运动对尼古丁戒断大鼠学习与记忆能力的影响及机制

目的:研究运动干预对尼古丁戒断大鼠学习与记忆能力的影响及其机制。方法:40只4周龄雄性SD大鼠适应性饲养1周后,建立大鼠尼古丁条件位置偏好(CPP)模型,随机分为4组:安静组、小强度运动组、中等强度运动组和大强度运动组。运动组大鼠进行连续10天、每天30 min的不同强度跑台运动干预。采用CPP偏好得分反映大鼠对尼古丁的奖赏记忆,水迷宫评价学习与记忆能力,Western blotting检测前额叶皮层和海马组织α7烟碱乙酰胆碱受体(n ACh Rs)蛋白表达水平。结果:与安静组相比,小强度运动组大鼠CPP得分没有显著变化,中等强度和大强度运动组大鼠CPP得分显著下降(分别P<0.01和P<0.05),但两组之间不存在差异性;在水迷宫测试中,仅中等强度运动组大鼠在连续4天学习任务中的逃避潜伏期显著缩短(P<0.01)。中等强度和大强度运动组大鼠在目标象限的游泳时间、在目标象限的游泳距离均显著增加(P<0.05),但两组之间不存在差异性,且仅中等强度运动组大鼠穿梭目标象限的次数显著增加(P<0.05);与安静组相比,仅中等强度运动组大鼠前额叶皮层α7 n ACh Rs蛋白相对表达显著上调(P<0.01),海马α7 n ACh Rs蛋白表达无变化。结论:连续10天的中等强度跑台运动可能通过特异性上调前额叶皮层α7 n ACh Rs蛋白表达,改善尼古丁戒断大鼠的学习与记忆能力,促进大鼠尼古丁奖赏记忆的消退。     

芪参益气滴丸对急性心梗大鼠α7nAChR抗炎通路的影响

目的 探讨芪参益气滴丸对急性心肌梗死(AMI)大鼠α7烟碱型乙酰胆碱能受体(α7nAChR)抗炎通路的影响,分析其作用机制.方法 选用45只成年雄性(Sprague-Dawley,SD)大鼠,随机分为假手术组,模型组及治疗组,每组15只.采用结扎左冠状动脉前降支建立AMI动物模型,假手术组仅手术不结扎血管.术后第2d,...     

α7nAChR通过调节miR-124对心肌梗死大鼠TNF-α转化酶、炎症反应及免疫功能的影响

目的 研究α7nAChR激活对急性心肌梗死大鼠免疫炎症功能的影响并探讨机制。方法 使用成年SD大鼠构建AMI模型设立为AMI组,设立假手术（sham）组为对照;AMI大鼠注射5、10、20 mg/kg α7nAChR激动剂GTS-21,并在20 mg/kg GTS-21基础上联合注射miR-124抑制剂（Inhibitor+GTS-21-20）,每组10只大鼠。统计检测心肌组织梗死面积,试剂盒法检测肌酸激酶（creatine kinase, CK）、CK的MB同工酶（creatine kinase-isozyme MB, CK-MB）、乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase, LDH）、心肌肌钙蛋白（cardiac troponin, cTnT）水平;酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA）法检测血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β, IL）-1β、IL-6、核因子-κB（NF-κB）的水平。流式细胞术检测血液CD3+、CD4+和CD8+细胞亚群比例;实时荧光定量PCR（RTqPCR）检测心肌组织中miR-124的水平;荧光素酶报告基因检验miR-124和TNF-α转化酶（TACE）的相互作用。使用蛋白免疫印迹法检测心肌组织中TACE的蛋白表达。结果 与sham组比较,AMI组大鼠的梗死面积、CK、CK-MB、LDH、cTnT的水平均明显增加（P<0.05）,而且NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6分泌水平和CD3+细胞比例明显上调（P<0.05）,CD4+/CD8+细胞比率下调（P<0.05）。与AMI组比较,AMI联合注射GTS-21后,miR-124的水平增加（P<0.05）,大鼠的梗死面积增加,CK、CK-MB、LDH、cTnT的水平均增加（P<0.05）;而且NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6的水平下调,以及CD3+细胞比例减少（P<0.05）,但是CD4+/CD8+细胞比率上调（P<0.05）。另外,TACE在AMI中表达上调,而GTS-21明显抑制TACE的表达,并促进miR-124的表达,还确定TACE是miR-124的靶基因。miR-124的抑制剂inhibitor明显减弱GTS-21对大鼠炎症和免疫功能的改善作用（P<0.05）。结论 激活α7nAChR通过上调miR-124从而抑制TACE并改善AMI大鼠炎症和免疫功能。     

不同力竭运动后大鼠心脏传导系统PPARα mRNA和蛋白表达的变化及其在运动性心律失常发生中的作用

目的:探讨大鼠力竭运动后不同时相心脏窦房结、房室结和浦肯野氏纤维代谢因子过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)基因和蛋白水平的表达特点,为阐明运动性心律失常发生机制提供实验依据。方法:100只健康成年雄性SD大鼠随机分为一次力竭组(4组)、2周反复力竭组(4组)及其相应的安静对照组(2组),每组10只。分别于力竭运动后即刻、4、12及24小时,应用激光显微切割技术定位并收集窦房结、房室结和浦肯野氏纤维细胞,采用实时荧光定量PCR和免疫荧光方法检测PPARαmRNA和蛋白表达。结果:一次和反复力竭运动后,心脏传导系统各部位PPARαmRNA和蛋白表达均在运动后4小时下降至低谷,反复力竭后12小时,房室结PPARαmRNA和蛋白表达显著低于一次力竭后12小时(P<0.01);反复力竭后24小时浦肯野氏纤维PPARαmRNA表达显著低于一次力竭后24小时(P<0.01),其他各时相组间无明显差异(P>0.05)。结论:力竭运动后心脏传导系统各部位代谢调节因子PPARα在mRNA和蛋白水平异常低表达,且有时相性规律,易诱发传导系统能量代谢障碍,构成运动性心律失常的病理过程。     

人分化相关基因Ndr3的克隆、组织表达谱及亚细胞定位研究

目的 :研究人源分化相关新基因Ndr3的克隆、组织表达谱及亚细胞定位。方法 :采用电子拼接和PCR扩增技术 ,从人 2 2周孕龄胎肝cDNA文库中获得与人Ndr1基因同源的一段表达性序列标签 ,继而从成人脑cDNA文库分离出Ndr3的全长cDNA ;采用点杂交分析和多组织Northern杂交分析方法 ,确定其组织表达谱 ;将其亚克隆入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP_N1,用脂质体介导法转染COS_7细胞 ,确定其亚细胞定位。结果与结论 :Ndr3的全长cDNA为 2 879bp ,其开放阅读框 (ORF)编码 375个氨基酸 ,染色体定位为 2 0q12_11.2 3。Northern杂交和点杂交分析显示 ,NDR3在脑组织和睾丸中高表达 ,在肾、心肌和前列腺中有一定量的表达 ,在胚胎组织的表达较低 ,在 8种人肿瘤细胞中的表达极低。与绿色荧光蛋白融合表达的实验结果显示 ,该蛋白定位于核外胞浆内     

基于 99Tc m标记纳米抗体的SPECT/CT显像探测非小细胞肺癌PD-L1表达的研究

目的:探讨 99Tc m标记抗程序性死亡受体1配体(PD-L1)纳米抗体(NM-01)的SPECT/CT显像探测非小细胞肺癌(NSCLC)PD-L1表达的价值。 方法:前瞻性纳入2019年1月至2020年3月间于上海交通大学附属第一人民医院病理确诊为NSCLC且未经治疗的患者14例[男...     

釉基质蛋白对牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响

目的:通过检测釉基质蛋白(Enamel matrix proteins,EMPs)作用下对促进牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响,探讨EMPs促进牙周组织再生的作用机制.方法:酶消化法获得人牙周膜成纤维细胞(Human periodontal ligament cells,HP-DLC)用不同浓度的EMPs进行诱导,在3 d、7 d两个时间点,利用MTT法检测和分析诱导后细胞增殖活性的变化.结果:EMPs浓度在(50～200)mg/L时促增殖作用呈剂量依赖性.EMPs的最小显效浓度是50 mg/L,而200 mg/L EMPs的促增殖作用最强.25 mg/L与(50～200)mg/L差异显著(P＜0.05);(100～200)mg/L间无明显差异(P＞0.05).结论:EMPs在一定浓度下可以促进人PDLCs增殖.100 mg/L浓度最佳.     

模拟失重环境碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨在模拟失重环境下碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)增殖的影响. 方法 试验分对照组、模拟失重组和模拟失重加hPDLF组3组.采用酶消化组织块培养法分离、培养原代hPDLF.应用噻唑蓝比色法,检测模拟失重条件下,不同时间和不同浓度的bFGF对hPDLF增殖的影响. 结果 在模拟失重12h、24h组hPDLF增殖较对照组没有显著差别,在48h、72h模拟失重组较对照组显著降低,差异有统计学意义(t=7.303、8.668,P<0.01).模拟失重48 h时bFGF浓度在50～100μg/L范围内加bFGF组hPDLF增殖高于模拟失重组,差异有统计学意义(P<0.05),而bFGF浓度为1～10μg/L时,两组没有显著差别. 结论 模拟失重在48 h、72 h对hPDLF的增殖有抑制作用,模拟失重环境bFGF浓度在50～100μg/L范围内具有促进hPDLF增殖的效应.     

ras-raf信号转导途径对受辐射细胞G_1期阻滞的调控作用

目的　探讨ras raf信号转导途径在受辐射KG 1细胞中对周期的调控作用方式。方法　通过转染DN ras阻断GM CSF的信号传递后 ,瞬间转染cyclinD1,观察cyclinD1对受辐射细胞周期阻滞的影响作用。结果　转染DN ras的受辐射KG 1细胞即使用GM CSF刺激亦不能跳出G1期阻滞 ;瞬间转染cyclinD1能促进受辐射细胞跳出周期阻滞。 结论　ras raf信号转导途径通过促进周期蛋白cyclinD1的表达而对受辐射细胞周期进行调控。     

釉基质蛋白和骨形成蛋白对牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响

目的:通过检测釉基质蛋白(Enamel matrix proteins,EMPs)、骨形成蛋白-2(BMP-2)作用下对促进牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响,探讨EMPs、BMP-2促进牙周组织再生的作用机制及其之间的相互影响.方法:酶消化法获得人牙周膜成纤维细胞(Haman periodontal ligament cells,HPDLC)用不同浓度的因子进行诱导,在3d、7d两个时间点,利用MTT法检测和分析诱导后细胞增殖活性的变化.结果:BMP-2、EMPs单独应用均可促进人PDLCs增殖,BMP-2作用强于EMPs.而联合组与100～200μg/L BMP-2、200 mg/L EMPs无明显差异,与100 mg/L EMPs差异显著.结论:BMP-2、EMPs单独或联合应用均可促进人PDLCs增殖,BMP-2作用强于EMPs.联合组中起主要作用的是BMP-2,EMPs未能增加BMP-2的作用.     

STA牙周膜麻醉在正畸减数牙拔除中的应用体会

目的 比较传统的局部浸润麻醉(骨膜上浸润麻醉)与单颗牙齿麻醉系统(STA)行牙周膜麻醉,在正畸减数牙拔除术前麻醉注射过程中的疼痛程度及麻醉效果.方法 采用自身对照研究的方法,将58例因正畸需要减数拔牙患者的两侧前磨牙随机分为试验侧和对照侧,试验侧(58颗牙)采取STA牙周膜麻醉,对照侧(58颗牙)采取传统的局部浸润麻醉,观察两组在注射过程中的疼痛程度及麻醉效果.结果 试验侧在注射麻醉时疼痛程度明显低于对照侧(x2=18.73,P＜0.05).两种方式的麻醉效果总体上无统计学差异(x2 =1.44,P＞0.05).结论 STA牙周膜注射能有效减轻注射时的疼痛,但麻醉效果与传统的局部浸润麻醉无显著差异.     

RNF181与Hippo/YAP对脑胶质瘤SHG44细胞恶性程度的影响及其可能机制

 目的 探讨环指蛋白RNF181与Hippo/YAP对脑胶质瘤SHG44细胞恶性程度的影响及其可能机制。方法 选取人脑胶质瘤细胞系SHG44细胞体外培养,腺病毒表达载体转染过表达RNF181,对比分析RNF181 过表达对肿瘤细胞生长增殖能力、细胞干性和体外侵袭及转移能力;通过RT-PCR和Western blot实验检测RNF181及Hippo/YAP的表达,明确RNF181与Hippo/YAP的关系;最后通过免疫荧光共定位分析RNF181和YAP在SHG44细胞表达情况。结果 转染后SHG44中RNF181 mRNA及蛋白相对表达量1.95±0.06、0.39±0.06,明显高于对照组1.05±0.03、0.23±0.06和Negative组1.03±0.04、0.24±0.07;YAP mRNA及蛋白相对表达量2.63±0.12、0.71±0.06,与对照组1.02±0.04、0.29±0.05和Negative组1.03±0.05、0.31±0.07比较,表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT、免疫荧光和Transwell 实验证实, RNF181过表达组细胞数、细胞增值率及SHG-44穿膜细胞数明显高于对照组和Negative组,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光共定位检测表明RNF181和YAP在SHG44细胞核内共表达。结论 RNF181过表达增加胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力,可能是通过Hippo/YAP信号途径实现的。     

釉基质蛋白和骨形成蛋白对牙周膜成纤维细胞矿化能力的影响

目的:通过检测釉基质蛋白(Enamel matrix proteins,EMPs)、骨形成蛋白-2(Bone morphogenetic protein 2,BMP-2)作用下,牙周膜成纤维细胞矿化能力,探讨EMPs、BMP-2促进牙周组织再生的作用机制.方法:酶消化法获得人牙周膜成纤维细胞(Human periodontal ligament cells,HPDLC)用不同因子进行诱导,在3d、7d两个时间点,利用ALP法检测诱导后细胞成骨活性的变化,同时进行体外矿化诱导实验.结果:BMP-2促进了PDLCs的矿化能力;EMPs作用不明显;同时,在BMP-2和EMPs作用下,PDLCs形成矿化结节,但EMPs结节细小,进展慢.结论:BMP-2是一种骨诱导因子;EMPs是一种成骨促进因子.     

ras-raf信号转导途径对受辐射细胞G1期阻滞的调控作用

目的 探讨ｒａｓ－ｒａｆ信号转导途径在受辐射ＫＧ－１细胞中对周期的调控作用方式。方法 通过转染ＤＮ－ｒａｓ阻断ＧＭ－ＣＳＦ的信号传递后,瞬间转染ｃｙｃｌｉｎＤ１,观察ｃｙｃｌｉｎＤ１对受辐射细胞周期阻滞的影响作用。结果 转染ＤＮ－ｒａｓ的受辐射ＫＧ－１细胞即使用ＧＭ－ＣＳＦ刺激亦不能跳出Ｇ１期阻滞;瞬间转染ｃｙｃｌｉｎＤ１能促进受辐射细胞跳出周期阻滞。结论 ｒａｓ－ｒａｆ信号转导途径通过促进周期蛋白ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达 地受辐射细胞周期进行调控。     

直线加速器X线照射对人肺成纤维细胞经典Wnt通路中关键信号蛋白的影响

 目的 探讨直线加速器X线照射对人肺成纤维细胞经典Wnt通路中关键信号蛋白的影响。方法 人肺成纤维细胞分为照射组和正常对照组,照射组经直线加速器X线5 Gy照射24 h后,Western blot检测两组成纤维细胞胞核内β-catenin蛋白表达,Real time PCR检测成纤维细胞胞核内β-catenin mRNA表达,ELISA法检测细胞培养液中WISP-1蛋白表达。结果 照射组人肺成纤维细胞β-catenin蛋白表达和mRNA表达水平均高于对照组,WISP-1蛋白表达水平也显著升高,与对照组比较均有统计学意义[(637±88)vs(387±58),P<0.05]。结论 直线加速器X线照射可诱导人肺成纤维细胞经典Wnt通路活化,促进肺纤维化的形成,可能为放射性肺损伤的治疗提供新的靶点。