鼠肝纤维化基质金属蛋白酶及其抑制因子的表达

基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ）是一族依赖Ｚｎ离子而降解各种细胞外基质的蛋白酶．肝内主要基质金属蛋白酶ＭＭＰ１,ＭＭＰ２和组织金属蛋白酶抑制因子１（ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ１,ＴＩＭＰ１）表达不平衡与肝纤维化的发生发展紧密相关．１　材料和方法清洁型Ｗｉｓｔａｒ♂大鼠１４０只,分肝纤维化模型组和正常对照组各７０只．两组动物按预定处死时间点各分为７个亚组．应用４０％（Ｖ／Ｖ）ＣＣｌ４纯花生油溶液予肝纤维…     

实验性肝纤维化过程中间质胶原酶表达的研究

肝纤维化是多种慢性肝损伤的不良结局,为慢性肝病向肝硬变发展的病理过程．其实质是Ⅰ,Ⅲ为主的胶原纤维等细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ,ＥＣＭ）合成与降解失衡,导致在ＥＣＭ肝内过度沉积而形成的．基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ）是一族参与降解ＥＣＭ的主要水解蛋白酶,目前为止该家族至少已有２０个成员,肝内发现了８种,其中间质胶原酶（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ,ｍｍｐ１ｉｎｈｕｍａｎ,ｍｍｐ１３ｉｎｒａｔ）主要参与Ⅰ,…     

逆转录定量PCR检测实验性肝纤维化组织中金属蛋白酶抑制因子-1的表达

肝纤维化是Ⅰ,Ⅲ型胶原为主的细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ,ＥＣＭ）成分过度沉积导致的病理性疾病．基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ）是一族依赖Ｚｎ离子降解ＥＣＭ成分的水解蛋白．目前为止该家族肝内发现８个成员,它们的抑制因子１（ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ１,ＴＩＭＰ１）可以抑制其活化和活性,因此,ＴＩＭＰ１与肝纤维化的发生发展紧密相关．我们应用大鼠ＣＣｌ４肝纤维化模型,通过逆转录定量ＰＣ…     

基质金属蛋白酶—2在肝纤维化时的表达

基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ）特异性地分解细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ,ＥＣＭ）,对胶原的沉积和组织结构的改建具有重要作用。肝星形细胞（ｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌ,ＨＳＣ,又称ｆａｔｓｔｏｒｉｎｇｃｅｌｌ,ｌｉｐｏｃｙｔｅ）不仅是肝纤维化时合成ＥＣＭ的主要来源［１］,而且能表达和分泌基质金属蛋白酶２（ＭＭＰ２）［２］,直接参与ＥＣＭ的代谢。本文分别测定了正常与ＣＣｌ４诱导的肝纤维化大鼠肝组织和ＨＳＣ的ＭＭＰ…     

基质金属蛋白酶表达与调控

肝纤维化是肝脏慢性损伤后细胞外基质（ｅｘｔｒａ－ｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）数量增加和／或成分改变，目前认为，ＥＣＭ在肝脏累积是其合成和降解失去平衡的结果，因此研究ＥＣＭ降解及其调控日益受到人们重视［１］。Ｉｒｅｄａｌｅ等［２］发现肝纤维化，甚至肝硬化有ＥＣＭ降解发生逆转的可能，基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，ＭＭＰｓ）是 ＥＣＭ降解的主要酶系，为防治肝纤维化提出了新的策略，本文就这方面的进展作一综述。１ ＭＭＰｓ与ＥＣＭ降解 ＭＭＰｓ是一类锌或钙依赖…     

实验性肝纤维化间质胶原酶酶原表达的研究

肝纤维化实质是Ⅰ、Ⅲ型为主的胶原纤维等细胞外基质(ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ ,ＥＣＭ)合成与降解失衡 ,在肝内过度沉积而形成的病理性疾病。基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ)是一组参与降解ＥＣＭ的主要水解蛋白酶 ,目前肝内发现了 8种 ,其中间质胶原酶 (ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｃｏｌｌａ ｇｅｎａｓｅ,ＭＭＰ 1ｉｎｈｕｍａｎ ,ＭＭＰ 13ｉｎｒａｔ)主要参与Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解 ,与肝纤维化的发生发展紧密相关[1] 。既往研究表明 ,肝损伤或肝纤维化早期间质胶原酶活性常…     

金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化

近年来 ,随着医学分子生物学的发展 ,肝纤维化发病机制研究有了较大进步。目前认为肝纤维化发生不仅是由于肝内的细胞外基质 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａ ｔｒｉｘ ,ＥＣＭ )合成过多 ,而且与ＥＣＭ降解水平有着密切关系。在肝内参与ＥＣＭ降解的主要是一组名为基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ,ＭＭＰｓ)的酶系 ,其特异性抑制物———金属蛋白酶组织抑制因子 (ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ,ＴＩＭＰｓ)可对该酶系活性产生抑制作用。二者与肝内ＥＣＭ…     

基质金属蛋白酶-2与肝纤维化

肝纤维化是各种慢性肝病向肝硬化发展的共同病理过程 ,其实质是以Ⅰ、Ⅲ型为主的胶原纤维等细胞外基质 (ＥＣＭ )合成与降解失衡 ,导致ＥＣＭ在肝内过度沉积而形成的。研究表明 ,参与ＥＣＭ降解的主要是基质金属蛋白酶类 (ＭＭＰｓ) ,其中基质金属蛋白酶 2 (ＭＭＰ 2 )在ＥＣＭ的降解与重塑中起着非常重要的作用 ,并有其独特的性质。本文就ＭＭＰ 2的来源、性质、结构及其在肝纤维化的发生、发展中的作用等作一介绍。一、ＭＭＰ 2的来源、结构ＭＭＰ 2又名明胶酶Ａ ,为Ⅳ型胶原酶的一种。相对分子质量为 72× 10 3 ,无糖基形式 ,主要由各种…     

金属蛋白酶抑制剂TIMP-2基因转染对胃癌细胞体内外生长侵袭与细胞外基质的相关性

目的探讨金属蛋白酶抑制剂（ＴＩＭＰ２）基因转染后胃癌细胞的体内外侵袭能力的改变及胶原与胶原酶的变化规律．方法将人全长ＴＩＭＰ２ｃＤＮＡ基因构建于改构的逆转录病毒载体ｐＬＭＴ，经基因转染法导入人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，Ｇ４１８筛选获阳性细胞．利用裸鼠肾包膜下移植模型，采用免疫组化和原位杂交方法，观察肿瘤发展过程中的不同时期ＴＩＭＰｓ／ＭＭＰｓ（基质金属蛋白酶）ｍＲＮＡ，Ⅳ型胶原表达的情况．结果随着肿瘤移植后时间的延长，瘤细胞侵袭基底膜处Ⅳ型胶原缺失，瘤巢周围ＭＭＰｓ含量丰富．通过体外实验，观察到ＳＧＣ７９０１Ｔ２细胞ＴＩＭＰ２ｍＲＮＡ及蛋白活性均高于母系ＳＧＣ７９０１细胞，ＴＩＭＰ２可抑制基质金属蛋白酶的活性，减弱肿瘤细胞的侵袭体内外移动速度．结论ＭＭＰｓ的高表达是肿瘤细胞侵袭的关键因素，而ＴＩＭＰ２基因是恶性肿瘤侵袭和转移的负调控因子．     

肝纤维化的基因治疗

肝纤维化是多种慢性肝病的共同病理基础与特征 ,表现为以胶原为主的肝脏细胞外基质 (ＥＣＭ )各成分合成增多 ,降解相对不足 ,过多沉积在肝内。若进一步发展引起肝小叶改建、假小叶与结节形成 ,则进入肝硬化。目前认为肝纤维化是可逆性病变 ,而肝硬化则不可逆转。但在实际工作中 ,对肝纤维化治疗仍缺乏有效办法 ,因此如何从抑制ＥＣＭ过度合成 ,或从促进ＥＣＭ降解的角度 ,积极寻找肝纤维化治疗的新方法 ,具有重要的现实意义与社会意义。基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｉｎａｓｅｓ,简称ＭＭＰｓ)是一组重要的锌离子依赖的蛋白水解酶 ,参与多种组织的病理和生理性基质溶解和重建过程。目前认为 ,ＭＭＰｓ在肝内ＥＣＭ降解过程中发挥重要作用。肝内ＭＭＰｓ来源主要为肝星状细胞 (ＨＳＣ) ,其在早期肝损伤等条件下被激活 ,由静态转为肌纤维样细胞 ,合成ＭＭＰ 1、ＭＭＰ 2、ＭＭＰ 3等参与肝内ＥＣＭ降解。其中肝内间质胶原酶 (大鼠为ＭＭＰ 13,人为ＭＭＰ 1)主要分解Ⅰ、Ⅲ型胶原 ,在阻止肝脏ＥＣＭ过度沉积中起着重要作用。从已进行的研究表明 ,ＭＭＰ 1在肝纤维化过程中表达数量上并无显著改变 ,但其降解胶原的...     

TIMPs与肝纤维化

肝纤维化的主要病理变化就是ＥＣＭ (细胞外基质 ,ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｒｍａｔｒｉｘ)在肝脏中过多沉积。肝脏ＥＣＭ的代谢主要由ＭＭＰｓ(基质金属蛋白酶 ,ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｐｒｏ ｔｅａｓｅ)及其抑制因子ＭＭＰｓ(基质金属蛋白酶的组织抑制因子 ,ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｐｒｏｔｅａｓｅ)所调节 ,ＭＭＰｓ促进ＥＣＭ的降解 ,而ＴＩＭＰｓ通过抑制ＭＭＰｓ,阻止ＥＣＭ的降解 ,从而形成或促进肝纤维化。肝脏受损后 ,一方面ＥＣＭ合成增多 ,另一方面ＴＩＭＰｓ表达上调 ,发挥对ＭＭＰｓ的普遍抑制作用 ,使Ｅ…     

纤溶酶原激活物抑制剂-1与肾脏疾病

肾小球硬化与肾间质纤维化归根到底是细胞外基质（ＥＣＭ）合成与降解失衡导致ＥＣＭ过度积聚的结果。目前已经知道参与ＥＣＭ降解的酶主要有三类：①基质金属蛋白酶（ＭＭＰ）；②丝氨酸蛋白酶；③半胱氨酸蛋白酶。其中主要的是前二类。ＥＣＭ的蛋白质成分降解均需要ＥＣ...     

贮脂细胞和肝细胞胶原合成能力的比较

目的为明确肝纤维化过程中细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）的细胞来源以及贮脂细胞（ｆａｔｓｔｏｒｉｎｇｃｅｌ，ＦＳＣ）和肝细胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ，ＨＣ）在肝纤维化胶原合成中的作用．方法用胶原酶和链霉蛋白酶Ｅ消化大鼠肝脏，结合密度梯度离心法分离培养大鼠ＨＣ和ＦＳＣ，在此基础上，用３Ｈ脯氨酸掺入结合胶原酶消化法和斑点杂交法，观察ＨＣ和ＦＳＣ胶原的合成及Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ型前胶原基因的表达．结果发现体外培养的ＦＳＣ合成胶原的能力较ＨＣ强，约为ＨＣ的两倍（Ｐ＜００５）；ＦＳＣ胶原基因表达的水平同样较ＨＣ高（Ｐ＜００５）．结论ＦＳＣ在ＥＣＭ胶原合成中起主要作用，但ＨＣ的作用也不容忽视．     

重视肝纤维化细胞外基质降解中TIMPs的研究

在正常肝脏纤维组织中存在着细胞外基质(ＥＣＭ)的合成与降解的动态平衡 ,肝纤维化及肝硬化时纤维结缔组织的形成 ,是各种不同致病因子导致ＥＣＭ合成与降解的失衡所致。纤维组织的形成不是一个静止过程 ,而是一个动态过程 ,因此 ,研究肝纤维化及早期肝硬化的可逆性 ,在注意胶原合成过程的同时 ,应加强胶原降解过程的研究。1　胶原降解主要由基质金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)介导既往对肝纤维化ＥＣＭ合成与沉积的研究比较深入。ＥＣＭ主要由胶原以及蛋白多糖、糖蛋白等组成 ,肝星状细胞 (ＨＳＣ)是其主要来源。处于“静止”期的ＨＳＣ主要合成Ⅳ…     

转化生长因子β1对Ito细胞作用的分子机制

肝纤维化是所有慢性肝病向肝硬变发展的必经病理过程,其特点是细胞外基质（ＥＣＭ）的异常增多、沉积．ＥＣＭ的主要成分有胶原和弹性蛋白等纤维性蛋白质、非胶原糖蛋白及蛋白多糖．特别以Ⅰ,Ⅲ型胶原、糖蛋白及蛋白多糖增多明显．现已证明,Ｉｔｏ细胞是细胞外基质的主要细胞学来源［１］．因此,Ｉｔｏ细胞已成为肝纤维化研究的热点．许多因素参与Ｉｔｏ细胞的调控,其中转化生长因子β（主要是ＴＧＦβ１）是主要的调控作用因素之一［２］．Ｉｔｏ细胞又名贮脂细胞（ｆａｔｓｔｏｒｉｎｇｃｅｌｌ）、肝脏星状细胞（ｈｅｐａｔｉｃｓ…     

基质金属蛋白酶2、9及基质金属蛋白酶组织抑制因子1在肺间质纤维化实验中的

细胞外基质 (ＥＣＭ)合成和降解失衡是引起ＥＣＭ积聚导致肺间质纤维化的重要病理生理因素。基质金属蛋白酶(ＭＭＰｓ)及其抑制物 (ＴＩＭＰｓ)是调节ＥＣＭ降解的重要体系。我们以博莱霉素诱导的肺间质纤维化大鼠为模型 ,观察肺间质纤维化发生过程中基质金属蛋白酶 2、9(ＭＭＰ 2、ＭＭＰ 9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子 1(ＴＩＭＰ 1)基因表达的变化 ,探讨ＭＭＰ 2、9和ＴＩＭＰ 1在肺间质纤维化发病中的作用。材料与方法　 (1)动物模型制备 :雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 6 0只(沈阳军区医学专科学校动物实验中心提供 ) ,体重 (2 15±2 0 )ｇ,…     

MMPs／TIMPs与肝脏疾病

基质金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)是一组蛋白酶类 ,具有降解细胞外基质 (ＥＣＭ )作用 ,其活性受金属蛋白酶组织抑制剂 (ＴＩＭＰｓ)调节 ,近年发现在许多肝脏疾病如各种原因的肝纤维化和肝细胞癌中ＭＭＰｓ和ＴＩＭＰｓ起重要作用 ,本文对它们的组成、特性、生物学功能及临床意义等方面的进展作一综述。1　ＭＭＰｓ和ＴＩＭＰｓ组成、特性与生物学功能　　ＭＭＰｓ是含有Ｃａ2 + -Ｚｎ2 + 的一组酶类 ,具有降解各型胶原 ,蛋白聚糖等ＥＣＭ成分作用 ,现今发现有 16种 ,按作用底物不同分五大类 :(1)胶原酶(ＭＭＰ - 1,- 8,- 13) ,降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型…     

Ⅳ型胶原酶与肝细胞癌侵袭转移性的关系

目的揭示Ⅳ型胶原酶与肝细胞癌（ＨＣＣ）侵袭转移性的关系。方法通过明胶酶谱法对ＨＣＣ癌、癌旁肝组织及血浆中Ⅳ型胶原酶含量进行测定,并与反映ＨＣＣ侵袭转移性的病理指标进行统计学分析。结果ＨＣＣ及其癌旁肝组织均有Ⅳ型胶原酶表达;ＨＣＣ组织中Ⅳ型胶原酶含量升高及基质金属蛋白酶２（ＭＭＰ２）活性形式的出现与ＨＣＣ侵袭转移性有关;血浆中Ⅳ型胶原酶含量的升高与ＨＣＣ侵袭转移有关。结论Ⅳ型胶原酶与ＨＣＣ侵袭转移性有关。     

胃癌患者血清Ⅳ型胶原降解酶活性的研究

近来的研究表明恶性肿瘤在其向外浸润、转移的过程中需溶解细胞外基质,其中基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ,ＭＭＰＳ）发挥了重要作用。基底膜Ⅳ型胶原是细胞外基质的重要成份,ＭＭＰＳ对Ⅳ型胶原的降解在肿瘤进展中至关重要。为此,...     

秋水仙碱对肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶—1及其抑制因 …

目的 观察秋水仙碱对纤维化肝脏基质金属蛋白酶－１（ＭＭＰ－１）、基质金属蛋白酶组织抑制因子－１（ＴＩＭＰ－１）表达的影响。从胶原降解的角度探讨秋水仙碱对肝纤维化有无逆转作用及可能存在的机制。方法 制备免疫性大鼠肝纤维化模型,并给予秋水仙碱治疗;通过ＲＴ－ＰＣＲ检测ＭＭＰ－１、ＴＰＭＰ－１的表达,并作Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化以及Ｍａｓｓｏｎ胶原染色。结果 发现秋水仙碱对肝纤维化大鼠ＭＭＰ－１的表达无明