miR-490-3p调控SW1990胰腺癌细胞上皮间充质转化

目的 研究miR-490-3p在分子水平上通过HMGA2蛋白对SW1990细胞上皮间充质转化的影响.方法 通过实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测正常胰腺导管上皮细胞HPDE和人胰腺癌细胞SW1990中miR-490-3p的表达.通过转染质粒[miR-490-3p阻遏物(inhibitor)和miR-490-3p...     

AP000892.6通过靶向miR-616-5p影响膀胱癌细胞迁移、侵袭和上皮间充质转化的分子机制

目的 探讨长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA)AP000892.6对膀胱癌细胞迁移、侵袭和上皮间充质转化进程的影响及相关分子机制。方法 应用GEPIA数据集分析AP000892.6在膀胱癌和癌旁组织中的表达。应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测膀胱癌细胞株647V、T24、UMUC3、5637、RT4和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中AP000892.6的表达水平。将AP000892.6过表达质粒或阴性对照质粒转染到T24细胞,实验分为AP000892.6组和NC组,RT-qPCR法验证质粒转染效率。细胞划痕法和Transwell实验分别检测转染T24细胞的迁移和侵袭能力。应用生物信息学方法预测以及双荧光素酶报告基因实验验证AP000892.6的下游靶基因。RT-qPCR法检测AP000892.6下游靶基因的表达。Western blot法检测上皮表型蛋白E-cadherin、ZO-1和间充质表型蛋白Vimentin、N-cadherin、Twist的表达。结果 与癌旁组织比较,AP000892.6在膀胱癌组织中表达降低(P<0.01)。与SV-HUC-1细胞比较,AP000892.6在膀胱癌细胞株中表达降低(P<0.05),T24细胞中AP000892.6的相对表达水平最低(P<0.01)。与NC组比较,过表达AP000892.6抑制膀胱癌T24细胞的迁移(P<0.01)和侵袭能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因分析证明miR-616-5p是AP000892.6的靶基因(P<0.01)。与NC组比较,AP000892.6对miR-616-5p表达具有负调控作用(P<0.01)。与NC组比较,AP000892.6组T24细胞中上皮表型蛋白E-cadherin、ZO-1表达上调,间充质表型蛋白Vimentin、N-cadherin、Twist表达下调。结论 AP000892.6通过靶向miR-616-5p抑制膀胱癌T24细胞的迁移、侵袭和上皮间充质转化进程。     

敲低MSX2对胰腺癌PANC-1细胞上皮-间充质转化的影响

目的研究MSX2 基因在胰腺癌PANC-1 细胞的上皮-间充质转化（EMT）/间充质-上皮转化（MET）转变中的作用。方法
通过脂质体2000将含有MSX2干扰序列的质粒（共3种,分别命名为shMSX2-1、shMSX2-2和shMSX2-3,转染空质粒的阴性对
照组NC）转染PANC-1细胞,利用Real-time RT-PCR、Western blot等技术检测MSX2在基因和蛋白水平的表达,检测干扰效率,
并选取干扰效率最高的一组用于后续试验;进而检测EMT相关上皮标志分子E-cadherin、间质标志分子Vimentin在基因和蛋白
水平的表达变化;采用CCK-8法检测干扰前后细胞的增殖能力变化,Transwell和划痕试验比较细胞的侵袭转移能力变化。结
果3组干扰质粒中shMSX2-1的干扰效率最高,CCK-8试验结果显示敲低MSX2可明显抑制PANC-1细胞增殖能力,与对照组
相比差异有显著性（P<0.05）;敲低MSX2 可明显抑制PANC-1 细胞的侵袭转移,差异有统计学意义（P<0.05）;EMT相关分子
E-cadherin表达升高,而Vimentin表达降低,且与对照组相比均有统计学意义（P<0.05）;倒置显微镜下观察敲低MSX2后细胞形
态由松散的长梭形变成紧密连接的椭圆形。RT-PCR 发现敲低MSX2 后转录因子twist 和snail 表达降低（P<0.05）,而slug 和
zeb1 表达变化无差异（P>0.05）。结论敲低MSX2 可抑制胰腺癌PANC1 细胞的增殖、侵袭转移能力,并且上皮标志分子
E-cadherin表达升高,间质标志分子Vimentin表达降低,有发生MET的趋势,MSX2可能通过twist、snail发挥其抑制作用
     

miR-454-3p通过靶向STAT3调控CNE-2人鼻咽癌细胞上皮-间质转化

目的：探讨miR-454-3p和STAT3在鼻咽癌组织中的表达情况,以及miR-454-3p靶向STAT3对鼻咽癌细胞上皮-间质转化的影响。方法：收集2023年6月～8月右江民族医学院附属医院和百色市人民医院的鼻咽癌组织和正常组织各5例,采用qRT-PCR检测各样本中miR-454-3p与STAT3的表达情况;以未处理的鼻咽癌细胞CNE-2作为空白对照组(blank group),采用Lipofectamine^TM 3000将miR-454-3p mimics、mimics NC(negative control)、miR-454-3p inhibitor、inhibitor NC(negative control)分别转染CNE-2细胞作为miR-454-3p mimics组、mimics NC组、miR-454-3p inhibitor组、inhibitor NC组;利用Targetscan预测miR-454-3p与STAT3的靶向关系并用双荧光素酶实验验证;分别采用qRT-PCR检测转染效率及转染后STAT3的mRNA水平变化;划痕愈合实验、Transwel...     

PLCD1对胰腺癌CAPAN-1和BXPC-3细胞上皮间充质转化的影响

目的 :进一步探索肿瘤相关基因磷脂酶Cδ1(phospholipase Cδ1,PLCD1)对胰腺癌细胞系增殖、侵袭及迁移的影响和潜在分子行为机制。方法:用脂质体法将pcDNA3.1-PLCD1质粒转入肿瘤,同时设立空载体组;综合利用CCK-8、克隆形成实验、划痕实验和Transwell验证PLCD1对胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,Western blot实验研究其潜在机制。结果:瞬时转染过表达质粒后的胰腺癌细胞CAPAN-1和BXPC-3中,PLCD1表达明显提高(P<0.05);CCK-8和克隆形成实验结果表明,高表达的PLCD1抑制胰腺癌细胞增殖速度(P<0.05);划痕实验和Transwell实验结果表明,细胞运动、侵袭及迁移能力下降(P<0.05)。Western blot实验发现,MAPK/ERK通路中磷酸化的ERK 1/2,间质细胞标志分子N-cadherin和Vimentin表达受抑制(P<0.05),同时上皮细胞标志分子E-cadherin表达上调(P<0.05)。结论:本研究发现PLCD1可能通过抑制MAPK/ERK通路来抑制上皮间...     

miR-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用

目的 探讨miR-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用.方法 采用实时荧光定量PCR检测8株乳腺癌细胞系(MCF7、BT474、SK-BR-3、MDA-MB-453、MDA-MB-468、HCC1937、BT549和MDA -MB -231)中miR-506的表达量,以正常乳腺上皮细胞MCF10A为对照.通过脂质体转染的方法在MDA-MB-231和BT549细胞系中瞬时过表达miR-606模拟物(设阴性对照),通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞运动能力的变化;观察MDA-MB-231和BT549细胞系转染miR-506前后细胞形态学变化;Western blotting法检测E-cadherin、Vimemin和Slug蛋白表达的变化.荧光素酶报告基因分析实验检测M DA-MB-231细胞中miR-506过表达对野生型荧光素酶活性的影响.结果 miR-506在各乳腺癌细胞中的表达量相对于正常乳腺上皮细胞MCF10A显著降低(P＜0.01).miR-506过表达显著抑制MDA-MB-231和BT549细胞的迁移和侵袭能力,与阴性对照的差异有统计学意义(P＜0.01).MDA-MB-231和BT549细胞瞬时转染miR-506 48 h后发生明显的形态学改变;Western blotting结果显示miR-506过表达在MDA-MB-231和BT549细胞中均上调E-cadherin的表达,下调Vimentin的表达.Western blotting检测结果显示MDA-MB-231细胞转染miR-506后Slug蛋白水平明显低于阴性对照;荧光素酶报告基因分析结果显示miR-506过表达显著抑制野生型荧光素酶的活性.结论 在乳腺癌中,miR-506可以通过靶向转录因子Slug诱导细胞发生上皮间充质转化,进而抑制细胞的侵袭和转移能力,这是miR-506参与乳腺癌发生和发展的可能途径之一.     

miR-409-3p靶向ZEB1负性调控卵巢浆液性癌HO-8910细胞上皮间质转化

目的 探讨miR-409-3p靶向ZEB1对卵巢浆液性癌HO-8910细胞上皮间质转化的影响及作用机制.方法 利用脂质体分别将对照mimics和miR-409-3p mimics转染入HO-8910细胞中,qRT-PCR检测其转染效率,Western blot检测各组细胞中ZEB1、E-cadherin、N-cadhe...     

miR-877-3p对骨质疏松症小鼠骨髓间充质干细胞增殖能力的影响

目的·研究骨质疏松症发生及发展过程中miR-877-3p对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖能力的影响.方法·8周龄的雌性健康小鼠20只,进行双侧卵巢摘除术,建立绝经后骨质疏松模型(OVX组).另选20只雌性健康小鼠,切除卵巢附近脂肪组织,建立假手术模型(假手术组...     

lncRNA TTN-AS1通过靶向miR-204-3p调控胃癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化

目的：探讨长链非编码RNA肌联蛋白反义RNA 1（lncRNA TTN-AS1）是否可通过靶向微小RNA-204-3p（miR-204-3p）调控胃癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化（EMT）。方法：采用qRT-PCR法检测胃癌组织、癌旁组织中TTN-AS1、miR-204-3p的表达量;体外培养人胃癌细胞AGS,分别将si-NC、si-TTN-AS1、miR-NC、miR-204-3p mimics、si-TTN-AS1与anti-miR-NC、si-TTN-AS1与anti-miR-204-3p转染至AGS细胞;采用qRTPCR法检测AGS细胞中TTN-AS1、miR-204-3p的表达量;采用Transwell小室实验检测迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测TTN-AS1、miR-204-3p的靶向关系。结果：胃癌组织中TTN-AS1的表达水平比癌旁组织增加约2.90倍（P ＜0.05）,miR-204-3p的表达水平比癌旁组织减少约0.57倍（P ＜0.05）;转染si-TTN-AS1或转染miR-204-3p mimics可明显减少迁移及侵袭细胞数（P ＜0.05）;双荧光素酶报告实验证实TTN-AS1可靶向结合miR-204-3p;共转染si-TTN-AS1与anti-miR-204-3p可明显增加迁移及侵袭细胞数（P ＜0.05）。结论：抑制TTN-AS1表达可通过上调miR-204-3p的表达从而抑制胃癌细胞迁移、侵袭及EMT。     

骨髓间充质干细胞外泌体miR-25-3p调控骨肉瘤细胞增殖迁移及侵袭能力的功能与机制研究

目的:探究骨髓间充质干细胞外泌体miR-25-3p对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制.方法:流式细胞术鉴定骨髓间充质干细胞,提取并鉴定骨髓间充质干细胞外泌体(BMSC exo),将miR-NC和miR-25-3p mimic转染至MG-63细胞(miR-NC组和miR-25-3p mimic组),将10μg/mL...     

3-methyladenine抑制自噬诱导胰腺癌细胞SW1990失巢凋亡

【目的】 探讨3-methyladenine(3-MA)对人胰腺癌SW1990细胞增殖?迁移及失巢凋亡的影响作用及其机制?【方法】 以胰腺癌细胞SW1990及永生化胰腺导管上皮细胞H6C7为研究对象,设3-MA处理组及PBS对照组,采用软琼脂克隆培养法及Poly-HEMA悬浮培养法筛选抵抗失巢凋亡的细胞?Annexin V-FITC/PI双染和TUNEL试剂盒法检测细胞凋亡;免疫荧光法及透射电镜检测细胞自噬;CCK-8法检测细胞增殖; Transwell小室检测细胞迁移能力?【结果】永生化胰腺导管上皮细胞H6C7处理组及对照组均无集落形成,胰腺癌细胞SW1990处理组形成(2.3 ± 2.63)个集落,对照组形成(9 ± 3)个,与H6C7 相比,SW1990具有较强的抵抗失巢凋亡的能力 (P < 0.05)?3-MA可抑制胰腺癌SW1990细胞自噬(P < 0.05)并抑制其增殖及迁移能力(P < 0.01)且诱导失巢凋亡(P < 0.01)?【结论】 3-MA可诱导胰腺癌细胞SW1990失巢凋亡,其机制可能与细胞自噬受抑有关?     

miR-122-3p靶向VEGFA基因对胰腺癌细胞恶性生物学行为影响的分子机制

目的 探讨miR-122-3p通过靶向血管内皮生长因子(VEGFA)基因对胰腺癌细胞增殖、克隆、迁移及侵袭能力影响的分子机制。方法 采用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胰腺癌细胞株(BxPC-3、Capan-1、PANC-1、HPAC、AsPC-1)与正常胰腺导管上皮细胞株HPDE中miR-122-3p mRNA及VEGFA mRNA的表达。将AsPC-1细胞株分为NC组、miR-con组、miR-122-3p mimic组、miR-122-3p+pcDNA组和miR-122-3p+pcDNA-VEGFA组。通过噻唑蓝(MTT)细胞增殖实验、平板克隆实验检测各组细胞增殖及克隆能力,通过细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力,通过蛋白质印迹实验检测MMP-2、VEGFA、ERK1、MAPK蛋白表达,通过双荧光素酶报告基因法和蛋白质印迹法验证miR-122-3p与VEGFA的靶向关系。结果 各胰腺癌细胞株中miR-122-3p mRNA表达量均低于HPDE细胞株,VEGFA mRNA表达量均高于HPDE细胞株(P<0.05)。miR-122-3...     

MiR-183调控PDCD4表达对SW1990胰腺癌细胞生长的调节作用

目的 观察miR-183在体外通过靶向调控程序性细胞死亡因子4（PDCD4）对SW1990胰腺癌细胞生长的调节作用。方法 将不同浓度的miR-183模拟物（miR-183 mimics）和拮抗剂（miR-183 inhibitors）通过细胞转染技术转入SW1990胰腺癌细胞株中,筛选出合适浓度,进一步应用实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot检测PDCD4基因和蛋白表达水平;MTT法检测miR-183 inhibitors对SW1990细胞生长的影响,流式细胞术和Hoechst染色检测SW1990细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测抗凋亡基因bcl-2蛋白的表达。结果 细胞转染50 nmol/L miR-183 mimic和150 nmol/L inhibitor后,miR-183基因的表达量与对照比较差异有统计学意义（P<0.05）。qPCR和Western blot发现miR-183 mimics能下调PDCD4的表达,而miR-183 inhibitors能上调PDCD4的表达,下调bcl-2（P <0.05）。MTT法显示miR-183 inhibitors能抑制细胞增殖,流式细胞术和Hoechst染色显示miR-183 inhibitors能促进胰腺癌细胞的凋亡及阻滞细胞周期于G₀/G₁期。结论 miR-183拮抗剂体外能抑制胰腺癌细胞增殖,促进凋亡和阻滞细胞周期,且可能通过靶向调节PDCD4基因发挥其调节作用。     

miR-490-3p过表达对大鼠非酒精性脂肪性肝病的改善作用及其机制

探讨miR-490-3p过表达对大鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的改善作用,并初步分析其作用机制。     

miR-370-5p对前列腺癌细胞周期及增殖的影响

目的 研究miR-370-5p导入对前列腺癌细胞株DU-145和LNCaP细胞周期和增殖的影响。方法 合成miR-370-5p（实验组）和dsControl（阴性对照组）,分别转染至两个细胞株。利用Real-time PCR和Western blot法分别检测细胞转染后p21、CDK4、Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达变化。流式细胞术分析细胞周期变化,利用MTT法和集落形成实验分析细胞活力和增殖能力。结果 Real-time PCR结果提示,转染miR-370-5p后DU-145和LNCaP细胞中p21 mRNA水平分别上调3.43倍（P<0.01）和3.06倍（P<0.01）,CDK4 mRNA水平分别下调0.51倍（P<0.01）和0.43倍（P<0.01）,Cyclin D1 mRNA水平分别下调0.31倍（P<0.01）和0.35倍（P<0.01）。Western blot法检测结果符合这一趋势。流式细胞术检测结果显示,转染miR-370-5p后,位于S期和G₂/M期的细胞比例下降,位于G₀/G₁期的细胞比例则上升,说明细胞周期被阻滞在G₀/G₁期。MTT分析结果显示,与dsControl组相比,转染miR-370-5p后,DU-145和LNCaP细胞活力明显降低。集落形成实验显示,miR-370-5p组的集落数数量明显较少,细胞增殖能力降低。结论 miR-370-5p能显著激活前列腺癌细胞中p21蛋白的表达,抑制前列腺癌细胞周期的进展和增殖。     

增强miR-146b-3p表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨增强miR-146b-3p表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 Real time PCR检测miR-146b-3p在6种人胰腺癌细胞系(MIA PaCa-2、BxPC-3、AsPC-1、PANC-1、SW1990、PC-3)和手术切除的12对胰腺癌/癌旁组织中的表达.将Pre-miR-hsa-miR-146b-3p Precursor 转染MIA PaCa-2 细胞,Real time PCR检测转染后miR-146b-3p的表达变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8的表达变化.结果 与正常胰腺组织相比,miR-146b-3p在6种胰腺癌细胞系中均呈低表达,以MIA PaCa-2细胞最为明显;12对胰腺组织中,癌组织miR-146b-3p表达水平均低于癌旁组织.同阴性对照组比较,转染前体组的MIA PaCa-2细胞,miR-146b-3p表达增强383.25倍,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率增加,蛋白Bcl-2表达降低(50.0%),Bax表达升高(4.29倍).结论 miR-146b-3p在胰腺癌细胞系和癌组织中低表达;上调胰腺癌细胞MIA PaCa-2中 miR-146b-3p的表达,能够抑制增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax的表达有关.     

miR-144-5p、miR-668-3p、miR-134-5p在儿童原发性免疫性血小板减少症中的表达

目的：探讨外周血单个核细胞（PBMCs）中miR-144-5p、miR-668-3p、miR-134-5p在儿童原发性免疫性血小板减少症（ITP）中的表达变化。方法：采用RT-qPCR检测25例ITP患儿和15例正常对照PBMCs中3种miRNAs相对表达量,Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪检测血小板计数及未成熟血小板分数（IPF%）;分析miRNAs与血小板计数的相关性,ROC曲线分析检验效能。结果：ITP患儿组PBMCs中的miR-144-5p和miR-668-3p较对照组表达均上调,miR-134-5p表达下调（均P＜0.05）。miR-144-5p和miR-668-3p在急性ITP患儿组中表达量要高于慢性ITP患儿组（均P＜0.05）,且miR-144-5P（r=-0.802,P＜0.001）和miR-668-3p（r=-0.753,P＜0.001）的相对表达量与外周血小板计数呈负相关。相较于单个指标,miR-144-5p联合IPF%诊断急性ITP的AUC为0.960,灵敏度和特异度分别为93.3%和100%;而miR-134-5p联合IPF%诊断慢性ITP的AUC为0.967,灵敏度和特异度分别为90.0%和93.3%。结论：miR-144-5p和miR-668-3p在ITP患儿PBMCs中表达显著上调,miR-134-5p表达下调,这些改变可能在疾病的发生与发展中发挥了重要作用。     

lncRNA CASC19靶向miR-490-3p调控骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

【摘要】 目的 探讨lncRNA CASC19对骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的影响以及潜在的作用机制。 方法 实验设置si con组、si CASC19组、pcDNA组、pcDNA CASC19组、miR con组、miR 490 3p组、si CASC19+anti miR con组、si CASC19+anti miR 490 3p组;qRT PCR检测miR 490 3p和CASC19的表达水平;Western blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。 结果 骨肉瘤细胞MG63、U2 OS、OS187中miR 490 3p低表达,CASC19高表达（P＜005）;过表达miR 490 3p或干扰CASC19表达可抑制骨肉瘤细胞MG63增殖、迁移和侵袭。CASC19靶向调控miR 490 3p的表达,抑制miR 490 3p表达能逆转干扰CASC19对骨肉瘤细胞MG63增殖、迁移、侵袭的抑制作用。 结论 lncRNA CASC19可抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向调控miR 490 3p有关,将可为骨肉瘤的预防和治疗提供新靶点。     

盐酸石蒜碱通过调控circSEPT9/miR-654-5p影响结直肠癌SW620细胞增殖及凋亡的机制

目的 探讨盐酸石蒜碱(lycoline hydrochloride,LH)对人结直肠癌细胞SW620细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 不同剂量的L H处理SW620细胞(L H-L组、L H-M组、L H-H组),同时将正常培养的SW620细胞记为Con组;实验分组:si-NC组、si-circSEPT9组...     

吉西他滨诱导胰腺癌细胞株SW1990的耐药作用与硫氧还蛋白还原酶活性的改变

目的建立对吉西他宾耐药的胰腺癌细胞株,探讨硫氧还蛋白还原酶(TrxR)在耐药过程中的作用.方法采用间歇浓度递增法诱导胰腺癌细胞株SW1990对吉西他宾耐药,检测其生物学性状变化,并对比观察TrxR活性变化.结果药物培养9个月后,得到稳定传代的SW1990/GZ耐药细胞株;其形态学、生长特征等均发生了明显变化,细胞变圆、体积缩小、内质网扩张、颗粒样物质增多及细胞倍增时间延长;对吉西他滨、5-氟尿嘧啶、阿霉素和丝裂霉素的耐药性均显著增加;耐药细胞的TrxR活性也明显增高.结论SW1990/GZ有多药耐药现象,TrxR在耐药过程中起一定作用.