三七皂苷对造血细胞AP-1家族转录调控蛋白NF-E2,c-jun和c-fos的诱导作用

为了进一步研究三七总皂苷(PNS)对转录调控蛋白AP-1家族的主要成员NF-E2、c-jun和c-fos转录因子的诱导作用，探讨PNS在造血细胞内的信号传递途径，选用人粒系HL-60、红系K562、巨核系CHRF-288和Meg-01 4个细胞株作靶细胞，经PNS刺激处理后提取细胞核蛋白，分别用人抗NF-E2、c-jun和c-fos抗体与核蛋白作Western blot杂交试验，并用^32P标记的具有与NF-E2、c-jun和c-fos转录因子共同结合位点的AP-1双链寡核苷酸探针作电泳带移动阻滞试验(EMSA)。结果表明：①western blot显示PNS诱导HL-60，K562，CHRF-288和Meg-01 4株细胞的NF-E2和c-jun转录因子蛋白水平分别是未经处理细胞的1．5-2．5倍和2．0—3．0倍。诱导的c-fos蛋白在K562，CHRF-288和Meg-01 3株细胞分别提高2．0—3．0倍，但HL-60细胞的c-fos在PNS处理后无明显变化；②EMSA显示AP-1转录调控蛋白与DNA结合复合物的特异性条带，经PNS诱导后4株细胞的AP-1蛋白与DNA复合物条带密度明显高于未经处理的细胞。结论：PNS在造血细胞内对基因的转录调控涉及到AP-1家族转录因子成员NF—E2、c—jun和c—fos，通过诱导这些转录因子量的增加，与特异性DNA促进子结合的活性增高而调控与细胞增殖分化相关的基因的表达。     

人参皂甙诱导巨核细胞GATA-2转录因子磷酸化

目的：探讨与造血祖细胞增殖有关的GATA转录调控蛋白经人参皂甙(GS)诱导后的磷酸化状况。方法：取生长因子依赖MO7e巨核细胞株经GS．血小板生成素(TPO)或自介素(IL-3)刺激处理后、提取核蛋白作电泳带移动阻滞试验(EMSA)、抗体胶移动试验(Antibody Gel Supershift Assay)、免疫沉淀和蛋白免疫印迹法(Western Blot)。结果：GS、TPO或IL-3均能诱导MO7e细胞核内GATA-2转录调控蛋白含量增加．且呈磷酸化状态。结论：GS能够诱导GATA2转录因子的磷酸化，GATA-2参与造血细胞对GS反应的信号传递途径。     

转录因子GATA-3在T细胞发育过程中的作用

脊椎动物的造血是一个极其复杂的过程。机体内多能造血干细胞的相关基因在各种不同转录因子的参与下通过诱导或沉默其表达从而促使造血干细胞向各系细胞分化与成熟。GATA-3属Ⅳ型锌指蛋白GATA家族,是辅助性T细胞(Th2)特异性转录因子,它不但直接参与T淋巴细胞的分化调控,诱导Th2细胞的生成,亦可通过直接或间接作用参与红细胞、巨核细胞、嗜酸性粒细胞、NK细胞的分化调控,同时对CD8+T淋巴细胞分化成熟产生抑制作用。     

转录因子GATA-3在T细胞发育过程中的作用

脊椎动物的造血是一个极其复杂的过程。机体内多能造血干细胞的相关基因在各种不同转录因子的参与下通过诱导或沉默其表达从而促使造血干细胞向各系细胞分化与成熟。GATA-3属Ⅳ型锌指蛋白GATA家族，是辅助性T细胞(Th2)特异性转录因子，它不但直接参与T淋巴细胞的分化调控，诱导Th2细胞的生成，亦可通过直接或间接作用参与红细胞、巨核细胞、嗜酸性粒细胞、NK细胞的分化调控，同时对CD8 T淋巴细胞分化成熟产生抑制作用。     

人参皂甙诱导的造血细胞内信号传递途径的研究

目的探讨人参皂甙（ＧＳ）刺激造血祖细胞增殖有关的细胞内信号传递途径。方法采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交法、电泳带移动阻滞实验、抗体胶结合移动实验和紫外放射交联实验。结果ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ显示经ＧＳ诱导的人巨核细胞株ＣＨＲＦ２８８、Ｍｅｇ０１和ＭＯ７ｅ细胞的ＧＡＴＡ２ｍＲＮＡ水平增高,分别是未经处理细胞的１．８４,２．４３和１．５２倍。但ＧＡＴＡ１ｍＲＮＡ表达水平低,且ＧＳ处理前后也无明显变化。电泳带移动阻滞实验提示ＧＳ诱导的细胞核内ＧＡＴＡ转录调控蛋白与特定的ＤＮＡ序列结合的活性增高。抗体胶结合移动实验证实与ＤＮＡ结合的主要成分为ＧＡＴＡ２蛋白,紫外放射交联实验确定该复合物的相对分子质量约为５０×１０３,符合ＧＡＴＡ２转录调控蛋白。结论ＧＳ诱导细胞内的信号传递途径与转录因子ＧＡＴＡ２有关,ＧＡＴＡ２有介导ＧＳ刺激造血细胞增殖的作用。     

GATA结合蛋白1的造血调控功能及其突变导致的红系/巨核系相关遗传病

GATA结合蛋白1(GATA1)是1个重要的造血谱系转录因子，在转录水平上特异性调控红系和巨核系细胞的增殖和分化，以此维持这2个系细胞的正常发育成熟。GATA1的功能结构由1个N端转录激活域(N-TAD)和2个锌指结构(NF与CF)构成。GATA1的蛋白序列在不同物种中高度保守，其改变将导致红系和巨核系相关基因转录失调，从而产生程度不一的临床表型。本文从GATA1的分子结构、在红系和巨核系细胞中的造血调控功能以及突变导致的遗传性红系/巨核系造血调控紊乱等方面予以综述。     

六亚甲基二乙酰胺对急性白血病细胞株HL-60和U937分化、凋亡的影响及其机制

目的　研究六亚甲基二乙酰胺 (HMBA)体外诱导HL 6 0和U937细胞分化、凋亡的作用及其机制。方法　流式细胞仪检测细胞分化抗原CD1 1b、CD1 4,细胞凋亡标记Annexin Ⅴ以及进行细胞周期分布和细胞内cyclinD、cyclinE、p2 7抗原的分析 ,RT PCR检测c myc、Rb、Bcl 2基因mRNA的表达。结果　HL 6 0、U937细胞经HMBA处理 72h后CD1 1b表达显著增高 ,高剂量HMBA促使Annexin Ⅴ表达增加。HMBA阻滞HL 6 0、U937细胞于G0 G1 期 ,并使该两种细胞内cyclinE表达显著下降 ,cyclinD、p2 7表达显著增高 ,呈剂量依赖关系 ;HMBA可使HL 6 0、U937细胞c myc、Bcl 2mRNA表达下调 ,而RbmRNA在HL 6 0细胞表达上调 ,在U937细胞则无显著改变。结论　HMBA能诱导HL 6 0、U937细胞出现明显的分化 ,高剂量的HMBA有促使HL 6 0、U937细胞凋亡的倾向 ,其机制可能是通过影响细胞周期调控分子以及有关的增殖分化相关基因的表达 ,从而抑制细胞增殖 ,促进细胞分化。     

内源性TGF-β_1、TNF-α在三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡中作用的研究

目的　探讨内源性TGF β1、TNF α在三氧化二砷 (As2 O3)诱导HL 6 0细胞凋亡过程中的作用。方法　建立As2 O3 诱导HL 6 0细胞凋亡模型 ,应用RT PCR、定量PCR、ELISA、缺口末端标记(TUNEL)法、片段化DNA分析等方法研究As2 O3 诱导HL 6 0细胞凋亡过程中内源性TGF β1、TNF α及其受体基因以及TGF β1蛋白表达的变化 ;进而研究TGF β1、TNF α反义磷酸硫代脱氧寡核苷酸 (PSODN)对细胞凋亡的干预作用。结果　①As2 O3 诱导HL 6 0细胞凋亡过程中伴有TGF β1、TNF α表达上调 (处理前后mRNA拷贝数分别为 135 46± 12 4,4972 16± 187和 2 32 73± 2 2 9,6 742 17± 189) ,bcl 2表达下调 (处理前、后分别为 10 42 4± 2 74和 336 1± 89) ,细胞培养 2 4h上清中TGF β1蛋白水平明显提高 ,上升为对照组的 2 .0倍。②TGF β1、TNF α反义PSODN能够明显抑制As2 O3 诱导细胞凋亡的发生 ,并使细胞bcl 2mRNA及蛋白表达恢复到处理前的水平。结论　内源性TGF β1、TNF α在As2 O3 诱导HL 6 0细胞凋亡中起重要作用 ,两者均可通过下调bcl 2表达促进细胞凋亡。     

GATA-1和GATA-2基因在贫血性疾病中的表达

转录因子GATA家系是近几年才被发现并广泛认识的一个转录因子家系,因能特异地识别并结合调节序列[T/A(GATA)A/G]而被命名,属锌指结构类家族,与造血细胞分化发育关系密切。GATA基因在白血病中表达已有少量资料报道,而在贫血性疾病中的表达目前尚未见报道。本文利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测了19例贫血性疾病患者GATA-1和GATA-2基因的表达情况。     

Bcl-2,Bax和线粒体膜蛋白在一氧化氮供体诱导HL-60细胞凋亡中的改变

本研究探讨外源性一氧化氮 (NO)供体硝普钠 (SNP)对HL 6 0细胞诱导凋亡的可能机制。将HL 6 0细胞与SNP在体外培养 ,用DNA片段原位末端标记法 (TUNEL)测定原位细胞凋亡率 ;用流式细胞仪测定细胞DNA倍体和周期分析及Bcl 2、Bax、线粒体膜蛋白表达率的变化。结果表明 :SNP可诱导HL 6 0细胞凋亡 ,两者之间有明显的量效和时效关系。 1.0mmol/LSNP作用 4 8小时后 ,HL 6 0细胞的凋亡率分别为亚二倍体峰 (4 2 .2± 3.5 ) % ,TUNEL测定凋亡细胞率为 (5 2 .5± 7.6 ) % ,显著高于空白对照组和同浓度的高铁氰化钾 (PFC)组 ;Bax基因蛋白和线粒体膜蛋白 (APO2 .7)表达增加 ,bcl 2基因蛋白表达降低。Bax、Bcl 2和APO2 .7的表达率与SNP两者之间也有明显的量效和时效关系。结论 :外源性一氧化氮供体诱导HL 6 0细胞凋亡过程中 ,线粒体膜蛋白表达显著上调并伴随Bax和Bcl 2蛋白的表达改变。     

三七皂苷对人骨髓造血细胞凋亡相关蛋白表达的影响

本文研究观察三七皂苷（PNS）对造血细胞促进凋亡相关蛋白（Daxx、Fas）和抑制凋亡的核转录因子（NFkB、c-Rel）表达的影响，探讨PNS促进造血细胞增殖，支持生长存活的作用机制。采用半固体集落培养法观察PNS对人骨髓红系、粒系祖造血细胞（CFU-GM、CFU-E）的增殖作用，台盼蓝拒染法观察细胞的存活率，涂片染色法观察细胞形态学的变化，用流式细胞术分析细胞凋亡状况。同时，用PNS处理粒系HL-60、红系KS62、巨核系CHRF-288和Meg-01 4种细胞株后，提取胞浆蛋白和核蛋白，Western免疫印迹观察Daxx、Fas、NFkB和c-Rel蛋白的表达水平。结果发现：①PNS能够刺激人骨髓红系、粒系祖细胞和HL-60等4种细胞株增殖。②HL-60等4种株细胞经PNS和饥饿处理后，活性良好，镜下未观察到凋亡的形态学特征；Annexin V分析也未见凋亡的阳性细胞。③Western blot结果显示，经PNS处理的4株细胞Daxx蛋白表达水平与对照相比，下降幅度分别为33．3％-61．5％；HL-60细胞本身表达Fas蛋白低下，PNS处理后也无明显下降，而K562、CHRF-288和Meg-01细胞Fas蛋白表达与对照相比，下降幅度分别为33．3％-71．4％。④NFkB、C-Rel蛋白除HL-60细胞对PNS诱导无明显变化外。其余细胞均出现不同程度地增加，分别提高了2．0-2.7倍和1．5-2．3倍。结论：PNS在某种程度上能够抑制Daxx、Fas蛋白表达，而相应减少造血细胞的凋亡，同时也能通过上调NFkB、C-Rel转录因子，促进细胞增殖，并阻止半胱天冬酶（caspase）连锁链的活化而抑制造血细胞凋亡，这为PNS应用于临床治疗凋亡过度的疾病如再生障碍性贫血提供了可能性。     

转录因子GATA-2对iASPP基因的转录调控研究

癌基因iASPP促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,其转录起始位点上游序列有转录因子GATA-2的假定结合位点,GATA-2在造血干/祖细胞的增殖和分化中起重要作用。本研究旨在探讨GATA-2对iASPP的转录调控作用。首先检测了部分白血病细胞系中iASPP和GATA-2蛋白的表达,然后构建带有GATA-2开放读码框的真核表达载体与带有iASPP转录起始位点上游3000 bp至下游500 bp序列中GATA-2假定结合位点的荧光素酶报告载体,共转染HEK293和CV-1细胞,检测荧光素酶活性,并对荧光素酶活性上调的结合位点区进行染色质免疫共沉淀实验。结果显示,白血病细胞系中iASPP高表达的细胞大多存在GATA-2的高表达;GATA-2对iASPP报告基因荧光素酶活性有显著影响,并呈现明显的＂剂量-效应＂关系。当pCMV5-GATA2转染剂量上升至100 ng时,iASPP荧光素酶活性在HEK293细胞中上调到2倍;此转录激活作用在CV-1细胞中尤为显著,荧光素酶活性上调可达6.7。染色质免疫共沉淀结果证实GATA-2与iASPP转录起始区nt-361～-334有特异性结合。结论：转录因子GATA-2可以与iASPP的转录调控区结合,并促进iASPP基因转录。     

转录因子GATA—2在早期造身过程中的作用

转录因子ＧＡＴＡ－２是ＧＡＴＡ家族的一成员,以其锌指结构结合于「（Ｔ／Ａ（ＧＡＴＡ）Ａ／Ｇ」的共同ＤＮＡ序列结构。近期,通过敲除小鼠ＧＡＴＡ－２基因的实验证明了ＧＡＴＡ－２在造血细胞发育中的重要地位。ＧＡＴＡ－２基因断裂导致全部造血祖细胞的减少;相反,强制表达ＧＡＴＡ－２则阻止正常造血。ＧＡＴＡ－２的调节作用发挥于早期胚胎时期并与其它的ＧＡＴＡ转录因子共同作用于粒系、红系、巨核系和肥大细胞系等的增     

白血病骨髓基质细胞中GATA-1和GATA-2基因的表达特点

为了解转录因子GATA-1和GATA-2基因在白血病和正常骨髓基质细胞(BMSC)中表达的情况,采集了42例白血病患者的骨髓标本及34例正常骨髓标本并分离骨髓单个核细胞,在体外扩增培养后收集悬浮细胞(骨髓细胞)和扩增后的贴壁细胞(BMSC),应用RT-PCR-ELISA方法分别检测GATA-1和GATA-2基因的表达情况,并对其相对表达水平进行半定量分析.结果发现,GATA-1和GATA-2基因在正常和白血病的BMSC和骨髓细胞中均有一定的表达.在BMSC中急性淋巴细胞白血病(ALL)组的GATA-1基因表达率(857%)与正常组(882%)相近,而急性髓性白血病(AML)和慢性粒细胞白血病(CML)组的GATA-1表达率(55.6%和41.2%)均比正常组低(P=0.008,0.000),且ALL的BMSC中GATA-1基因表达水平＞AML＞正常＞CML(P均＜0.05);而各白血病组BMSC中GATA-2的表达率和表达水平与正常组相比均无显著性差异(P均＞0.05).骨髓细胞中AML组的GATA-1基因表达水平＞正常＞ALL＞CML,AML组的GATA-2基因表达水平＞CML＞ALL＞正常(P均＜0.05).AML、CML和正常组的BMSC和骨髓细胞中均以GATA-2的表达占优势.可以推论,转录因子GATA-1和GATA-2基因在正常和白血病BMSC的表达可能影响骨髓微环境的造血调控作用.是否对白血病的发生发展有一定的影响也值得进一步探索.     

GATA-2过表达对小鼠胎肝造血干细胞功能的影响

本研究探讨GATA-2过表达对小鼠胎肝造血干细胞功能的影响。应用带GFP绿荧光的逆转录病毒载体介导的病毒感染实验将GATA-2基因引入小鼠胎肝细胞,通过流式免疫荧光术、细胞周期检测及集落形成实验等技术手段研究这些GATA-2过表达胎肝造血干细胞的生物学功能变化。研究结果表明:过表达GATA-2的胎肝细胞中Lin-Sca1+C-Kit+(LSK)细胞比例显著增加,LSK细胞周期未受太大影响,但其定向克隆形成能力受抑。结论:过表达GATA-2引起小鼠胎肝造血干细胞LSK比例增加,并抑制其定向分化能力,其机制可能与HES-1表达上调导致细胞在干/祖细胞阶段受阻滞有关。     

Expression of the CD4 molecule on acute nonlymphocytic leukemia (ANLL) cell lines

Mature and immature monocytes express the CD4 molecule similar to that expressed on lymphocytes. Since monocytes and cells of myeloid lineage are derived from a common progenitor, we studied a panel of nine myeloid leukemia cell lines for the expression of the CD4 molecule. We found that six of nine myeloid leukemia cell lines (U937, KG1-B, HL-60, THP-1, HEL 92.1.7, KMOE) expressed CD4, the exceptions being the erythroleukemia line K562, myeloblast line KG1-REV, and megakaryocytic line, CHRF-288. SDS-PAGE analysis of HL-60 cells immunoprecipitated with OKT4 showed the presence of a 55 kd molecule similar in weight to that seen on lymphocytes. These data suggest that some myeloid progenitor cells express the CD4 molecule and that the CD4 may have a broader distribution within hematopoietic cells.