽结构及功能研究

项目简介：癫痫是一种常见的慢性脑部疾患，对于癫痫发病机制的研究一直是神经科学研究中的一个热点领域，尽管经过长期、多方面的深入研究，癫痫发生及其反复发作的细胞和分子机制迄今仍未完全明了，其发病过程中的许多环节尚不清楚，在癫痫的发生发展过程中，海马结构具有极重要的作用，大量研究表明，海马内苔藓纤维发芽所致的突触重组是癫痫病理生理过程中的一个非常重要的变化，     

遗传性癫Jian易感大鼠惊厥后脑内N—甲基—D—天冬氨酸受体亚基NR1、NR2A、NR2B蛋白的表达

目的：探讨惊厥后大脑皮质N－甲基－D－天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体亚基蛋白表达与癫Jian发病机制的关系。方法：利用免疫组化技术,观察听源性癫Jian易感大鼠P77PMC惊厥后不同时间大脑皮质、海马等脑区NMDA受体亚基NR1、NR2A,NR2B蛋白表达状况。结果：惊厥后大脑皮质,海马齿状回,CA1、CA3等脑区NR1蛋白表达呈时间依赖性增高。大脑皮质在惊厥后4hNR1蛋白表了开始增加,24－48h达高峰,海马齿状回、CA1和CA3等脑区4h达高峰,8h开始下降,24h恢复正常。惊厥后4－8h,在海马CA1区NR2A亚基蛋白表达短暂性降低。而在大脑皮质、海马齿状回和CA3等脑区,惊厥后时间点NR2A,NR2B蛋白表达均无明显改变。结论：听源性惊厥后NMDA受体亚基蛋白表达的变化提示NMDA受体亚基组成的改变,这种改变可能与神经网络兴奋性增高及癫Jian感性的保持有关。     

铅暴露大鼠脑不同区域NMDA受体亚基(NR1、NR2A、NR2B)表达的研究

目的：观察铅暴露大鼠中不同脑区NMDAR1（NR1）、NMDAR2A（NR2A）和NMDAR2B（NR2B）亚基蛋白和mRNA水平的表达情况。方法：采用Western Blot及RT-PCR技术,测定NR1、NR2A和NR2B亚基蛋白和mRNA在铅暴露大鼠脑中额叶皮质、新小脑、海马及纹状体中的表达情况。结果：铅暴露大鼠中NR1、NR2A和NR2B亚基的蛋白水平和mRNA表达在各个脑区均有不同程度的下调。结论：在铅暴露大鼠的额叶皮质、海马、新小脑和纹状体中,NMDA受体亚基NR1,NR2A和NR2B的表达在mRNA水平就已经发生了改变。     

大鼠海马NMDA受体NR1亚单位蛋白的基础表达量与学习记忆相关

目的 :探讨大鼠海马 N-甲基 - D-门冬氨酸 (NMDA)受体 NR1亚单位蛋白表达水平与学习记忆的关系。方法 :用新事物识别模型 (novel object recognize model)和 Morris水迷宫 ,分析 SD大鼠的新事物探究能力和空间学习能力 ,根据指标最强的 2 0 %和最弱的 2 0 % ,分别选取新事物探究能力强和弱 2组 ,以及空间学习能力强和弱 2组。分离制备上述各组大鼠海马的膜蛋白 ,用 NR1亚单位特异性抗体作免疫印迹分析 ,测定 NR1亚单位蛋白的含量。结果 :新事物探究能力强组大鼠海马的 NR1亚单位蛋白含量比弱组高 6 0 % (P<0 .0 1) ,空间学习能力强组大鼠海马 NR1亚单位蛋白含量比弱组高 4 5 .4 % (P<0 .0 5 )。结论 :大鼠海马 NMDA受体 NR1亚单位蛋白的基础表达量与新事物探究能力和空间学习能力相关。     

Humanin抑制NR1亚基表达和NR2B亚基磷酸化的神经保护作用

目的：探讨Humanin （HN）通过抑制N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR1亚基的表达和NR2B亚基的磷酸化在兴奋性神经毒中发挥的保护作用,并阐明其可能的作用机制。方法：利用原代培养的Wistar大鼠皮层神经元建立NMDA诱导的兴奋性神经毒模型,将神经元分为对照组、NMDA组、NMDA+MK-801（MK-801）组和NMDA+HN（HN）
组。流式细胞术荧光定量检测各组神经元膜NMDA受体NR1亚基蛋白的表达,Western blotting法检测各组神经元膜NMDA受体NR2B亚基Tyr1472位点的磷酸化水平。结果： 倒置相差显微镜观察,NMDA组中的神经元胞体肿胀,个别细胞变成圆形,胞体周围光晕模糊,神经元突起大部分消失,表现出明显的神经毒性作用。流式细胞术免疫荧光定量检测,与对照组比较,NMDA组NR1亚基蛋白的平均荧光强度值明显增加（P<0.05）;与NMDA组比较,MK-801组和HN组的NR1亚基蛋白的平均荧光强度值明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测,各组神经元的NR2B亚基总蛋白的表达水平无改变;与对照组比较,NMDA组NR2B亚基蛋白Tyr1472位点的磷酸化水平明显升高（P<0.05）;与NMDA组比较,MK-801组和HN组均能降低NR2B亚基蛋白Tyr1472位点的磷酸化水平（P<0.05）。 结论： NMDA受体NR1亚基蛋白表达水平的增加和NR2亚基磷酸化可能参与NMDA诱导的兴奋性神经毒作用;HN可能通过抑制NR1亚基的表达和NR2B亚基的磷酸化而发挥对神经元的保护作用。     

异氟烷对老年大鼠认知功能及海马NMDA受体NR1亚基磷酸化的影响

目的 探讨老年大鼠吸入异氟烷后其认知功能变化及NMDA受体NR1亚基磷酸化的分析.方法 应用18月龄SD大鼠24只,雌雄各半,随机分成3组:0%异氟烷组(10%)、1.2%异氟烷组(11.2%)和1.8%异氟烷组(11.8%),n=8.对各组大鼠行Morris水迷宫测试,结束用westtern-blot检测磷酸化NMDA受体NR1亚基.结果 11.2%组与10%组在第1天潜伏期比较有显著性差异(P<0.05),第2天以后各时间点潜伏期和空间探索实验的成绩与10%组同时间比较均无差异(P>0.05);11.8%组与I0%组潜伏期和空间探索实验的成绩比较均有显著性差异(P<0.05).11.8%组与10%组NMDA受体磷酸化NR1分析比较有显著性差异(P<0.05).结论 1.8%异氟烷引起老年大鼠的认知功能下降,推测可能与海马NMDA 受体NR1亚基磷酸化降低有关.     

甲基苯丙胺与HIV-Tat蛋白协同致大鼠纹状体NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达

目的 观察甲基苯丙胺 (MA) 与HIV-Tat蛋白协同作用致大鼠相关脑区N-甲基-D-天冬氨酸 (NMDA) 受体NR2B亚基和诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS) 的表达变化, 探讨MA与HIV-Tat协同作用对神经系统的影响.方法 50只健康雄性SD大鼠随机分为实验组:MA组 (10 mg/kg MA, 每日2次腹腔注射, 连续4 d) 、HIV-Tat组 (10μg HIV-Tat注入大鼠脑纹状体) 和MA+HIV-Tat组 (按MA组注射MA 4 d后按HIV-Tat组注入HIV-Tat) ;对照组:生理盐水腹腔注射或纹状体内注射.各组大鼠分别于注射结束后48 h和7 d处死, 麻醉后用多聚甲醛灌注, 取出脑组织并固定, 石蜡包埋, 作冠状切面, 用免疫组化和蛋白免疫印迹法对中毒大鼠纹状体中NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达进行观察, 并进行图像分析, 测量其平均光密度值, 与对照组比较并进行统计学分析.结果 各实验组与对照组比较, 纹状体内NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达均有不同程度增高, 差异具有统计学意义 (P<0.05) ;其中MA+HIV-Tat组与MA组、HIV-Tat组比较, NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达显著增高 (P<0.05) .结论 MA与HIV-Tat蛋白的共同作用能够显著增加NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达, 揭示NMDA受体NR2B亚基和iNOS参与了MA与HIV-Tat蛋白的协同神经毒性机制.     

大鼠大脑中动脉闭塞后基底节NR1和NR2A及NR2B的表达

目的：探讨基底节区N－甲基－D天冬氨酸受体亚单位蛋白NR1、NR2A和NR2B在脑缺血时的表达与缺血时间的关系。方法：选择“栓线法”大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型,用定量免疫印迹技术测定局灶性脑缺血后不同时点基底节区NR1和NR2A及NR2B的表达。结果：因侧NR1在MCAO后1h表达明显下降,然后表达逐渐增加;NR2A在MCAO后1h为低水平表达,4－6h明显增加;NR2B以缺血后5h表达增加最明显。结论：3种亚单位蛋白的表达水平在一定范围内随缺血时间延长而增加,支持脑缺血半暗带理论。     

早期干预对未成熟大鼠脑损伤学习记忆及NMDA受体NR1亚单位表达的影响

目的 探讨早期干预对未成熟大鼠脑损伤后学习记忆及NMDA受体NR1亚单位表达的影响.方法 选2日龄SD大鼠制作未成熟大鼠脑损伤模型,随机分为丰富环境(EE)组、贫瘠环境(IE)组、标准环境(SE)组,每组20只.另选20只2日龄SD大鼠,仅分离左侧颈总动脉,不予结扎和缺氧,作为对照组(Sham).EE组于术后第3天行触摸和丰富环境干预,总干预时间为30d.标准环境组和对照组均饲养于标准环境中,不行早期干预.干预结束后行学习记忆能力检测,同时分别于生后第7、35天取各组大鼠海马脑组织免疫细胞化学检测NR1亚单位表达.结果 生后5周龄时,EE组学习记忆能力较SE组及IE组明显改善[逃避潜伏期(ELP):4.75±2.85与12.45±3.23、8.42±2.23比较,空间探索能力:61.36±8.12与50.24±8.29、40.12±7.99比较,P<0.05];且丰富环境组海马CA1区NR1阳性反应物着色最强,与标准环境组、贫瘠环境组及对照组比较差异有统计学意义(43.2±6.6与59.5±8.1、88.5±15.5、62.3±9.5比较,P<0.01).结论 早期干预可增强未成熟大鼠脑损伤的学习记忆能力,NMDA受体NR1亚单位表达增多可能是其机制之一.     

七氟醚对缺氧无糖损伤大鼠海马 NR1亚基mRNA表达的影响

目的探讨七氟醚对缺氧无糖(oxygen and glucose deprivation，OGD)损伤大鼠海马NMDA受体NR。亚基mRNA表达的影响。方法大鼠海马脑片随机分为3组(n=3)，用RT—PCR方法检测对照组、缺氧组及七氟醚组大鼠离体海马脑片OGD损伤14min恢复氧糖供应孵育1、2、4h后NMDA受体NR1亚基mRNA的表达。结果恢复氧糖供应1、2h后NR1亚基mRNA的表达3组无明显差异，而缺氧组4h后NR1亚基mRNA的表达增高，七氟醚组恢复氧糖供应后4hNR1亚基mRNA的表达明显降低。结论七氟醚可通过下调OGD损伤引起的NR1亚基mRNA的表达发挥脑保护作用。     

发育期大鼠三氟乙醚致反复惊厥后海马NMDA受体亚基表达变化

目的:研究三氟乙醚反复惊厥对发育中大鼠脑内N-甲基-D-门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate, NMDA)受体亚基NR1、NR2A、NR2B蛋白表达的影响.方法:三氟乙醚致发育期大鼠惊厥30次,分别于末次惊厥后1、3、7 d灌注固定、断头,采用免疫组化方法观察不同时间点脑内NMDA受体亚基NR1、NR2A、NR2B蛋白表达的变化.结果:在末次惊厥后1 d,海马齿状回、CA1、CA3脑区NR1蛋白表达明显增加,分别为对照组的135.2%、144.7%、146.3%(P值均<0.01),惊厥后3 d,表达有所减弱,但在CA1、CA3区仍高于正常水平, 分别为对照组的133.8%、125.7%(P<0.05),惊厥后7 d,表达恢复接近正常水平.在末次惊厥后1 d,NR2A蛋白表达在上述脑区均明显增加,分别为对照组的135.6%、129.4%、130.5%(P＜0.01),惊厥后3 d,蛋白表达开始下降,虽然仍高于对照组,分别为对照组的113.2%、113.7%、114.3%,但差异无显著性(P值分别为0.11,0.12, 0.17 ),惊厥后7 d,下降接近正常水平(P值均>0.05);NR2B亚基蛋白表达,在末次惊厥后1 d、3 d有轻度增加,但差异无显著性(P值均>0.05).结论:发育期大鼠三氟乙醚致反复惊厥后脑内NR1亚基蛋白表达显著增加,在海马CA1、CA3区可持续至3天,NR2A亚基蛋白表达仅在末次惊厥后1 d显著增加,而NR2B表达无显著改变,提示惊厥后脑内NR亚基的构成可能发生了改变,并且可能进一步对大鼠脑兴奋性及其发育产生较长期影响.     

小鼠持续性脑缺血后NMDA受体亚单位表达的变化

目的：研究小鼠持续性脑缺血后不同脑区NMDA受体亚单位表达的变化及其与病理损伤之间的联系。方法：采用大脑中动脉阻断法制作小鼠持续性脑缺血模型，取缺血后不同时间的皮层、海马、皮层下脑组织，用免疫印迹技术测定NMDA受体亚单位ζ1和ε1及ε2蛋白的含量。同时作冰冻切片和苏木素伊红染色，计算相应脑区神经元密度。结果：NMDA受体ζ1和ε1及ε2亚单位表达的改变发生于缺血后5h内，皮层下3个亚单位表达均明显增加，海马则各亚单位表达变化不一。脑梗塞灶和相关脑区神经元密度显著减小均出现于缺血后5h，相关脑区神经元死亡严重程度依次为皮层下组织和海马CA1区及大脑颞叶皮层Ⅲ－Ⅳ层。结论：小鼠持续性脑缺血，缺血侧脑组织NMDA受体亚单位ζ1和ε1及ε2表达的变化发生在明显的病理损害之前，表达变化程度因脑区不同，与相关脑区神经元损害的程度相应。     

发育期大鼠高热惊厥前后海马γ-氨基丁酸B受体亚基表达的变化

目的：研究高热惊厥(febrile seizures，FS)对发育期大鼠脑内γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)B受体亚基GABABR1与GABARR2蛋白表达的影响。方法：采用热水浴诱导大鼠高热惊厥模型。隔日诱导惊厥1次，共诱导10次，末次惊厥后24h处死大鼠。发育期大鼠随机分为3组：对照组(n＝24)，1次高热处理组(n＝28)，10次高热处理组(n＝40)。高热处理组根据是否出现惊厥再分为1次高热惊厥组(FS1，n＝16)与1次高热未惊厥组(F1，n＝12)，10次高热惊厥组(FS10，n＝15)与10次高热未惊厥组(F10，n＝13)。采用免疫组化方法观察不同次数高热惊厥大鼠脑内GABABR1与GABABR2蛋白表达的变化。结果：FS10大鼠海马齿状回、CAl-CA3区GABABRl和GABABR2蛋白表达明显低于F10、F1、FSl和对照组；F10大鼠上述脑区GABABRl和GABABR2蛋白表达低于F1、FS1和对照组；F1及FS1大鼠与对照组相比差异无显著性；海马各区GABABR1与GABABR2表达的改变大部分平行，但10次高热惊厥后GABABR2在CA1—CA3区下降更明显，而GABABR1在齿状回下降更明显。结论：反复高热惊厥及反复高热均可使发育期大鼠脑内GABABR亚基蛋白表达降低，高热惊厥的影响较单纯高热更为明显，提示GABABR亚单位与发育期大鼠高热惊厥及其脑损伤密切相关。GABABR1与GABABR2改变的不平行可能与受体亚单位组合的可塑性改变有关，这种改变可能导致抑制功能的改变。     

丙泊酚对大鼠的空间学习记忆和海马NMDA受体NR2A亚基表达的影响

目的观察丙泊酚单次麻醉对成年大鼠空间学习记忆能力的影响以及海马NMDA受体NR2A亚基的变化。方法 30只SD大鼠随机分成丙泊酚组（n=15）和对照组（n=15）。给予丙泊酚50mg/kg腹腔注射作为诱导剂量,待翻正反应消失后在腹腔追加50mg/kg丙泊酚加深麻醉。对照组不予任何处理。待翻正反应恢复12h后应用Morris水迷宫评价丙泊酚对于大鼠空间学习记忆的影响。同时通过免疫荧光技术检测海马NMDA受体NR2A亚基的表达变化。结果丙泊酚组平均学习潜伏期较对照组显著缩短（P〈0.05）,靶象限活动时间百分比明显延长（P〈0.05）,丙泊酚组NMDA受体NR2A亚基的表达增加。结论丙泊酚单次麻醉后成年大鼠的空间学习记忆能力提高,这种学习记忆能力的提高可能和NMDA受体NR2A亚基的表达上调相关。     

抑郁大鼠脑内NMDA受体NR1、NR2B表达及中药干预作用

目的研究抑郁大鼠脑内N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚单位NR1mRNA、NR2BmRNA的表达及中药颐脑解郁方的干预作用。方法二级雄性大鼠分为正常组、抑郁组、治疗组、对照组,后3组采用慢性应激方法结合孤养法建立抑郁模型,治疗结束后,取脑组织,采用逆转录PCR(RT-PCR)实验方法,研究NR1mRNA、NR2BmRNA在抑郁模型大鼠脑内左前额皮质、海马的表达及中药颐脑解郁方的干预作用。结果抑郁组大鼠海马、前额皮质的NR1、NR2B表达明显高于正常组,中药颐脑解郁方干预后可明显降低NR1mRNA、NR2BmRNA在脑内的表达。结论抑郁模型大鼠脑内NR1mRNA、NR2BmRNA表达升高,中药颐脑解郁方可使之明显下调,中药颐脑解郁方的抗抑郁作用可能与下调NMDA受体(NMDAR)的表达有关。