人参皂苷Rg1抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用及免疫机制

目的 观察人参皂苷Rg1对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）的抑制作用及其对脾淋巴细胞T细胞亚群和外周血细胞因子水平的影响。方法 采用C57BL/6小鼠皮下多点注射MOG35-55、百日咳毒素的方法复制EAE模型。将EAE小鼠随机分为模型组,人参皂苷Rg1低、中、高剂量组,同时设置正常对照组,每组6只。首次免疫后第10天予以不同剂量Rg1腹腔注射,连续给药14 d。第35天处死小鼠后取脊髓,观察各组小鼠脊髓炎症细胞浸润和脱髓鞘等病理变化,采用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞Th1、Th17、Treg细胞亚群,采用ELISA法检测外周血白细胞介素（interleukin,IL）-17A、干扰素γ（interferon gamma, IFN-γ）、IL-6、IL-10水平。结果 与模型组比较,人参皂苷Rg1低、中、高剂量组小鼠神经症状评分显著下降（P＜0.05）,脊髓炎症细胞浸润评分和脱髓鞘评分显著降低（P＜0.05）,脾淋巴细胞CD4+、CD8+、Th1、Th17 T细胞亚群比例显著降低（P＜0.05）,Treg（CD4+CD25+FoxP3+）比例显著升高（P＜0.05）,外周血IFN-γ、IL-17A、IL-16水平显著降低（P＜0.05）,IL-10水平显著升高（P＜0.05）,人参皂苷Rg1的作用呈现明显的剂量依赖性。结论 人参皂苷Rg1可显著改善EAE小鼠的临床症状,减轻中枢神经系统脱髓鞘和炎症细胞浸润,其作用可能与调控Th17、Th1、Treg细胞亚群失衡,抑制炎症细胞因子表达相关。     

妊娠对实验性自身免疫性妊娠对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的免疫调节作用

目的 明确妊娠期实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的神经功能的变化情况,并进一步探索其可能的作用机制.方法 采用MOG35-55多肽诱导制作雌性EAE小鼠模型,按雌雄小鼠2:1比例合笼受孕,以成功妊娠的小鼠为妊娠组(n=10);未配...     

妊娠对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的免疫调节作用

目的明确妊娠期实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)小鼠的神经功能的变化情况,并进一步探索其可能的作用机制。方法采用MOG35-55多肽诱导制作雌性EAE小鼠模型,按雌雄小鼠2:1比例合笼受孕,以成功妊娠的小鼠为妊娠组(n=10);未配孕的小鼠为对照组(n=10)。比较2组神经功能评分(5分评分法),脊髓实质内炎症细胞的浸润(HE法)及神经脱髓鞘(Bielshowsky’s-Luxol fast blue staining染色)情况,血清IFN-γ、IL-17、IL-10浓度(ELISA法),脾脏中Treg细胞数百分比(流式细胞术)。结果妊娠组小鼠神经功能缺损程度在妊娠后第10、13天较对照组显著降低(P<0.05),且妊娠组小鼠脊髓病灶区炎症细胞浸润程度较对照组显著降低(P<0.05);2组小鼠的脑和脊髓白质内均可见神经脱髓鞘改变,妊娠组的脱髓鞘程度较对照组轻(P<0.05);妊娠组小鼠血清的IFN-γ、IL-17浓度较对照组显著降低(P<0.05),但血清IL-10浓度较对照组显著升高(P<0.05);妊娠组小鼠脾脏中调节性T细胞(Treg细胞)数百分比较对照组显著升高(P<0.05)。结论妊娠期EAE小鼠的临床症状缓解且脊髓实质内炎症反应减轻;其可能的作用机制为上调Treg细胞的抗炎因子和抑制促炎因子的分泌。     

沙利度胺抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎与促进Treg细胞中枢募集有关

目的研究沙利度胺对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的治疗作用及神经免疫机制。方法采用豚鼠脊髓匀浆免疫诱导SD大鼠制作EAE模型。在免疫诱导当天开始,分别给予15、30、60mg/kg沙利度胺,溶剂组给予无菌溶剂,空白对照组不予给药,每日监测行为学评分,至免疫诱导的第20天统一处死。常规病理染色检测中枢炎症水平,流式细胞术检测中枢CD4+T细胞浸润水平以及CD4+CD25+Treg细胞比例,Elisa检测血清INF-γ与TNF-α蛋白浓度。结果与溶剂组比较,给予15mg/kg沙利度胺大鼠EAE行为学评分、中枢炎症程度、CD4+T淋巴细胞浸润水平,血清INF-γ浓度均有下降趋势但差异无统计学意义（P＞0.05）,而TNF-α浓度下降差异有统计学意义（P＜0.05）。给予30、60mg/kg沙利度胺均可使行为学评分下降,中枢炎症减轻,中枢CD4+T细胞浸润减少,血清INF-γ,TNF-α浓度降低。流式细胞术还发现沙利度胺可促进中枢Treg比例上调,差异有统计学意义。结论沙利度胺对大鼠EAE的治疗作用可能与促进Treg细胞向中枢募集有关。     

骨髓基质干细胞对过继免疫实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响及免疫调节机制

目的探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)对过继免疫实验性自身免疫性脑脊髓炎(AT-EAE)的治疗作用及相关免疫调节机制。方法分离纯化培养BMSCs,建立EAE动物模型,在EAE动物模型发病高峰期取淋巴细胞,加入MBP刺激并与BMSCs共培养,并设未共培养的单纯MBP刺激对照组。将培养后的淋巴细胞对大鼠进行过继免疫回输,通过体外增殖实验,流式细胞仪检测以及体内临床评分评估BMSCs对EAE的治疗作用及其机制。结果BMSCs共培养MBP组与MBP组相比,淋巴细胞增殖明显被抑制,CD4+Foxp3+细胞显著增高而CD4+IL-17+细胞显著降低,培养后的淋巴细胞进行过继免疫回输后,干细胞共培养组临床评分显著降低(P<0.05)。结论BMSCs通过调节免疫系统的调节性T细胞(Treg)和Th17的细胞平衡,即上调调节性T细胞分化和下调Th17细胞功能,对EAE起治疗作用。     

Fasudil对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠致脑炎性T细胞的免疫调节作用

目的：探讨法舒地尔(Fasudil)修饰的脾单个核细胞(mononuclear cells,MNCs)治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的疗效及可能的分子机制。方法：雌性C57BL/6小鼠采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35–55诱导,建立主动免疫EAE模型,免疫后第9天制备脾MNCs,和/无Fasudil培养。作用72 h后收集上述细胞,检测T细胞亚群的变化、Rho激酶(Rho kinase,ROCK)活性和细胞因子水平;以5×107个细胞/只小鼠腹腔注射诱导,建立被动转移EAE模型,并将小鼠分为PBS-MNCs组和Fasudil-MNCs组,每组8只。观察各组小鼠临床评分和体质量变化。结果：免疫第9天EAE小鼠脾致脑炎性MNCs可通过被动转移实验诱导EAE模型的建立,而体外Fasudil修饰的MNCs不能诱导EAE的发生;与PBS-MNCs组相比,Fasudil-MNCs组小鼠体质量减轻较少(P<0.05)。体外实验显示：Fasudil处理的MNCs ROCK活性降低(P<0.01);Fasudil可抑制IFN-γ和IL-17的CD4+T细胞比例(IFN-γ：P<0.01;IL-17：P<0.05),并增强TGF-β和IL-10的CD4+T细胞分泌(均P<0.001);此外,Fasudil可降低细胞因子IL-17水平(P<0.001)和增强细胞因子IL-10分泌(P<0.05)。结论：Fasudil介导的细胞治疗通过抑制辅助性T细胞1(helper T cell 1,Th1)和Th17炎性反应,促进Th2免疫调节作用,影响EAE的发生和发展。     

雌激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎的保护作用

目的 检测雌激素在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)中的预防性治疗作用并初步探讨其体内作用机制.方法 用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35-55)和完全弗氏佐剂(CFA)免疫C57BL/6J小鼠制备EAE模型;雌激素于建模始每日皮下注射50 μmol/L进行治疗,通过发病指数评分、脊髓病理分析、炎症因子水平检测,并应用流式细胞仪(FACS)及实时荧光定量PCR(qPCR)评价治疗效果;进一步通过分析小鼠脾细胞及脊髓相关功能分子CD4/PD-l、CD19/PD-L1、CD4/CD25/Foxp3、CD19/CD21/CD23及CD 19/CD5/CDl dhigh的表达变化,探讨雌激素可能的作用机制.结果 雌激素预防性治疗可有效延缓EAE小鼠的发病,减轻脱髓鞘病变.病理结果显示,雌激素治疗能减少小鼠脊髓组织炎性细胞的浸润,同时下调外周炎性因子TNF-a及IL-17A的分泌表达(P＜0.01);与模型组相比,雌激素治疗下调T淋巴细胞表面活化分子CD69的表达(P＞0.05)并可显著上调CD4+T细胞表面PD-1的表达(P＜0.05);同时,雌激素治疗后PD-1的配体CD19+B细胞表面PD-L1的表达明显上调(P＜0.01),脾细胞中CD19+CD21highCD23low(P＜0.01)及CD19+CD5+CD1dhigh(P＜0.01)的比例也有不同程度的升高,但对脾细胞中CD4+CD25Toxp3*的表达无明显作用.结论 雌激素预防性治疗可延缓EAE小鼠的发病进程,其作用机制可能与上调PD-1/PD-L1通路并上调调节性B细胞水平有关.     

雌激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎免疫性保护机制的研究进展

实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是一种主要由特异性致敏CD4+T细胞介导的自身免疫性疾病,其主要特征是中枢神经系统(CNS)单个核细胞浸润以及脱髓鞘。由于与多发性硬化(MS)有着极其相似的组织病理学特征和免疫学特征,EAE动物模型作为经典模型已被广泛用于MS的相关研究。近年来,雌激素作为免疫调节剂用于治疗复发-缓解型MS已进入Ⅱ期临床试验。大量前期动物实验研究证实,高浓度雌激素能缓解EAE,但其具体的作用机制有待进一步阐明。本文主要就雌激素对EAE的免疫性保护机制做简要综述。     

二黄胶囊对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠细胞免疫的影响

目的观察二黄胶囊对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠(EAE)细胞免疫的影响。方法皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)与完全弗氏佐剂(CFA)混合的抗原,辅以腹腔注射百日咳毒素(PTX),建立EAE模型。造模后每天记录各组小鼠体质量及神经功能评分;用流式细胞仪检测小鼠外周血T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞;采用HE染色进行脑组织病理学观察。结果模型组小鼠造模后第9天陆续发病,第22天达到高峰,发病急性期(造模后第25天)T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+明显比正常组增高(P<0.01),CD4/CD8比值也有所升高(P<0.05);发病缓解期(造模后第40天)T淋巴细胞亚群CD8+和NK细胞明显下降(P<0.05);病理检查发现EAE小鼠脑组织神经元细胞核固缩,小静脉周围炎性细胞浸润形成袖套样改变。二黄胶囊治疗后,EAE小鼠神经功能评分比模型组明显降低(P<0.05),脑组织炎性浸润程度减轻,发病急性期外周血T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比值显著降低(P<0.01);恢复期T淋巴细胞亚群(CD3+、CD8+)及NK细胞明显增加(P<0.05)。结论二黄胶囊可在EAE小鼠发病的不同时期通过调节T淋巴细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+,CD4+/CD8+)及NK细胞而起到防治EAE作用。     

不同剂量富氢气生理盐水对实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用观察

目的 探讨富氢气生理盐水对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠的治疗作用及最佳剂量范围。 方法 用豚鼠脊 髓匀浆与完全弗氏佐剂免疫 SD 大鼠制作 EAE 模型;造模成功后第 1~20 天大鼠腹腔注射不同剂量（0、3、6ml/kg）富氢气生理盐水,观 察并记录大鼠体重、行为学评分;第 21 天处死大鼠取脑、脊髓作 HE 染色,检测脊髓 IL-17、INF-γ 表达水平以及血清超氧化物歧化酶（SOD）活性。 结果 6ml/kg 富氢气生理盐水剂量组临床发病率较低,仅为 30.0%;且发病后能抑制体重下降,最高临床评分与累积临 床评分均最低,中枢组织炎症细胞浸润最少。３、6ml/kg 剂量的富氢气生理盐水均能抑制 EAE 大鼠 IL-17、INF-γ 的释放,提高 SOD 活性;但 6 ml/kg 剂量效果更佳。 结论 6ml/kg 剂量的富氢气生理盐水可能对降低 EAE 大鼠临床发病率有积极作用,且能抑制发病大 鼠体重下降,降低神经缺损行为学评分,并能促进 SOD 活性,从而抑制 EAE。     

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎MCP-1的影响

[目的] 研究益肾达络饮对髓鞘蛋白脂质蛋白多肽(PLP139-151)诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内趋化因子(MCP-1)的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制。[方法] 采用免疫组化、地高辛标记的寡核苷酸探针原位杂交技术熏测定各组小鼠中枢神经组织中MCP-1蛋白和MCP-1mRNA的含量。[结果] 正常组与模型组、激素组、中药组MCP-1蛋白、MCP-1mRNA含量相比较均有极显著性差异(P<0.01),中药组、激素组与模型组MCP-1蛋白、MCP-1mRNA含量相比较均有极显著性差异(P<0.01);中药组、激素组相比较有显著性差异(P<0.05)。[结论] 益肾达络饮在蛋白、分子水平能降低MCP-1含量,其对自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能与下调MCP-1熏抑制单个核细胞的趋化性熏减轻炎性浸润,抑制局部炎症有一定关系。     

丁苯酞联合骨髓间充质干细胞治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的疗效及机制研究

目的 探索丁苯探索丁苯酞(3-n-butylphthalide,NBP)和骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)联合治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的疗效和机制.方法 用髓鞘少突...     

黄芪对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎小鼠的治疗作用及机制研究

目的：观察中药黄芪对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎（EAE）小鼠的治疗作用,并探讨其免疫调节机制。方法：建立C57BL／6小鼠EAE模型,通过5级临床症状评分观察黄芪对EAE小鼠的治疗作用;HE染色观察黄芪对EAE小鼠脊髓炎症细胞浸润的影响;CCK-8法检测脾脏髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）多肽MOG35-55特异性T细胞增殖情况;ELISA法检测脾脏MOG35-55特异性T细胞培养上清液中IFN-γ、TNF—α、IL-17、IL-4的水平。结果：黄芪能够有效抑制EAE小鼠的临床症状,减轻中枢神经系统的炎性反应,抑制MOG35-55特异性T细胞增殖及IFN-γ、TNF-α、IL-17的分泌,促进IL-4的分泌。结论：黄芪能够有效抑制中枢神系统的自身免疫反应,这种作用与其抑制MOG35-55特异性T细胞增殖,减少Th1、Th17型细胞因子分泌,促进Th2型细胞因子分泌相关。     

减毒百日咳杆菌对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠模型诱导的影响

目的 :探讨在不同部位加用减毒百日咳杆菌对EAE非敏感品系Wistar大鼠EAE模型诱导影响。方法 :免疫组除常规免疫外在足背皮下或腹腔注射减毒百日咳杆菌 0 .0 5ml/只 (含 5 .0× 10 10 个菌体 )。结果 :足背皮下注射百日咳组发病率为 87.5 % ,发病时间为免疫后 (10 .2 5± 1.6 7)d ,而腹腔组分别为 35 .7%和 (14 .8± 1.79)d。结论 :足背皮下注射百日咳毒素诱导EAE模型适合在国内开展。     

减毒百日咳杆菌对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠模型诱导的影响

目的:探讨在不同部位加用减毒百日咳杆菌对EAE非敏感品系Wistar大鼠EAE模型诱导影响.方法:免疫组除常规免疫外在足背皮下或腹腔注射减毒百日咳杆菌0.05 ml/只(含5.0×1010个菌体).结果:足背皮下注射百日咳组发病率为87.5%,发病时间为免疫后(10.25±1.67)d,而腹腔组分别为35.7%和(14.8士1.79)d.结论:足背皮下注射百日咳毒素诱导EAE模型适合在国内开展.     

氨基葡萄糖对EAE大鼠血-脑脊液屏障功能的影响

目的探讨不同剂量氨基葡萄糖(GS)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠血-脑脊液屏障(BBB)功能及动态变化的影响。方法用完全抗原和减毒百日咳杆菌原液免疫大鼠后随机分为3组:①EAE组(n=40):腹腔注射4.5(ml/kg·d)磷酸盐缓冲溶液。②GS治疗1组(n=40):腹腔注射90mg/(kg·d)GS溶液。③GS治疗2组(n=40):腹腔注射180mg/(kg·d)GS溶液。各组分别于免疫后6、8、10、12、14、16、18d检测大鼠血清和脑脊液(CSF)中白蛋白(ALB)含量,其CSF与血清ALB比值(QA)作为评价BBB功能及动态变化的指标。结果EAE组QA值在免疫后6d开始升高,免疫后10d达最大值,早于临床症状出现。GS治疗组QA值在免疫后6d仅有少量升高,在免疫后14d达高峰,与EAE组相比QA值变化趋势差异有统计学意义(P<0.01)。GS治疗2组QA值与GS治疗1组相比有一定程度的降低。结论GS可降低EAE大鼠QA值水平,对EAE发病具有一定程度的保护作用。     

预防性治疗急性实验性自身免疫性脑脊髓炎的实验研究

目的　观察己酮可可碱及溴隐亭能否抑制急性实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE)模型的发病 ,以及对血清 TNF、IL- 6活性及 PRL 水平的影响 ,为临床应用提供实验依据。方法　将 EAE模型豚鼠随机分成两组 ,分别给予治疗组肌注己酮可可碱 (30 mg/ kg· d)或口服溴隐亭 (5 mg/ kg· d) ,对照组肌注等容量的无菌生理盐水或口服等容量 5 %葡萄糖液。观察动物 EAE的发病数、临床评分、病灶计数以及检测各组动物血清 TNF、IL- 6活性及血清 PRL 水平。结果　己酮可可碱及溴隐亭治疗组豚鼠发病数较对照组减少 ,临床表现及病理变化明显减轻 ,血清 TNF、IL- 6活性及 PRL 水平较对照组明显降低。结论　己酮可可碱可能通过抑制 TNF释放及其活性的表达 ,而溴隐亭可能通过抑制 PRL 释放 ,从而抑制 EAE的发病 ,可尝试将该药物用于临床 MS的急性发作或复发的治疗。     

不同剂量MOG抗原免疫诱导小鼠自身免疫性脑脊髓炎模型的比较

目的 比较不同剂量髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG_(35-55))免疫诱导C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的作用.方法 将C57BL/6小鼠分为正常组和三组不同剂量MOG_(35-55)诱导的EAE模型组,共4组.模型组分别以每只200、100、50μg的MOG_(35-55)与完全弗氏佐剂(complete Freund''s adjuvant,CFA)混合的乳化抗原皮下注射免疫诱导EAE模型,正常组以生理盐水替代.观察不同剂量MOG_(35-55)对C57BL/6小鼠体重、发病率以及神经功能评分等影响,同时取小鼠脑和脊髓,利用光镜和透射电镜观察小鼠病理组织学改变.结果 三组不同剂量MOG_(35-55)均能诱导EAE模型,发病率为100%,呈慢性单相病程,病理学观察发现小鼠脑和脊髓有炎性细胞浸润、脱髓鞘及轴突损伤等改变.但小剂量组在体重减轻、临床症状评分及病理学改变等方面均较中、大剂量组明显.结论 用MOG_(35-55)50μg剂量免疫诱导的C57BL/6小鼠EAE模型稳定,可在今后的研究中应用.