雌二醇浓度对大鼠髁突软骨细胞中雌激素受体mRNA表达的影响

目的：探讨雌二醇(estradiol,E2)对体外培养的髁突软骨细胞雌激素受体(estrogen recerptor,ER)基因表达的影响。方法：体外培养大鼠髁突软骨细胞,分别加入浓度为10-12、10-9、10-6、10-3 mmol/L的17β E2 24 h,实时定量PCR法检测所培养的髁突软骨细胞 ERα、ERβmRNA的表达。采用SPSS10.0软件包对结果进行统计学分析。结果：ERα和ERβ在体外培养的髁突软骨细胞中均有表达,17β E2能够上调ERα的基因表达,同时下调ERβ表达。在10-9 mmol/L的17β E2作用下,上调ERα基因表达最为明显。结论：E2浓度的改变可上调ERα的表达并下调ERβ的表达,在生理范围的雌激素浓度下,E2上调ERα基因表达的作用最为明显。     

雌激素对髁突软骨细胞作用的研究进展

髁突软骨细胞是髁突软骨唯一的细胞成分,其生长、代谢受细胞因子、力学刺激及激素影响,其中,雌激素对其的影响一直受学者们关注,它可能是引起颞下颌关节紊乱病的因素之一。髁突软骨是纤维软骨,不同于四肢关节软骨,雌激素对四肢关节软骨细胞代谢影响的研究已深入,而对髁突软骨细胞影响的研究则相对滞后。本文从雌激素对髁突软骨细胞的作用机制及对髁突软骨代谢、分化的影响两方面进行综述,这将有助于进一步认识机体雌激素水平对颞下颌关节生理与病理变化的影响,以期对颞下颌关节紊乱病的治疗提供理论指导。     

雌激素改变对大鼠髁突雌激素受体表达及形态的影响

目的:探讨雌激素在髁突形态学改变过程中可能的作用及机制.方法:40只6周龄健康未孕雌性SD大鼠,随机平均分为对照组、避孕药组、避孕药+生理盐水组和避孕药+雌二醇组.实验前和第12周、16周分别检测血清雌二醇浓度,实验结束后处死大鼠,检测髁突软骨ERα和ERβ的表达,观察髁突形态学改变.采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学分析.结果:血清雌二醇浓度检测结果显示,第12周时,与对照组相比,各组血清雌激素浓度均显著降低(P＜0.05);第16周时,与避孕药+生理盐水组相比,避孕药+雌二醇组血清雌二醇浓度显著上升(P＜0.05).H-E染色及免疫组织化学结果显示,与对照组相比,避孕药组大鼠髁突软骨发生退行性改变,ERα、ERβ表达均显著降低(P＜0.05);与避孕药+生理盐水组相比,避孕药+雌二醇组退变的髁突软骨出现修复改变,ERα表达升高(P＜0.05),ERβ表达无显著改变(P＞0.05).结论:雌激素浓度降低可出现髁突软骨退行性变,而使用戊酸雌二醇可提高血清雌激素浓度,增加ERα表达,并可能通过ER途径介导完成缓解髁突软骨退行性变的过程.     

大鼠髁突软骨细胞发育中差异蛋白的表达变化

目的：初步建立大鼠髁突软骨细胞发育过程中蛋白表达差异谱,寻找并鉴定其差异表达蛋白。方法：体外培养出生后1、7、14、28d共4组SD大鼠髁突软骨细胞,应用甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定软骨细胞。提取各组软骨细胞总蛋白．采用iTRAQ标记定量蛋白．2Dnano—HPLC和基质辅助激光解吸／电离串联飞行时间质谱（MALDI—TOF—TOF）技术动态、定量观察出生后大鼠髁突软骨细胞发育过程中差异蛋白的表达及其量变情况,所得数据用MASCOT软件处理,筛选样本之间有意义的差异蛋白,运用GO法进行蛋白分类。结果：共鉴定500种差异蛋白．其中137种具有可信度表达．包括15种高可信度表达,相对分子量在7806．24～608459．2．主要功能为参与各类代谢及发育过程、细胞骨架结构、信号转导,响应各类刺激、免疫应答以及细胞间联系及运输等。结论：本研究获得了目前较为全面的大鼠髁突软骨细胞发育中差异蛋白表达谱．并运用质谱技术成功鉴定了差异表达蛋白．为进一步研究髁突软骨细胞内蛋白功能及在颞下颌关节疾病中的改变与作用奠定基础。     

大鼠髁突软骨细胞双向电泳图谱的比较

目的:探讨大鼠髁突软骨细胞的双向电泳方法,比较不同染色方法的图谱,以助于对髁突软骨细胞进行蛋白质组学研究.方法:取第3代大鼠髁突软骨细胞,提取细胞总蛋白质,进行不同pH宽度的双向电泳,对蛋白质定量、样品溶解、聚焦时间、二向平衡时间进行探讨,并比较银染(silver)和改良考马斯亮蓝染色法(coomassi blue-silver)对图谱的影响,对获得的图谱进行Pdquest(Version 7.1)图像分析.结果:采用Bio-Rad标准方法进行双向电泳获得理想的2-DE图谱.大鼠髁突软骨细胞蛋白质大多集中在pH4～7范围.在窄范围的pH4～7分离后,蛋白质点分散.考马斯亮蓝染色检测到(1203±86)个蛋白质点,银染色检测到(1769±97)个蛋白质点.与改良的考马斯亮蓝染色比较,银染能更好地显示低丰度蛋白质,但背景加深.结论:大鼠髁突软骨细胞蛋白质的双向电泳方法可靠,结果较为满意,丰富了蛋白质组学数据库,为颞下颌关节的深入研究提供了可靠的实验依据;考马斯亮蓝染色蛋白质点清晰,背景干净,更利于后续的质谱鉴定.     

rhTGF-β1对大鼠髁突软骨细胞SZP表达的影响

目的:观察rhTGF-β1对大鼠髁突软骨细胞SZP表达的影响.方法:酶消化法获取大鼠髁突软骨细胞,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原染色鉴定.细胞培养液中分别加入10 μg/L、20μg/L rhTGF-β1后,不同时间点应用RT-PCR和ELISA法检测SZP mRNA和蛋白的表达.结果:加入10μg/L、20μg/L rhTGF-...     

下颌髁突软骨雌激素受体的测定

目的：对大鼠髁突软骨中雌激素受体（ＥＲ）进行了检测和分析,探讨ＥＲ与髁突软骨增生、分化的关系。材料和方法：选用２５只４周龄、雌性ＳＤ大鼠,随机分成５组,分别于３天、１周、２周、３周、４周后将动物处死,应用葡萄糖－活性炭吸附法（ＤＣＣ法）进行髁突软骨的雌激素受体的测定。结果：大鼠髁突软骨中存在雌激素受体,且其含量与髁突软骨的生长周期有关,增生旺盛期时受体含量较高,而分化期时含量较低。结论：研究表明,雌激素受体与髁突软骨的增生与分化密切相关;本研究证实了髁突软骨中雌激素受体的作用机制．     

雌激素对人胚髁突软骨细胞增殖分化的影响

目的 观察不同浓度的雌激素作用于体外培养的人胚髁突软骨细胞（MCCs）,探讨雌激素对MCCs增殖分化的影响。方法 体外培养MCCs,甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色法鉴定;甲基噻唑基四唑（MTT）法检测不同浓度雌激素对MCCs增殖与分化的影响。结果 高浓度（10-6 mol·L-1）、低浓度（10-12 mol·L-1）雌二醇抑制MCCs增殖分化,生理浓度（10-10、10-8 mol·L-1）雌二醇促进MCCs增殖分化,且随作用时间延长,促进或抑制作用增强。结论 雌激素对体外培养的人胚MCCs增殖分化具有双向调节作用,呈时间和剂量依赖性。表明雌激素对维持颞下颌关节的正常功能具有重要意义,可能在颞下颌关节病的发生和进程中发挥作用。     

雌激素受体与Ⅱ型胶原在人胚髁突软骨中的表达

目的探讨雌激素受体（ER）和Ⅱ型胶原在人胚髁突软骨中的表达情况。方法 采用苏木精-伊红（HE）及免疫组织化学染色法检测ERα、ERβ和Ⅱ型胶原在人胚颞下颌关节髁突软骨各层的表达。结果 Ⅱ型胶原主要表达于髁突软骨的过渡层及肥大层。ERα主要表达于髁突软骨的过渡层及肥大层,均匀分布于细胞内;ERβ集中表达于肥大层,且以细胞核内分布为主。纤维层及增殖层未见Ⅱ型胶原和ER表达,钙化软骨层有少量表达。结论 ER与Ⅱ型胶原在髁突软骨中分布一致,雌激素可选择性地结合不同亚型的ER,从而调节髁突软骨细胞分泌Ⅱ型胶原的能力。     

实验性咬合紊乱对大鼠髁突软骨局部雌激素表达的影响

目的探讨实验性咬合紊乱所致大鼠髁突软骨改建过程中的雌激素表达变化规律。方法通过正畸方法前移幼年及青春期雌性大鼠右侧上颌及左侧下颌第一磨牙,造成大鼠的实验性咬合紊乱模型,咬合紊乱组分别于2、4、6、8周后取材,去除咬合紊乱组则在实验6周时拔除第一磨牙,2周后取材。应用免疫组织化学SABC方法检测髁突软骨中雌激素的表达,并通过计算阳性细胞个数来探讨雌激素在不同时间点的表达变化规律。结果1）雌激素主要表达于大鼠髁突软骨的成熟层和肥大层;2）正常对照组大鼠髁突软骨中的雌激素表达水平自6周龄到16周龄呈逐渐降低的趋势;3）无论幼年组还是青春期组,咬合紊乱2周时雌激素表达均高于对照组（P<0.05）,4、6、8周时与对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）。去除咬合紊乱组雌激素表达高于正常对照及咬合紊乱8周组（P<0.01）。结论大鼠髁突软骨中雌激素的表达随年龄增长而减少,实验性咬合紊乱可以一过性升高髁突软骨中雌激素的表达水平。     

周期性单轴压力对大鼠髁突软骨细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨在髁突软骨细胞受到周期性单轴压力后,结缔组织生长因子(connective tissuegrowth factor, CTGF)表达的影响,为正畸治疗中髁突软骨受力后的改建提供生物学依据。方法 选取1周龄SD大鼠,提取并培养髁突软骨细胞,免疫组化鉴定。利用四点弯曲细胞力学加载仪对第3代细胞进行力值为2000u strain、0.5Hz的体外周期性单轴压力加载,分别在加力0min、30min、60min和120min后继续培养24h,应用蛋白印迹法检测在不同加力时间CTGF蛋白表达的变化。应用SPSS18.0软件对数据进行统计学分析。结果 CTGF的相对蛋白量在加力0min、30min、60min和120min后,分别为0、1.59、2.34和3.16,随着加载时间的增加,表达呈逐渐上升趋势。且组间差异具有统计学意义(P<0.05) 结论 周期性单轴压力可刺激大鼠髁突软骨细胞CTGF的表达。     

荧光组织化学法检测髁突软骨中雌激素受体

目的：了解髁突软骨中雌激素受体（ＥＲ）的分布特点及细胞内定位，探讨ＥＲ与髁突软骨增生、分化的关系。方法：应用荧光组织化学方法对青春期大鼠髁突软骨中的ＥＲ进行检测分析。结果：大鼠髁突软骨中存在ＥＲ，且主要位于细胞浆中，胞核中分布较少；ＥＲ主要分布于软骨的生发层细胞中，且在髁突软骨的生长处于增生旺盛时分布较多。结论：髁突软骨中存在雌激素—受体的作用机制，且ＥＲ与髁突软骨的增生、分化关系密切。     

大鼠髁突软骨细胞冻存复苏后的生物学特性观察

目的观察低温冻存1月后,不同年龄大鼠髁突软骨细胞的生物学特性。方法体外培养出生后1天、7天、14天、28天共4组SD大鼠髁突软骨细胞。对冻存复苏后的细胞进行形态学观察;甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色检测其对糖胺聚糖(GAG)、Ⅱ型胶原的合成能力;台盼蓝拒染试验测定细胞成活率;MTT法观察细胞增殖能力;实时定量-聚合酶链式反应(real time-PCR)检测冻存后细胞增殖核抗原(PCNA)基因表达情况。结果低温冻存后,各年龄组大鼠髁突软骨细胞仍能保持软骨细胞特有的形态及特性;细胞成活率均大于90%;生长曲线近似"S"型;冻存后各年龄组细胞pcna基因表达较冻存前无显著统计学差异(P>0.05)。结论低温冻存1月后的大鼠髁突软骨细胞成活率高,并保持了其生物学特性及增殖活性。     

周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞早期增殖活性的影响

目的 探讨不同力值、不同时段体外周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞早期增殖活性及功能状态的影响。方法 分离培养大鼠髁突软骨细胞至第三代，利用四点弯曲细胞力学加栽仪进行体外周期性单轴压应力加裁，力值为2000和4000μ strain，时间0、15、30、60、120和240min；采用流式细胞计量术和MTT四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法研究大鼠髁突软骨细胞在周期性单轴压应力作用下增殖活性的变化。结果 2000μ strain周期性单轴压应力作用120min后，细胞增殖活性逐步增强，SPF增加（P〈0．001）；4000μstrain周期性单轴压应力作用60min后，髁突软骨细胞SPF出现了一明显下降，相反G2期细胞比例增高（P〈0．001）；120min后S期、G2细胞比例开始恢复，240minSPF增加（P〈0．001）。加力后1、2、3天，实验组细胞的增殖活性与对照组相比无统计学差异。结论 2000ttstrain周期性单轴压应力刺激能促进大鼠髁突软骨细胞增殖活性逐步增强；而4000μ strain周期性单轴压应力能引起细胞增殖活性早期发生变化，表现为先抑制后促进。两组细胞增殖活性变化均为暂时性、可恢复的。     

Effects of estrogen on the condylar cartilage of the rat mandible in organ culture.

PURPOSE: The effects of estrogen on bone have been well documented. However, very little is known about the regulatory role of estrogen on cartilage and, in particular, the secondary cartilage of the mandibular condyle. The aims of this study were to determine whether estrogen receptors are present in the condylar cartilage of the rat mandible and to assess the effect of varying 17beta-estradiol (E2) concentrations on the proteoglycan content of this tissue. MATERIALS AND METHODS: Mandibular condyles of 16 female Sprague-Dawley rats were resected. Eighteen of these condyles were divided into three groups and the condylar cartilage was removed and placed in organ culture for 4 days with media containing different concentrations of estrogen: 10(-11) mol/L, 10(-8) mol/L, and 10(-6) mol/L. The cartilage then was analyzed for proteoglycan content along with six specimens not passed through the organ culture. Six intact mandibular condyles also were resected and placed in organ culture with the same varying E2 concentrations, and the condylar cartilage was analyzed for estrogen receptors along with two condyles not passed through the culture system. RESULTS: Estrogen receptors were evenly distributed within the chondroblastic and hypertrophic zones in the control group and the group with 10(-11) mol/L E2. With E2 concentrations of 10(-8) mol/L and 10(-6) mol/L, there was a qualitative decrease in hypertrophic chondroblasts, thickness of the condylar cartilage, and a significant decrease in proteoglycan content. CONCLUSIONS: This study shows the presence of estrogen receptors in the secondary cartilage of the rat mandibular condyle. Estrogen has the potential to cause a decrease in extracellular matrix and thickness of this cartilage.