TNF-α通过NF-κB信号通路调控宣威肺癌恶性生物学行为

摘 要：［目的］ 探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）通过影响核因子-κB（NF-κB）信号通路对宣威肺癌恶性生物学行为的调控。［方法］ ELISA检测临床收集宣威肺癌、非宣威肺癌及正常人血清样本中TNF-α水平。RT-qPCR、Western blot检测人支气管上皮样细胞16HBE、人肺腺癌细胞A549及宣威肺癌细胞XWLC-05中TNF-α;CCK-8检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期;Transwell检测细胞迁移能力;Western blot检测NF-κB经典及非经典信号通路相关蛋白水平。［结果］ TNF-α在宣威肺癌患者血清及细胞中显著性高表达,差异均有统计学意义（P<0.05）。沉默TNF-α不仅阻滞细胞周期、抑制细胞增殖及迁移,并促进凋亡（P<0.05）;也抑制NF-κB经典信号通路。XWLC-05被外源性TNF-α促进的恶性生物学行为可被NF-κB信号通路抑制剂扭转（P<0.05）。［结论］ TNF-α通过激活NF-κB经典信号通路促进宣威肺癌细胞恶性生物学行为。     

CD147在乳腺癌细胞中的表达及对癌细胞增殖及TGF-β信号通路的影响

摘 要：［目的］ 观察细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)在乳腺癌细胞表达及对癌细胞增殖及转化生长因子-β（TGF-β）信号通路的影响。［方法］ 收集2018年4月至2019年2月我院诊治的50例乳腺癌患者的乳腺癌和癌旁组织样本,CD147表达采用免疫组化检测。采用Western blot检测不同乳腺癌细胞中CD147蛋白表达,乳腺癌细胞HCC1806中转染siRNA后检测乳腺癌细胞增殖能力和TGF-β信号通路蛋白表达。［结果］ 与癌旁组织相比,乳腺癌组织中CD147蛋白表达明显上调（χ2=54.958,P<0.001）。与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,乳腺癌细胞中CD147蛋白表达水平明显上调（F=10.841,P<0.001）。与对照组相比,转染CD147-siRNA后第2d和3d细胞增殖能力明显下降（t=5.029和5.316,P=0.007和0.006）,同时TGF-β、磷酸化SMAD家族成员3（p-Smad3）和转录因子E2F（E2F4）蛋白水平明显升高（t=7.934,10.427和9.985,P=0.001,<0.001和0.001）,而Myc家族蛋白c（c-Myc）蛋白水平明显下降（t=10.137,P=0.001）。［结论］ 乳腺癌中CD147表达明显上调,CD147可能通过抑制TGF-β/Smad3信号通路来促进乳腺癌细胞增殖。乳腺癌中CD147表达在乳腺癌诊断和治疗中具有一定临床意义。     

miR-145靶向Glut1调节Akt通路对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

摘 要：［目的］ 探讨微小RNA-145（miR-145）对葡萄糖转运蛋白1(Glut1)表达和丝苏氨酸激酶(Akt)信号通路的调节作用，以及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。［方法］ 2018年2月至2019年2月20例乳腺癌样本及其癌旁组织样本进行Glut1的免疫组化染色，同时采用荧光定量PCR对组织样本中Glut1和miR-145基因表达水平进行检测。采用蛋白免疫印迹实验检测不同乳腺癌细胞株中Glut1蛋白的表达，选择Glut1表达量较高的MDA-MB-231细胞用于后续实验。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-145对Glut1的转录调控，采用磺酰罗丹明B(SRB)实验和细胞迁移侵袭(Transwell)实验验证miR-145对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响，采用Western blot实验验证Akt信号通路蛋白的表达。［结果］ 与癌旁组织相比，乳腺癌组织中Glut1蛋白和基因表达明显提高（t=7.230，P=0.002），而乳腺癌组织中miR-145表达明显下降（t=4.246，P=0.013）。乳腺癌细胞中转染miR-145后Glut1表达明显下降（t=7.664，P=0.002），并且miR-145对Glut1基因转录具有一定抑制作用，并且抑制效应依赖于Glut1基因的3′-UTR区域。乳腺癌细胞中转染miR-145后细胞在3d和4d的增殖能力（t=7.746和8.086，P=0.001和0.001）以及迁移能力明显下降（t=4.960，P=0.008），并且Akt蛋白的磷酸化水平明显下降（t=5.406，P=0.006）。［结论］ 在乳腺癌中Glut1表达和Akt信号通路的活化能够被miR-145所抑制，并且miR-145能够抑制乳腺癌细胞增殖和迁移。     

HCV C 蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究

目的探讨HCV C蛋白在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF-κB)调控作用.方法利用稳定表达HCV C蛋白的QBC939细胞株(QBC939 HCV C ),通过NF-κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)检测HCV C蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF-κB的DNA结合活性和反式激活活性.RT-PCR、Western blot检测HCV C蛋白对核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及p50、p65、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响.结果①EMSA结果显示QBC939HCV C 细胞系中NF-κB相对信号密度明显比QBC939细胞高.②将pNF-κB-lun表达质粒转染稳定表达HCV C蛋白胆管癌细胞系中,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性,结果显示QBC939HCV C 细胞中活化NF-κB为12.8倍,而QBC939细胞中NF-κB为2.6倍.③RT-PCR显示IκBα mRNA在QBC939 HCV C 细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异;Western blot结果显示稳定表达HCV C蛋白的QBC939 HCV C 细胞株的胞核中的p50、p65蛋白高水平表达,而未转染HCV C蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的p50、p65蛋白.在QBC939HCV C 细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达,QBC939细胞高水平表达,但IκBα蛋白磷酸化水平则相反.结论HCV C蛋白通过增加IκBα降解激活的NF-κB在肝门部胆管癌的发生中起重要作用.     

阻断NF-κB信号通路对人肝门部胆管癌细胞QBC939增殖的影响

  目的  研究阻断NF-κB信号通路对人肝门部胆管癌细胞QBC939生长增殖的影响。  方法  常规培养QBC939细胞, 采用PDTC(100μmol/L)阻断NF-κB信号通路, Western blot检测核内P65蛋白水平的表达, CCK-8检测细胞生长增殖抑制率, 流式细胞仪观察细胞周期与凋亡的变化情况。  结果  经PDTC阻断NF-κB信号通路后, 与对照组相比, 细胞核内P65蛋白水平明显下降(P < 0.05)。CCK-8检测显示细胞增殖活性明显受到抑制, 并随时间的延长而愈渐明显, 12、24、36h后细胞增殖抑制率分别为(22.53±0.03)%、(46.54±0.03)%、(58.02±0.03)%, 与对照组相比差异有统计学意义(P < 0.05)。流式细胞仪检测发现实验组G₀/G₁期细胞比例高于对照组, 分别为(68.53±1.72)%、(38.3±1.35)%, 差异有统计学意义(P < 0.05);细胞凋亡率在实验组为(27.68±2.77)%, 对照组仅为(9.27±2.36)%, 差异有统计学意义(P < 0.05)。  结论  阻断NF-κB信号通路诱导人肝门部胆管癌细胞G₀/G₁期阻滞及细胞凋亡, 从而抑制细胞生长与增殖, 提示NF-κB信号通路组成性激活参与人肝门部胆管癌的发生发展, 以NF-κB信号通路作为治疗的靶点可能给人肝门部胆管癌带来新的治疗选择。      

外源性IL-17对胃癌细胞生物学特性的影响及其机制研究

摘 要：［目的］ 检测外源性IL-17对胃癌细胞生物学特性的影响,探讨其可能的作用机制。［方法］ RT-PCR法检测3种胃癌细胞株中IL-17R的表达;MTT法、细胞划痕和Transwell侵袭实验分别检测IL-17对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;ELISA实验测定IL-17处理后培养上清中IL-6、IL-8和TNF-α的含量;Western blot技术检测IL-17对通路蛋白Akt、NF-κB及p-Akt、p-NF-κB表达的影响。［结果］ IL-17R在3种细胞株均有表达,且在SGC7901细胞中表达最高;外源性IL-17处理胃癌细胞后,其增殖活性无明显变化,但细胞迁移距离明显增大,穿膜细胞数明显增多,培养上清中IL-6和IL-8的分泌水平显著增高,而TNF-α的分泌水平无明显变化;细胞内Akt和NF-κB及p-Akt、p-NF-κB表达水平均显著增高。［结论］ 外源性IL-17对胃癌细胞增殖无明显影响,但可明显促进其迁移和侵袭。IL-17可能通过调节PI3K-Akt信号通路上调IL-6和IL-8的分泌,促进胃癌细胞迁移和侵袭     

NF-κB信号通路在食管鳞癌细胞系中的激活

目的核转录因子NF-kappaB(NF-κB)是一种重要的转录因子,参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。本研究拟通过检测NF-κB信号通路在食管鳞癌细胞系中是否存在,分析NF-κB在食管鳞癌细胞中的激活状态及其对食管鳞癌细胞的生存及转化作用。方法采用免疫细胞化学法和Western blotting法检测两株食管鳞癌细胞系中NF-κB亚单位p50和p65,阻遏物IκBα及其上游激酶IKKβ的蛋白表达。并采用EMSA法检测两株食管鳞癌细胞核中NF-κB与DNA的结合活性。结果食管鳞癌细胞中存在激活的NF-κB信号通路,p50、p65、IκBα及其上游激酶IKKβ的蛋白在细胞质中均表达,并且p50/p65在细胞核中具有较高的DNA结合活性。结论本研究发现NF-κB信号通路在两种食管鳞癌细胞系被激活,提示激活的NF-κB信号通路可能在食管鳞癌发生中起重要作用。     

RNA干扰NF-κBp65基因表达对胃癌细胞株SGC-790增殖、凋亡的影响

摘 要：［目的］探讨RNA干扰NF-κBp65基因表达对胃癌细胞株SGC-790增殖、凋亡的影响。［方法］ 培养SGC-790胃癌细胞株,分为阴性对照组、siRNA-NC组、NF-κBp65-siRNA转染组。检测不同组细胞增殖抑制率及凋亡率,采用Western blot检测STAT3信号通路相关蛋白表达水平。［结果］ （1）MTT检测发现,在48h及72h时,NF-κBp65-siRNA组的细胞抑制率显著高于空白组与siRNA-NC组（P均<0.05）。（2）流式细胞术检测发现,48h时,空白组、siRNA-NC组、NF-κBp65-siRNA组的细胞凋亡率分别为5.85%±0.25%、6.13%±0.39%、16.05%±0.14%,NF-κBp65-siRNA组的细胞凋亡率显著增加（P<0.001）。（3）Transwell检测结果显示,空白组、siRNA-NC组、NF-κBp65-siRNA组穿过Transwell小室的细胞数量分别为379.62±10.51、386.86±11.42、89.62±5.73,NF-κBp65-siRNA组的穿膜细胞数量显著少于空白组与siRNA-NC组（P均<0.001）。（4）Western-blot检测显示,与空白组相比,NF-κBp65-siRNA组中p-STAT3、PCNA、MMP-2蛋白的表达量均显著下降（P均<0.05）。［结论］在SGC-790胃癌细胞株中,抑制NF-κBp65表达水平可能通过降低STAT3信号通路活性,抑制细胞增殖并促进凋亡。     

谷氨酰胺对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及TNF-α和NF-κB表达的影响

摘 要：［目的］ 探讨谷氨酰胺（glutamine,Gln）对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及TNF-α、NF-κB表达的影响。［方法］ 体外培养肺腺癌A549细胞株,CCK-8法检测不同浓度Gln（2、4、8、16、32、64 mmol/L）对A549细胞的增殖影响,筛选适宜浓度。Transwell 实验检测细胞迁移能力,ELISA法和Western Bolt法分别检测TNF-α、NF-κB p65蛋白表达。［结果］ （1） Gln对A549细胞的作用与干预浓度有关,缺乏Gln时细胞生长受限;低浓度Gln（2、4、8mmol/L）对细胞增殖无明显抑制作用;高浓度Gln（16、32、64mmol/L）作用下抑制作用明显（P<0.01）并呈时间依赖性,且32mmol/L和64mmol/L两组作用无明显差异（P>0.05）。（2）与对照组相比,Gln组明显降低A549细胞迁移数;高浓度Gln组明显降低TNF-α、NF-κB p65蛋白的表达（P<0.01）,但32mmol/L和64mmol/L组之间无统计学差异（TNF-α分别为14.671±0.842pg/ml、14.867±1.21pg/ml,NF-κB p65分别为0.548±0.042、0.474±0.077）（P>0.05）。［结论］ Gln对肺腺癌A549细胞的作用与浓度有关,32mmol/L可能为最适抑制浓度。Gln可能通过下调TNF-α和NF-κB p65蛋白表达并抑制A549细胞的迁移发挥抗肺腺癌作用。     

哈萨克族食管癌患者中Lrig1通过MEK-ERK信号通路调控NF-κB及MMP-2表达

  目的  探讨Lrig1、NF-κB及MMP-2在哈萨克族食管癌患者中的表达与PI3K-AKT、MEK-ERK信号通路及与临床病理指标之间的关系。  方法  采用RT-PCR方法检测48例哈萨克族食管癌患者组织中Lrig1、NF-κB、MMP-2表达, 探讨NF-κB、MMP-2的表达与Lrig1的关系。纳入PI3K及MEK信号通路的关键基因PI3K、AKT1、MEK1、MEK2、MEK5、ERK1、ERK2, 研究Lrig1调控NF-κB、MMP-2基因表达的通路。  结果  转录水平mRNA检测显示在肿瘤组织及远端正常组织中NF-κB（P < 0.001, P= 0.014）、MMP-2（P=0.003, P=0.045）的表达与Lrig1 mRNA表达相关; 蛋白水平Western blot检测显示Lrig1与NF-κB、MMP-2可能呈负相关。在肿瘤组织中MEK5（P < 0.001）及ERK2（P=0.009）的表达与Lrig1相关; PI3K在正常组织中（P < 0.001）的表达与Lrig1相关。Lrig1、MMP-2及NF-κB协同表达率为52.1%（25/48）, 其协同表达与淋巴结转移相关（P=0.020）。  结论  NF-κB、MMP-2与Lrig1协同表达促进食管癌患者的淋巴结转移, Lrig1可能是通过MEK-ERK信号通路调控相关基因表达。      

姜黄素增强人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1放射敏感性的研究

目的 研究姜黄素对人乳头瘤状甲状腺癌细胞TCP-1放射敏感性的影响,并探索姜黄素可能作用的信号通路,为甲状腺癌放射增敏剂的开发提供新的思路。方法 使用姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1,CCK-8法检测细胞增殖,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,western blot检测p50、p65、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达变化。使用NF-κB信号通路抑制剂PDTC抑制NF-κB信号通路活性,检测细胞增殖、克隆形成和凋亡变化。结果 姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1后,细胞增殖率下降,克隆形成减少,凋亡上升,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调,并呈浓度依赖性。这些结果表明姜黄素可增加TPC-1细胞的放射敏感性。碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路活化,姜黄素可以抑制碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路的激活。使用抑制剂抑制NF-κB通路的活性,细胞增殖下降,克隆形成减少,凋亡上升,放射敏感性升高。结论 姜黄素可能靶向NF-κB信号通路,通过抑制NF-κB信号通路活性调节甲状腺癌细胞的放射敏感性。     

HERG 基因调控 NF-κB 通道抑制骨肉瘤恶性表型的研究

目的：检测HERG（human ether-à-go-go-related gene）钾离子通道在骨肉瘤中的表达,并探索小干扰 RNA（siRNA）沉默 HERG 表达后对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能的调控机制。方法采用反转录定量聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blotting 和免疫组织化学法检测骨肉瘤 MG-63细胞和组织中 HERG 的表达。实验分组为：HERG-siRNA 处理为实验组,control-siRNA 处理为对照组,未行任何处理为空白组。分别采用 CCK-8法、克隆形成、流式细胞仪和 Tunel 法检测 MG-63细胞增殖、生长和凋亡的变化。最后采用 Western blo-tting检测骨肉瘤细胞中核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白的表达水平。结果HERG 在骨肉瘤细胞和组织中异常高表达。CCK-8法结果示,实验组[（75．34±4．45）％]与对照组[（100．60±5．31）％]和空白组[（100．00±5．66）％]的细胞增殖水平相比,差异有统计学意义（t ＝3．64,P ＝0．007;t ＝3．43,P ＝0．009）。克隆形成结果示,实验组（134．30±11．82）与对照组（225．30±11．56）和空白组（232．80±12．21）的克隆形成数相比,差异有统计学意义（t ＝5．51,P ＝0．002;t ＝5．80,P ＝0．001）。流式细胞凋亡结果示,实验组[（28．10±2．21）％]与对照组[（9．36±2．42）％]和空白组[（10．92±2．51）％]的早期凋亡所占比例相比,差异有统计学意义（t ＝5．72,P ＝0．005;t ＝5．14,P ＝0．007）。Tunel 法结果示,实验组[（31．57±2．08）％]与对照组[（10．35±1．82）％]和空白组[（7．96±0．88）％]的凋亡指数相比,差异有统计学意义（t ＝7．69,P ＝0．002;t ＝10．48,P ＝0．001）。抑制 HERG 表达可明显下调 NF-κB 信号通路中细胞凋亡抑制蛋白-1（cIAP-1）、X 染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）、Bcl-2和 Survivin 的活性,同时还下调磷酸化 NF-κB 抑制蛋白（IκB）α和 NF-κB p65的表达水平。结论HERG 在骨肉瘤中高表达,其通过调控 NF-κB 信号通路参与骨肉瘤细胞增殖和凋亡过程,有望成为骨肉瘤治疗和诊断的新靶点。     

肾癌中PPARα通过IKK改变NF-κB信号通路活性的实验研究

目的:观察对舒尼替尼耐药的肾癌细胞系(A498、Caki-1、786-O)中PPARα调控NF-κB信号通路活性的作用机制。方法:首先培养对舒尼替尼耐药的三种肾癌细胞系(A498、Caki-1、786-O),上调和下调PPARα的表达后,用Western blot法和荧光素酶法,分别检测耐药和敏感细胞系中NF-κB p65的表达水平以及NF-κB 活性。用RT-PCR和Westen blot法分别检测空白对照组和NF-κB+SN50（信号通路抑制组）中,PPARα 的 mRNA 和蛋白表达水平。在稳定过表达PPARα和低表达PPARα时用Westen blot法分别检测耐药细胞株(A498)中IKK,P-IKK,P-NF-κB p65蛋白的表达水平。结果:舒尼替尼耐药的肾癌细胞系中,下调PPARα,抑制NF-κB p65的表达。抑制NF-κB信号通路,PPARα表达变化未出现显著性差异。上调PPARα基因表达,IKK、P-IKK、P-NF-κB p65蛋白的表达显著性升高。结论:PPARα 可能通过改变上游基因IKK的表达来调控NF-κB 信号通路活性。     

PDTC对胃癌细胞MKN-45 p53异构体表达的影响及其生物学意义

摘 要：［目的］ 探讨核因子-κB(NF-κB) 抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对胃癌细胞MKN-45 p53异构体表达的影响及其生物学意义。 ［方法］ 不同浓度的PDTC（25、50、75μmol/L）单独及联合顺铂(4μg/ml)作用于胃癌细胞MKN-45,采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8试剂盒)检测细胞增殖抑制率;实时荧光定量多聚酶链反应(RT-PCR)检测p53β、Δ133p53及NF-κB p65在mRNA水平的表达情况。［结果］ CCK-8结果显示,PDTC(25、50、75μmol/L)单独作用时能抑制MKN-45细胞生长,抑制率分别为4.95%、12.20%、21.28%,差异有统计学意义（P＜0.0001）;当与顺铂（4μg/ml）联合时,MKN-45细胞增殖抑制率随PDTC浓度的增加而增加,且高于单独顺铂组,差异有统计学意义（P＜0.001）。RT-PCR结果显示,当用不同浓度PDTC (25、50、75μmol/L) 预处理2h后再加入顺铂（4μg/ml）,MKN-45细胞中p53β mRNA的表达差异无统计学意义（P=0.04）,而Δ133p53和p65 mRNA的表达随PDTC浓度的增加而降低,且低于顺铂单独组,差异有统计学意义（P＜0.0001）。Pearson相关性分析显示,p65与p53β mRNA表达无相关性（r=0.072,P=0.798）,p65与Δ133p53 mRNA表达呈正相关（r=0.814,P＜0.0001）。 ［结论］ NF-κB 抑制剂PDTC可以抑制MKN-45细胞的生长,也可以增强顺铂对该细胞的生长抑制效应,Δ133p53异构体可能是NF-κB-p53对话的关键分子。     

粉防己碱通过NF-κB通路抑制肿瘤相关成纤维细胞分泌IL-8阻断肺腺癌细胞的侵袭转移

摘 要：［目的］ 研究粉防己碱（tetrandrine,Tet）通过调控肿瘤相关成纤维细胞（CAF）旁分泌因子的表达抑制肺腺癌细胞侵袭转移的作用效应,探讨NF-κB通路在Tet抑制CAF分泌IL-8促进肺腺癌细胞侵袭转移中的重要作用。［方法］ 采用条件培养基（CM）刺激胚肺成纤维细胞MRC5建立CAF模型,Western blot实验分析Tet作用前后NF-κB通路蛋白IKK、IκB和p65表达和磷酸化水平,ELISA实验检测Tet作用前后CAF分泌IL-8情况,以及Tet对CAF诱导肺腺癌细胞H1975侵袭转移的影响。抗体封闭培养基中游离的IL-8,分析CAF诱导H1975细胞侵袭转移能力的变化,验证IL-8是否Tet调控CAF旁分泌因子的表达抑制H1975细胞侵袭转移的关键因子。［结果］ Tet作用24h,CAF中NF-κB通路蛋白IKK、IκB和p65蛋白的磷酸化水平显著性下降;Tet组培养基上清液中IL-8含量为（151.7±24.8）pg/ml,显著性低于模型组的（384.7±39.5）pg/ml（P<0.001）;模型组诱导H1975细胞迁移的数量为141.7±21.5,Tet组为41.3±11.9（P<0.01）;模型组诱导H1975细胞侵袭的数量为129.7±25.1,Tet组为56.7±14.5（P<0.05）。模型组诱导H1975细胞迁移的数量为152.3±25.5,IL-8封闭（aIL-8）组为61.7±15.5（P<0.01）;模型组诱导H1975细胞侵袭的数量为136.3±14.5,aIL-8组为73.3±12.7（P<0.01）。［结论］ Tet具有抑制CAF诱导肺腺癌细胞侵袭转移的作用效应,其机制与抑制NF-κB通路的活性和CAF分泌IL-8有关。     

舒尼替尼通过NF-кB旁路途径诱导人肝癌HepG2细胞NKG2DLs的表达

目的：探讨舒尼替尼通过NF-κB信号通路诱导肝癌HepG2细胞表达自然杀伤细胞2族成员D配体（natural killer group 2 member D ligands, NKG2DLs)的分子机制。方法： 常规体外培养HepG2细胞,单细胞凝胶电泳检测1 μmol/L舒尼替尼处理HepG2细胞24 h前后DNA损伤情况,实时荧光定量PCR检测药物处理前后细胞DNA损伤修复分子mRNA的表达,Western blotting 检测分别以NF-κB激动剂和抑制剂处理HepG2细胞前后NKG2DLs蛋白表达及IKKα和IκBα表达情况。结果： 舒尼替尼药物处理后,HepG2细胞均发生不同程度DNA损伤;且AP-1、ATM、ATR mRNA表达水平明显升高,而CHK1、CHK2、GSK3β mRNA表达水平明显降低;不同处理组间DNA损伤修复相关信号分子mRNA表达有显著差异（F=61.242,P=0.000）。NF-κB转录活性抑制剂JSH-23可降低HepG2细胞NKG2DLs蛋白表达量,而NF-κB转录活性激动剂TNF-α、PMA均可增加HepG2细胞NKG2DLs蛋白表达量（F=15.043,P=0000）;舒尼替尼处理肿瘤细胞后NF-κB的抑制分子IKKα被抑制,而激活分子IκBα被激活。结论： 舒尼替尼可通过DNA损伤修复分子激活NF-κB旁路途径诱导肿瘤细胞表达NKG2DLs。     

NF-κB和GM-CSF表达与乳腺癌骨转移相关性的研究

目的探讨核转录因子-κB（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB）和粒-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage clony-stimulating factor,GM-CSF）的表达与乳腺癌发生骨转移的相关性及其与临床病理指标的关系。方法采用免疫组化方法,检测52例乳腺癌骨转移患者、72例乳腺癌患者肿瘤组织中NF-κB和GM-CSF的表达。结果乳腺癌骨转移组NF-κB阳性表达率（69.2%）明显高于乳腺癌组（41.7%）,P=0.002;而乳腺癌骨转移组GM-CSF阳性表达率（34.6%）低于乳腺癌组（63.9%）,P=0.001;NF-κB和GM-CSF表达间无明显的相关性（P=0.490）;NF-κB表达与乳腺癌分子病理分型有相关性（P=0.000）,而GM-CSF表达与乳腺癌分子病理分型无明显相关性（P=0.991）;NF-κB表达与肿块大小、临床分期、淋巴结转移数目、受体状态、HER-2、p53表达有关,GM-CSF表达与其它临床病理指标均无相关性。结论 NF-κB表达与乳腺癌多项临床病理指标有关,其可能与乳腺癌骨转移发生有关。     

肝癌细胞 miR-183表达及上下游调控机制探讨

目的： miR-183的显著上调已成为临床肝肿瘤发生的普遍特征,但其在肝癌发生中的分子机制亟待阐明。本研究探讨肝癌细胞 Hep3B 中 miR-183的表达及其上游调控机制和下游靶标蛋白变化。方法 MTT 法检测人正常肝细胞株 LO2及人肝癌细胞株 HepG2、Hep3B 的细胞增殖活性。提取细胞的总 RNA 和蛋白,采用 RT-qPCR 和蛋白印迹法分别检测细胞株中 miR-183的表达和细胞外信号调节激酶1／2（extracellular signal-regulated kinase 1／2,ERK1／2）、磷酸化 ERK1／2（phospho-ERK1／2,p-ERK1／2）、磷酸化胞内磷脂酰肌醇激酶（phospho-phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶 B（phospho-protein kinase B,p-AKT）、NF-κB 抑制蛋白α亚基（nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor,alpha,IκBα）和程序性细胞死亡因子4（programmed cell death factor 4,PDCD4）的蛋白水平。用抑制剂分别抑制 Hep3B 细胞 ERK、PI3K、AKT 和 NF-κB 信号分子的活性并检测 miR-183的表达水平及 PD-CD4蛋白表达水平。结果 LO2、HepG2和 Hep3B 细胞在48 h 的增殖倍数分别为8．76±0．22、16．61±1．59和19．86±0．69,F ＝159．90,P ＜0．001。与 LO2（41．68±9．62）和 HepG2（41．53±1．20）细胞相比,Hep3B（69．15±11．02）的 miR-183细胞表达水平显著升高,F ＝10．250,P ＝0．012。与 LO2相比,Hep3B 细胞的 p-ERK1、ERK1、p-AKT 和 IκBα的蛋白水平明显升高,分别为 LO2的10．87、24．68、6．67和1．92倍;PDCD4的蛋白水平明显下降,为 LO2的0．14倍。与LO2细胞相比,HepG2细胞的 IκBα和 PDCD4蛋白表达明显升高,分别为 LO2的4．46和7．90倍。抑制 ERK 的活性后24 h,miR-183表达水平显著上升,F ＝215．459,P ＜0．001;抑制 Hep3B 细胞的 PI3K 活性后12和24 h,miR-183表达水平显著降低,F ＝80．215,P ＜0．001;抑制 AKT 的活性后12和24 h,miR-183表达水平显著下降,F ＝101．947,P ＜0．001;抑制 NF-κB 的活性后12和24 h,miR-183表达水平没有显著变化,F ＝1．826,P ＝0．216。抑制 ERK 和 NF-κB 信号分子活性对 PDCD4的蛋白表达没有显著影响。抑制 PI3K 和 AKT 信号分子活性可明显提升 PDCD4的蛋白表达水平。结论在 Hep3B 细胞中,PI3K／AKT 对 miR-183的表达有显著的促进作用,而 ERK 对 miR-183的表达有显著的抑制作用,NF-κB 不是调控 miR-183表达的主要信号分子。PDCD4是 miR-183的重要下游靶蛋白。     

拓扑替康对卵巢癌SKOV3细胞水通道蛋白5及NF-κB表达的影响

背景与目的：水通道蛋白5（aquaporin 5,AQP5）的表达异常与卵巢癌细胞的浸润转移和血管形成有关。核转录因子NF-κB参与细胞的增殖、分化、凋亡,且能影响肿瘤细胞对化疗的敏感性。本研究探讨拓扑替康（topotecan,TPT）对卵巢癌SKOV3细胞中AQP5、核转录因子（nuclear factor kappa B,NF-κB）及其抑制因子（inhibitor kappa B,IκKBa）表达的影响。方法：用不同浓度TPT作用SKOV3细胞不同时间后,应用MTT法检测并计算卵巢癌细胞增殖抑制率,蛋白质印迹法检测AQP5、NF-κB及IκBα蛋白表达。并分析各蛋白表达水平的相关性。结果：0．4μg／mL TPT与SKOV3细胞温育24h,AQP5、胞浆和胞核NF-κB p65以及胞浆IκKBa表达随着作用时间延长均明显下降,并维持至72h后（P〈0．05）。不同浓度（0．2μg／mL、0．4μg／mL、0．6μ／mL、0．8μg／mL）TPT作用于SKOV3细胞24h,随着TPT浓度增加,SKOV3细胞AQP5表达量逐渐减少（P〈0．05）,0．8μg／mL TPT AQP5表达抑制率为57．9％;同时,细胞核NF-κBp65、IκKBa表达量也逐渐减少。TPT对细胞的增殖抑制率与AQP5表达呈负相关（r=-0．965;P〈0．05）,AQP5表达与NF-κB p65和IκKBa呈正相关（r=0．903,0．896;P〈0．05）。结论：TPT抑制肿瘤细胞增殖时下调AQP5及核转录因子NF—κB表达。     

食管鳞癌及癌旁粘膜中核转录因子κB p65及IκBα基因和蛋白表达及意义

目的:探讨核转录因子κB(NF-κB)p65基因及其抑制基因IκBα的表达与食管鳞癌发生的关系。方法:用RT-PCR及免疫组化SP法检测了61例食管鳞癌及其正常粘膜上皮、癌旁粘膜上皮中NF-κBp65基因、IκBα基因mRNA及蛋白的表达。结果:食管鳞癌中p65mRNA、IκBαmRNA的表达量明显高于正常上皮(P<0.01),p65蛋白、IκBα蛋白胞浆表达或胞核表达率均明显高于正常上皮(P<0.01)。癌旁粘膜中,NF-κBp65蛋白、IκBα蛋白在癌旁正常上皮中的胞浆或胞核阳性率均明显低于不典型增生上皮、原位癌和浸润癌(P均<0.05)。结论:NF-κBp65、IκBαmRNA表达和蛋白表达均与食管鳞癌的发生有关。