丙型肝炎病毒非结构区 3(NS3)Ⅰ、Ⅱ型血清反应性的比较研究

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)非结构区3(NS3)Ⅰ型、Ⅱ型血清反应性.方法利用表达载体PBVIL1对HCV全长NS3区Ⅰ型、Ⅱ型抗原表位进行克隆表达,经纯化获得电泳纯的抗原.经酶联免疫吸附(ELISA)的方法检测丙型肝炎179份总抗体可疑阳性血清,再用NS3区Ⅰ、Ⅱ型抗原进行相应抗体检测.结果通过测定HCV-NS3区Ⅰ型、Ⅱ型抗体,179份HCV-NS3区1型阳性检出105份,HCV-NS3区Ⅱ型阳性检出95例.结论重组表达的HCV-NS3 Ⅰ型、Ⅱ型抗原对丙型肝炎病毒血清反应略有不同.二者具有一定的互补性.     

丙型肝炎病毒不同编码区重组抗原在抗体检测中的应用

目的　探讨丙型肝炎病毒 (HCV)不同编码区重组蛋白片段的免疫反应性及其在抗体检测中的应用。方法　分别以 4种HCV单片段抗原 (C、NS3、NS4或NS5 )检测抗 HCV抗体阳性血清 ;以 4种单片段抗原的混合物 (MIX)检测抗 HCV抗体阳性血清、大学生体检血清和抗 HCV抗体阴性质控血清。结果　 90份抗 HCV抗体阳性血清中共有 75份可与一种或多种单片段抗原反应 ,阳性率分别为 70 .0 % (C)、6 1.1% (NS3)、5 2 .2 % (NS4 )、4 4 .4 % (NS5 ) ,其中仅与C、NS3、NS4和NS5一种抗原发生反应的分别有 8份、1份、2份和 3份血清标本 ;90份抗 HCV阳性血清经MIX抗原检测 ,阳性率为 83.3% (75 / 90 ) ;10 0份大学生血清和39份阴性质控血清经混合抗原检测均阴性。结论　HCV不同编码区重组蛋白片段有不同的免疫反应性 ,在发展抗 HCV抗体诊断试剂时 ,应采用各种不同编码区的混合抗原。     

抗HCV分片段酶联免疫检测试剂的临床评价

在克隆表达了丙型肝炎病毒不同区抗原（HCV－C、NS－3、NS－4、NS－5）的基础上，研制出抗HCV抗体分片段酶联免疫检测试剂。对该试剂特异性、灵敏度进行了临床评价。结果显示该试剂具有良好的特异性和灵敏度。     

丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）与HCV-IgM检测试剂性能对比研究

[目的]对研制的丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）与HCV—IgM检测试剂进行对比，探门丙型肝炎病毒感染早期诊断意义。[方法]收集早期丙型肝炎病毒感染的样品43份，慢性丙肝患者27份，应用建立的丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）及HCV—IgM检测试剂同时对比检测。[结果]建立的丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）检测试剂与HCV—IgM对早期丙型肝炎病毒感染样品及慢性患者检出符合率均为100％，而间接抗HCV检测试剂在早期感染样品有1份检测阴性。[结论]建立的丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）可同时检测抗HCV-IgG和IgM，抗HCVIgM在早期检测的抗体滴度高于慢性感染者。     

蛋白芯片检测丙型肝炎病毒分片段抗体

目的 用蛋白芯片的方法检测丙型肝炎病毒（HCV）分片段抗体。方法 利用生物芯片技术和化学发光技术将高度纯化的抗原HCV Core、NS3、NS4、NS5以特定微阵列固定在固相载体上,用化学发光免疫法检测抗HCV Core、抗HCV NS3、抗HCV NS4和抗HCV NS5。结果 174份血清中HCV抗体阳性87份,HCV抗体阴性87份,其中献血员33份,非丙型肝炎的其他肝病患者39份,非肝病者15份。87例雅培公司的AxSYM（微粒子发光）检测抗HCV阳性患者中,蛋白芯片检出阳性85份,阳性率为97．70％;在174份标本中,蛋白芯片检出阳性标本88份,其中抗HCV阳性87份,阳性率98．86％;抗HCV NS3检出49份,阳性率为55．68％;抗HCV NS4检出68份,阳性率为77．27％;抗HCV NS5检出37份,阳性率为42．05％;抗HCV Core检出69份,阳性率为78．41％。结论 蛋白芯片显示较高的敏感性和特异性,具有临床实用价值。     

献血者丙型肝炎病毒（HCV）核心抗原的检测

目的：探讨在无偿献血者中开展丙型肝炎病毒核心抗原（HCV—CAg）检测的应用价值。方法：采用美国强生公司HCV核心抗原（HCV—CAg）酶联免疫分析（ELISA）试荆，对无偿献血者样进行了检测与结果分析。阳性者用荧光定量PCR方法进行HCV检测，并将抗体检测、抗原检测、病毒核酸检测（nucleic aeldtesting，NAT）的检测结果进行比较。结果：676份合格血样的HCV—CAg结果均为阴性。63份抗-HCV阳性中有11例HCV—CAg阳性，138例ALT阳性中有2例阳性，合计检出13例HCV C抗原阳性标本。经荧光定量PCR检测有12例HCVRNA阳性，其中11份抗-HCV阳性，ALT阳性的1份。结论：现行的抗-HCV检测方法有可能出现HCV感染的漏检，HCV—CAg检测方法可提高检测的灵敏度。应在献血者中开展该检验项目．     

丙型肝炎病毒抗体单片段检测与总抗体检测的比较分析

目的通过对国产HCV抗体分片段酶联免疫检测试剂与进口第三代抗HCV检测试剂检测丙型肝炎病毒抗体的研究来了解丙肝病毒抗体单片段检测的意义。方法采用国产基因重组表达的丙型肝炎病毒不同区(C、NS3、NS4、NS5)特异性抗原分别包被酶标板,以间接EIA法检测75例丙肝患者血清中不同区特异性抗体,并以Abbott公司第三代抗HCV试剂进行总抗体检测,同时做HCVRNA检测。结果75例血清中HCV不同区抗原片段NS3、HCVC、NS4、NS5的抗体检出率分别为933%(7075)、920%(6975)、707%(5375)、640%(4875),含两个片段以上的抗体检出率为947%(7175);抗HCV总抗体的检出率为987%(7475);HCVRNA检出率为774%(5875)。结论HCV不同区抗原片段的抗体检出率有差别,NS3、HCVC检出率较高,其次为NS4、NS5。两种试剂有较好的相关性,HCV抗体单片段试剂可作为检测丙型肝炎病毒抗体的补充试剂,单独片段抗体阳性具有一定意义,动态观察NS3、NS4抗体水平可预测IFN的治疗效果。     

生物素化HCV多抗原表位融合基因的克隆及可溶性表达

为了建立丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)的双抗原夹心ELISA检测方法．克隆表达带有生物素标签的Hcv多种抗原优势表位融合蛋白，选取HCV各抗原如Core，NS3，NS4，NS5和E的优势抗原表位片段编码序列．克隆重组为融合基因，插入Pinpoint^TM Xa-1 T载体中诱导表达，并用Western blot进行抗原性及标签生物素活性鉴定；表达抗原经Promega SoftLink Soft Release Avidin Resin系统亲和层析纯化后包被酶联板，用抗HCV单片段抗体阳性血清对表达融合蛋白各区的抗原性作间接ELISA法鉴定。结果显示：成功构建了带有生物素标签的HCV多抗原表位融合基因表达载体，该载体可在JM109(DE3)中可溶性表达目的蛋白，表达产物携带生物素标签，融合的各片段区均具有良好的抗原性。结论：所构建融合抗原可可溶性表达，可以用作双抗原夹心ELISA的酶标抗原．所含生物素标签也可用作酶联检测的生物素一亲和素信号放大系统。     

蛋白芯片检测丙型肝炎病毒分片段抗体

目的用蛋白芯片的方法检测丙型肝炎病毒(HCV)分片段抗体。方法利用生物芯片技术和化学发光技术将高度纯化的抗原HCV Core、NS3、NS4、NS5以特定微阵列固定在固相载体上,用化学发光免疫法检测抗HCV Core、抗HCV NS3、抗HCV NS4和抗HCV NS5。结果174份血清中HCV抗体阳性87份,HCV抗体阴性87份,其中献血员33份,非丙型肝炎的其他肝病患者39份,非肝病者15份。87例雅培公司的AxSYM(微粒子发光)检测抗HCV阳性患者中,蛋白芯片检出阳性85份,阳性率为97.70%;在174份标本中,蛋白芯片检出阳性标本88份,其中抗HCV阳性87份,阳性率98.86%;抗HCV NS3检出49份,阳性率为55.68%;抗HCV NS4检出68份,阳性率为77.27%;抗HCV NS5检出37份,阳性率为42.05%;抗HCV Core检出69份,阳性率为78.41%。结论蛋白芯片显示较高的敏感性和特异性,具有临床实用价值。     

献血人群中丙型肝炎病毒第1高变区抗体检测及意义

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)第一高变区(HVR1)抗体检测在献血者血液筛查中的意义。方法采用融合F4HVR1抗原检测不同血清样本中的抗-HVR1的存在情况,并与现有C、NS3、NS4、NS5抗体进行比较。结果在HCV-RNA阳性样本中,HVR1抗体的阳性率为96.8%;在90份可疑HCV感染血清中HVR1抗体的阳性率为61.1%,与C区、NS3区接近,高于NS4区、NS5区(P<0.05),共检测出4份单独HVR1抗体阳性血清。结论在现有HCV诊断试剂基础上,对献血人群进行HCV-HVR1抗体的检测可以提高血液筛查灵敏度,减少HCV的经血传播。     

丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂的临床评价

[目的]对研制的丙型肝炎病毒核心抗原（HCV—cAg）ELISA检测试剂进行临床特异性及敏感性评价。[方法]制备抗HCV-核心区（Core）抗原四株单克隆抗体，研制出双抗体夹心检测HCV～core抗原酶联免疫检测（ELISA）试剂。三家临床单位收集抗HCV阴性样品3040份，HBsAg阳性100份，抗HIV阳性40份，从10万份抗-HCV筛查出临界样品28人份。[结果]3040份阴性样品检测有3份HCV—cAg阳性，3份经HCVPCR检测有1份阳性，100份HBsAg阳性，40份抗HIV阳性样本检测均为阴性，在10万份抗HCV抗体筛查样品中，选择28份抗-HCV检测临界样品进行HCV—cAg检测，有4份阳性，4份HCV—cAg阳性样品中有3份HCV—RNA检测阳性。[结论]研制的双抗体夹心HCV-核心抗原ELISA试剂具有很好的特异性和灵敏度。     

丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法酶联免疫试剂的初步临床评价

目的对研制的丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）酶联免疫检测试剂进行临床评价。方法以克隆表达的HCV多表位嵌合蛋白作为包被抗原,经多表位嵌合蛋白修饰后用于标记抗原,研制HCV双抗原夹心酶联免疫检测试剂;检测血液筛查阴性标本440份,乙肝表面抗原阳性标本90份,HIV抗体阳性标本10份,梅毒螺旋体抗体阳性标本90份及丙型肝炎病毒抗体阳性标本259份。结果对259份HCV抗体阳性标本进行检测时,有3份标本未检出,应用Chiron RIBA确认试剂检测后,结果为阳性。其余标本的检测结果均为阴性。结论采用HCV双抗原夹心酶联免疫检测试剂共检测889份标本,其中只有3份标本结果不一致,总符合率99．7％,敏感性和特异性较好。     

重组抗原在戊型肝炎病毒感染诊断中的应用

目的探讨重组抗原在戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）感染诊断中的应用。方法用ＨＥＶ重组抗原建立酶免疫试验（ＥＩＡ）检测肝病患者和健康人群血清中抗戊型肝炎病毒抗体（抗－ＨＥＶ）。结果５５份用新加坡ＤＢＬ公司抗－ＨＥＶ诊断试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阳性的肝炎患者血清中，５３份（９６．４％）用本方法检测也为阳性；４５份ＤＢＬ试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阴性的血清中，本法检测有３份为抗－ＨＥＶ阳性。检测甲、乙、丙型肝炎患者血清各３０份，抗－ＨＥＶ阳性率分别为１３．３％（４／３０）、１３．３％（４／３０）和１０．０％（３／３０）。健康人抗－ＨＥＶ阳性率为５．０％（８／１６０）。重组抗原与合成肽抗原混合用于ＥＩＡ，可以检出两种抗原单独阳性的抗－ＨＥＶ。结论以重组抗原为基础的ＥＩＡ特异性强、灵敏度高、快速简便，是戊型肝炎血清学诊断及流行病学调查的一种可靠方法     

重组抗原在戊型肝炎病毒感染诊断中的应用

目的 探讨重组抗原在戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）感染诊断中的应用。 方法 用ＨＥＶ重组抗原建立酶免疫试验（ＥＩＡ）检测肝病患者和健康人群血清中抗戊型肝炎病毒抗体（抗－ＨＥＶ）。结果 ５５份用新加坡ＤＢＬ公司抗－ＨＥＶ诊断试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阳性的肝炎患者血清中，５３份（９６．４％）用本方法检测也为阳性；４５份ＤＢＬ试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阴性的血清中，本法检测有３份为抗－ＨＥＶ阳性。检测甲、乙、丙型肝炎     

金标渗透法快速检测血清中丙型肝炎病毒抗体

采用基因工程技术克隆表达了丙型肝炎病毒（HCV）－Core-Ns3-Ns4优势表位嵌合抗原，研制出金标渗透法快速检测丙型肝炎病毒抗体试剂，与抗丙型肝炎病毒抗体酶联免疫检测试剂（HCV－ELISA）和重组免疫印迹分析检测试剂（HCV－RIBA3.0)进行了比较，其特异性、敏感性均达到了ELISA试剂水平。     

丙型肝炎病毒优势表位抗原不同嵌合表达蛋白的血液反应性研究

目的：采用含HCV不同优势表位抗原进行连接表达，对20份血清进行对比检测，探讨血清反应性。方法：构建原核融合表达载体pBVIL-1，精选出HCV主要表位抗原插入表达载体在E.coli中表达，纯化后的融合抗原包被酶联板，用ELISA方法进行测定。结果：不同抗原组合连接（HCV NS4－Core、NS4-Core-NS3、NS4-Core-NS5AB-NS3)对血清的反应性不同。结论：含有多个抗原表位的嵌合抗原，能提高检测的灵敏度。     

丙型肝炎病毒核心抗原对婴幼儿丙型肝炎病毒感染的诊断价值

目前，对丙型肝炎病毒（HCV）感染诊断主要依据HCV抗体（IgC）、HCVRNA等实验室检测指标。由于HCVIgG分子较小，阳性孕妇体内的HCVIgG可通过胎盘经脐带进入婴儿体内，可能对婴幼儿HCV感染诊断产生影响。而HCVRNA检测条件要求较高，基层单位难以开展。本研究通过对HCVIgG阳性婴幼儿血清HCV核心抗原（cAg）测定，并与HCVRNA检测结果进行对比，旨在从方法学角度探讨HCVcAg检测对婴幼儿HCV感染的诊断价值。     

酶联免疫吸附测定法检测H CV抗原与抗体的结果分析

目的：探讨应用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测丙型肝炎病毒（HCV）抗原、抗体。方法将 HCV-RNA PCR法检测的50例标本分为阳性组（34例,HCV-RNA阳性）、阴性组（16例,HCV-RNA阴性）,对所有标本应用ELISA法进行HCV抗原与抗体检测,对结果进行统计分析。结果阳性组 HCV 抗体阳性率、抗原阳性率均显著高于阴性组,差异均有统计学意义（P＜0．05）。阳性组中,HCV抗原及抗体联合检测与 HCV-RNA检测结果的符合率为94．12％（32/34）,与 HCV抗原、抗体单独检测比较,差异有统计学意义（χ2＝20．4424,P＝0．0000）。结论 ELISA法检测HCV抗原与抗体,有助于临床准确诊断丙型病毒性肝炎。     

在安全输血中应用丙型肝炎病毒核心抗原检测技术的初步探索

本研究探讨用丙型肝炎病毒（HCV）核心抗原酶联免疫吸附技术（HCV-cAg ELISA）筛查献血员感染HCV的可行性.对我医院2003年1月-2005年12月间的8 677份献血者血清标本进行抗-HCV初检和复检.将仅初检阳性的15份血清标本和仅复检阳性的14份血清标本,分别再做HCV-cAg ELISA和HCV RT-PCR检测.结果表明：经HCV-cAg ELISA检测,29份仅初检（15份）和仅复检（14份）抗-HCV阳性血清标本中只有5份结果为阳性,阳性率为17.24%.经HCV RT-PCR检测,29份仅初检和仅复检抗-HCV阳性血清标本中同样也只有5份阳性结果,阳性率也为17.24%.结论：HCV-cAgELISA检测技术的敏感性与HCVRT-PCR技术类似,但成本明显降低,有可能作为HCV感染的辅助确证试验,或作为抗-HCV检测技术的更新换代技术用于安全输血中献血者血液的筛查.     

HCV-NS3抗原基因的克隆表达及活性测定

[目的]研制新的更符合我国HCV感染株的NS3抗原，以进一步提高HCV免疫检试剂的灵敏度。[方法]对HCV／NS3（1192-1457aa）片段序列进行在线Blast分析，根据共有序列（consensus）设计并合成引物。以Trizol法从病人血清中提取总RNA，经反转录PCR扩增获得NS3相应目的基闪，插入载体、经测序正确后，克隆表达，表达产物经纯化后用间接ELISA法测定其反应活性。[结果]从病人血清中获得了NS3部分基闪片段，测序证明所获得的序列和我们以前的la型NS3序列有18个不同的氨基酸残基。重组新NS3抗原经活性测定，反应灵敏度有较大提高。[结论]新获得的HCV-NS3可用于试剂盒抗原，以提高对我国HCV感染病人检测的灵敏度。