ELK-3蛋白在肝癌组织中的表达及其对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响

目的：探讨转录因子ELK-3与肝癌患者临床病理特征的关系及ELK-3对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响,并阐明其作用机制。方法：选取80例肝癌患者癌组织及49例癌旁正常组织石蜡标本、18例肝癌患者癌组织及癌旁正常组织新鲜术后标本,采用免疫组织化学法和Western blotting法检测ELK-3蛋白在肝癌及癌旁正常组织中的表达,探讨ELK-3与肝癌患者临床病理特征的关系。选取处于对数生长期的人肝癌HepG2细胞,设立对照组（control-siRNA）和ELK-3干扰组（ELK-3-siRNA）,将ELK-3 siRNA转染至HepG2细胞,通过细胞划痕实验及体外Transwell小室实验观察肝癌HepG2细胞的迁移和侵袭能力。结果：石蜡组织标本免疫组织化学染色,与癌旁正常组织比较,肝癌组织中ELK-3蛋白阳性表达率明显升高（P<0.05）,且ELK-3蛋白阳性表达率与肝癌患者肿瘤数、TNM分期、Edmondson分级和门静脉浸润有关联（P<0.05）。新鲜术后标本Western blotting法检测,与癌旁正常组织比较,18例肝癌患者肝癌组织中ELK-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与对照组比较,ELK-3-siRNA组细胞的迁移距离明显变短（P<0.05）,侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。结论：ELK-3在肝癌组织中的表达水平明显升高。干扰ELK-3会抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,表明ELK-3蛋白可以通过抑制肝癌细胞的迁移和侵袭对其产生影响,从而在肝癌发生发展过程中起重要作用。     

RIP1在肝癌组织中的表达意义及其对细胞侵袭、迁移的影响

探讨受体相互作用蛋白激酶-1(RIP1)在肝癌组织及癌旁组织中的表达情况,并探索其对肝癌细胞侵袭和迁移的分子调控机制。收集肝癌和癌旁组织,免疫组化检测RIP1蛋白的表达,筛选高表达RIP1的肝癌细胞系。对肝癌细胞系进行RIP1沉默处理并设置阴性对照。采用western blot及RT-PCR法检测RIP1的表达量;Tranwell观察细胞侵袭能力;细胞划痕观察细胞迁移能力。结果显示, 48例肝癌组织中,22例存在RIP1蛋白阳性表达,阳性率为45.83%,其中,强阳性患者为15例,中等及弱阳性7例,该研究中有6例复发患者。RIP1在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P＜0.05),高表达RIP1患者的总生存率和无复发生存率显著低于低表达RIP1的患者(均P＜0.05)。抑制RIP1基因后其相对表达量、细胞侵袭、迁移能力均下降(P＜0.05)。RIP1在肝癌中存在高表达,可能参与肝癌细胞侵袭与迁移过程。     

七氟烷抑制宣威肺癌XWLC-05细胞生物学行为

  目的   了解七氟烷对宣威肺癌细胞XWLC-05增殖、迁移、侵袭及恶性行为的影响，并进一步探讨其潜在机制。  方法   七氟烷对XWLC-05细胞进行处理，体外实验检测XWLC-05细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭变化；体内实验检测XWLC-05细胞致瘤性，蛋白印迹法分析增殖关键分子PI3K/AKT、细胞侵袭蛋白MMP-2/MMP-9的表达。  结果  对照组的克隆形成数（287.5±23.1）个，高于实验组（174.1±16.3）个，（P < 0.05）；对照组的凋亡率（1.60±0.38）%，低于实验组（31.48±5.81）%，（P < 0.01）；对照组迁移细胞数（87.8±10.2）%，高于实验组（35.2±4.4）%，（P < 0.05）；对照组侵袭细胞数（93.6±7.3）个，高于实验组（30.7±3.2）个，（P < 0.01）。七氟烷处理下调增殖蛋白分子PI3K、p-AKT和侵袭蛋白分子MMP-2、MMP-9的表达水平（P < 0.05）。  结论   七氟烷通过抑制PI3K/AKT信号通路降低宣威肺癌细胞XWLC-05的增殖能力，诱导细胞凋亡，减弱XWLC-05细胞的迁移、侵袭和成瘤能力。七氟烷可能成为宣威肺癌治疗的一种新方法。     

miR-613靶向PTBP1抑制子宫内膜癌细胞侵袭和迁移的实验研究

  目的  探讨微RNA-613(miR-613)靶向多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)对子宫内膜癌细胞(Ishikawa)增殖、迁移及侵袭的影响。  方法  采用RT-qPCR法检测子宫内膜癌组织miR-613及PTBP1 mRNA表达;体外培养Ishikawa细胞并对Ishikawa细胞进行干预,过表达miR-613、抑制PTBP1表达或共同过表达miR-613与PTBP1,分别检测Ishikawa细胞增殖、迁移与侵袭及PTBP1、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达情况;双荧光素酶报告实验验证miR-613与PTBP1的靶向关系。  结果  子宫内膜癌组织中miR-613表达水平为0.48±0.09,显著低于癌旁组织的1.03±0.11(P＜0.05),PTBP1 mRNA表达水平为2.78±0.23,显著高于癌旁组织的1.01±0.12(P＜0.05),miR-613与PTBP1 mRNA呈负相关关系(r=-0.523,P＜0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-613靶向负调控PTBP1表达;过表达miR-613与抑制PTBP1表达,Ishikawa细胞存活率、细胞迁移与侵袭数、PTBP1、MMP-2及MMP-9表达水平显著降低(均P＜0.05);过表达PTBP1逆转过表达miR-613对Ishikawa细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。  结论  miR-613在子宫内膜癌组织中低表达,过表达miR-613可通过靶向抑制PTBP1表达,抑制人子宫内膜癌细胞的增殖、迁移及侵袭。      

KLF4调控 MMP9对原发性肝癌的侵袭迁移能力的影响

目的：研究Krüppel 样因子4(KLF4)和基质金属蛋白酶9(MMP9)在原发性肝癌中的表达情况,探讨 KLF4调节MMP9对原发性肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法收集原发性肝癌手术患者癌和癌旁组织标本,通过免疫组织化学、实时荧光定量 PCR 和免疫印迹试验(Western blot)检测50例肝癌组织及对应癌旁组织中 KLF4和 MMP9的表达情况;构建重组质粒,上调肝癌细胞(HepG2细胞系)的 KLF4表达,检测 MMP9 mRNA 及蛋白水平的表达情况;转染后的 HepG2细胞运用 Tran-swell 侵袭试验和划痕试验观察侵袭和迁移能力的变化。结果相比癌旁组织,KLF4在肝癌组织中的表达明显降低(P <0.05),而 MMP9的表达明显增高(P <0.05)。通过构建重组质粒,上调 KLF4的表达,发现 MMP9的 mRNA 和蛋白表达均降低,并影响 HepG2细胞的侵袭和迁移能力。结论在原发性肝癌中,KLF4低表达,而 MMP9高表达。在肝癌细胞中上调 KLF4表达可引起 MMP9表达下降,进而抑制肝癌细胞的侵袭和迁移。     

UHRF1调控雌激素受体表达对甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

  目的  观察泛素样含PDH和环指域1 (UHRF1)对雌激素受体（ER）α和ERβ表达比率的影响,探讨UHRF1影响甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移的机制。  方法  应用Western blot、实时荧光定量（qRT）-PCR检测正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1和甲状腺乳头状癌细胞BCPAP中UHRF1、ERα和ERβ的蛋白及mRNA表达。分别用Scrambled siRNA、UHRF1 siRNA处理BCPAP细胞,qRT-PCR检测各组细胞中ERα和ERβ的mRNA表达;MTT、Transwell分别检测各组细胞增殖、侵袭和迁移。  结果  与Nthy-ori3-1细胞相比,BCPAP细胞中UHRF1和ERα蛋白及mRNA表达水平上调（P<0.05）,而ERβ蛋白和mRNA表达水平下调（P<0.05）。与空白对照组和Scrambled siRNA组相比,转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞中ERα mRNA表达降低（P<0.05）,ERβ mRNA表达升高（P<0.05）;转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移降低（P<0.05）。  结论  UHRF1可上调ERα/ERβ的表达比率,促进甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移。     

MicroRNA-577在肺癌组织中的表达及对NCI-H520细胞侵袭的影响

目的 探讨microRNA-577（miR-577）在人肺鳞状细胞癌组织内的表达及对NCI-H520细胞侵袭的影响。方法 选取2013年1月—2016年12月成都市温江区人民医收治并行手术切除的60例肺鳞状细胞癌患者的癌组织和对应癌旁组织。检测miR-577的相对表达量,分析miR-577表达的临床病理意义。采用人工合成的miR-577模拟物转染NCI-H520细胞,检测NCI-H520细胞过表达miR-577后迁移、侵袭能力及miR-577下游潜在靶点β-catenin的表达变化。结果 肺鳞状细胞癌组织中的miR-577表达水平较癌旁组织降低（P?<0.05）,低表达miR-577与患者存在淋巴结转移相关（P?<0.05）;过表达miR-577能够削弱NCI-H520细胞迁移、侵袭能力及细胞内β-catenin的表达水平（P?<0.05）。结论 肺鳞状细胞癌组织中miR-577表达降低,miR-577可能通过下调β-catenin的表达来削弱肺癌细胞的侵袭能力。     

AK4对肝内胆管癌细胞HUCCT1增殖、迁移的影响

  目的  探究AK4对肝内胆管癌细胞HUCCT1增殖、迁移能力的影响。  方法  采用小干扰RNA（siRNA）技术靶向沉默肝内胆管癌细胞HUCCT1中AK4的表达,采用免疫印迹法检测沉默效果以及筛选siRNA-AK4,通过EdU实验和细胞划痕实验检测该胆管癌细胞增殖、迁移能力。  结果  通过免疫印迹法检测出siRNA-AK4-3沉默效果最好,EdU实验显示沉默AK4后,细胞增殖能力下降（P < 0.05）,细胞划痕实验显示沉默AK4后,细胞迁移能力下降（P < 0.01）。  结论  沉默肝内胆管癌细胞HUCCT1中AK4的表达后,其增殖、迁移能力受到抑制。     

芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT的影响

  目的  研究芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT的影响。  方法  MTT法检测各浓度芒果苷元对HK-2细胞活力的影响；用TGF-β1诱导HK-2细胞成EMT模型，并给以芒果苷元干预，在TGF-β1诱导24 h时显微镜下拍照记录细胞形态变化，划痕实验法检测细胞迁移能力，Transwell法检测细胞侵袭能力，Western blot法检测纤连蛋白（fibronectin，FN）和Ⅰ型胶原（collagen type Ⅰ，Col Ⅰ）蛋白表达水平。  结果  （1）芒果苷元（10-9～10-5 mol/L）浓度下HK-2细胞活力均无明显变化（P > 0.05）；（2）与正常组相比，模型组细胞形态变长变梭，迁移和侵袭能力显著增强（P < 0.05，0.01），FN和ColⅠ蛋白表达水平显著上调（P < 0.05，0.01）；与模型组相比，芒果苷元组细胞能维持原来的鹅卵石形，迁移和侵袭能力显著下降（P < 0.05，0.01），FN和ColⅠ蛋白表达水平显著下调（P < 0.05）。  结论  芒果苷元能抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞迁移和侵袭，阻止细胞形态的改变，下调细胞外基质成分FN和ColⅠ的蛋白表达，从而抑制EMT的发展。     

REGγ促进肺癌细胞的恶性生物学行为

目的 研究蛋白酶体激活因子γ（REGγ）在人肺癌组织及细胞系中的表达以及其对肺癌细胞增殖、细胞周期以及迁移能力等多种恶性生物学行为的影响。方法 免疫组织化学染色检测REGγ在肺癌组织以及癌旁正常组织中的表达情况;Western blot 检测肺癌细胞系及肺正常上皮细胞系中REGγ的表达;构建REGγ过表达及沉默肺癌H1975稳定细胞株,用MTT法检测不同REGγ表达情况的肺癌细胞H1975稳定株的增殖变化;PI染色流式检测REGγ对肺癌细胞周期的作用;通过细胞划痕实验观察REGγ对肺癌细胞迁移能力的影响。结果 在肺癌组织中REGγ的表达程度明显高于癌旁正常组织。在多个肺癌细胞系中,REGγ表达量均高于正常细胞系。REGγ过表达可以促进肺癌细胞增殖（P<0.05）,增加肿瘤细胞S+G2/M期的比例（P <0.05）,并增强其迁移能力（P <0.05）,沉默REGγ后上述影响均发生逆转。结论 REGγ对肺癌多种恶性生物学行为有明显促进作用。     

Twist1调控Bmi1对胆囊癌细胞侵袭迁移的影响及其机制研究

目的 探讨Twist1对胆囊癌细胞侵袭转移的影响,以及对Bmi1、E-Cadherine、N-Cadherine的调控作用。方法 构建Twist1 shRNA慢病毒载体感染GBC-SD细胞做为实验组,空载慢病毒感染GBC-SD细胞为阴性对照组,不做任何处理的GBC-SD细胞为空白对照组。细胞划痕及Transwell侵袭小室实验检测细胞的迁移及侵袭能力,Western blot及RT-PCR检测Twist1、Bmi1、E-Cadherine及N-Cadherine的蛋白及mRNA的相对表达量。结果 与阴性组、空白组相比,实验组细胞划痕愈合度低、侵袭数少（P <0.000 1）,而阴性组及空白组间细胞迁移率、侵袭数比较差异均无统计学意义（P> 0.05）。阴性组及空白组的Twist1、Bmi1、NCadherine的蛋白及mRNA的相对表达量明显高于实验组（P <0.001）,而E-Cadherine蛋白及mRNA的相对表达量则明显低于实验组（P <0.000 1）,阴性组及空白组组间各蛋白及mRNA的相对表达水平比较差异无统计学意义（P> 0.05）。结论 ...     

孕激素通过HOXA9对人卵巢癌细胞增殖和迁移的机制研究

  目的  探讨HOXA9在孕激素抑制卵巢癌发展过程中的作用机制。   方法  （1）按照孕激素醋酸甲羟孕酮（MPA）药物浓度梯度（0.1、1、10、50、100 μmol/L）培养人卵巢癌细胞HO-8910,作用24 h、 48 h 、72 h后,光学显微镜观察细胞形态; CCK-8检测细胞存活率,确定IC₅₀; Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡率。（2）将细胞分为H0-8910细胞4组:（1）NC组;（2）孕激素组;（3）孕激素+si-HOXA9组;（4）孕激素+ov-HOXA9组。H0-8910细胞分别转染HOXA9敲降或过表达质粒后使用MPA处理或不转染质粒单独使用使用MPA处理72 h,qPCR 和Western blot 分别用于检测HOXA9 mRNA和蛋白表达水平以及上皮间质转化（EMT）相关蛋白 （Vimentin,N-cadherin,E-cadherin）的表达变化;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell 实验用于检测细胞侵袭能力。   结果  （1）孕激素刺激后,HO-8910细胞株生长状态变差,排列稀疏,细胞增殖,迁移以及侵袭能力受到抑制（P < 0.0001）,且细胞凋亡率上升（P < 0.0001）;（2）通过cck8结果计算得MPA处理H0-8910细胞72 h的IC50值为2.680 μmol/L;（3）相较于人卵巢上皮细胞CP-H055,HOXA9在人卵巢癌细胞株HO-8910,SKOV3,A2780和OVCAR3中mRNA均高表达（P < 0.01）,HOXA9蛋白在HO-8910中同样高表达（P < 0.001）;（4）孕激素可抑制HOXA9的表达（P < 0.0001）,敲降HOXA9 后,孕激素对HO-8910侵袭和迁移能力的抑制更为明显（P < 0.0001）,而过表达HOXA9后,孕激素对HO-8910侵袭和迁移能力的抑制稍有减弱（P < 0.0001）;（5）孕激素使E-cadherin蛋白表达上升（P < 0.01）,而Vimentin,N-cadherin蛋白表达下降（P < 0.001）;敲降HOXA9 后,孕激素对HO-891中EMT相关蛋白表达影响更为明显（P < 0.05）,而过表达HOXA9后,孕激素对HO-891中EMT相关蛋白表达影响减弱（P < 0.05）。  结论  孕激素通过抑制HOXA9基因的表达,抑制细胞增殖,迁移,侵袭以及EMT进程等恶性生物学表型,从而抑制卵巢癌发展进程。     

真核翻译起始因子-5A2在肝内胆管癌中的表达及意义

  目的  研究真核翻译起始因子-5A2（eukaryotic translation initiation factor 5A2，eIF5A2）在肝内胆管癌中的表达及与神经侵犯和周围脂肪组织浸润的相关性。  方法  收集昆明医科大学第二附属医院肝胆胰外科2013年10月至2020年10月156例肝内胆管癌患者术后石蜡切块，收集同期30例肝血管瘤患者部分肝切除的正常肝组织作为对照组，采用免疫组化的方法检测eIF5A2的表达水平，并收集病理资料，分析eIF5A2与神经侵犯和周围脂肪组织浸润的相关性。  结果  156例肝内胆管癌组织切片中eIF5A2高表达95例（60.9%），其在正常肝组织胆管上皮高表达率为13.3%，eIF5A2的表达与神经侵犯和周围脂肪组织浸润显著相关（P < 0.05）。  结论  eIF5A2在肝内胆管癌中高表达，与神经侵犯和周围脂肪组织浸润显著相关。     

负载抗原DC联合CIK对肝癌免疫微环境的影响

  目的  探讨负载肝癌抗原树突状细胞（dendritic cell，DC）联合细胞因子诱导杀伤细胞（cytokine-induced killer，CIK）对肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）微环境的影响。  方法  采用手术切除HCC组织制备HCC抗原，采集健康志愿者单个核细胞，诱导并分离出DC，CIK，按是否加入HCC抗原及共培养将细胞分为DC、Ag-Dc、CIK、Ag-DC-CIK四组，流式细胞仪测定各组细胞表型后，ELISA检测IL-6、IL-10及IFN-γ水平；免疫细胞化学SP法检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达；RT-PCR检测基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）-2，MMP-3，MMP-9mRNA表达水平。  结果  负载抗原后DC组CD80及CD86表达阳性率，Ag-DC-CIK组CD3+CD56+、CD8+CD56+双阳性细胞均显著升高（P < 0.05）； Ag-DC-CIK组IL-6及IFN-γ浓度显著低于其余各组；而IL-10浓度最高（P < 0.05）；Ag-DC-CIK组VEGF及MMP-2、MMP-3、MMP-9mRNA表达水平均显著下降（P < 0.05）。  结论  在DC负载自身抗原的基础上，与CIK共培养，可显著增强DC及CIK活性，有效降低HePG2微环境中血管形成，炎症反应及纤维化相关因子表达。     

miR-490-3p调控SW1990胰腺癌细胞上皮间充质转化

  目的  研究miR-490-3p在分子水平上通过HMGA2蛋白对SW1990细胞上皮间充质转化的影响。  方法  通过实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）检测正常胰腺导管上皮细胞HPDE和人胰腺癌细胞SW1990中miR-490-3p的表达。通过转染质粒[miR-490-3p阻遏物（inhibitor）和miR-490-3p模拟物（mimic）以及各自的阴性对照质粒]调控miR-490-3p在SW1990细胞中的表达并通过RT-qPCR法验证转染效率。转染48 h后，通过CCK8检测、划痕法、Transwell小室检测，流式细胞仪检测等分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等恶性生物学特征的影响。通过Western blot检测细胞中上皮间充质转化相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的蛋白表达水平。同时，用数据库预测miR-490-3p及其靶基因HMGA2的靶向关系，并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证，通过Western blot检测细胞中HMGA2的蛋白表达水平。  结果  （1）与HPDE正常细胞相比，SW1990癌细胞中miR-490-3p表达水平明显降低（P = 0.215）；（2）miR-490-3p 上调后，SW1990细胞的凋亡率显著高于对照组（P < 0.0001），而细胞增殖、迁移和侵袭能力显著低于对照组（P < 0.0001）。miR-490-3p 下调后，SW1990细胞的凋亡率显著低于对照组（P < 0.0001），而细胞增殖、迁移和侵袭能力显著高于对照组（P < 0.0001）；（3）miR-490-3p 上调后，SW1990细胞中的N-cadherin表达量显著高于对照组（P < 0.0001），而E-cadherin的表达水平显著低于对照组（P < 0.0001）；miR-490-3p 下调后，SW1990细胞中的N-cadherin表达量显著低于对照组（P < 0.0001），而E-cadherin的表达水平显著高于对照组（P < 0.0001）；（4）HMGA2是miR-490-3p的靶向基因。  结论  miR-490-3p可通过靶向HMGA2抑制SW1990胰腺癌细胞EMT，从而影响胰腺癌的的发生发展进程，揭示HMGA2和miR-490-3p可能为胰腺癌诊断和治疗的靶点。     

CAAP1对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨Caspase活性和凋亡抑制因子1(CAAP1)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭的影响.方法 构建CAAP1的过表达载体pcDNA3/CAAP1和敲降载体pSilencer 2.1-U6 neo/shR-CAAP1(shR-CAAP1),并进行鉴定.SMMC-7721分为4组:pcDNA3/CA...     

Rev-erbβ基因敲除对肝癌HepG2细胞增殖和迁移侵袭的影响

  目的  探讨核受体Rev-erbβ基因敲除对肝癌HepG2细胞增殖和迁移的影响。  方法  首先采用对靶向基因进行特定DNA修饰的CRISPR/Cas9基因组编辑技术构建Rev-erbβ基因敲除的HepG2细胞系。用Rev-erbβ打靶载体共转染到HepG2细胞,通过筛选、克隆化构建Rev-erbβ基因敲除HepG2细胞系,并采用PCR、测序和Western blot鉴定。以正常HepG2细胞为对照,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Rev-erbβ基因敲除对肿瘤迁移、侵袭相关基因表达的影响,采用MTT、细胞划痕、Transwell等实验检测Rev-erbβ基因敲除对HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的影响。  结果  成功构建一株Rev-erbβ基因完全敲除单克隆细胞系(经PCR、测序和Western blot鉴定),命名为HepG2 C5(Rev-erbβ-/-)。qRT-PCR结果显示,Rev-erbβ基因敲除可以导致基质金属蛋白酶-2,-9基因(MMP2,MMP9)、细胞外基质蛋白1基因(ECM1)表达上调(P均＜0.05),细胞黏附相关基因E-钙黏蛋白基因(CDH1)下降(P=0.05);MTT、细胞划痕、Transwell实验显示,并且HepG2 C5比对照细胞有更强的增殖、迁移与侵袭能力(P＜0.05)。  结论  Rev-erbβ基因敲除可以改变HepG2细胞与迁移、黏附相关基因的表达,进而影响HepG2细胞增殖、迁移与侵袭能力。