含川芎嗪的玻璃化液对异体神经移植免疫反应的影响

目的:观察含不同浓度川芎嗪(Tetramethylpyrazine.TMP)的玻璃化保存液对异体神经移植的免疫学变化,以探索含川芎嗪的玻璃化液保存同种异系(体)神经后对其抗原性的影响.方法:在Wistar大鼠的背部和腹部皮下植入经过含川芎嗪的玻璃化液保存的SD大鼠的坐骨神经,对照组植入新鲜自体神经.用免疫组化染色检测异体神经中T淋巴细胞的侵润程度.结果:含320 mg/L川芎嗪的玻璃化液在-20℃保存异体神经3周后.CD4+和CD8+淋巴细胞的侵润程度明显轻于含其他浓度川芎嗪的玻璃化液保存的异体神经移植组,神经组织较好保持原形态,周围仅见极少量淋巴细胞侵润,与自体神经植入组无明显差别.结论:含320mg/L川芎嗪的玻璃化液在-20℃保存同种异体神经3周后的抗原性明显降低,植入体内后免疫排斥反应不明显.     

神经生长因子对超低温冷冻异体神经移植的效果评价

目的研究神经生长因子（nerve growth factor,NGF）对超低温冷冻处理后的同种异体神经移植后神经再生的作用。方法选择Wistar大鼠作为动物模型,于建立动物模型三周前取5只大鼠作为供体,切取双侧坐骨神经,冷藏于-196℃液氮中。另取30只大鼠分为：A组,单纯冷冻异体神经移植组;B组,冷冻异体神经局部应用NGF缓释膜组;C组,自体神经移植组。术后12周进行大体观察、组织学、超微结构等测定。结果术后12周内,三组大鼠均未发生急性移植排斥反应。组织学、超微结构测定发现B、C组神经生长情况明显优于A组。结论超低温冷冻异体神经移植局部应用神经生长因子能更有效促进神经再生。     

硫酸软骨素酶ABC-PLGA缓释微球处理去细胞同种异体神经移植修复大鼠坐骨神经

目的 探讨硫酸软骨素酶ABC（chondroitinase ABC,ChABC）-聚乳酸-聚乙醇酸共聚物缓释微球处理改良化学法去细胞同种异体神经移植修复大鼠坐骨神经的可行性。方法 用复乳法制备硫酸软骨素酶ABC-聚乳酸-聚乙醇酸共聚物缓释微球。取成年雄性SD大鼠40只,随机分为4组（n=10）：硫酸软骨素酶ABC-聚乳酸-聚乙醇酸共聚物缓释微球处理改良化学法去细胞同种异体神经移植组（A组）、自体神经移植组（B组）、改良化学法去细胞同种异体神经浸泡ChABC神经移植对照组（C组）、改良化学法去细胞同种异体神经移植09%氯化钠注射液对照组（D组）。取A、C、D 3组动物人工切取右侧坐骨神经10 mm,用改良化学法制备移植神经段：A、C两组浸泡在PBS液中,D组浸泡在含2 U/ml ChABC的PBS液（pH7.4）中。A组动物取C组制备神经行同种异体神经移植,外膜无张力缝合,并在移植神经段距近心端缝合处2 mm、4 mm、6 mm、8 mm处分别注入0.2μl制备好的硫酸软骨素酶ABC-PLGA缓释微球。B组在右侧离断10 mm坐骨神经倒置后行外膜缝合。C组取D组制备神经行神经移植。D组取A组制备神经行神经移植后,按照A组的位置注入等量等渗0.9%氯化钠注射液。术后4、8、12周进行大体标本观察,术后12周行电生理检测、HE染色、镀银染色及电镜组织学检测、图像分析对比。结果 制备所得硫酸软骨素酶ABC微球表面光滑,球体大小各异且均匀,无粘连及成簇等现象,Weibull方程曲线显示硫酸软骨素酶ABC微球体外释药稳定。采用硫酸软骨素酶ABC-聚乳酸-聚乙醇酸共聚物缓释微球处理改良化学法去细胞同种异体神经移植能够促进大鼠神经缺损处的轴突再生,提高神经修复的速度和质量,再生神经直径较粗,粘连较轻,电生理检测和组织学观察显示各项指标均优于两对照组,且较两对照组修复效果更接近于自体神经移植。结论 硫酸软     

不同浓度川芎嗪的玻璃化保存液对施万细胞凋亡的作用

目的探讨不同浓度川芎嗪(TMP)的玻璃化保存液对大鼠施万细胞凋亡及调控基因表达的影响,以便获得川芎嗪的最佳浓度。方法 20只SD大鼠,切取双侧坐骨神经(共40条),将其随机分成A、B、C、D、E组,每组8条,分别用含不同浓度川芎嗪的玻璃化保存液在-20℃保存3周(A组:0mg/L、B组:80mg/L、C组:160mg/L、D组:320mg/L、E组:640mg/L)。3周后取神经进行苏木素-伊红(HE)染色光镜检查;免疫组化法检测Bcl-2、Bax;末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。结果 D组神经施万细胞凋亡数量明显少于其余各组施万细胞凋亡数量,A组神经施万细胞凋亡数量明显多于其余各组施万细胞凋亡数量;D组Bcl-2的阳性表达率最高,且明显高于其余各组,A组Bcl-2的阳性表达率最低,且明显低于其余各组;D组Bax阳性表达率明显低于其余各组,A组Bax阳性表达率明显高于其余各组。结论川芎嗪能通过调节Bcl-2和Bax的表达而有效抑制施万细胞的凋亡,在-20℃含川芎嗪的玻璃化液保存大鼠坐骨神经,川芎嗪的浓度以320mg/L最佳。     

不同温度时间保存异体神经移植后电生理观察

周围神经损伤后缺损过长、过粗，由自体提供有限，移植后还会给供区带来神经功能抓害。以冷冻法降低异体种经移植后的抗原性，国内外已有报道，但其结果大相径庭。究竟哪一种温度和时间保存，排斥反应小，国内外尚未见肯定的意见、本实验研究，旨在用不同温度和时间保存异体神经进行移植以取得临床应用数据。实验取100只成年雄性SD大白鼠，体重250±20g，其中对照组异体神经不作任何处理共10只大白鼠。实验分3组，每组30只即A组为异体神经-196℃、－80℃、－40℃保存20分钟、每种温度均为10只大白鼠；B组为保存1周的同样温度和数量的大白鼠；C组为保存3周的同样温度和数量的大白鼠。手术在显微镜下由作者一人操作；来后不用任何药物，喂养条件、室温及管理条件完全一致。术后分别于6周和12周观察电生理变化，结果表明：同种异体神经可再生轴突，从电生理中发现，本实验组温度以-196℃为好。时间以3周为佳．为进一步在分子学上研究异体种经移植提供了统一的实验模型。     

紫外线照射的供体脾细胞预输注对大鼠同种异体神经移植的影响

目的：探讨大鼠尾静脉预输注经紫外线照射的供体脾细胞在同种异体坐骨神经移植中的作用。方法：20只雄性Wistar大鼠随机分为未经紫外线照射的供体脾细胞注射组（非照射组）、经紫外线照射的脾细胞注射组（照射组）两组，每组10只。未照射组注射未经紫外线照射的供体脾细胞，照射组注射经紫外线照射的脾细胞，7d后移植供体神经。术后7d行外周血T淋巴细胞亚群检查，术后8W行移植神经组织学检查。结果：照射组CD4^＋百分率、CD4^＋CD8^＋比值较非照射组明显降低（氏O．01，P〈0．05），CD8^＋百分率较非照射组明显升高（P〈0．01）。组织学检查显示，照射组的再生神经较非照射组多。结论：尾静脉内注射经紫外线照射的异基因脾细胞可诱导对异体神经移植的特异性免疫耐受。     

聚乳酸复合NGF／TGF-β1对同种异体神经移植修复周围神经缺损影响的实验研究

目的研究外消旋聚乳酸（PDLLA）-神经生长因子（NGF）-转化生长因子β1（TGFβ1）药物缓释系统对同种异体神经移植修复神经缺损的影响。方法32只大鼠随机分成A、B、c、D4组,每组8只,所有大鼠左侧坐骨神经段性切除后,移植经过化学脱细胞处理后的同种异体神经段,A组在移植区域应用PDLLA-NGF-TGFβ1缓释膜,B、C两组分别应用PDLLA—NGF缓释膜、PDLLA-TGFβ1缓释膜,D组为空白对照组,术后观察备组大鼠的大体形态、步态、关节活动情况。     

PHB导管复合神经生长因子在大鼠坐骨神经损伤模型中的疗效研究

目的研究应用PHB复合神经生长因子在大鼠坐骨神经损伤模型的疗效。方法SD雄性大鼠随机分为PHB神经导管移植组、自体神经移植组、免疫抑制下的异体神经移植组和PHB复合应用神经生长因子导管移植组,采用坐骨神经功能指数检测和神经电生理测定进行神经功能测试。病理学检测和电镜观察神经解剖结构。结果PHB导管复合神经生长因子组坐骨神经功能指数和神经传导速度显著优于异体神经移植组和PHB神经导管移植组;病理学和电镜检测显示PHB导管复合神经生长因子组髓鞘再生与自体神经移植组相似,而显著优于其余两组。结论在坐骨神经损伤修复中PHB导管复合应用神经生长因子神经修复效果与自体神经移植相似,而显著优于异体神经移植和PHB神经导管移植。     

含川芎嗪的玻璃化保存液对雪旺细胞凋亡及调控基因表达影响的初步实验研究

目的:探讨在不同温度下含川芎嗪的玻璃化保存液对大鼠雪旺细胞凋亡及调控基因表达的影响.方法:24只SD大鼠,切取双侧坐骨神经(共48条),将其随机分成2组(每组24条):实验组(含川芎嗪)和对照组(不含川芎嗪).实验组分为A、B、C、D亚组,对照组分为A'、B'、C'、D'亚组(每亚组6条),分别在不同的温度下保存3周(A、A'亚组:-4℃保存;B、B'亚组:-20~C保存;C、C'亚组:-80℃保存;D、D'亚组:-196℃保存).3周后取神经进行检测:①HE染色光镜检查;②免疫组化法检测Bcl-2、Bax;③TUNEL法检测细胞凋亡.结果:除D、D'亚组外,实验组各亚组神经雪旺细胞凋亡数量明显少于对照组相应的各亚组,实验组各亚组Bcl-2的阳性表达率均明显高于对照组相应的各亚组,实验组各亚组Bax阳性表达率均明显低于对照组相应的各亚组,差异均有显著性(PO.05).结论:含川芎嗪的玻璃化保存液能够在-20~C条件下,通过调节Bcl-2和Bax的表达而有效抑制雪旺细胞的凋亡.     

同种异体神经与自体神经瘤联合修复周围神经缺损的实验研究

目的 探讨用优化法处理后的脱细胞同种异体神经和自体神经瘤组成的联合体修复大鼠坐骨神经缺损的效果. 方法 30只SD大鼠随机分为2组(每组15只):A组(自体神经瘤模型组),行同种异体神经与自体神经瘤联合移植;B组(坐骨神经缺损模型组),做自体神经移植.将30只成年Wistar大鼠作为神经供体,取其单侧坐骨神经,制备为脱细胞同种异体神经.在术后的8周、16周进行坐骨神经功能指数评价、神经电生理和组织学检查. 结果 两组模型制备成功后,术后8周时大鼠均出现肢体躲避反应;术后16周时均有大量神经纤维通过移植体,两组再生神经的纤维数量、直径及髓鞘比较,差异无统计学意义;术后8周电生理检测发现A组再生神经的传导速度明显慢于B组(P<0.05),术后16周两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后16周A组和B组坐骨神经功能指数比较,差异无统计学意义(P>0.05). 结论 同种异体神经与自体神经瘤组成的联合体能修复周围神经缺损,恢复神经的传导功能,有效地促进神经的再生,此联合体是一种良好的自体神经移植替代材料.     

不同温度和时间保存异体神经移植后对鼠轴突再生的影响

目的：观察不同温度和时间保存异体神经移植后对鼠轴突再生的影响。方法：取１００只成年雄性ＳＤ大鼠，其中实验组９０只，对照组１０只。实验组在－１９６℃、－８０℃、－４０℃各保存２０ｍｉｎ、１周、３周，在显微镜下进行异体神经移植。于术后１２周观察光镜和电镜、异体神经中段的轴突计数。结果：在保存２０ｍｉｎ组中，－４０℃可见轴突间水肿明显，髓鞘脱水；－８０℃与－４０℃变化基本相似；－１９６℃肿胀稍轻，也有脱髓鞘改变，神经内有炎性细胞浸润。在保存１周组中可见，－４０℃轴突间水肿比２０ｍｉｎ组同温减轻；－８０℃与－４０℃病理改变基本相似；－１９６℃比－４０℃和－８０℃病理改变更严重。在保存３周组中可见，－４０℃轴突间仍有水肿，脱髓鞘改变较轻；－８０℃比－４０℃更接近正常；－１９６℃比－４０℃和－８０℃病理改变轻，主要表现为轴突间只有轻度水肿，轴突密度明显增高，神经纤维接近正常。结论：同种异体神经可再生轴突，即使未作任何冷冻处理亦有极少量再生轴突。异体神经保存温度以－１９６℃为好，时间以３周为佳。     

胸腺内注射不同剂量的异基因抗原诱导大鼠同种异体神经移植的免疫耐受反应

目的 探讨大鼠胸腺内注射不同剂量异基因抗原(MHC),诱导大鼠同种异体坐骨神经产生的特异性免疫耐受反应.方法 雄性Wistar大鼠20只为供体,选用清洁级雄性SD大鼠50只为受体,受体随机分为5组,每组10只:A:新鲜自体神经移植组;B:新鲜异体神经移植组;C、D、E组分别为低、中、高剂量异基因抗原注射异体神经移植组,剂量分别为1 5 mg、3 0 mg、6 0 mg.术后2周进行运动神经传导速度、病理学、混合淋巴细胞培养(MLC)和血清sIL-2R检查.结果 胸腺内抗原注射组动物肢体的生理功能、免疫学、组织学及透射电镜指标恢复,其中,E组动物各项指标恢复最明显,与A组指标类似.结论 胸腺内注射异基因抗原可以诱导大鼠对异体坐骨神经移植的免疫耐受,在一定范围内,免疫耐受的程度与抗原量有关.     

改良去细胞同种异体神经移植后免疫反应的观察

目的 观察冻融联合改良化学法去细胞同种异体神经植入受体后体内细胞免疫变化从而判断其免疫原性.方法 30只雄性Wistar大鼠分成冻融法联合改良化学法供体组（实验组）15只、新鲜异体神经供体组（对照组）15只.另取30只Spraue Dawley大鼠随机分成冻融法联合改良化学法受体组15只,新鲜异体神经受体15只.右侧坐骨神经造成1 cm长缺损,用供体组的两种不同方法处理的神经分别与相应受体组进行移植物桥接.植入4周后,将移植段取出,作组织学观察、免疫组化染色,记数上述CD4^＋、CD8^＋淋巴细胞变化.结果 CD4^＋、CD8^＋淋巴细胞变化新鲜异体神经组明显多于冻融法联合改良化学法（P＜0.01）.结论 经冻融联合改良化学法制备的去细胞同种异体神经具有免疫原性低,作为同种神经移植物不会被排斥吸收.     

冷冻保存异体神经移植实验研究

目的：寻求异体神经移植修复周围神经缺损的可能性。方法：用－３０℃保存６０天的同种异体神经桥接大鼠坐骨神经１５ｍｍ缺损；术后进行神经传导速度检测，神经功能恢复检查及组织学观察。结果：异体神经移植与自体神经移植比较，在早期有非常显著的差异性，随着恢复期延长，其差异性逐渐缩小，到６个月时已无明显差别。结论：认为用冷冻保存的异体神经移植修复周围神经缺损是有效的方法。     

FK506缓释膜片在异种神经移植修复周围神经缺损中的应用研究

目的 对大鼠坐骨神经缺损采用异种神经移植，并局部应用免疫抑制剂FKS06聚乳酸膜片，观察其对神经再生的影响，以寻求一种促进周围神经再生的方法。方法 制取FKS06缓释膜片聚乳酸膜片后。选用健康6月龄Wister大鼠40只，雌雄不限，随机分为A、B两组，每组20只，显露坐骨神经，在坐骨神经分权处向近端游离，造成1．2cm的神经缺损后，给予以下处理：A组采用异种神经移植加空白聚乳酸膜片，B组采用异种神经移植加含免疫抑制剂FK506聚乳酸膜片。术后第4、8、12周分别对所有大鼠进行大体形态学观察、神经诱发电位及肌电图检查，并在第8周取神经进行乙酰胆碱脂酶染色及电镜观察。结果（1）4周时各组损伤侧均见腓肠肌萎缩，皆有足部溃疡及足趾坏死脱落现象，各组无明显差别，8周时溃疡面积减少，12周时B组溃疡有愈合，可见足趾活动；（2）神经肌电图：4周时各组无差异，8周时波幅恢复率：B〉A，12周时差异更明显，两组之间统计学上有显著性差异。（3）光镜观察：各组均有神经再生现象，B组再生神经较多。（4）电镜观察：各组均有新生神经纤维，B组标本可见神经纤维再生多，较成熟，微丝、微管等结构正常较多。结论 FK506缓释膜片对大鼠坐骨神经异种神经移植的神经再生的速度及质量有的促进作用。     

不同冷冻时间对异体神经移植后生理特性的影响

目的观察超深低温(-196℃)条件下不同冷冻时间对异体神经移植后生理特性的影响。方法将80只雌性Wis tar大鼠随机分为取材组(20只),对照组(A组:新鲜自体神经移植组;B组:新鲜异体神经移植组,每组10只)和实验组(按取材神经冷冻保存3、6、9、12周后移植分为C、D、E、F组,每组10只)。术后做大体、光镜、电镜观察,神经电生理测试。结果移植9周后,大体、光镜、电镜结果显示:B组生理特性影响最大,A组最小,C、D、E、F组次之;电生理结果显示:A与B、A与E、A与F之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论异体神经移植后的生理特性和冷冻时间存在依从关系。     

同种异体神经移植后免疫反应的实验研究

目的：研究在哪种温度和时间条件下保存异种神经，其排斥反应较小。方法：用不同温度和时间保存的异体神经进行移植，实验取３５只成年雄性ＳＤ大白鼠，其中对照组８只大白鼠异体神经不作任何处理，实验组分为Ａ，Ｂ二组，每组１５只，即Ａ组为异体神经，分别在保存在一－１９６℃，－８０℃，－４０℃环境中１周；Ｂ组中为同样温度和数量的大白鼠保存３周，移植前实验组大白鼠在３７℃生理盐水中反复冷冻复温５次，手术在显微镜下由     

冷冻保存后不同直径异体神经移植的实验研究

目的 探讨经液态氮冷冻贮存后,不同直径同种异体神经移植的神经再生情况.方法 取40只Wistar大鼠,雌雄不限,取10只鼠分别切取正中神经、桡神经及坐骨神经,放于-196℃液态氮贮存3周备用;其余30只鼠随机分为A、B、C 3组,均造成右侧胫神经8mm的神经缺损模型,分别植入不同直径异体神经.A组:粗直径同种异体神经移植组;B组:等直径同种异体神经移植组;C组:细直径同种异体神经移植组.术后2、4周分别进行大体手术显微镜下观察、病理组织学及电生理学检查.结果 电生理学检查:2周时,传导速度(CV)及波幅(Amp)经统计学分析,A、B、C 3组之间无显著性差异(P>0.05);4周时,CV及Amp经统计学分析,3组之间存在显著性差异(P<0.05),并且C组明显优于A组.病理组织学检查:2周时,3组均见明显髓鞘、轴突崩解和空泡变性,基底膜管完整清晰,外周见较多新生血管及巨噬细胞、淋巴细胞浸润;4周时,各组吞噬现象消失,并见较多新生神经轴突.其中C组的再生轴突数量和直径均优于其余2组;结论不同直径同种异体神经移植,对神经再生效果有明显影响,其中细直径移植组神经再生效果最佳.     

华西Ⅲ号液保存鼠肾的实验研究

利用大鼠异体肾移植模型，以ＵＷ液为对照，研究华西Ⅲ号液对鼠肾的保存效果。实验采用封闭群ＳＤ大鼠，体重２００￣２８０ｇ，供受体同性，随机分为对照组（ＵＷ液组）和实验组（ＨＸ－Ⅲ液组）２组。各组又根据保存４８及７２小时分为两个亚组，每个亚组各１０只大鼠。原位灌注切取供体大鼠左肾后低温保存４８、７２小时行异体肾移植。结果：ＵＷ液保存鼠肾４８、７２小时移植后的存活率分别为１００％和９０％；ＨＸ－Ⅲ液保存鼠     

冷冻保存神经后自体和异体移植的实验研究

目的：探讨冷冻保存神经自体和异体移植对神经再生的影响。方法：４０只ＳＤ大鼠用反复冷冻、复温的神经和未经任何处理的坐骨神经移植体,进行自体和异体移植。Ａ组为冷冻神经移植于自体原位中;Ｂ组为冷冻神经移植于异体中;Ｃ组为未冷冻神经移植于异体中;Ｄ组为未冷冻神经移植于自体原位中。术后６,１２周光镜、电镜下行组织学观察,检测各项电生理指标。结果：Ａ 组可见到较多的再生轴突通过移植体;Ｂ组可以看到炎性细胞侵润,但仍可见再生轴突通过移植体;Ｃ组可见到大量炎性细胞侵润,有极少量再生轴突通过移植体;Ｄ组可见到大量再生轴突通过移植体。电生理指标和伸趾长肌恢复率Ａ,Ｄ两组明显好于Ｂ,Ｃ两组。结论：神经冷冻处理可以降低抗原性,本实验为同种异体神经移植提供理论依据。