卵巢肿瘤患者血清CP2及抗独特型mAb 6B11Ab2的检测意义

目的　探讨应用卵巢癌抗原 CP2 及卵巢癌抗独特型单克隆抗体 6 B1 1 Ab2 进行血清中相关抗体检测的可行性及临床应用价值 .方法　应用 EL ISA法对 95例恶性卵巢肿瘤、40例良性卵巢肿瘤及 9例子宫内膜异位症患者血清进行卵巢癌相关抗原及抗体的检测 ,并以 5 0例正常女性为对照 .结果　非粘液性卵巢上皮癌抗原阳性率为 10 0 % ,抗体阳性率为 6 6 .7% ,高于粘液性卵巢上皮癌、非上皮性卵巢恶性肿瘤及生殖系统其他恶性肿瘤 ,并且明显高于卵巢良性肿瘤 (P<0 .0 1) .结论　卵巢癌相关抗原及抗体的检测对临床诊断及辅助鉴别诊断有一定实用价值     

卵巢癌抗抗独特型单克隆抗体3D12的制备及初步研究

目的:制备卵巢癌抗抗独特型单克隆抗体并进行初步鉴定,为深入研究卵巢癌疫苗的主动免疫机制奠定基础.方法:以卵巢癌抗独特型单克隆抗体6B11作为免疫原,采用杂交瘤技术制备抗抗独特型单克隆抗体3D12.经酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫组织化学、流式细胞学、免疫印迹杂交等检测其特异性结合抗原的性质;竞争抑制实验鉴定其特异性结合的抗原表位.结果:获得1株稳定分泌3D12的杂交瘤细胞,所分泌的3D12能够特异性结合6B11及卵巢癌初始抗原OC166-9,并能竞争抑制COC166-9(抗OC166-9的单克隆抗体Ab1)与OC166-9的结合.免疫印迹杂交显示,3D12与COC166-9免疫沉淀的蛋白的相对分子质量相同.该抗体为IgM,亲和力约为8.34×10⁷ L/mol.结论:卵巢癌抗抗独特型单克隆抗体3D12属Ab1样Ab3,间接证实6B11为抗原内影像型抗独特型抗体.     

抗独特型卵巢癌疫苗的研究

根据免疫网络学说,抗独特型抗体中的Ab2β具有模拟原始抗原的作用,同时也是重要的免疫调节因子.抗独特型抗体能打破免疫耐受,作为肿瘤疫苗具有良好的应用前景.卵巢癌相关抗原OC166-9在大多数上皮性卵巢癌有表达,我中心经过系列研究陆续制备了鼠源的模拟OC166-9的抗独特型抗体6B11、6B11单链抗体(6B11scFv)、6B11scFv和人粒细胞集落刺激因子(hGM-CSF)的融合蛋白(6B11GM).鼠源抗体反复应用于人体可产生人抗鼠抗体,为了实现人源化、增加6B11scFv的免疫原性、提高分子质量、降低鼠源性,我中心又制备了抗独特型微抗体(6B11VLVHhc).同时为了验证上述抗体的免疫作用,我们构建了人淋巴细胞免疫重建的荷人卵巢癌的严重联合免疫缺陷小鼠模型.上述系列研究为6B11卵巢癌抗独特型疫苗用于临床积累了大量实验依据.     

卵巢癌患者血清及腹水中白细胞介素-6水平的临床意义

目的　探讨IL - 6在卵巢癌诊断中的作用。方法　通过检测卵巢癌患者血清及腹水中IL - 6水平并与正常及卵巢良性肿瘤妇女血清IL - 6水平对照 ,了解IL - 6水平与卵巢癌的相关关系。结果　卵巢癌患者血清及腹水中IL - 6水平明显高于良性卵巢上皮肿瘤及正常妇女组 ,但良性疾患组与正常妇女组之间无差异。结论　IL - 6与卵巢癌密切相关 ,IL - 6水平的检测可作为卵巢癌早期诊断及鉴别卵巢良、恶性肿瘤的特异性指标。     

卵巢癌6B11抗独特型微抗体诱导抗肿瘤免疫应答的体外实验

目的:研究6B11抗独特型微抗体在体外抗肿瘤免疫情况,探讨其作为卵巢癌疫苗的可能性.方法:分离人外周血单个核细胞,用6B11抗独特型微抗体刺激并培养.采用3HTdR参入法、51Cr细胞毒实验分别观察淋巴细胞增殖情况和细胞毒作用,ELISA方法测定用6B11微抗体刺激后培养上清液中IFN-γ水平的变化,流式细胞术检测微抗体刺激后淋巴细胞表型的改变.结果:6B11抗独特型微抗体可以刺激人外周血淋巴细胞的增殖,最佳刺激剂量为20 mg/L;并对OC166-9表达阳性的卵巢癌细胞系有细胞毒作用;用6B11微抗体刺激后培养上清液中IFN-γ水平升高;淋巴细胞的表型表现为,疫苗刺激后CD3 的细胞明显增高, CD4 的细胞也增加, CD8 的细胞增加不明显.CD4 /CD8 的比率明显增高,差异有统计学意义.结论:6B11抗独特型微抗体在体外可诱导机体产生特异体液免疫和细胞免疫反应,为抗独特型微抗体疫苗的临床应用提供了一定的实验依据.     

卵巢癌患者血清和组织中MG_7-Ag含量测定及对预后的影响

目的探讨单克隆抗体MG7对卵巢恶性肿瘤的诊断价值及对患者预后的影响。方法应用免疫放射分析法和免疫荧光流式细胞技术同时检测 46例卵巢恶性肿瘤患者血清和组织中MG7 Ag水平 ,并进行了随访。结果①单克隆抗体MG7诊断卵巢癌的敏感性血清学方法为 5 2 .2 % ,组织学方法为 6 3.0 % ,二者之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。②MG7血清值和FI值呈明显正相关 (r =0 .395 ,t =2 .85 2 ,P <0 .0 5 )。③血清MG7阳性组 3年生存率显著低于MG7阴性组 (P <0 .0 5 )。结论单克隆抗体MG7对卵巢恶性肿瘤具有一定的诊断价值 ,血清MG7水平测定可作为判断卵巢癌患者预后的一个参考指标。     

精子蛋白17 mRNA在卵巢癌中的表达及临床意义

目的：测定精子蛋白(Sp)17mRNA在肿瘤组织中表达情况。方法：设计合成特异性引物，建立测定人Sp17mRNA的RT-PCR的方法，以β-肌动蛋白(β-actin)作为内标。检测13份原发卵巢癌组织标本、3份卵巢癌腹水标本和13份其他肿瘤组织标本。用正常睾丸组织RNA作模板进行RT-PCR作为阳性对照，正常卵巢组织为阴性对照。阳性对照可出现2个条带，其中Sp17扩增产物近500bp，β-actin产物234bp。阴性对照仅出现β-actin条带。结果：13份原发卵巢癌组织标本中，11例表达Sp17mRNA，阳性率为84．6％。3份卵巢癌腹水标本中，1份检出Sp17mRNA。其他肿瘤组织标本全部阴性。结论：Sp17mRNA在原发卵巢恶性肿瘤中高水平表达，可以作为临床诊断的辅助指标。     

六种肿瘤相关抗原自身抗体联合CA125检测对卵巢癌早期诊断的价值

目的:探讨肿瘤相关抗原(TAAs)P53、Survivin、IMP1、CyclinD1、C-myc及CyclinE自身抗体联合CA125检测对卵巢癌早期诊断的价值。方法:应用间接ELISA法检测78例原发性上皮性卵巢癌、60例卵巢良性肿瘤、100例正常对照血清中以上6种TAAs抗体,电化学发光法测定血清CA125含量。结果:卵巢癌患者血清中TAAs抗体的阳性率高于正常对照组(P均<0.05),每种TAA单独检测的阳性率为11.5%～35.9%;对6种TAAs抗体进行组合,随着联合抗体数目的增加,检测阳性率随之增加,6种TAAs抗体联合检测的阳性率为55.1%;6种TAAs抗体联合CA125检测卵巢癌的灵敏度为96.2%,特异度为76.0%,阳性预测值为75.8%,阴性预测值为96.2%,阳性似然比为6.25,阴性似然比为0.14;6种TAAs抗体联合CA125检测早期卵巢癌的阳性率为89.3%,明显高于单独应用CA125的检测阳性率(χ2=4.909,P=0.027)。结论:利用6种TAAs抗体组合检测卵巢癌具有较高的真实性,可能为卵巢癌诊断提供一定的参考价值;6种TAAs抗体联合CA125检测可明显提高卵巢癌的检测灵敏度,特别是对早期卵巢癌的检测可能具有重要价值。     

HK6和B7-H4在卵巢癌诊断价值的探讨

目的:分别检测卵巢正常和卵巢良性病变和卵巢癌组织及血清中HK6、B7-H4表达水平,探讨HK6和B7-H4联合诊断卵巢癌的临床意义。方法:免疫组织化学SP法和酶联免疫吸附实验检测卵巢组织及血清中HK6和B7-H4表达水平,并结合临床病理资料分析28例卵巢癌中HK6和B7-H4在组织表达与血清浓度之间相关性。结果:HK6在卵巢癌组织中呈阳性表达,但B7-H4在黏液性癌中呈阴性表达。HK6和B7-H4在卵巢正常患者和卵巢良性病变患者血清中低表达,在卵巢癌患者血清中相对较高表达。卵巢癌患者血清中HK6和B7-H4两种蛋白的表达有明显的正相关关系(P0.01)。结论:HK6和B7-H4在卵巢癌组织及血清中均较高表达,两者联合可指导卵巢癌诊断。     

血清HE4及CA125联合检测对卵巢癌的诊断价值

目的 探讨血清人附睾分泌蛋白4（HE4）及糖类抗原125（CA125）联合检测在上皮性卵巢癌诊断中的应用价值.方法 比较我院2008年1月-2013年5月妇科肿瘤病房收治的50例卵巢恶性肿瘤和53例卵巢良性肿瘤患者共103份血清中的CA125和HE4水平,同时选取同期本院女性健康体检者50例作为健康对照组进行比较.结果 卵巢恶性肿瘤组患者血清HE4和CA125水平显著高于卵巢良性病变组和健康对照组患者,差异有统计学意义（P＜0.05）;而健康对照组和卵巢良性病变组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.Ⅰ-Ⅱ期卵巢癌中HE4和CA125的阳性率大致一致（P＞0.05）,Ⅲ-Ⅳ期卵巢癌中HE4的阳性率均高于CA125,联合检测CA125和HE4的阳性率高于单独检测HE4及CA125的阳性率,差异有统计学意义（x2=7.846,P＜0.05）.结论 HE4和CA125联合检测能进一步提高诊断能力,在卵巢癌早期诊断中的应用价值值得关注.     

六种肿瘤相关抗原自身抗体微阵列诊断卵巢癌的价值

目的:检测卵巢肿瘤患者血清中Survivin、P53、P16、CyclinBl、CyelinD1和CyclinE 6种肿瘤相关抗原(TAAs)自身抗体,评价TAAs微阵列对卵巢癌诊断及术后病情监测的价值.方法:用间接ELISA法检测55例原发性上皮性卵巢癌、40例卵巢良性肿瘤、35例正常对照及23例卵巢癌患者术后化疗期间69份血清中以上6种TAAs自身抗体.结果:检测1种TAAs抗体诊断卵巢癌的阳性率为9.1%-23.6%,Survivin最高,CyclinE最低;随TAAs联合种类由1种增加至6种,诊断卵巢癌的灵敏度增加至63.6%,特异度达85.7%,阳性和阴性预测值及约登指数分别为87.5%、60.0%及0.493.6种TAAs微阵列检测阳性率在不同组织学类型和临床分期卵巢癌组织间的差异均无统计学意义(X2分别为0.622、0.135,P均>0.05),而卵巢癌患者术后化疗各组阳性率(8.7%-34.8%)有较术前(65.2%)降低的趋势.结论:联合6种TAAs微阵列检测血清自身抗体对卵巢癌诊断和术后病情监测可能具有重要参考价值.     

多种肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对卵巢癌的诊断价值

目的研究多种肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对卵巢癌的诊断价值。方法用多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统测定分析60例卵巢癌患者和100份正常对照人群血清的12种常见的肿瘤标志物:甲胎蛋白(AFP),癌胚抗原(CEA),神经元特异性烯醇化酶(NSE),糖原125(CA125),糖原15-3(CA15-3),糖原242(CA242),糖原19-9(CA19-9),前列腺特异性抗原(PSA),游离前列腺特异性抗原(f-PSA),铁蛋白(FER),β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG),人生长激素(HGH)。结果60例卵巢癌患者血清中有50例血清肿瘤标志物为阳性(敏感性为83%),100份正常对照血清中有3例血清出现肿瘤标志物(特异性97%)。结论多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对卵巢癌患者有一定的临床应用价值。     

转化生长因子-β1在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的:探讨上皮性卵巢癌中TGF-β1基因及蛋白的表达。方法:应用逆转录-巢式PCR法检测上皮性卵巢癌40例、卵巢良性肿瘤40例及正常卵巢20例组织中TGF-β1 mRNA表达,并通过凝胶图像系统分析其相对表达量。同时采用免疫组化方法分析组织中TGF-β1蛋白的定位和表达。结果:TGF-β1 mRNA表达率上皮性卵巢癌组织为100%(40/40),明显高于良性卵巢肿瘤的70.0%(28/40)和正常卵巢组织55.0%(11/20)(P=0.0002;P<0.01)。免疫组织化学法显示上皮性卵巢癌组织中TGF-β1蛋白表达率和表达强度均明显高于卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织(P<0.05),且TGF-β1表达强度与卵巢癌淋巴结转移、腹水形成和肿瘤分期有关。结论:TGF-β1的表达与上皮性卵巢癌的发生发展、转移等密切相关。     

上皮性卵巢癌中雌激素受体β甲基化水平检测

目的检测上皮性卵巢癌中雌激素受体β（ERβ）基因启动子CpG岛甲基化状况,探讨ERβ基因甲基化在上皮性卵巢癌发生发展中的作用及其临床意义。方法收集石蜡包埋上皮性卵巢癌标本47例,卵巢良性肿瘤标本5例,正常卵巢组织5例。采用甲基化特异性PCR（MSP）技术对ERβ基因CpG岛甲基化进行检测。并采用免疫组织化学技术检测上皮性卵巢癌中ERβ的表达。结果ERβ基因甲基化在上皮性卵巢癌中的发生率为40.4%（19/47）,在卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织中均未检测到ERβ基因甲基化。ERβ基因甲基化在上皮性卵巢癌中的发生与之病理分期分级、肿瘤盆腔淋巴结转移有关,ERβ基因甲基化与其蛋白表达之间存在相关性。结论上皮性卵巢癌的发生发展与ERβ基因甲基化有关,检测甲基化状况对卵巢良恶性肿瘤的鉴别诊断可能有辅助作用。ERβ可能成为卵巢癌治疗的新的靶点。     

IFN、IL-6与妇科肿瘤相关性研究

本研究采用双抗体夹心法ELISA检测58例妇科肿瘤患者血清中干扰素(IFN)及白细胞介素_6(IL—_6)的含量,并与30例正常人进行比较。结果表明卵巢癌、子宫颈癌患者血清中IFN及IL-_6含量明显增高,与正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01),但妇科良性肿瘤如子宫肌瘤及恶性肿瘤手术后患者IFN及IL-_6的含量基本正常。由此表明IFN、IL—_6的变化与妇科恶性肿瘤发生、发展及转归密切相关。     

卵巢癌患者血清TGF-α、TGF-β_1和CA125的检测及意义

目的探讨卵巢癌患者血清中TGF-α、TGF-β1和CA125与卵巢癌患者预后的相互关系。方法采用放射免疫测定法和酶联免疫吸附法检测57例卵巢癌患者(恶性组)术前术后血清中TGF-α、TGF-β1和CA125水平,设52例卵巢良性肿瘤患者(良性组)及55名正常妇女(正常组)为对照组。结果恶性组术前TGF-α、TGF-β1、CA125水平比良性组及正常组明显增高(P均<0.01);术后TGF-α、CA125水平明显降低,TGF-β1水平明显升高(P均<0.01)。结论检测卵巢癌患者血清中TGF-α、TGF-β1和CA125水平对判断患者预后有重要价值。     

CA125、CA72-4、TSGF联合检测在卵巢癌诊断中的临床应用

目的研究CAl25、CA72-4、TSGF联合检测在卵巢癌诊断中的临床应用。方法选择卵巢癌组45例、卵巢良性肿瘤组60例、对照组50例,采用生化比色法、酶联免疫法检测其血清CA125、CA72-4、TSGF的含量。结果卵巢癌组血清CAl25、CA72-4、TSGF水平明显高于卵巢良性肿瘤组与对照组（P〈0.05）,卵巢良性肿瘤组血清CAl25、CA72-4、TSGF的含量高于正常对照组（P〈0.05）。CAl25、CA72-4、TSGF联合检测对早期卵巢癌诊断的敏感度较单独检测时高（P〈0.05）。结论肿瘤标志物的联合检测可提高对早期卵巢癌诊断的阳性率,在卵巢肿瘤的诊断及鉴别诊断中发挥着重要的作用。     

人抗猪胰岛细胞天然抗体同种型的分析

为检测人抗猪胰岛细胞天然抗体的同种型 ,采取 18份胰岛素依赖型糖尿病 (IDDM)患者血清及 2 0份正常人血清分别与杂种猪胰腺组织的冰冻切片孵化后 ,再用免疫荧光标记的羊抗人 Ig G、Ig M单克隆抗体染色。 8份 IDDM血清和 8份正常人血清中含有直接针对猪胰岛细胞的 Ig G型抗体 ;4份 IDDM血清和 6份正常人血清中含有 Ig M型抗猪胰岛细胞抗体。结果表明 :人抗猪胰岛细胞天然抗体的同种型是 Ig G和 Ig M型抗体     

固相反向间接血凝试验检测抗-HBs的抗独特型抗体

目的建立固相反向间接血凝试验检测抗 HBs的抗独特型抗体的方法。方法用羊抗人IgG包被聚苯乙烯微孔板 (V型 ) ,捕捉血清中的抗 HBs的抗独特型抗体 (IgG) ,再加入抗 HBs致敏的血球 ,观察其凝集结果。结果对正常人血清标本 116例以及HBsAg阳性血清标本 10 2例进行了抗 HBs的抗独特型抗体检测 ,在HBsAg阳性血清标本中共检出抗 HBs的抗独特型抗体阳性标本 2 4例 ,阳性率为 2 3 7%。结论该方法具有简便、快速 ,又不需要特殊设备等优点。     

消化系统生物活性物质的基础及应用研究

本项目属生物医学领域,含特异性抗体制备、新方法的建立及消化系统含生物活性物质细胞的基础研究。主要成果如下: 1.成功制备了9种特异性抗体及抗独特型抗体其中除生长抑素(SS)抗体国内已有报道外,5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、神经肽Y(NPY)抗体和5-HT抗独特型多克隆抗体为国内首次报道。5-HT抗独特型单克隆抗体、肌源性运动神经诱向因子(MNTF)单克隆抗体及抗独特型单克隆抗体、视网膜节细胞神经诱向因子抗独特型单克隆抗体为国际首次报道。这