麝香保心丸调节PINK1/Parkin信号通路对糖尿病视网膜病变大鼠的影响

[目的] 探讨麝香保心丸（SBP）对糖尿病视网膜病变（DR）大鼠线粒体自噬及PTEN诱导激酶蛋白1（PINK1）/细胞质E3-泛素连接酶（Parkin）信号通路的影响。[方法] 建立DR大鼠模型,将大鼠随机分为正常组（Control组）、模型组（DR组）、麝香保心丸低剂量组（SBP-L组）、麝香保心丸高剂量组（SBP-H组）、麝香保心丸高剂量+雷帕霉素组（SBP-H+RAP组）。检测各组大鼠空腹血糖（FPG）及总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平;苏木精-伊红（HE）染色观察各组大鼠DR情况;酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组大鼠血管内皮生长因子（VEGF）、高迁移率族蛋白1（HMGB1）水平;透射电镜观察各组大鼠细胞线粒体形态;免疫组化检测线粒体自噬相关蛋白选择性自噬接头蛋白sequestosome-1（SQSTM1/P62）、微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3-Ⅱ）的表达;蛋白免疫印迹法检测各组大鼠PINK1、Parkin蛋白表达。[结果] 与Control组比较,DR组视网膜结构破坏严重,细胞排列紊乱,水肿明显,细胞间隙变宽,线粒体损伤、肿胀明显,形态异常,FPG、TC、TG、LDL-C、VEGF、HMGB1、LC3-Ⅱ、PINK1、Parkin表达水平显著升高,SQSTM1/P62表达水平显著降低（P＜0.05）;与DR组比较,SBP-L组、SBP-H组视网膜细胞结构改善,细胞排列逐渐整齐,细胞水肿减轻,细胞、线粒体形态均趋于正常,线粒体肿胀减轻,FPG、TC、TG、LDL-C、VEGF、HMGB1、LC3-Ⅱ、PINK1、Parkin表达水平显著降低,SQSTM1/P62表达水平显著升高（P＜0.05）;与SBP-H组相比,SBP-H+RAP组视网膜细胞结构破坏加重,细胞排列紊乱,水肿明显,线粒体肿胀加重,形态异常,FPG、TC、TG、LDL-C、VEGF、HMGB1、LC3-Ⅱ、PINK1、Parkin表达水平显著升高,SQSTM1/P62表达水平显著降低（P＜0.05）。[结论] 麝香保心丸通过抑制PINK1/Parkin信号通路抑制DR大鼠线粒体自噬。     

从阴阳自和角度探讨灰树花多糖对CIF模型线粒体自噬蛋白PINK1和Parkin的调节效应

目的:探讨灰树花多糖调节化疗相关性疲劳(CIF)模型骨骼肌线粒体异常的机制。方法:将60只6～8周龄SPF级C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、灰树花多糖低剂量组(5 mg·kg~(-1))和灰树花多糖高剂量组(10 mg·kg~(-1)),每组15只。将除空白组以外的小鼠腹腔注射5-氟尿嘧啶(5-Fu,40 mg·kg~(-1)),每天给药1次,连续5 d,同时灰树花多糖低、高剂量组分别给予不同剂量灰树花多糖灌胃,空白组和模型组给予等量生理盐水灌胃,期间测量体质量及抓力。第13天处死动物取腓肠肌,测SOD和MDA含量,透射电镜观察腓肠肌线粒体形态,Western Blot法检测线粒体自噬相关蛋白PINK1和Parkin的表达情况。结果:与空白组相比,模型组抓力显著下降(P0.05),SOD显著降低(P0.01),MDA显著升高(P0.01),灰树花多糖组抓力显著高于模型组(P0.05),灰树花多糖高剂量组SOD显著高于模型组(P0.05),灰树花多糖组MDA显著低于模型组(均P0.01)。电镜结果显示模型组骨骼肌线粒体肿胀变形,且有大量空泡变性,线粒体内嵴排列紊乱或不清晰,灰树花多糖组骨骼肌肌节仍有部分排列紊乱或断裂现象,但可见较多自噬的线粒体。Western Blot结果显示模型组线粒体自噬相关蛋白PINK1和Parkin的表达显著下降(P0.01),灰树花多糖可显著增加PINK1和Parkin的表达(P0.01)。结论:灰树花多糖可以改善CIF骨骼肌SOD与MDA失衡,增强线粒体自噬相关蛋白PINK1和Parkin的表达,促进线粒体自噬。     

基于PINK1/Parkin信号通路探讨芪莲益髓清毒颗粒对急性髓系白血病Molm-13细胞线粒体自噬的调控作用

目的：探讨芪连益髓清毒颗粒（QLYS）通过PINK1/Parkin信号通路对急性髓系白血病（AML）Molm-13细胞线粒体自噬的调控作用。方法：体外培养Molm-13细胞株,大鼠灌胃QLYS后制备含药血清。采用空白血清和不同浓度的QLYS含药血清分别干预Molm-13细胞,观察各组细胞的增殖情况、ATP水平、ROS水平,PINK1、Parkin、P62和LC3的变化水平。此外,采用MDC法检测自噬荧光强度,并用自噬抑制剂3-MA进行反向验证。结果：QLYS含药血清可显著抑制Molm-13细胞增殖（P<0.05,P<0.01）,提高ROS水平和MDC荧光强度（P<0.01,P<0.05）,降低ATP水平（P<0.05,P<0.01）,增强PINK1、Parkin和LC3表达（P<0.05,P<0.01）,降低P62表达（P<0.01）,3-MA可降低QLYS含药血清诱导的自噬水平（P<0.05）。结论：QLYS可通过激活PINK1/Parkin信号通路促进Molm-13细胞线粒体自噬。     

脾气虚大鼠胃黏膜细胞线粒体自噬相关蛋白表达的研究＊

目的 通过检测PTEN诱导激酶1（PTEN-induced putative kinase protein 1，PINK1）-Parkin通路及自噬相关蛋白表达，探讨脾气虚胃黏膜细胞线粒体损伤的可能机制。方法 16只雄性SD大鼠随机分为正常组和脾气虚证模型组（模型组），每组8只；透射电镜观察胃黏膜细胞线粒体形态，JC-1法测量其膜电位（ΔΨm）；比色法测定其ATP含量和呼吸链复合物（respiratory chain complex，RCC）I-IV活性；Western blot法检测其RCCV、PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein light chain 3，LC3）-I和II及p62等表达。结果 与正常组比较，模型组胃黏膜细胞的线粒体嵴减少，ΔΨm和ATP水平下降，RCCI和IV活性降低，RCCV、PINK1、Parkin和LC3-II表达下降，但LC3-I和p62表达上升。结论 脾气虚胃黏膜细胞线粒体结构和功能损伤与PINK1-Parkin通路抑制所导致的线粒体自噬水平低下有关。     

电针对帕金森病小鼠SIRT3/PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬的影响

目的：观察电针“风府”“太冲”“足三里”对帕金森病（PD）小鼠中脑黑质沉默调节蛋白3(SIRT3及其下游PTEN诱导的假定激酶1(PINK1)、PARK2基因编码蛋白（Parkin）介导的线粒体自噬的影响,探讨电针治疗PD的可能机制。方法：C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、电针组、假电针组,每组12只。采用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶复制PD小鼠模型。电针组小鼠给予针刺“风府”“太冲”“足三里”,每天1次,每次20 min,连续12 d。以旷场实验评估各组小鼠的运动能力;免疫组织化学法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶（TH）、α-突触核蛋白（α-syn）阳性表达;透射电镜观察黑质区神经元超微结构;免疫荧光染色法检测小鼠黑质自噬轻链蛋白3(LC3)的阳性表达;实时荧光定量PCR法检测小鼠黑质TH、α-syn、SIRT3、PINK1、Parkin和线粒体自噬受体蛋白P62、Beclin-1、LC3ⅡmRNA表达水平;Westernblot法检测小鼠黑质TH、α-syn、SIRT3、PINK1、Parkin、P62、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达水平。结...     

黄芩汤对UC模型大鼠PINK1/Parkin通路的作用研究

目的:探究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠组织中PTEN诱导假定激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)和E3泛素连接酶(E3ubinquitin ligases, Parkin)表达的影响及对PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬水平的作用。方法:采用2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic, TNBS)复合造模法制备UC大鼠模型,将大鼠按照体质量随机分为正常对照组、模型组、阳性药柳氮磺胺吡啶组(SASP,0.5 g/kg)和黄芩汤(HQT)高、中、低剂量组(20、10、5 g/kg),连续给药7 d,眼眶取血后处死,取结肠组织。HE染色法检测大鼠结肠组织的病变程度,透射电镜观察结肠黏膜组织线粒体形态结构及线粒体自噬现象,Western Blot法检测大鼠结肠中PINK1、Parkin的蛋白表达。结果:造模后模型组大鼠精神倦怠,体质量与进食量明显下降,DAI评分和组织病理评分与正常组相比有显著性差异(P<0.01),电镜观察结果显示线粒体结构被破坏,组织中Parkin蛋白表达量显著降低(P<0.01)。各给药组大鼠给药后DAI评分与组织病理评分较模型组均有不同程度的降低,电镜观察到线粒体自噬现象,组织中PINK1和Parkin的表达量升高,其中,阳性药组与黄芩汤高剂量组最为明显,具有显著性差异(P<0.01)。结论:黄芩汤能够明显改善溃疡性结肠炎大鼠的行为体征与病理评分,其机制可能与促进PINK1与Parkin蛋白的表达,激活线粒体自噬有关。     

当归补血汤对再障小鼠骨髓单个核细胞线粒体膜电位与自噬相关蛋白的作用研究

目的:观察当归补血汤含药血清对调节再障小鼠骨髓单个核细胞线粒体膜电位及自噬相关蛋白的作用。方法:利用皮下注射苯油及腹腔注射环磷酰胺溶液50 mg/kg的方法制备再障小鼠模型,提取、分离骨髓单个核细胞,分别置于当归补血汤含药血清0.5%、2.5%、10%的培养基中进行体外培养,观察其对再障小鼠骨髓单个核细胞线粒体膜电位及线粒体自噬标志物PINK1和泛素结合蛋白P62表达的影响。结果:与正常对照组相比较,模型对照组骨髓粒细胞线粒体膜电位明显降低,P62的蛋白表达明显下调(P<0.05),自噬泡的数量明显增高,PINK1蛋白表达明显上调(P<0.05);而与模型对照组比较,不同浓度当归补血汤20 g/kg含药血清使线粒体膜电位明显增加,P62的蛋白表达明显上调(P<0.05),自噬泡的数量明显降低,PINK1的蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:当归补血汤能够调节再障小鼠线粒体膜电位和自噬相关蛋白的表达,从而调节其线粒体自噬,影响造血细胞的凋亡。     

联合microRNA测序及体外实验探究miR-15b介导PINK1/Parkin线粒体自噬通道在心力衰竭过程中的作用机制

目的：探究miR-15b介导PINK1/Parkin线粒体自噬通道在心力衰竭过程中的作用机制,寻找防治心衰的新靶点。方法：通过高通量测序检测心衰患者与健康志愿者体内表达差异micro RNA;体外实验培养HL-1心肌细胞,通过Ang II诱导心肌细胞损伤模型,采用细胞转染技术过表达和抑制miR-15b水平,利用q RT-PCR检测miR-15b转染效能及在各组的表达水平;使用双荧光素酶报告基因实验验证miR-15b与PINK1靶标关系;运用Western Blot检测自噬蛋白Beclin-1、LC3B及线粒体自噬通道蛋白PINK1、Parkin等表达水平;运用免疫荧光法检测心肌细胞PINK1、Parkin蛋白表达情况。结果：心衰患者和健康志愿者外周血中micro RNA表达存在明显差异,其中心衰患者外周血清miR-15b水平上调明显[log2(Fold＿change)>1; P<0.01],通过对miR-15b靶基因进行预测,发现PINK1是其靶标,并通过双荧光素酶报告基因实验进一步确定miR-15b与PINK1之间的靶向关系。细胞实验中,与空白组相比,模型组miR-15b...     

两种脾虚证大鼠肝脏线粒体自噬及细胞凋亡的比较研究

目的比较脾气虚证和脾不统血证两种脾虚证模型大鼠肝脏线粒体自噬及细胞凋亡水平，探讨脾虚证发生发展过程中，肝脏细胞状态变化及可能的机制。方法32只SD大鼠随机分为4组：正常对照组（8只）、低分子肝素钠对照组（8只）、脾气虚组（8只）、脾不统血组（8只）。采用劳倦过度加饮食失节的方法复制脾气虚证大鼠模型，在脾气虚证的基础上采用低分子肝素钠诱导出血的方法构建脾不统血证大鼠模型；使用化学发光法检测大鼠肝组织三磷酸腺苷（ATP）含量；JC-1荧光探针法检测大鼠肝组织线粒体膜电位；Western Blot法检测各组大鼠肝组织线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin、LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平和细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、线粒体外Cyt-C的表达水平；使用荧光定量法检测PINK1、Parkin、Bcl-2 、Bax mRNA水平。结果与正常对照组及低分子肝素钠组比较， 两种脾虚证大鼠肝组织线粒体膜电位，ATP含量，PINK1、Bcl-2蛋白及mRNA水平显著降低（P<0.05， P<0.01）， 线粒体外Cyt-C蛋白水平、Bax mRNA水平显著升高（P<0.01）。与正常对照组比较，两种脾虚证大鼠LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值、Parkin蛋白水平显著降低（P<0.01）。与脾气虚证大鼠比较，脾不统血证大鼠肝组织线粒体膜电位、ATP含量降低（P<0.05， P<0.01），线粒体外Cyt-C蛋白水平、Bcl-2蛋白及mRNA 水平下降 （P<0.05， P<0.01），Cleaved caspase-3 蛋白水平、Bax 蛋白及mRNA 水平上升（P<0.05）。结论脾虚证大鼠肝组织细胞凋亡可能机制为，线粒体过度损伤导致线粒体自噬紊乱，进一步导致了细胞凋亡，随着脾虚证的加重，肝组织细胞凋亡程度加深。     

基于海马神经元线粒体自噬探讨脾气虚心神不足的可能机制

目的:通过检测脾气虚大鼠行为学及其海马神经元线粒体超微结构、基本功能和自噬水平,探讨脾气虚所致心神不宁的可能机制。方法:16只雄性SD大鼠随机分为正常组和脾气虚组(模型组),每组8只;旷场实验检测大鼠行为学;透射电镜观察海马神经元线粒体超微结构;JC-1法检测海马神经元线粒体膜电位;ELISA法检测海马神经元线粒体ATP和反应性氧簇(ROS)水平; Western blot法检测海马线粒体PTEN诱导激酶1 (PINK1)、Parkin、微管相关蛋白轻链3(LC3)-I和II表达。结果:与正常组相比,模型组大鼠在旷场的中心活动时间明显延长,周边活动时间缩短,运动距离和直立次数显著减少;海马神经元部分线粒体嵴消失,自噬样结构减少;海马神经元线粒体的ATP水平和膜电位下降明显,PINK1、Parkin和LC3-II表达及LC3-II/I比值均显著下降。结论:脾气虚所致心神不足与海马神经元线粒体损伤及其自噬水平低下有关。     

Protective effects of Buyinqianzheng Formula on mitochondrial morphology by PINK1/Parkin pathway in SH-SY5Y cells induced by MPP+

ObjectiveBuyinqianzheng Formula (BYQZF) is clinically employed in traditional Chinese medicine to treat Parkinson’s disease (PD) by improving mitochondrial dysfunction. However, the underlying mechanisms by which BYQZF affects mitochondrial morphology remain unknown. Therefore, we observed the effects of BYQZF on mitochondria from the perspective of the PINK1/Parkin pathway.MethodsCell survival rates were assessed by Cell Counting Kit-8 assay. Expression levels of PINK1 and Parkin mRNA were examined by qRT-PCR. Protein expression levels of PINK1, PINK1-Ser228, Parkin, Parkin-Ser65, Drp1, and Drp1-Ser637 were examined by western blotting. PINK1, Parkin, and MitoTracker® Red CMXRos (MTR) were stained by triple-labeled immunofluorescence, and observed under laser confocal microscopy.ResultsCell survival rate, mitochondrial form factor, mean length and number of mitochondrial network branches, mitochondrial activity, mRNA expression levels of PINK1 and Parkin, and protein expression levels of PINK1, Parkin, and Drp1-Ser637 were reduced after 1-methyl-4-phenylpyridinium (MPP⁺) intervention. In contrast, Pearson’s correlation coefficients between PINK1 and Parkin, and between Parkin and MTR, as well as protein expression levels of PINK1-Ser228, Parkin-Ser65, and Drp1 increased significantly after MPP⁺ intervention. Treatment with BYQZF increased cell survival rate, mitochondrial form factor, mean length and number of mitochondrial network branches, mitochondrial activity, mRNA expression levels of PINK1 and Parkin, and expression of PINK1, Parkin, and Drp1-Ser637 proteins. Pearson’s correlation coefficients between PINK1 and Parkin, and between Parkin and MTR, as well as protein expression levels of PINK1-Ser228, Parkin-Ser65, and Drp1 decreased after BYQZF treatment.ConclusionThese results demonstrate that BYQZF has a protective effect on mitochondrial molecular mechanisms in the PD cell model, and the mechanism is related to the PINK1/Parkin pathway.     

忍冬藤提取物诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及机制研究

目的研究忍冬藤Lonicerajaponica提取物对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)表征忍冬藤提取物的化学成分;采用MTT法检测忍冬藤提取物对人骨肉瘤细胞HOS、143B以及人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2存活率的影响;采用荧光显微镜观察忍冬藤提取物对HOS、143B细胞凋亡的影响;采用Annexin V/PI双染法检测忍冬藤提取物对HOS细胞凋亡的影响;采用JC-1染色法检测忍冬藤提取物对HOS细胞线粒体膜电位的影响;采用Westernblotting法检测忍冬藤提取物对HOS细胞B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(bcl-2associated X,Bax)、B细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleavedpolyADP-ribosepolymerases,cleavedPARP)、cleavedCaspase-9和细胞色素C(cytochrome-c,Cyt-C)蛋白表达的影响。结果忍冬藤提取物中鉴定出有机酸类、三萜皂苷类、黄酮类、环烯醚萜类和氨基酸类5种类型的36种化学成分。忍冬藤提取物抑制HOS和143B细胞存活率,显著诱导HOS细胞凋亡(P0.01),Caspase-3抑制剂Z-VAD-FMK显著抑制忍冬藤提取物诱导的HOS细胞凋亡(P0.05、0.01);忍冬藤提取物显著提高HOS细胞Caspase-3活性(P0.01),显著改变HOS细胞线粒体膜电位(P0.05、0.01),显著上调HOS细胞Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9、Cyt-C和Bax/Bcl-2蛋白表达水平(P0.05、0.01),显著下调Bcl-2蛋白表达水平(P0.05、0.01)。结论忍冬藤提取物能够抑制骨肉瘤细胞增殖,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9和Cyt-C蛋白表达,激活Caspase级联反应有关。     

柴胡不同极性部位对肝癌SMMC-7721细胞的影响及机制研究

目的 探究柴胡Bupleuri Radix不同极性部位对人肝癌SMMC-7721细胞的影响及相关机制。方法 不同极性部位的柴胡作用于SMMC-7221细胞后,采用MTT法考察细胞增殖能力;采用划痕实验考察细胞迁移能力;采用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;采用qRT-PCR及Western blotting检测柴胡低极性部位（LPB）组和中极性部位（MPB）组干预后肝癌细胞与周期阻滞、凋亡及迁移相关的基因与蛋白表达;采用代谢组学技术检测LPB和MPB干预前后肝癌细胞内源性差异物的变化,采用京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）分析LPB和MPB调节的代谢通路。结果 与对照组比较,LPB、MPB能够显著抑制SMMC-7721细胞增殖（P<0.05、0.01、0.001）,LPB能够显著抑制细胞迁移（P<0.05、0.01）。LPB阻滞细胞于G1期和G2期,MPB阻滞细胞于G2期。LPB显著下调肝癌细胞中神经元PAS结构域蛋白2(neuronal pas domain protein 2,NPAS2)、细...     

基于PERK/Nrf2信号通路研究山豆根提取物诱导鼻咽癌细胞铁死亡作用机制

目的 基于蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)/核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)通路探究山豆根提取物(Sophorae Tonkinensis Radix et Rhizoma extract,TSRE)诱导鼻咽癌细胞铁死亡作用机制。方法 为研究TSRE对鼻咽癌CNE1细胞的抑制作用,设置对照组和TSRE低、中、高剂量(100、200、400 mg/L)组;为研究铁死亡在TSRE致CNE1细胞增殖抑制中的作用以及PERK/Nrf2信号通路对铁死亡的影响,TSRE处理过程中分别用铁死亡抑制剂Fer-1、PERK抑制剂GSK2606414、Nrf2 siRNA进行干预。MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞周期;荧光探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)和脂质过氧化水平;比色法检测铁离子和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;Western blotting检...     

当归多糖对糖尿病肾病KK-Ay小鼠肾脏AMPK信号通路及线粒体自噬的影响

目的 研究当归多糖对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）KK-Ay小鼠肾脏磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPactivated protein kinase,AMPK）信号通路及线粒体自噬的影响。方法 SPF级雄性KK-Ay小鼠用高糖高脂饲料喂养,随机分为模型组、厄贝沙坦（25 mg/kg）组和当归多糖高、中、低剂量（400、200、100 mg/kg）组,每组10只;将10只雄性C57BL/6J小鼠作为对照组。给予药物干预4周,观察小鼠一般情况,每周称定体质量并检测血糖;末次给药后,心脏取血并处死小鼠,分离血清检测尿微量白蛋白（urine microalbuminuria,U-ALB）、肌酐（creatinine,SCr）、尿素氮（urea nitrogen,BUN）;采用苏木素-伊红（HE）染色观察肾组织病理变化;采用Western blotting检测肾组织线粒体自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、p62、Nix]和线粒体裂变蛋白[线粒体动力相关蛋白1(dy...     

附子-干姜对慢性溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜微循环障碍的改善作用

目的研究附子-干姜对慢性溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,UC)小鼠肠黏膜微循环障碍的改善作用。方法建立慢性UC小鼠模型,给予附子-干姜水煎液进行干预,记录各组小鼠体质量、大便性状及便血情况,进行疾病活动指数(disease activityindex,DAI)评分;采用激光多普勒血流仪检测各组小鼠肠黏膜血流灌注量、血细胞移动速度和移动血细胞浓度;采用ELISA法检测各组小鼠血清中血小板活化因子(platelet activating factor,PAF)和组织因子(tissue factor,TF)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组小鼠结肠组织病理改变情况;采用免疫组化法检测各组小鼠肠黏膜毛细血管内皮细胞CD31表达并计算微血管密度(microvessel density,MVD)。结果与对照组比较,模型组小鼠DAI评分显著增加(P0.01),肠黏膜血流灌注量、血细胞移动速度显著下降(P0.01),肠黏膜移动血细胞浓度显著升高(P0.01),血清PAF、TF水平显著升高(P0.01),结肠组织CD31表达减少,肠黏膜微血管密度显著减少(P0.01);与模型组比较,附子-干姜高剂量(6.06 g/kg)组小鼠DAI评分明显降低(P0.01),肠黏膜血流灌注量、血细胞移动速度显著升高(P0.01),肠黏膜移动血细胞浓度显著降低(P0.01),机体凝血因子PAF、TF水平显著降低(P0.01),肠黏膜MVD显著增加(P0.01)。结论附子-干姜可通过改善肠黏膜微循环障碍从而治疗慢性UC。     

南蛇藤提取物联合miR-302通过PI3K/Akt信号通路调控食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的研究

目的探讨南蛇藤提取物(COE)联合miR-302对人食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及对PI3K/Akt信号通路的调控作用。方法实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测人正常食管上皮细胞Het-1A及不同食管癌细胞株中miR-302表达情况。将miR-302mimic和阴性对照mimiccontrol转染至人食管癌TE-1细胞中,q RT-PCR检测质粒转染后TE-1细胞中miR-302的表达情况。单独或联合使用COE作用TE-1细胞,CCK-8实验检测TE-1细胞增殖情况,Transwell实验检测TE-1细胞侵袭和迁移能力,Westernblotting分析PI3K/Akt信号通路中相关蛋白表达情况。结果食管癌细胞株中miR-302的表达明显低于正常食管上皮细胞(P0.05)。转染miR-302mimic能够有效提高TE-1细胞中miR-302的表达(P0.05)。单独使用COE或过表达miR-302可抑制食管癌TE-1细胞增殖、侵袭和迁移(P0.05),下调PI3K和p-Akt蛋白表达;二者联合使用对TE-1细胞增殖、侵袭和迁移抑制及对PI3K和p-Akt蛋白表达下调作用更显著(P0.05)。结论 COE联合miR-302可协同抑制食管癌TE-1细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

藤黄茎皮中莽吉柿素对人胃癌HGC-27细胞的作用研究

目的 探讨藤黄树茎皮中氧杂环酮类成分莽吉柿素对人胃癌HGC-27细胞的生长抑制作用及潜在的作用机制。方法 采用噻唑蓝（MTT）染色实验检测莽吉柿素对HGC-27细胞的抑制作用。采用克隆形成实验评估莽吉柿素对HGC-27细胞增殖的影响。采用Hoechst染色实验研究莽吉柿素对HGC-27细胞形态变化的影响。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测莽吉柿素给药后与凋亡过程、Neddylation修饰途径及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路相关的蛋白表达水平变化。采用裸鼠移植瘤模型进行莽吉柿素裸鼠体内抗肿瘤药效研究。结果 莽吉柿素给药后能够抑制HGC-27细胞的增殖能力和细胞集落形成。与对照组比较,莽吉柿素显著上调HGC-27细胞多聚ADP核糖聚合酶1（PARP1）和Bax蛋白表达（P<0.001）,下调抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）的表达（P<0.001）,发挥促进胃癌细胞凋亡的作用。莽吉柿素给药后HGC-27细胞中β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白1（APPBP1）、泛素样修饰激活酶3（UBA3）和泛素结合酶E2M（UBC12）蛋白及MAPK信号通路蛋白c-Jun、c-Jun氨基端激酶（JNK）和p38的磷酸化水平均显著下调（P<0.001）。进一步的体内移植瘤动物实验结果显示,莽吉柿素给药后裸鼠肿瘤体积缩小18.7%,差异具有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较,莽吉柿素组裸鼠体内与肿瘤细胞增殖相关的标志蛋白Ki67阳性细胞数明显减少,肿瘤组织中棕色细胞数量明显增加。结论 藤黄树茎皮中氧杂环酮类化学成分莽吉柿素在HGC-27细胞和裸鼠上均显示良好的抗胃癌活性,其作用机制可能与抑制Neddylation修饰途径以及抑制MAPK信号通路相关。